張曉戰(zhàn),邢忠玉,陳夢(mèng)云,陳家霖,董 青,湯宇心,王子玥,趙利嬌,江 澳,徐志坤,彭志鋒,邊傳周,袁 野

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 動(dòng)物醫(yī)藥學(xué)院,河南 鄭州 450046;2.乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠,河南 鄭州 450048)

鵝細(xì)小病毒感染又稱為小鵝瘟(goose plague,GP),是由鵝細(xì)小病毒(goose parvovirus,GPV)引起的雛水禽的一種急性、致死性、高度接觸性傳染病[1-2]。GPV是一種無囊膜的單鏈DNA病毒,基因組長度約5.1 kb,與番鴨細(xì)小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)和新型鵝細(xì)小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)一樣,屬于細(xì)小病毒科(Parvovidae)依賴性細(xì)小病毒屬(Dependoparvovirus)[3]。GPV基因組包含2個(gè)開放閱讀框(open reading frame,ORF),ORF兩端含有細(xì)小病毒科典型的重復(fù)倒置回文結(jié)構(gòu)(inverted terminal repeats,ITRs)[4]。基因組左側(cè)ORF編碼兩種非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2,在病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯等感染過程及調(diào)控宿主的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期方面具有重要作用[5];基因組右側(cè)ORF編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2和VP3,3者羧基端蛋白序列相同,共同組成病毒粒子,是病毒重要的毒力相關(guān)蛋白,其中VP3為主要的衣殼蛋白,是主要的保護(hù)性抗原蛋白,可以刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體[2,6]。

GPV主要感染3周齡以內(nèi)雛鵝和雛番鴨,尤其是導(dǎo)致雛鵝的發(fā)病,發(fā)病率和病死率可達(dá)100%。該病病程可表現(xiàn)為急性感染和亞急性感染,臨床上以嚴(yán)重下痢和滲出性腸炎為主要特征,剖檢可見小腸腸腔內(nèi)含香腸狀凝固性栓子[1]。該病呈世界性分布,1956年,GPV感染引發(fā)GP疫情在江蘇揚(yáng)州等地鵝群發(fā)生流行,方定一[7]教授首次報(bào)道描述了GP的發(fā)生;相同時(shí)期,法國、荷蘭、波蘭、匈牙利等多個(gè)國家地區(qū)的鵝群相繼暴發(fā)相似的疫病,給世界養(yǎng)鵝業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。隨后,多個(gè)國家研制及推廣應(yīng)用小鵝瘟疫苗和卵黃抗體等生物制品,該病在世界范圍內(nèi)得到較好的控制。近年來,隨著GPV病原的變異和跨物種感染鴨群現(xiàn)象的出現(xiàn)[8-9],GP的流行態(tài)勢(shì)發(fā)生了新的變化,目前在我國廣東、江蘇、福建、河南、山東等地區(qū)鵝養(yǎng)殖密集呈無規(guī)律散發(fā)流行,嚴(yán)重危害我國水禽養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。

2020年6月,河南開封地區(qū)某鵝養(yǎng)殖場發(fā)生疑似GP疫情,雛鵝群和青年鵝群出現(xiàn)了不同程度的死亡。本研究以該鵝場發(fā)病死亡的青年鵝為研究對(duì)象,通過病鵝臨床表現(xiàn)和病理剖檢變化,結(jié)合病原分子生物學(xué)診斷,確定該鵝場青年鵝群中零星死亡的發(fā)病原因,并進(jìn)一步通過病原分離鑒定和全基因組序列測(cè)序,對(duì)發(fā)病鵝場GPV流行毒株的基因特征進(jìn)行分析,為下一步該病的科學(xué)防控提供合理科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源2020年6月中旬,河南開封某鵝場雛鵝群和青年鵝群相繼發(fā)病。通過與養(yǎng)殖戶溝通,了解該鵝場當(dāng)前存欄23日齡雛鵝約4 100只,55日齡青年鵝存欄約2 300只,雛鵝和青年鵝處于混養(yǎng)狀態(tài)。雛鵝群在6月初開始發(fā)病,發(fā)病率30%左右,死亡約700只。病鵝表現(xiàn)食欲減退,精神萎靡,排青綠色稀糞,死前倒地抽搐,表現(xiàn)明顯神經(jīng)癥狀。雛鵝群有GP卵黃抗體、抗生素藥物和抗病毒中藥藥物使用史,療效較好,病程約1周。雛鵝群發(fā)病后10 d,部分青年鵝開始出現(xiàn)精神萎靡、拉稀、突然倒地死亡。隨機(jī)挑選3只病死青年鵝進(jìn)行解剖,無菌采集部分病鵝肝臟、脾臟和小腸等組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

