張植元， 范 澤， 胡佳祥， 王雄延， 魏 東 ， 錢(qián) 靜， 陳 嬌

（1.四川水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 成都 611200；2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江省水生動(dòng)物病害與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150070；3.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384）

浮萍，是浮萍科水面漂浮性植物，其廣泛分布于湖泊、 河流和稻田等， 屬于水體污染與毒理檢測(cè)、可進(jìn)行水體修復(fù)的水生植物類(lèi)群（Sharma 等，2019）。從營(yíng)養(yǎng)角度來(lái)看，浮萍蛋白質(zhì)含量豐富，同時(shí)其氨基酸組成理想，與飼料原料豆粕相當(dāng)，因此可成為良好的飼料、食品及生物質(zhì)基質(zhì)資源（楊晶晶等，2021；Sharma 等，2019；Appenroth 等，2018；Ma 等，2018；張植元等；2017）。 目前，浮萍的飼用價(jià)值已經(jīng)得到廣泛關(guān)注， 其作為飼料原料或配料飼養(yǎng)豬、 畜禽及魚(yú)類(lèi)均能夠有效促進(jìn)飼養(yǎng)對(duì)象的生長(zhǎng) （張植元等，2017； 李凱年，2015；Cruz-Velásquez 等，2014；許萬(wàn)祥，1994）。 除此之外，浮萍中豐富的葉黃素與酪氨酸也有助于魚(yú)體體色的改善， 并會(huì)影響體內(nèi)黑色素的沉積 （張植元等，2017；黃斌等，2011）。

錦鯉體型健碩、體色豐富多彩、易飼養(yǎng)的特性使其倍受觀賞魚(yú)愛(ài)好者的追崇（劉飛等，2007）。而黃金錦鯉獨(dú)特的體色使其從諸多錦鯉品種中脫穎而出。我國(guó)對(duì)錦鯉已有不少研究，但主要集中在生物學(xué)特性、人工繁育選育、飼養(yǎng)技術(shù)和疾病防治等方面（胡民強(qiáng)，2010），關(guān)于飼料原料對(duì)其影響的研究較少， 而將浮萍作為一種原料添加到觀賞魚(yú)飼料中的研究至今鮮見(jiàn)報(bào)道。 錦鯉體自身無(wú)法合成類(lèi)胡蘿卜素，體表著色需要從外界攝入，因此必須通過(guò)飼料中著色劑的添加來(lái)解決這一問(wèn)題（冷向軍和李小勤，2006）。因此，介于浮萍豐富的類(lèi)胡蘿卜素含量， 本試驗(yàn)通過(guò)研究不同添加水平的浮萍飼料對(duì)黃金錦鯉形體及體色的影響， 以期為浮萍在錦鯉飼料中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚(yú)與飼養(yǎng)管理 黃金錦鯉魚(yú)種來(lái)自天津市藍(lán)科水產(chǎn)有限公司， 飼養(yǎng)階段在天津農(nóng)學(xué)院循環(huán)水實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。 試驗(yàn)分6 組， 每組3 個(gè)重復(fù)，養(yǎng)于18 個(gè)循環(huán)水族箱，每個(gè)水族箱喂養(yǎng)30 尾魚(yú)。 試驗(yàn)魚(yú)馴化1 周后，選取體格健壯，規(guī)格相仿[（52.99±1.95）g] 的錦鯉， 隨機(jī)分入18 個(gè)水族箱中，水溫控制在（29±1.1）℃，pH 為7.8±0.2，投餌率3%，每日9:00 和15:30 投喂，持續(xù)養(yǎng)殖8 周。

