馬瑞雪，寇婷婷，孫霞芝，范艷麗

（寧夏大學食品科學與工程學院 銀川 750021）

枸杞（Lycium barbarum L.）屬茄科，多年生落葉灌木，是我國珍貴的傳統(tǒng)藥用植物[1]，也是藥食同源品種之一[2]，具有抗炎、抗老和神經(jīng)保護等多種生物學功能[3-5]。其種植區(qū)域從傳統(tǒng)的寧夏中寧產(chǎn)區(qū)，逐漸擴展為“寧夏道地產(chǎn)區(qū)為核心，青海、甘肅、新疆、內(nèi)蒙為兩翼”的大枸杞種植區(qū)[6]。枸杞多糖（Lycium Barbarum polysaccharides，LBP）是 枸杞的主要活性成分，是一種有效的抗氧化劑[7]。由于環(huán)境因素不同，導致不同產(chǎn)地枸杞的品質(zhì)存在很大差異[8]，而枸杞多糖結(jié)構(gòu)和活性是否存在典型的地區(qū)差異，對其質(zhì)量評價和產(chǎn)品研發(fā)有至關重要的作用[9]。

基于同位素標記相對和絕對定量（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation，i-TRAQ）技術(shù)的蛋白組學分析，廣泛應用于植物蛋白的識別和定性、定量分析中，該技術(shù)可同時比較8 個樣品的表達量[10]。目前關于不同產(chǎn)區(qū)枸杞多糖的研究已有報道。Wang等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，青海產(chǎn)地的枸杞果實明顯大于寧夏和新疆，而其產(chǎn)量低于其它產(chǎn)地，研究還發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地枸杞多糖的單糖組成、分子質(zhì)量和構(gòu)象相似，抗氧化和免疫活性結(jié)果也一致。徐金楠等[11]通過對不同產(chǎn)地枸杞多糖結(jié)構(gòu)特征對比，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的枸杞多糖結(jié)構(gòu)相似，且環(huán)境因素對多糖糖環(huán)形式和單糖組成的影響比品種因素大。在蛋白水平探究不同產(chǎn)地枸杞多糖差異的相關報道較少，課題組前期比較了不同產(chǎn)地枸杞多糖的含量、分子質(zhì)量、單糖組成以及結(jié)構(gòu)特征，通過iTRAQ 技術(shù)比較枸杞蛋白表達差異[12]，而未分析枸杞多糖的相關蛋白。本文基于前期iTRAQ 定量蛋白組學技術(shù)，對不同產(chǎn)地“寧杞1號”枸杞果實的蛋白質(zhì)進行分析，篩選出與枸杞多糖合成代謝相關的蛋白質(zhì)，并初步推測枸杞多糖合成代謝相關通路，為不同產(chǎn)地枸杞多糖的差異提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SDS（色譜純）、Urea（色譜純）、二硫蘇糖醇（色譜純）、碘乙酰胺（色譜純），美國Bio-Rad 公司；碳酸氫銨（色譜純）、Tris（色譜純）、三氟乙酸（色譜純），美國Sigma-Aldrich 公司；甲酸（色譜純），德國Fluka 公司；乙腈（色譜純），德國Merck 公司；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 設備與儀器

液相色譜系統(tǒng)（Easy nLC）、質(zhì)譜儀（Q Exactive）、微量紫外光度計（2000c）、酶標儀（Multiskcan FC），美國Thermo Scientific；低溫高速離心機（5430R）、真空離心濃縮儀（Concentrator Plus），德國Eppendorf 公司；超聲破碎儀（JY92-II），寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 采樣 枸杞樣品為分別采摘自寧夏中寧、新疆精河、內(nèi)蒙古烏拉特前旗、甘肅瓜州和青海德令哈的“寧杞1 號”枸杞。于7 月枸杞夏果期，選擇6 年生樹勢健壯、栽培管理一致的“寧杞1 號”代表性植株5 株，從開花坐果起第32 天進行取樣。共設3 個重復，兼顧東、西、南、北4 個方向及上、下、內(nèi)、外各個方位的果實，并將其充分混勻。取樣后立即用液氮冷凍24 h，并用-80 ℃冰箱貯藏，待所有產(chǎn)地全部采樣完成后，用干冰冷凍快遞至上海美吉生物科技有限公司進行測樣。