1.2 主要試劑病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒購自天根生化科技有限公司;反轉(zhuǎn)錄試劑盒ReverTra Ace?購自東洋紡生物公司;2×SanTaq PCR Mix預(yù)混液、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒和零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒購自生工生物工程(上海)股份有限公司;DL2000 DNA Marker、高保真酶PrimeSTAR Max DNA Polymerase購自寶生物工程(大連)有限公司;感受態(tài)細(xì)胞TOP10由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.3 引物的設(shè)計(jì)及合成在病原實(shí)驗(yàn)室診斷過程中,GPV、鵝星狀病毒(goose astrovirus,GAstV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、禽副黏病毒1型(avian paramyxovirus-1,APMV-1)和禽呼腸孤病毒(goose reovirus,GRV)病原檢測(cè)所用的引物均來自針對(duì)基因組中保守的區(qū)域,部分引物的設(shè)計(jì)參考已發(fā)表的文獻(xiàn),引物具體信息見表1。所用引物均由河南尚亞生物技術(shù)有限公司合成。

表1 引物序列及相關(guān)信息

1.4 可疑病原的核酸檢測(cè)

1.4.1病料的處理 取采集的病鵝肝臟、脾臟和小腸組織約0.5 g,剪碎后用含有100 U/mL青霉素、100 mg/L鏈霉素?zé)o菌生理鹽水制成1∶4的懸液,研磨勻漿后反復(fù)凍融3次,8 000 r/min離心5 min,上清用0.22 μm的無菌濾器過濾除菌,分裝凍存至-80℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2病原核酸的提取 按照病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒操作說明提取上清樣品的DNA/RNA,洗脫獲得的樣品DNA/RNA混合物。取部分核酸混合物,通過ReverTra Ace?反轉(zhuǎn)錄試劑盒,利用隨機(jī)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),反應(yīng)總體系為40 μL。反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA樣品和剩余的DNA樣品分別凍存至-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2病原的PCR鑒定 以臨床樣品的DNA混合物為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)GPV,cDNA混合物為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)GAstV、AIV、APMV-1和GRV。PCR擴(kuò)增體系25 μL,其中2×SanTaq PCR Mix預(yù)混液(含DNA聚合酶、dNTP和反應(yīng)緩沖液)12.5 μL,上、下游引物各0.5 μL,模板1.5 μL,ddH2O 10.5 μL。參照文獻(xiàn)[10-12],應(yīng)用降落PCR(touch-down PCR,TD-PCR)反應(yīng)程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增,所獲得的PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.5 病毒的分離鑒定將1.4中經(jīng)核酸鑒定為陽性樣品的過濾上清,接種12日齡健康鵝胚5枚,200 μL/胚,石蠟封孔后置于37℃溫箱孵育,同時(shí)設(shè)置2枚鵝胚為對(duì)照組。逐日觀察鵝胚健康狀況,棄掉24 h內(nèi)死亡鵝胚,收集接毒后7 d內(nèi)死亡鵝胚尿囊液,剖檢死亡鵝胚,觀察記錄病變情況。將病毒在健康鵝胚上連續(xù)傳代3次,收集死亡鵝胚尿囊液,離心后取上清凍存至-80℃?zhèn)溆谩?/p>

為鑒定分離到的病原是否單一,用試劑盒提取第3代鵝胚尿囊液病毒核酸,參照1.4.2的步驟進(jìn)行常見鵝病原的檢測(cè),確定GPV分離物中是否存在其他病原的污染。此外,參照文獻(xiàn)[13],取第3代分離尿囊液上清,經(jīng)PEG 6000濃縮后制成待檢抗原,進(jìn)行瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn),驗(yàn)證其與GP陽性血清和陰性血清的反應(yīng)性。

