李文莉　朱凱　趙瑩　王永春　李軍鴿

【摘要】目的：優(yōu)選加味葛根顆粒最佳制備工藝。方法：以出膏量和葛根素含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)，優(yōu)選出加味葛根顆粒的最佳提取工藝。對輔料種類及其用量、潤濕劑濃度、干燥溫度等成型工藝條件進(jìn)行考察，確定成型工藝。結(jié)果：加味葛根顆粒的最佳制備工藝為第一次加10倍量水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，濾過，第二次加9倍量水，煎煮1.5 h，濾過，合并濾液，濃縮，干燥；成型工藝為干膏粉加1倍量可溶性淀粉，加適量70%的乙醇作為潤濕劑，混勻，過14目篩制顆粒，60～70 ℃干燥，整粒，即得。結(jié)論：優(yōu)選出的提取工藝和成型工藝穩(wěn)定可行，為后期加味葛根顆粒的制備和生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】加味葛根顆粒；正交試驗(yàn)；葛根素；制備工藝

【中圖分類號】R286.0【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）21-0055-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.21.zgmzmjyyzz202318013

Study on Preparation Technology of Jiawei Gegen KeliLI WenliZHU KaiZHAO YingWANG YongchunLI Junge*

Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun 130117， ChinaAbstract：Objective To optimize the best preparation process of Jiawei Gegen Keli. Methods Taking the amount of extract and puerarin content as indicators，orthogonal tests were used to optimize the best preparation process of Jiawei Gegen Keli. According to the molding rate， angle of repose and other indicators， the conditions of auxiliary materials， dosage and process are investigated to determine the molding process of the prescription.Results The optimal extraction process of Jiawei Gegen Keli was soaking for 1 hours， adding 10 times of water for the first time， adding 9 times of water for the second time， extracting twice， and decocting for 1.5 hours each time; the molding process was dry paste powde： paste Essence =1∶1 Add soluble starch， then add an appropriate amount of 70% ethanol as a wetting agent， mix well， pass through a 14 mesh sieve to make granules，dry at 60-70 ℃， and granulate.Conclusion The optimized extraction process and molding process are stable and feasible， and provide a basis for the preparation of Jiawei Gegen Keli for large-scale industrial production.

Keywords：Jiawei Gegen Keli; Orthogonal Test; Puerarin；Preparation Technology

加味葛根顆粒原方經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿科多年臨床應(yīng)用，療效確切，安全性高。方劑由葛根、麻黃、桂枝等九味藥組成，有解表升津、舒筋解肌之功效，主治頸椎病、項(xiàng)痹、筋傷［1-2］。

加味葛根顆粒原處方在臨床上主要以湯劑為主，湯劑存在攜帶不便、貯藏困難等缺點(diǎn)，顆粒劑具有起效迅速，攜帶、服用、貯藏均較方便，并能克服湯劑的缺點(diǎn)［3-6］。在保留其制備方法及藥效物質(zhì)的基礎(chǔ)上現(xiàn)進(jìn)行院內(nèi)制劑開發(fā)研究。本研究采用傳統(tǒng)的水煎煮提取方法，以出膏量和葛根素含量共同作為考察指標(biāo)，采用權(quán)法確定綜合評分，根據(jù)正交試驗(yàn)，優(yōu)選出最佳的提取過程，以求結(jié)果穩(wěn)定可靠。通過觀察顆粒成型狀態(tài)、溶化性等指標(biāo)，對輔料種類及用量、潤濕劑濃度等條件進(jìn)行成型工藝考察，確定加味葛根顆粒最佳制備工藝，也為后期其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究與制劑生產(chǎn)開發(fā)提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器LC2030（日本島津公司）高效液相色譜儀；ME204E分析天平、XS105DU分析天平（METLER）；BPZ-6123LC真空干燥盒（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.2試藥與藥材葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110752-201816，純度：95.6%），甲醇（色譜純，美國Fisher公司），其他試劑均為分析純；經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)唐秋竹教授鑒定檢驗(yàn)，葛根、麻黃、桂枝、生姜、炙甘草、芍藥、大棗、木瓜、牛膝九味中藥飲片全部合格，由吉林北藥藥材加工有限公司購進(jìn)；可溶性淀粉（安徽山河藥用輔料股份有限公司，200908）。

