傅 莉，李曉雪

（1. 古浪縣農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，甘肅 古浪 733101；2. 武威市畜牧獸醫(yī)總站，甘肅 武威 733000）

布魯氏菌能夠引起牛、羊、豬等動(dòng)物和人的布魯氏病，常稱(chēng)“布病”，是我國(guó)二類(lèi)人畜共患傳染病。主要引起病畜不孕、流產(chǎn)、睪丸炎等和人的似感冒、似風(fēng)濕及流產(chǎn)、不孕等癥狀，不僅在養(yǎng)殖上造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，更是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康和公共衛(wèi)生安全。布魯氏菌因其在胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖不易被藥物治療、反復(fù)感染和尚未清晰發(fā)病機(jī)制等特點(diǎn)，從1905年被正式報(bào)道至今仍未被消除凈化，目前布魯氏菌的防控已成為動(dòng)物養(yǎng)殖和醫(yī)學(xué)界的共同難題。

近年來(lái)，地方政府把養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)作為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的“重點(diǎn)工程”，養(yǎng)牛數(shù)量激增造成了更為嚴(yán)峻的疫病防控風(fēng)險(xiǎn)，尤其布病這個(gè)危害性極為嚴(yán)重的人畜共患病。牛布病將會(huì)引起不孕、流產(chǎn)、死胎等，嚴(yán)重影響?zhàn)B牛效益，更會(huì)污染周?chē)h(huán)境，增加人感染布病的風(fēng)險(xiǎn)，因此牛布病的科學(xué)防控是對(duì)畜牧業(yè)持續(xù)發(fā)展和保障人民健康的重要措施之一。本文將對(duì)牛布魯氏菌病的防控模式進(jìn)行探索，以期在布病防控中找到效果好、成本低、易操作的防控方式。

1 構(gòu)建生物安全體系

牛布魯氏菌病的生物安全體系的構(gòu)建包括養(yǎng)牛、產(chǎn)品加工和銷(xiāo)售運(yùn)輸?shù)雀鱾€(gè)環(huán)節(jié)；還包括牛場(chǎng)的選址布局和周邊環(huán)境、硬件設(shè)施設(shè)備和軟件飼養(yǎng)管理、人員車(chē)輛和環(huán)境衛(wèi)生消毒、病死畜和排泄物或污染物的無(wú)害化處理等。構(gòu)建合格的布魯氏菌病生物安全體系能夠有效避免布魯氏菌入侵，減少牛的患病幾率，從而降低布病感染造成的損失和風(fēng)險(xiǎn)，在源頭做好布病防控。

1.1 牛場(chǎng)設(shè)計(jì)與環(huán)境 參照《生鮮乳生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（試行）》進(jìn)行選擇，包括地勢(shì)、水源、土質(zhì)、氣象、交通、周邊環(huán)境等。合理布局，需包括生活管理區(qū)、輔助生產(chǎn)區(qū)、生產(chǎn)區(qū)、糞污處理區(qū)和病畜隔離區(qū)等功能區(qū)，需做好道路、牛舍、牛床、水質(zhì)、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)、排水、糞污處理等場(chǎng)地設(shè)施。

1.2 配套設(shè)施設(shè)備 配套生產(chǎn)設(shè)施有飼草飼料加工投喂設(shè)施、通風(fēng)及照明設(shè)施、雨水和污水分離的排水設(shè)施及消毒設(shè)施，場(chǎng)區(qū)入口和生產(chǎn)區(qū)入口處均需設(shè)置車(chē)輛消毒池或噴霧式消毒設(shè)備，人員通道需配備蒸汽消毒設(shè)施和消毒地墊，物品消毒間設(shè)有紫外燈、消毒柜或熏蒸設(shè)備，場(chǎng)區(qū)、圈舍內(nèi)備有消毒車(chē)和消毒墊等；無(wú)害化處理設(shè)施應(yīng)設(shè)有堆糞池、化尸池、焚燒爐或無(wú)害化處理暫存區(qū)等。