1.6 GPV全基因組測(cè)序參照GenBank中已經(jīng)發(fā)表的GPV中國流行株核酸序列,設(shè)計(jì)引物,用于擴(kuò)增GPV/HNKF-2020株全基因組,引物具體信息見表2。將1.5中經(jīng)核酸鑒定為陽性樣品通過重疊PCR技術(shù)對(duì)GPV全基因組進(jìn)行克隆測(cè)序。利用高保真酶PrimeSTAR Max DNA Polymerase,分別以7對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)核酸電泳鑒定后,利用DNA凝膠回收試劑盒回收目的片段。將回收產(chǎn)物連接至TOPO-Blunt克隆載體,轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)細(xì)胞,分別利用克隆引物鑒定陽性菌落,陽性菌落擴(kuò)繁后提取質(zhì)粒,送至河南尚亞生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

表2 GPV基因組擴(kuò)增引物序列及相關(guān)信息

1.7 GPV全基因組序列分析通過檢索GenBank數(shù)據(jù)庫中近年來國內(nèi)外公開的鵝源GPV毒株和其他水禽源GPV毒株代表毒株序列,進(jìn)行BLAST對(duì)比分析,利用DNAStar軟件中的MegAlign程序分別比對(duì)所鑒定毒株全基因組與其他GPV毒株之間的相似性。將所分析毒株的全基因組序列和其編碼的病毒蛋白氨基酸序列提交Clustal Omega進(jìn)行在線比對(duì)[14],分析比對(duì)所分離GPV毒株的全基因組和各病毒蛋白突變情況,并進(jìn)一步通過MEGA 7.0程序繪制進(jìn)化樹[15],分析本次發(fā)病鵝場GPV毒株的遺傳演化情況。

2 結(jié)果

2.1 病例綜合診斷發(fā)病鵝場病鵝群55日齡左右,與雛鵝混養(yǎng),雛鵝有疑似GP發(fā)病史。病鵝表現(xiàn)精神萎靡、拉稀、突然倒地死亡。對(duì)3羽病死青年鵝進(jìn)行病理解剖,可觀察到病鵝小腸段存在腫脹,黏液較多,部分腸道膨大,形似香腸狀,內(nèi)含纖維素性滲出物和壞死物凝固而成的凝栓物(圖1A,B)。采集病鵝病料組織,進(jìn)行可疑病原的核酸檢測(cè),通過TD-PCR后,各個(gè)病原的檢測(cè)PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳,發(fā)現(xiàn)病死鵝病料組織中均檢測(cè)出GPV核酸(3/3),部分病鵝同時(shí)檢測(cè)出GAstV(1/3),AIV、APMV-1和GRV的核酸檢測(cè)陰性(圖1C),初步鑒定該發(fā)病鵝場存在GPV感染。

A.腸道內(nèi)纖維素性滲出物;B.腸道內(nèi)壞死物凝固成的栓子;C.相關(guān)病原核酸PCR/RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

2.2 GPV分離鑒定將鑒定為GPV陽性的病料組織處理后,接種12日齡鵝胚,第1代接種后5 d 死亡2枚。取死亡鵝胚尿囊液檢測(cè)確定GPV陽性后,繼續(xù)在鵝胚傳代至第3代,能夠?qū)е?枚鵝胚接種后7 d內(nèi)死亡。死亡鵝胚胚體出血嚴(yán)重(圖2 A)。收集死亡鵝胚尿囊液進(jìn)行AGP試驗(yàn),結(jié)果顯示GPV陽性鵝胚尿囊液與GPV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng),兩孔之間可見明顯沉淀線。與GPV陰性血清及各組生理鹽水對(duì)照不發(fā)生反應(yīng),孔間無沉淀線(圖2B)。提取尿囊液核酸,PCR擴(kuò)增出GPV目的大小核酸片段,顯示GPV陽性(圖2C),未擴(kuò)增其他病原的核酸片段。以上結(jié)果表明成功分離到1株青年鵝源GPV,結(jié)合該病例發(fā)生時(shí)間和地點(diǎn)等信息,命名該毒株為GPV/HNKF-2020株。