2方法與結(jié)果

2.1葛根素含量測定方法的建立

2.1.1對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含葛根素0.4 mg的溶液，搖勻，即得。

2.1.2供試品溶液的制備樣品適量，研細(xì)，取約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇25 mL，稱定重量，超聲處理40 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.1.3陰性對照溶液的制備取不含葛根的處方水提液干燥樣品，按“2.1.2”制備陰性對照溶液。

2.1.4色譜條件 TechMate C18-ST色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相是甲醇-水（24∶76）；檢測波長為250 nm；柱溫為35 ℃；流速為1.0 mL/min。

2.1.5方法學(xué)驗(yàn)證

2.1.5.1專屬性試驗(yàn)取葛根素對照品，供試品溶液及陰性對照溶液，按2.1.4色譜條件試驗(yàn)，記錄色譜圖，如圖1所示。結(jié)果，陰性無干擾。

2.1.5.2線性考察取葛根素對照品溶液（濃度0.0093 mg/mL、0.0186 mg/mL、0.0247 mg/mL、0.0371 mg/mL、0.0445 mg/mL、0.0928 mg/mL）各5 μL，分別注入液相色譜儀。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到葛根素線性方程為：Y=0.0000002X+0.0041（r=0.9992），表明葛根素在該范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品，按“2.1.2”制備6份供試品溶液并進(jìn)行測定，葛根素平均含量為2.59mg/g，RSD為2.26%，說明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.1.5.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1.4”色譜條件，分別于0 h、4 h、8 h、12 h、18 h、24 h進(jìn)行測定，結(jié)果，葛根素含量的平均值為2.50 mg/g，RSD為1.08%，24 h內(nèi)供試品溶液基本穩(wěn)定。

2.2出膏量測定精密量取25 mL的水提液，置一恒重蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃烘箱內(nèi)烘干至恒重，置干燥器中30 min放涼，計算出膏量。

2.3提取工藝研究

2.3.1浸泡時間及藥材吸水率考察按處方比例取藥材3份，分別加5倍量水浸泡至透心，每隔30 min測量一次，直至藥材全部浸透，濾出全部未被吸收的水液，得藥材的吸水率，結(jié)果見表1。當(dāng)飲片浸泡1 h后，吸水量基本不變，藥材基本浸透，平均吸水量為286 mL，平均吸水率為101.42%（約飲片干重的1倍量）。由此確定，第一次煎煮需多加1倍的水，浸泡1 h后再第一次加熱提取。

2.3.2加水量的考察取處方藥材282 g，4份，分別加入5倍、7倍、9倍、11倍水，第一次煎煮追加1倍量水，浸泡1 h，提取2次，每次1 h，濾過，合并2次濾液，按“2.2”方法測定出膏量，取干膏粉，按“2.1”方法測定葛根素含量。結(jié)果見表2，隨著加水量的增加，出膏量和葛根素含量不斷增加，當(dāng)加水量增加到藥材9倍時，出膏量為74.45 g和葛根素含量為240.98 mg與11倍相比干出膏量和葛根素含量無顯著性提高，故選擇5倍、7倍、9倍為正交試驗(yàn)加水量考察水平。

2.3.3提取時間的考察稱取處方藥材282 g，4份，分別加7倍量水，第一次煎煮追加1倍量水，浸泡1 h，分別提取1 h、1.5 h、2 h、2.5 h，提取2次，濾過，合并濾液，按“2.2”方法測定出膏量，取干膏粉，按“2.1”方法測定葛根素含量。結(jié)果見表3，隨著提取時間的延長，出膏量和葛根素含量呈增加趨勢，當(dāng)提取時間延長至2.5 h時，出膏量和葛根素含量與2 h相差不多，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際節(jié)約資源，可選擇1 h、1.5 h、2 h為正交試驗(yàn)提取時間考察水平。

2.4正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計加水量選擇5倍藥材量、7倍藥材量、9倍藥材量三水平；煎煮時間選取1 h、1.5 h、2 h三水平；煎煮次數(shù)選擇1次、2次、3次，對三因素三水平進(jìn)行整理，見表4，以出膏量、葛根素含量為考查指標(biāo)，利用正交L9（34）設(shè)計正交實(shí)驗(yàn)。按方劑配比稱取藥材282 g，共9份，第一次加水量追加1倍量，并在首次加熱提取之浸泡1 h。按照L9（34）正交表進(jìn)行水煎煮提取試驗(yàn)，按“2.2”方法測定出膏量，取干膏粉，按“2.1”方法測定葛根素含量。