1.3.2 蛋白質(zhì)提取與定量 將5%TCA/丙酮（1∶9）加入枸杞細粉中，并用渦旋混勻。混合物在-20 ℃下沉淀4 h 后離心（6 000×g、40 min），并將沉淀風干。將30%的SDT 緩沖液加入20 μg 粉末中，混合煮沸5 min，并在80 W 的條件下勻漿超聲10 次，每次10 s，間歇15 s。煮沸15 min 并離心（14 000×g、40 min），用0.22 μm 過濾器過濾上清液。用BCA 蛋白檢測試劑盒測定蛋白質(zhì)含量，并于-80 ℃保存。采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳對枸杞蛋白進行驗證。

1.3.3 蛋白質(zhì)消化 利用過濾輔助樣品制備程序進行蛋白質(zhì)消化[13]，并用BCA 蛋白測定試劑盒測定蛋白質(zhì)含量。

1.3.4 iTRAQ 標記 按說明使用iTRAQ 試劑標記每個枸杞樣品的100 μg 肽混合物。蛋白質(zhì)樣品分別標記為113（寧夏中寧）、114（新疆精河）、115（內(nèi)蒙古烏拉特前旗）、116（甘肅瓜州）及117（青海德令哈）。

1.3.5 分離標記肽 利用純化系統(tǒng)通過強陽離子交換SCX 色譜分離iTRAQ 標記的肽。用緩沖液A（25% ACN、10 mmol/L KH2PO4、pH 3.0）酸化重組干燥的肽混合物，并將其裝入聚硫乙基（4.6×100）mm 柱（5 μm，200?）。用緩沖液B（500 mmol/L KCl，10 mmol/L KH2PO4，25% ACN，pH 3.0）以1 mL/min 的流速梯度洗脫肽。緩沖液B 吸光度值的線性梯度和后續(xù)步驟與前人研究方法相同[14]。

1.3.6 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）分析的方法與Wang等[15]的研究相同。每個樣品都采用液相色譜系統(tǒng)Easy nLC 分離。0.1%甲酸為緩沖液A，0.1%甲酸（84%乙腈）為緩沖液B，色譜柱與95%緩沖液A 平衡。將樣品從自動進樣器裝入裝載柱，并通過ntelliFlow 技術(shù)用分析柱分離，流速為300 nL/min。在Q Exactive 上進行LC-MS/MS 分析，并將其與Easy nLC 耦合。

1.3.7 數(shù)據(jù)庫搜索和蛋白質(zhì)鑒定與定量 質(zhì)譜的鑒定和定量通過Proteome Discoverer 1.4 和Mascot 2.2 進行。用蛋白表達倍數(shù)≥1.2 或≤0.83 且P<0.05 來確定上調(diào)或下調(diào)差異表達蛋白（DEPs），用t 檢驗進一步分析蛋白質(zhì)比值。

1.3.8 生物信息學分析 以寧夏中寧“寧杞1 號”枸杞作為相對定量參考，采用層次聚類算法對5個產(chǎn)地的總蛋白質(zhì)進行聚類分析，對所有DEPs進 行KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。后將各個比較組DEPs 通過蛋白質(zhì)ID 在uniprot 網(wǎng)站進行查找，標注所有DEPs 的主要功能，并篩選出與多糖合成相關的DEPs。將篩選的DEPs 通過STRING 軟件構(gòu)建蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡（protein-protein interaction，PPI），利用KEGG 通路結(jié)合篩選后的DEPs推測出多糖合成代謝途徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 枸杞蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定和聚類分析

質(zhì)譜數(shù)據(jù)（圖1a）表明共有818 444 個LCMS/MS 譜與已知譜進行了匹配；匹配譜數(shù)為60 795 個，利用率為7.43%；得到16 384 個肽段；其中鑒定到的唯一肽段總數(shù)有12 375 個。這些肽共鑒定得到4 852 個蛋白質(zhì)，表明采自寧夏、新疆、內(nèi)蒙古、甘肅和青海的“寧杞1 號”枸杞共鑒定出4 852 個蛋白質(zhì)。將鑒定到的蛋白進行聚類分析（圖1b），結(jié)果表明采自各產(chǎn)地的枸杞樣品的3次重復結(jié)果較好，蛋白組學測定結(jié)果可靠。