A.接種GPV后導(dǎo)致鵝胚胚體出血;B.GPV瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)陽性;C.接種GPV尿囊液PCR陽性

2.3 GPV/HNKF-2020株全基因組序列分析以重疊PCR方法利用7對(duì)特異性引物對(duì)GPV分離株全基因序列進(jìn)行PCR克隆。經(jīng)過對(duì)克隆產(chǎn)物的測(cè)序驗(yàn)證和序列拼接,確定青年鵝源GPV分離株GPV/HNKF-2020株基因組長度為5 045 bp?；蚪M兩端含有細(xì)小病毒科典型的ITRs,長度為415 bp,其中1～167 bp和212～378 bp序列嚴(yán)格反向互補(bǔ)?；蚪M含有2個(gè)ORF框,其中編碼非結(jié)構(gòu)蛋白的NS基因長度為1 884 bp (509～2 392 bp),編碼結(jié)構(gòu)蛋白的VP基因長度為2 119 bp (2 411～4 609 bp)。與經(jīng)典GPV毒株Virulent B株和疫苗株SYG61v株ITRs序列相比,GPV/HNKF-2020株在70～83 bp和280～293 bp間存在2段14 bp基因缺失。最近在鴨群頻繁發(fā)生的NDRV毒株JS1603、QH15和SD等株,在58～71 bp和331～344 bp間存在2段14 bp基因缺失(圖3)。

圖3 GPV/HNKF-2020株ITRs區(qū)域序列分析

通過NCBI數(shù)據(jù)庫在線BLAST分析GPV/HNKF-2020株與GenBank數(shù)據(jù)庫已有的GPV毒株相似性,發(fā)現(xiàn)GPV/HNKF-2020株與2016年安徽地區(qū)分離的鵝源GPV強(qiáng)毒株DY16株相似性較高[16]。下載GenBank數(shù)據(jù)庫中鵝源GPV毒株和其他禽源GPV代表毒株序列,與GPV/HNKF-2020分離株進(jìn)行序列比對(duì),結(jié)果顯示,GPV/HNKF-2020株與DY16株、2016年重慶地區(qū)分離的鵝源RC16株[17]和2019年河北地區(qū)鴕鳥源HB-2019株[18]序列相似性高,達(dá)99.5%左右;與近年來鴨群中頻繁發(fā)生的NGPV毒株(JSJS1603株、QH15株和SD株)序列相似性為95%左右。此外,GPV/HNKF-2020株與疫苗株SYG61v和經(jīng)典GPV毒株GDaGPV核苷酸相似性較低,為93%左右。

2.4 GPV/HNKF-2020株遺傳演化分析為了解分離GPV毒株的遺傳進(jìn)化情況,分別基于全基因組和主要結(jié)構(gòu)蛋白VP3實(shí)施多序列比對(duì),利用MEGA 7.0程序繪制進(jìn)化樹進(jìn)行分析?；谌蚪M核苷酸序列的遺傳演化分析結(jié)果顯示GPV/HNKF-2020株和DY16株、RC16株和HB-2019(鴕鳥源)株親緣關(guān)系較近,演化關(guān)系上屬于同一分支,為DY-16 like毒株。該分支毒株與分離自天鵝(SHFX1201株)、雁鵝(Yan-2株)、鴻雁(FJ01株)和灰雁(Virulent B株)等禽類的GPV毒株,及疫苗株SYG61v、VG32/1和82-0321V等均歸類于經(jīng)典的GPV類群,但存在一定的遺傳距離。GPV/HNKF-2020株與近年來流行在麻鴨、櫻桃谷鴨群流行的NGPV毒株和MDPV毒株遺傳距離較大,親緣關(guān)系較遠(yuǎn)(圖4)。此外,基于VP3蛋白氨基酸序列的遺傳演化分析結(jié)果與全基因組結(jié)果相似,顯示與GPV/HNKF-2020株親緣關(guān)系最近的DY-16 like分支的毒株,且主要為2016年以來國內(nèi)鵝群分離毒株(圖5)。此外,GPV/HNKF-2020株與疫苗株SYG61v在VP3基因上親緣關(guān)系較近,與VG32/1和82-0321V等疫苗株具有一定的遺傳距離,親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