2.4.1正交試驗(yàn)結(jié)果與方差分析

表5分析可知，因素A（加水量）的結(jié)果為A₃＞A₂＞A₁，因素B（煎煮時間）的結(jié)果為B₂＞B₃＞B₁，因素C（煎煮次數(shù)）的結(jié)果為C₃＞C₂＞C₁；表6分析可知，A因素（加水量）和B因素（煎煮時間）沒有顯著影響，因素水平可選A₃和B₂，C因素水平對試驗(yàn)結(jié)果有顯著的影響，C₃＞C₂，但選C₃提取周期較長，提取液過多，濃縮耗能較大，故從節(jié)能降耗方面綜合考察，對A₃B₂C₂與A₃B₂C₃進(jìn)行比較試驗(yàn)，A₃B₂C₂方案出膏量為73.23 g，葛根素含量為187.26 mg， A₃B₂C₃方案出膏量為74.33 g，葛根素含量為188.54 mg。A₃B₂C₂方案的出膏比A₃B₂C₃方案少1.095 g，葛根素含量無明顯變化。考慮生產(chǎn)實(shí)際情況，可以選擇C₂水平，故最后選擇A₃B₂C₂為加味葛根顆粒最佳提取工藝，即每味藥材按處方比例取藥，第一次加10倍量的水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，濾過，第二次加9倍量水，煎煮1.5 h，濾過，濾液合并。

2.5提取驗(yàn)證工藝取處方藥材3份，每份282 g，按確定的最佳提取工藝條件進(jìn)行提取，濃縮，干燥，考察出膏量和葛根素含量。結(jié)果見表7。三份樣品的出膏量、葛根素含量的RSD分別為1.77%、2.22%，綜合評分均較高，重現(xiàn)性良好。故確定A3B2C2為最佳提取工藝。

2.6成型工藝研究

2.6.1干膏的制備稱取處方藥材，第一次加10倍量的水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，濾過，第二次加9倍量的水，煎煮1.5 h，濾過，合并濾液，藥液濃縮至相對密度為1.18～1.25（65 ℃）的稠膏，60 ℃減壓干燥，得干膏。

2.6.2輔料的選擇及藥輔比的考察制顆粒常用輔料有蔗糖、乳糖、糊精、可溶性淀粉等多種［8］，當(dāng)干膏粉分別與蔗糖和乳糖制軟材時，軟材粘性較大，不容易過篩，且不易烘干，色澤不均勻，整粒后顆粒成型性不好；干膏粉分別與糊精和可溶性淀粉制粒軟才時，軟材適中，顆粒成型性好，溶化性符合規(guī)定［9］。糊精和可溶性淀粉具有無毒、水溶性較好、成型率較高、成本較低等特點(diǎn)，適用人群范圍大［10］，對于加味葛根顆粒而言，可二選其一，本研究以可溶性淀粉作為加味葛根顆粒輔料。

取干膏粉3份，每份100 g，分別加入可溶性淀粉50 g、100 g、150 g，適量70%的乙醇，混勻制軟材，干燥，整粒，制粒結(jié)果如圖2，見表8，干膏粉∶可溶性淀粉為1∶1軟材適中，過篩容易，顆粒成型性好，不易結(jié)塊，色澤均一，溶化性符合要求，因此確定可溶性淀粉加入量約為干膏粉的1倍。

2.6.3過篩目數(shù)的考察稱取處方藥材，按照 “2.6.1”項(xiàng)下的方法制備干膏，取干膏粉4份，分別加1倍可溶性淀粉，再加入70%乙醇作為潤濕劑，分別用10目、14目、18目篩制粒，干燥，整粒，記錄制粒情況及顆粒外觀。結(jié)果14目篩時，顆粒的外觀、粒徑較均勻，故選擇加味葛根顆粒過篩目數(shù)為14目。

2.6.4潤濕劑濃度的考察稱取處方藥材，按照“2.6.1”項(xiàng)下方法制備干膏，取干膏粉3份，分別加1倍可溶性淀粉，再分別加入70%、75%、80%乙醇作為潤濕劑，14目篩制粒，60 ℃鼓風(fēng)干燥，整粒，記錄制粒情況及顆粒外觀。結(jié)果各濃度乙醇潤濕劑對制顆粒影響不大，故選擇濃度較低，制粒容易、顆粒成型較好的乙醇潤濕劑濃度，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果決定采用70%乙醇作為加味葛根顆粒的潤濕劑。