1.2 試驗(yàn)飼料 室外（天津市西青畜牧局示范基地門(mén)口河溝中）采集鮮浮萍，清理曬干后進(jìn)入粉碎機(jī)粉碎制成浮萍粉 （粗蛋白質(zhì)：34.6%； 粗脂肪：6.7%；粗纖維：5.0%），以魚(yú)粉、全蝦粉、豆粕和棉籽粕作為蛋白源，配制浮萍（干品）替代菜籽粕水平分別為0%、20%、40%、60%、80%、100% 的6種等蛋白（38.6%）飼料，分別記為D1、D2、D3、D4、D5、D6，其組成與營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。 各飼料原料均通過(guò)粉碎機(jī)粉碎過(guò)60 目網(wǎng)篩，混合均勻后，使用江蘇牧羊集團(tuán)牧羊MUZLM V4 型飼料制粒機(jī)制成直徑為1.00 mm 的沉性顆粒飼料。

表1 魚(yú)飼料組成和營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 樣本采集 飼養(yǎng)結(jié)束后，各試驗(yàn)組錦鯉進(jìn)行禁食2 d 的處理，之后每重復(fù)組選20 尾魚(yú)作為樣品，測(cè)量體重、體長(zhǎng)、體高，并用色彩色差儀（CR-400 型，日本柯尼卡美能達(dá)集團(tuán)）測(cè)定體表相關(guān)數(shù)值。 取皮膚、側(cè)線鱗片及背鰭后將其解剖，然后轉(zhuǎn)入-80 ℃低溫冰箱中保存，待測(cè)。

1.4 形體指標(biāo)的測(cè)定 形體指標(biāo)計(jì)算公式如下：

式中：Wt 為終末魚(yú)體質(zhì)量，g；Wn 為內(nèi)臟重，g；t 為養(yǎng)殖周期，d；L 為試驗(yàn)?zāi)~(yú)體長(zhǎng)，cm；T 為試驗(yàn)?zāi)~(yú)體高，cm。

1.5 體色指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 體表色差值的測(cè)定 試驗(yàn)開(kāi)始、 第4 周和結(jié)束時(shí)，用色彩色差儀測(cè)定魚(yú)體白度值（L*）、紅度值（a*）、黃度值（b*）、總色差（△E*）。

1.5.2 總類(lèi)胡蘿卜素的測(cè)定 參考陳曉明等（2004）的研究方法并略做修改：用電子分析天平準(zhǔn)確分別稱(chēng)取皮膚、胸鰭、側(cè)線鱗片0.1 g，用丙酮定容至5 mL，放入超聲波清洗機(jī)低溫超聲波振蕩45 min 后取出，以4000 r/min 離心10 min，放入冰箱（4 ℃）中靜置24 h。 將所得的色素萃取液分別置于1 cm 比色皿中，以丙酮為空白對(duì)照管（比色皿加蓋以防止丙酮揮發(fā)， 影響比色效果），用Thermo Spectronic UVmini-1240 型紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，找出最大吸收峰處的波長(zhǎng)（448 nm），在該波長(zhǎng)下測(cè)定各組色素萃取液的吸光度值。 總類(lèi)胡蘿卜素含量計(jì)算公式如下：

式中：A 為吸光度值；K 為常數(shù)（104）；V為提取液體積，mL；E 為摩爾消光系數(shù)（2500）；G 為樣品質(zhì)量，g。

1.6 數(shù)據(jù)處理分析 數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用SPSS 18.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）， 若差異達(dá)到顯著水平， 則采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 飼料浮萍水平對(duì)黃金錦鯉形體指標(biāo)的影響由表2 可知，各組錦鯉體重/體長(zhǎng)（L/T）與肥滿(mǎn)度（CF）均表現(xiàn)為升高的趨勢(shì)，且均以D6 組與D5 組最高，體重/體長(zhǎng)（L/T）指標(biāo)相較于最低組D2 提高15.51% ～17.25%（P＜0.05），肥滿(mǎn)度（CF）相較于最低組D1 顯著提高17.14% ～20.82% （P＜0.05）；體長(zhǎng)/體高（L/T）表現(xiàn)為下降的趨勢(shì)，D6 組最低，相比D1 組顯著降低6.67%（P＜0.05）；內(nèi)臟指數(shù)（VIS）整體表現(xiàn)為下降趨勢(shì)，其中D5 組與D6 組顯著低于D2 組， 降低16.18%～18.04%（P＜0.05）；空殼率（DOR）表現(xiàn)為上升的趨勢(shì)，且D6 組與D5 組差異不顯著（P＞0.05），D6 組顯著高于對(duì)照組D1 組，顯著提高1.38%（P＜0.05）。