圖1 蛋白質(zhì)鑒定（a）和聚類分析（b）Fig.1 Mass spectrometry identification results（a）and Cluster analysis（b）

2.2 差異蛋白篩選與分析結(jié)果

4 個比較組共鑒定出1 437 個DEPs，如圖2a，青海/寧夏組的DEPs 數(shù)量最多，共1 015 個。其次是甘肅/寧夏組和新疆/寧夏組，分別是966 個和446 個。而內(nèi)蒙古/寧夏組的DEPs 最少，共166個。此外，各比較組上調(diào)的DEPs 數(shù)量均小于下調(diào)的。將4 個比較組的DEPs 做Venn 圖，結(jié)果如圖2b 所示，發(fā)現(xiàn)在4 個比較組中都存在的DEPs 有56 個，且新疆/寧夏組、青海/寧夏組和內(nèi)蒙古/寧夏組共有的DEPs 最少，共2 個。

圖2 DEPs 分布及重疊情況Fig.2 Distribution and overlap of DEPs

2.3 差異蛋白KEGG 通路分析

對新疆/寧夏組、內(nèi)蒙古/寧夏組、甘肅/寧夏組及青海/寧夏組的DEPs 進行KEGG 通路分析，并將各組注釋到DEPs 數(shù)最多的前20 個通路列出。結(jié)果如圖3 所示，新疆和寧夏比較組KEGG 途徑中DEPs 數(shù)目最多的條目是“碳代謝”，其次為“氨基酸的生物合成”和“核糖體”。內(nèi)蒙古和寧夏比較組KEGG 途徑中DEPs 數(shù)目最多的條目是 “內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)加工”，其次為“氨基酸的生物合成”和“嘌呤代謝”。甘肅和寧夏比較組KEGG 途徑中DEPs 數(shù)目最多的條目是“碳代謝”，其次為“氨基酸的生物合成”和“核糖體”。青海和寧夏比較組KEGG 途徑中DEPs 數(shù)目最多的條目是“碳代謝”，其次為“氨基酸的生物合成”和“內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)加工”。在4 個比較組中DEPs 占比最大的是光合有機體的“碳代謝”，中心碳代謝是所有生物體最基本的細胞代謝途徑之一[16]，而且光合作用本身是糖合成和運輸?shù)臎Q定性因素，并連接著調(diào)節(jié)果實發(fā)育的環(huán)境和生物因素[17]。

圖3 差異蛋白KEGG 通路注釋Fig.3 KEGG pathway annotation of protein expression

2.4 枸杞中多糖相關DEPs 篩選

篩選與枸杞多糖合成代謝相關的DEPs，共160 個。結(jié)果如圖4 所示，青海/寧夏組得到的相關差異蛋白最多，共102 個；內(nèi)蒙古/寧夏組得到的相關差異蛋白最少，共11 個。

圖4 各個比較組蛋白篩選結(jié)果Fig.4 Screening results of proteins in each comparison group

進一步篩選后，除去未表征蛋白和在KEGG通路中無法注釋的外，與枸杞多糖相關的DEPs共23 個，得到的多數(shù)表達蛋白與植物多糖合成代謝有直接關系。而這23 個DEPs 大多表征在甘肅/寧夏組和青海/寧夏組中，且在新疆/寧夏組和內(nèi)蒙古/寧夏組中多不顯著表達（P>0.05），因此剔除這兩個比較組，只比較甘肅/寧夏組和青海/寧夏組，得到的結(jié)果如表1 所示。

表1 不同產(chǎn)地枸杞果實多糖相關差異蛋白篩選Table 1 Screening of wolfberry polysaccharide related proteins from different habitats