2.6.5濕顆粒干燥溫度的確定濕顆粒制成后應(yīng)迅速干燥，放置過久濕粒易結(jié)塊，考察80 ℃、70 ℃、60 ℃干燥溫度，結(jié)果80 ℃干燥顆粒較硬，易結(jié)塊，70 ℃和60 ℃顆粒干燥效果較好，故濕顆粒干燥溫度應(yīng)控制在60～70 ℃干燥即可。

2.7成型工藝驗(yàn)證取處方藥材3份，按“2.5”最佳提取工藝提取，藥液濃縮至相對密度為1.18～1.25（65 ℃）稠膏，60 ℃減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，加1倍量可溶性淀粉、70%乙醇適量，混勻，14目篩制顆粒，60～70 ℃干燥，即得。成型工藝驗(yàn)證結(jié)果見表9。

3討論

3.1劑型的選擇中藥院內(nèi)制劑大多是有著多年臨床經(jīng)驗(yàn)的名老中醫(yī)，經(jīng)過多年實(shí)踐總結(jié)出的療效確切的驗(yàn)方［11］，還有一些是流傳幾千年的經(jīng)典名方［12］。中藥院內(nèi)制劑的研究能極大地推動我國的中醫(yī)藥事業(yè)向前發(fā)展［13-16］。加味葛根顆粒原湯劑經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院多年臨床應(yīng)用，反復(fù)實(shí)踐、對比研究，結(jié)果表明，選擇顆粒劑，既能保留原湯劑的功效，又便于患者的攜帶、服用、儲藏等。

3.2含量測定指標(biāo)的選擇加味葛根顆粒由九味藥材組成，處方中各藥材所含有效成分各不相同，含量指標(biāo)的選擇，應(yīng)從質(zhì)量控制的可測性和整體性考慮，從處方配伍看，首選君藥葛根，在《中國藥典》（2020年版）含量測定中測葛根素，葛根素具有抗骨質(zhì)疏松［17］、解熱鎮(zhèn)痛作用［18］、降血糖［19］、抗炎［20］等作用，故參考藥典方法測定處方中葛根素含量，結(jié)果方法簡單、可靠、易行，所得圖譜峰型好，陰性無干擾，小試試驗(yàn)計算葛根素轉(zhuǎn)移率較高為30%，故將葛根素確定為有效成分的評價指標(biāo)。

3.3提取工藝的選擇本方原劑型為湯劑，為了最大限度地保留其功效，因此選擇傳統(tǒng)的水煎煮工藝對其進(jìn)行提取，以加水倍數(shù)、提取時間、提取次數(shù)作為考察因素，以出膏率和葛根素含量作為提取工藝的評價指標(biāo)，為了使結(jié)果穩(wěn)定，可靠，采用熵權(quán)法確定綜合評分，并根據(jù)正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳提取工藝。正交試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)是科學(xué)性高、效果顯著、操作簡便等，廣泛應(yīng)用于中藥提取工藝的研究中［21］，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果表明，提取次數(shù)對綜合評分影響最大，其次是加水倍數(shù)、提取時間。因此優(yōu)選出的最佳提取工藝為加9倍量水，提取兩次，每次1.5 h。

3.4成型工藝的選擇通過觀察顆粒成型性狀態(tài)、溶化性、休止角等指標(biāo)，對輔料種類及用量、潤濕劑濃度、過篩目數(shù)、干燥溫度等條件進(jìn)行成型工藝考察。臨床常用的輔料種類很多，經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)，加味葛根顆粒適宜的輔料為可溶性淀粉和糊精，對于本研究而言，選用溶解性更好的可溶性淀粉。通過試驗(yàn)考察，最佳配比為干膏粉：可溶性淀粉=1∶1。

本研究為保證加味葛根顆粒提取和輔料添加的客觀準(zhǔn)確性，選用多個指標(biāo)綜合測評。優(yōu)選出最佳制備工藝為第一次加10倍量水（第一次煎煮追加1倍量水，煎煮前浸泡1 h），第二次加9倍量水，每次1.5 h，濾過，合并煎液，濾液濃縮至相對密度為1.18～1.25（65 ℃）稠膏，60 ℃減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，加1倍量可溶性淀粉，加70%的乙醇適量，過14目篩制成顆粒，60～70 ℃干燥，整粒，即得。通過本研究優(yōu)選出的加味葛根顆粒最佳制備工藝合理、可行、穩(wěn)定，為后期顆粒的制備和生產(chǎn)提供理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2023-02-27編輯：陶希睿）