表2 飼料浮萍水平對(duì)黃金錦鯉形體指標(biāo)的影響

2.2 飼料浮萍水平對(duì)黃金錦鯉體色的影響

2.2.1 飼料浮萍水平對(duì)黃金錦鯉體表色差值的影響 由表3 ～表6 可知， 同一飼料組投喂的黃金錦鯉在3 個(gè)不同階段的各色差值均出現(xiàn)變化：白度值（L*）均隨投喂時(shí)間的增長(zhǎng)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，整體來(lái)看下降9.35% ～16.23%，且初始白度值（L*）顯著高于其他時(shí)期（P＜0.05）；D6與D2 組紅度值（a*）在三個(gè)階段差異均不顯著（P＞0.05）， 而其他各組大致呈下降的趨勢(shì)；據(jù)黃度值（b*）結(jié)果顯示，D6、D3 與D4 組在三個(gè)階段存在顯著差異（P＜0.05），均呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)；各組的總色差（△E*）在三個(gè)階段均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且中期（4 周）階段顯著大于其他兩個(gè)階段，提高14.00% ～14.52%（P＜0.05）。

表4 飼料紫背浮萍水平對(duì)黃金錦鯉紅度值（a＊）的影響

表5 飼料紫背浮萍水平對(duì)黃金錦鯉黃度值（b＊）的影響

表6 飼料紫背浮萍水平對(duì)黃金錦鯉總色差（△E＊）的影響

同一階段的不同飼料組投喂的黃金錦鯉各色差值也都出現(xiàn)了變化：末期（8 周）階段，白度值（L*）以D6 與D5 組表現(xiàn)最高，且顯著高于D2 組，相較于D2 組提高2.83%～6.31%（P＜0.05）， 其他兩個(gè)階段各組差異不顯著（P＞0.05）；中期（4 周）與末期（8 周）兩個(gè)階段，紅度值（a*）均隨著飼料紫背浮萍的添加量提高呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)， 且D6 組顯著高于D3 組，提高83.33%～89.36%（P＜0.05）；中期（4 周）與末期（8 周）兩個(gè)階段黃度值（b*）大致呈現(xiàn)上升趨勢(shì)， 且D5 組與D6 組顯著高于對(duì)照組D1 組， 相較于D1 組提高7.40% ～36.59%（P＜0.05）；中期（4 周）與末期（8 周）兩個(gè)階段各組的總色差（△E*）均呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，D6 組顯著高于對(duì)照組D1 組，提高6.27%～6.86%（P＜0.05）。

2.2.2 飼料浮萍水平對(duì)黃金錦鯉體表總類(lèi)胡蘿卜素的影響 由表7 可知， 同一飼料組投喂的黃金錦鯉在不同組織間總類(lèi)胡蘿卜素含量大致均呈現(xiàn)相同的差異，肌肉中總類(lèi)胡蘿卜素含量顯著低于其他各組（P＜0.05），而D1、D2 組與D3 組其他組織間類(lèi)胡蘿卜素含量差異不顯著（P＞0.05），其他三組各組織總類(lèi)胡蘿卜素含量均為胸鰭＞皮膚＞鱗片＞肌肉。而同一組織中，各飼料組投喂黃金錦鯉除肌肉的總類(lèi)胡蘿卜素含量無(wú)顯著差異（P＞0.05），其他各組織中均隨著紫背浮萍添加量的提高呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)， 且D6 組顯著高于對(duì)照組D1 組，相較于D1 組提高50.00% ～587.27%（P＜0.05）。