2.5 蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡（PPI）的構(gòu)建

由于缺乏枸杞及其近邊緣物種的蛋白質(zhì)互作，故而通過茄科的同源性蛋白構(gòu)建蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡（圖5）。利用160 個與多糖相關的DEPs 制作蛋白質(zhì)互作互交作用最明顯的一組由21 個DEPs組成，包括：糖基轉(zhuǎn)移酶家族（K4CPX6、K4CMS0）、己糖激酶家族（K4C7S0）、ATP 依賴的6-磷酸果糖激 酶（K4CES3）、α -1，4 -葡聚糖 磷酸化 酶（K4CSQ2）及一些尚未被驗證的蛋白（annotation not available）。另一組由6 個DEPs 組成，包括β-半乳糖苷酶（E3UVW7），α -半乳糖苷酶（K4BP29）、α-甘露糖苷酶（E0XN34）及一些尚未被驗證的蛋白（annotation not available）。

圖5 篩選后差異表達蛋白的相互作用網(wǎng)絡Fig.5 Interaction network of differentially expressed proteins after screening

2.6 枸杞多糖相關蛋白通路分析

植物中的多糖主要分為纖維素、半纖維素和果膠三大類[18]，并利用這23 個多糖相關蛋白與KEGG 通路分析結(jié)合，初步預測枸杞多糖合成代謝相關通路，主要有5 個過程。這些過程并非單獨存在，而是由UDP-葡萄糖連接在一起的，UDP-葡萄糖通過一系列反應參與果膠物質(zhì)、半纖維素、糖脂和其它糖基化分子的合成[19]，因此多糖的合成是通過UDP-葡萄糖池的通量進行碳分配和循環(huán)[20]。在多糖合成代謝的過程中，當不同產(chǎn)地的同一個蛋白的表達倍數(shù)存在差異時，可能導致其多糖合成代謝也存在差異。

2.6.1 蔗糖合成分解代謝過程 蔗糖合成和分解代謝的過程如圖6 所示，蔗糖磷酸合成酶（EC：2.4.1.14，SPS）先催化果糖-6-磷酸和UDP-葡萄糖轉(zhuǎn)化為蔗糖-6-磷酸。通過對不同淀粉葉物種茄科植物番茄、馬鈴薯和煙草等植物的SPS 過表達的分析得到證實，SPS 活性與這些物種葉片的蔗糖合成率呈正比關系[21]。青海和甘肅枸杞中SPS 的表達量低于寧夏枸杞（表1），推測寧夏蔗糖合成率可能高于青海和甘肅。鄭國琦[22]研究發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育期枸杞果實中枸杞多糖含量的積累與蔗糖含量呈負顯著相關，表明寧夏中寧產(chǎn)地枸杞的多糖含量可能會低于青海和甘肅，但這與課題組前期試驗結(jié)果并不一致[12]。前期枸杞多糖含量測定結(jié)果表明，青海和寧夏產(chǎn)地微高于甘肅產(chǎn)地，導致這一結(jié)果的原因可能是SPS 的活性與蔗糖積累量并不總是密切相關，葡萄柚汁囊中蔗糖含量增加時，SPS 活性趨于穩(wěn)定[23]。

圖6 蔗糖與纖維素合成代謝過程Fig.6 The synthesis and metabolism of sucrose and cellulose

蔗糖分解代謝具有復雜的生理生化過程，主要調(diào)控因子是蔗糖代謝酶，包括蔗糖合成酶（EC：2.4.1.13，SS）和細胞壁轉(zhuǎn)化酶（EC：3.2.1.26，INV），二者活性的變化明顯影響了總碳水化合物的積累狀態(tài)，其中SS 的作用是雙向的，促進蔗糖和UDP-葡萄糖的平衡[24]。UDP-葡萄糖作為纖維素合成的底物，通過SS 被引導到纖維素合成酶復合物，催化蔗糖裂解生成UDP-葡萄糖和果糖[25]。SPS（果糖-6-磷酸+UDP-葡萄糖）通過循環(huán)使果糖生成蔗糖，為SS 提供連續(xù)的底物，以UDP-葡萄糖的形式的進行纖維素的生物合成，同時限制了細胞內(nèi)果糖的數(shù)量[26]。如表1 所示，青海枸杞蛋白中的SS表達量低于寧夏，可能會導致青海枸杞中纖維素的前體底物UDP-葡萄糖較少，使纖維素含量較少，影響枸杞多糖合成。