圖4 GPV/HNKF-2020株全基因組演化分析

圖5 GPV/HNKF-2020株VP3基因遺傳演化分析

2.6 GPV/HNKF-2020基因組序列突變情況分析為進(jìn)一步分析發(fā)病鵝場GPV毒株特性,通過全基因組和各病毒蛋白序列比對(duì),分析GPV/HNKF-2020株與其他GPV毒株、NGPV毒株和MDPV毒株間堿基和氨基酸突變情況。結(jié)果顯示,GPV/HNKF-2020株基因組含有C478T、C769T、G942A、G1867A、C4459G、C4516T和A4611T等7個(gè)特有的堿基突變位點(diǎn),其中5個(gè)堿基突變位于基因組ORF區(qū)域,4個(gè)堿基突變?yōu)橥x突變,G942A突變導(dǎo)致非結(jié)構(gòu)蛋白NS1發(fā)生R145K氨基酸突變。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),近年來在鵝群流行的DY-16 like分支毒株在結(jié)構(gòu)蛋白VP1發(fā)生V554I的突變,該位點(diǎn)定位于病毒主要衣殼蛋白VP3抗原表位密集區(qū)。

3 討論

我國是水禽養(yǎng)殖和消費(fèi)大國,水禽產(chǎn)業(yè)是我們國家畜牧業(yè)和農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的重要組成部分,是我國的特色型產(chǎn)業(yè)。根據(jù)國家水禽產(chǎn)業(yè)體系統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù),2020年我國水禽養(yǎng)殖數(shù)量非常龐大,國內(nèi)22個(gè)水禽主產(chǎn)區(qū)肉鴨出欄46.83億只,蛋鴨存欄1.46億只,鴨蛋產(chǎn)量284.66萬t,肉鵝出欄約6.39億只。水禽養(yǎng)殖業(yè)在我國養(yǎng)殖模式多元,不同地區(qū)的水禽養(yǎng)殖業(yè)存在水養(yǎng)、旱養(yǎng)和籠養(yǎng)等多種模式[19]?？傮w來講,國內(nèi)水禽飼養(yǎng)設(shè)施相對(duì)比較落后,養(yǎng)殖場生物安全防護(hù)能力較弱,抵御疫病能力較差。尤其是近幾年非洲豬瘟疫情暴發(fā)以來,水禽產(chǎn)業(yè)養(yǎng)殖規(guī)模盲目擴(kuò)張,養(yǎng)殖總量逐年遞增,粗放的養(yǎng)殖管理模式,不斷加大的養(yǎng)殖密度,進(jìn)一步加劇新發(fā)和再發(fā)水禽疫病的發(fā)生[20]。