表7 飼料紫背浮萍水平對(duì)黃金錦鯉體表總類(lèi)胡蘿卜素的影響mg/kg

3 討論

錦鯉的鑒賞主要體現(xiàn)在形體健碩與色澤鮮艷兩個(gè)方面。 錦鯉的成長(zhǎng)會(huì)經(jīng)歷幼鯉、若鯉、成鯉與壯鯉等多個(gè)時(shí)期， 每個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期都要進(jìn)行定期的專(zhuān)業(yè)化挑選， 而體型的美觀與否是挑選的第一指標(biāo)也是最重要的參照指標(biāo)（朱力和普歌，2006）。王廣軍（2000）在錦鯉的鑒賞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中提出，錦鯉體長(zhǎng)與體高的比例為2.6 ～3.0:1 時(shí)相對(duì)理想，本試驗(yàn)結(jié)果顯示， 六組不同紫背浮萍添加水平飼料投喂下的錦鯉， 體長(zhǎng)與體高的比例均大致在該范圍內(nèi)，且D4 組與D6 組表現(xiàn)最為理想，結(jié)合空殼率與內(nèi)臟指數(shù)指標(biāo)表明， 紫背浮萍添加量的提高使錦鯉對(duì)于飼料的吸收更充分， 在水中的活動(dòng)量增加，最終表現(xiàn)出更為美觀的體型。

錦鯉被業(yè)界稱(chēng)之為水中“活寶石”，其豐富多彩的體色總是會(huì)讓鑒賞者稱(chēng)贊與陶醉。 幾乎所有品種的錦鯉（寫(xiě)類(lèi)與別甲類(lèi)除外）體表著色均需從外界攝入類(lèi)胡蘿卜素， 因此必須通過(guò)飼料中著色劑的添加來(lái)解決這一問(wèn)題。 白東清等（2010）通過(guò)對(duì)紅白錦鯉投喂含有不同水平β-胡蘿卜素的飼料試驗(yàn)表明，其添加量為1.0 ～2.5 g/kg 時(shí)對(duì)紅白錦鯉增色效果最好；李建光等（2009）試驗(yàn)結(jié)果表明， 飼料中添加辣椒紅素與胡蘿卜素對(duì)錦鯉均起到了良好的增色效果。 孫金輝等（2016）在飼料中添加紅辣椒粉對(duì)錦鯉體色影響的研究中提到，體表的色差值與類(lèi)胡蘿卜素含量有一定的相關(guān)性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示， 黃金錦鯉體表組織色素含量高低順序?yàn)椋忽挆l＞皮膚＞鱗片＞肌肉，而隨著紫背浮萍添加量的提高， 黃金錦鯉的體表各組織中總類(lèi)胡蘿卜素的含量相應(yīng)地升高，且黃度值（b*）也有明顯的提高， 說(shuō)明紫背浮萍中含量豐富的葉黃素被黃金錦鯉高度吸收。但值得注意的是，養(yǎng)殖8 周后，各組黃金錦鯉體表白度值（L*）大致均在下降，且黃度值（b*）在養(yǎng)殖第4 周時(shí)表現(xiàn)最高，之后也呈下降趨勢(shì)， 這可能是由于室內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境不同于室外養(yǎng)殖采光度好所導(dǎo)致的結(jié)果。

綜上， 在形體指標(biāo)方面， 綜合體長(zhǎng)/體高（L/T）、體重/體長(zhǎng)（W/L）及肥滿(mǎn)度（CF）等結(jié)果表明，紫背浮萍作為植物蛋白源替代菜籽粕促使黃金錦鯉的形體向正常錦鯉鑒賞要求情況下發(fā)展，且D6組效果最顯著；在體色方面，綜合體表色差值與總類(lèi)胡蘿卜素含量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖8 周后，黃金錦鯉的白度值（L*）呈下降的趨勢(shì)，黃度值（b*）呈上升的趨勢(shì)， 促使黃金錦鯉體表的色彩往最美的方向發(fā)展， 且各組織總類(lèi)胡蘿卜素含量隨紫背浮萍添加量提高呈上升趨勢(shì)，D6 組顯著高于其他組。 因此，飼料浮萍添加水平為14%時(shí)，更有利于黃金錦鯉體型趨于美觀，達(dá)到體表增色的效果。