2.6.2 纖維素合成代謝過程 纖維素合成代謝的過程如圖6 所示，一部分UDP-葡萄糖通過一系列反應生成纖維素后，纖維素需要一個酶聯(lián)合體來逐漸將纖維素分解，最終代謝為葡萄糖；另一部分UDP-葡萄糖生成1，3-β-葡聚糖和β-葡萄糖苷，并分別由β-1，3-葡聚糖酶（EC：3.2.1.39，GN5-6）和β-葡萄糖苷酶（EC：3.2.1.21，BGL）最終代謝為葡萄糖[27]。研究表明純化后的野生杏β-葡萄糖苷酶可以將纖維二糖糖化成葡萄糖，β-葡萄糖苷酶（EC：3.2.1.21，BGL）對纖維素材料的糖化具有高親和力和催化能力[28]。纖維素的底物UDP-葡萄糖通過一系列酶的作用轉(zhuǎn)化為纖維素是利用一個高效的酶聯(lián)合體來水解纖維素，轉(zhuǎn)化為葡萄糖通常需要3 種酶：內(nèi)切葡聚糖酶（EC：3.2.1.4，EG）、外切葡聚糖酶（EC：3.2.1.91，CBH）和BGL。如表1 所示，在酶聯(lián)合體中，除青海和甘肅枸杞中BGL 的表達量高于寧夏枸杞外，未發(fā)現(xiàn)其它兩種酶有差異表達，推測BGL 可能是導致青海和甘肅與寧夏枸杞的纖維素水解效果速率產(chǎn)生差異的主要原因。在纖維素水解過程中，產(chǎn)物葡萄糖在很多情況下會抑制BGL 的活性[29]，因而青海和甘肅產(chǎn)地枸杞多糖中的葡萄糖含量可能會低于寧夏產(chǎn)地，這一結(jié)果與前期研究一致[12]。

2.6.3 半乳聚糖合成代謝過程 如圖7 所示，UDP-葡萄糖-4-表異構(gòu)酶（EC：5.1.3.2，galE）催化UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖相互轉(zhuǎn)化。UDP-半乳糖在半乳糖醇合成酶（EC：2.4.1.123，GOLS）的作用下生成半乳糖醇，半乳糖醇作為半乳糖基供體，分別由棉子糖合成酶（EC：2.4.1.82，E2.4.1.82）和水蘇糖合成酶（EC：2.4.1.67，E2.4.1.67）這兩種專門的合成酶合成棉子糖和水蘇糖；隨后由β-呋喃果糖苷酶（EC：3.2.1.26，INV）將兩種糖分別水解成蜜二糖和甘露三糖；最后由α-半乳糖苷酶（EC：3.2.1.22，GLA）水解棉子糖、水蘇糖、甘露三糖和蜜二糖最終生成半乳糖和葡萄糖[30]。在擬南芥中，棉子糖和半乳糖醇在冷適應條件下會增加，而棉子糖的合成降解會受到半乳糖醇合成酶和棉子糖合成酶的作用[31]。在矮牽?；ㄖ蠫LA 下調(diào)會導致整個植株的耐寒性增加，因此認為GLA 基因的過度表達會導致內(nèi)源性棉子糖含量降低，從而減低植物抗凍性[32]。由表1 可知甘肅和青海地區(qū)枸杞GLA 和INV 與寧夏地區(qū)相比表達下調(diào)，推測甘肅和青海地區(qū)枸杞耐寒性高于寧夏，寧夏地區(qū)枸杞棉子糖家族寡糖含量可能低于甘肅和青海地區(qū)。