水禽細(xì)小病毒病是一種危害嚴(yán)重的水禽病毒性傳染病,包含GPV感染雛鵝和雛番鴨引起的GP,MDPV感染雛番鴨引起的番鴨“三周病”,及NGPV感染肉鴨和麻鴨引起的短喙侏儒綜合征[3]。近年來隨著病原的變異,該病的流行態(tài)勢(shì)發(fā)生了新的變化。GPV在河南、山東、安徽、江蘇、廣東、浙江等多個(gè)鵝養(yǎng)殖密集區(qū)存在暴發(fā)流行,能夠跨物種感染導(dǎo)致天鵝、鴕鳥、雁鵝等禽類發(fā)病[18,21-22]。本研究鑒定的GPV/HNKF-2020株,其遺傳演化關(guān)系與近幾年國內(nèi)鴕鳥(HB-2019株)、天鵝(SHFX1201株)、雁鵝(Yan-2株)、鴻雁(FJ01株)等特禽類感染的GPV株親緣關(guān)系近,演化關(guān)系上屬于同一分支,說明國內(nèi)GPV流行毒株基因組和保護(hù)性抗原VP3沒有發(fā)生較大的變異,暗示一些在鵝群應(yīng)用效果良好的疫苗株可在特禽GPV防控過程中發(fā)揮一定的作用。此外,自2015年,由GPV變異形成的NGPV感染櫻桃谷鴨和麻鴨的現(xiàn)象日益增多。LI等[23]在2015-2016年間山東、安徽和江蘇3個(gè)地區(qū)的櫻桃谷鴨群中分離到7株NGPV毒株,證實(shí)這些毒株與國內(nèi)經(jīng)典的GPV毒株全基因組序列相似性為92.2%～97.1%,親緣關(guān)系較近,屬于GPV毒株的一個(gè)變種;其中SDLY1602株可能由弱毒株82-0321v和野毒株GDaGPV的重組產(chǎn)生。我國鵝群中病原感染情況復(fù)雜,LIU等[24]發(fā)現(xiàn)2019年安徽12個(gè)發(fā)生痛風(fēng)疫情的雛鵝養(yǎng)殖場的致病原為GPV和GAstV,混合感染率可達(dá)100%。NIU等[25]對(duì)山東、廣東、四川等11個(gè)省市地區(qū)的鵝群病原調(diào)查發(fā)現(xiàn),GPV與H9亞型禽流感病毒、禽副黏病毒Ⅰ型、坦布蘇病毒和鵝圓環(huán)病毒存在普遍的混合感染情況。GPV與其他病原混合感染的現(xiàn)象在我國鵝群中也非常普遍,給GP的診斷和防控帶來了較大的負(fù)面影響。

GPV傳播方式多樣,可以通過水平傳播和經(jīng)蛋垂直傳播,其中消化道感染是主要的傳播方式[1-2]。本次發(fā)生GP疫情鵝場雛鵝和青年鵝混養(yǎng),雛鵝近期有GPV感染史。考慮到感染GPV雛鵝主要通過消化道途徑向外界排出病原體,且GPV病原對(duì)外界環(huán)境抵抗力較強(qiáng),極容易長期污染混養(yǎng)的場地、用具,乃至共用的飼料和飲水[1],暗示該場青年鵝感染的GPV極可能來源于發(fā)病雛鵝排出的病原。GPV主要危害的是雛鵝、雛番鴨等幼齡階段的水禽,成年水禽能夠感染GPV發(fā)病,但多以不表現(xiàn)明顯臨床癥狀的隱性感染為主[1-2]。該鵝養(yǎng)殖場在治療雛鵝GP疫情期間,忽視了對(duì)青年鵝實(shí)施針對(duì)GPV的預(yù)防措施,給GPV感染青年鵝群提供了機(jī)會(huì)。

我國水禽養(yǎng)殖業(yè)中,“公司+農(nóng)戶”的養(yǎng)殖模式非常普遍,小規(guī)模的家庭養(yǎng)殖模式仍占據(jù)重要的養(yǎng)殖地位。需要注意的是,在家庭養(yǎng)殖模式中,不同日齡鵝群,乃至不同物種禽群混養(yǎng)的情況比較普遍,飼養(yǎng)管理和疫病防控水平較差,禽流感病毒、禽副黏病毒Ⅰ型和GP等的疫病頻發(fā),危害嚴(yán)重[19-20]。以本研究跟蹤的GP病例進(jìn)行反思,目前國內(nèi)外關(guān)于GPV病原及疫苗、卵黃抗體等防控生物制品相對(duì)成熟,我國有多家企業(yè)生產(chǎn)GPV疫苗和卵黃抗體商品[13]。近年來,隨著GPV生物制品的廣泛應(yīng)用,我國GP多地區(qū)頻繁暴發(fā)的流行態(tài)勢(shì)逐漸緩和,局部地區(qū)的零星散發(fā)成為常態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)近年來鵝群感染的GPV毒株沒有發(fā)生較大的變異,且流行毒株與疫苗株之間存在較好的抗原一致性。結(jié)合當(dāng)前GPV生物制品情況,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理水平和水禽場生物安全防護(hù)能力,是我國當(dāng)前GPV防制的重要措施。