圖7 半乳聚糖合成代謝過程Fig.7 The synthesis and metabolism of galactan

2.6.4 半纖維素合成代謝過程 半纖維素主要為阿拉伯木聚糖，如圖8 所示，UDP-葡萄糖通過UDP-葡萄糖脫氫酶（EC：1.1.1.22，UGDH）不可逆地反應生成UDP-葡萄糖醛酸，并在UDP-葡萄糖醛酸脫羧酶（EC 4.1.1.35，UXS）、UDP-木糖/木糖合酶（AXS）和其它一系列酶的作用下一部分轉(zhuǎn)化為UDP-D-芹菜糖和UDP -D-木糖[33]，UDP-木糖通過一些與阿拉伯聚糖合成代謝相關的酶作用下進行分解代謝。UDP-葡萄糖作為轉(zhuǎn)換UDP-糖的重要分支節(jié)點在UGDH、UXS 及AXS 和UDP-阿拉伯糖-4-表異構(gòu)酶（EC 5.1.3.5，UXE）的催化下分別轉(zhuǎn)換為UDP-葡萄糖醛酸、UDP-木糖和UDP-L-阿拉伯糖。

圖8 半纖維素合成代謝過程Fig.8 The synthesis and metabolism of hemicellulose

有研究表明，高表達的AXS 和低表達的UXE會導致UDP-木糖的積累[34]。前期研究發(fā)現(xiàn)[12]，寧夏產(chǎn)地枸杞多糖中木糖含量高于青海，而阿拉伯糖含量低于青海?？赡芤驗榍嗪ｈ坭街蠻XS 和AXS 的表達量均低于寧夏，青海枸杞中UGDH 的表達量高于寧夏而導致木糖和阿拉伯糖積累發(fā)生變化。

2.6.5 果膠合成代謝過程 果膠是存在所有植物初級細胞壁中的多糖家族，屬于酸性植物細胞壁多糖，（1，4）-鏈接的β-D-吡喃半乳糖醛酸作為骨架結(jié)構(gòu)的一部分。如圖9 所示，UDP-葡萄糖-4-表異構(gòu)酶（EC：5.1.3.2，galE）催化UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖相互轉(zhuǎn)化，UDP-半乳糖醛酸在α-1，4-半乳糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（EC：2.4.1.43，GAUT）的作用下生成果膠，而PG（EC 3.2.1.15）和果膠酯酶（EC：3.1.1.11，E3.1.1.11）是最佳的果膠修飾酶，可降解果膠[35-36]。

圖9 果膠合成代謝過程Fig.9 The synthesis and metabolism of pectin

果膠裂解酶（EC：4.2.2.2，PLY）主要通過降解原代細胞壁中的果膠在植物生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用，能夠促進細胞的擴張和分化[38-39]。在植物中，已經(jīng)證實，在香蕉等水果的成熟和軟化過程中PLY 參與果膠多糖主鏈的降解[37]。果膠酯酶（EC：3.1.1.11，E3.1.1.11）是一種羧酸酯酶，屬于水解酶類，該酶通過使細胞壁中存在的多半乳糖醛酸果膠主鏈中的甲基化羧基脫酯化，促進果膠的降解，從而提高了多半乳糖醛酸酶的效率[40]。甘肅和青海地區(qū)枸杞中PLY 和E3.1.1.11 的表達量與寧夏產(chǎn)地有差異，PLY 和果膠酯酶可能對枸杞果實中的果膠多糖具有一定的降解作用，從而影響不同產(chǎn)地枸杞多糖差異。

3 結(jié)論

本文基于iTRAQ 結(jié)合2D LC-MS/MS 的技術(shù)研究不同產(chǎn)地“寧杞1 號”枸杞的蛋白質(zhì)差異，共篩選到1 437 個DEPs，進行KEGG 通路注釋，進一步篩選發(fā)現(xiàn)與枸杞多糖相關的差異表達蛋白共23 個，推測枸杞多糖合成代謝通路，主要分為蔗糖合成代謝、纖維素合成代謝、半乳聚糖合成代謝、阿拉伯木聚糖合成代謝及果膠合成代謝5 個過程，主要參與其中的酶為蔗糖磷酸合成酶、蔗糖合成酶、UDP-葡萄糖醛酸脫羧酶、β-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶、果膠酯酶和果膠裂解酶等，這些酶可能是影響不同產(chǎn)地枸杞多糖差異的重要蛋白。本文為深入了解不同產(chǎn)地枸杞多糖差異變化機理提供了一定的參考，下一步可針對不同成熟期的枸杞進一步分析，以探究不同產(chǎn)地枸杞多糖變化規(guī)律。