1.3 飼養(yǎng)管理 分別做好犢牛、青年牛、成年牛的飼養(yǎng)和管理。做好日糧搭配、保證充足的飼料營(yíng)養(yǎng)和清潔新鮮的飲水供應(yīng)，注意添加維生素和礦物質(zhì)。做好飼草飼料的管理，對(duì)購(gòu)入的青貯飼料、精料、飼料添加劑等進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，做好購(gòu)買(mǎi)和使用記錄等，將飼料專(zhuān)庫(kù)儲(chǔ)存，定期檢查，避免受潮霉變和防蟲(chóng)防鼠。做好引種管理，正規(guī)渠道購(gòu)買(mǎi)引入精液、胚胎、種牛等，引種時(shí)注意證章證明等的檢查、驗(yàn)收和保管。對(duì)引入牛要進(jìn)行整群檢測(cè)，隔離觀察30 d，無(wú)發(fā)病死亡等現(xiàn)象方能混群飼養(yǎng)。同時(shí)注意做好圈舍防寒保暖、散熱通風(fēng)、衛(wèi)生打掃、定期消毒。注意牛的健康狀況觀測(cè)和記錄。建立自繁自養(yǎng)制度。

1.4 防疫管理

（1）消毒：建立消毒制度。按照消毒技術(shù)規(guī)范采用不同消毒液不同方式對(duì)場(chǎng)區(qū)、圈舍、工具、人員、車(chē)輛等進(jìn)行消毒。場(chǎng)區(qū)、圈舍每半月至少消毒一次，人員車(chē)輛每進(jìn)出一次場(chǎng)區(qū)和生產(chǎn)區(qū)均要消毒，工具使用前后消毒并在平時(shí)做好清潔保管。認(rèn)真做好每次消毒，保證消毒時(shí)間和效果，做到不留死角，并做好消毒記錄。

（2）監(jiān)測(cè)：按照《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》根據(jù)地方區(qū)域性和養(yǎng)殖場(chǎng)情況制定布病監(jiān)測(cè)計(jì)劃，實(shí)行病原學(xué)監(jiān)測(cè)和免疫抗體監(jiān)測(cè)。奶畜和種畜每年進(jìn)行2 次陽(yáng)性檢測(cè)，進(jìn)行淘汰和處置。免疫后進(jìn)行抗體檢測(cè)，不合格的及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。

（3）免疫：做好布病免疫，建立免疫制度、科學(xué)制定免疫程序、建立免疫檔案，使用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)的布病疫苗，實(shí)行區(qū)域性強(qiáng)制免疫，奶牛原則上不免疫（泌乳期奶牛禁止免疫），免疫后要進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)。

1.5 無(wú)害化處理 需按照《病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》和《糞便無(wú)害化衛(wèi)生要求》對(duì)病原學(xué)陽(yáng)性牛及其產(chǎn)品和污染物、牛群糞污等進(jìn)行無(wú)害化處理。

1.6 制度運(yùn)行管理 制定生物安全、人員車(chē)輛、無(wú)害化處理等管理制度并嚴(yán)格按照制度維護(hù)運(yùn)行。有專(zhuān)人負(fù)責(zé)生物安全管理，對(duì)場(chǎng)區(qū)人員進(jìn)行生物安全知識(shí)、疫病防控、消毒、飼養(yǎng)技術(shù)等的培訓(xùn)和考核；建立人員健康檔案，禁止人畜共患病人員進(jìn)行生產(chǎn)工作；做好生產(chǎn)人員和防疫人員的安全防護(hù)工作，避免人員被感染；建立車(chē)輛流通管理制度，防止外來(lái)車(chē)輛攜帶病原菌造成風(fēng)險(xiǎn)隱患；配備專(zhuān)職獸醫(yī)人員，對(duì)布病進(jìn)行監(jiān)測(cè)和診斷。

2 免疫接種

控制布病的最佳方式是免疫接種，目前所用的疫苗多為弱毒疫苗。雖然具有較好的免疫效果，但存在毒力返強(qiáng)、引發(fā)孕畜流產(chǎn)、疫苗感染人和無(wú)法區(qū)分自然感染等缺點(diǎn)。因此，學(xué)者們開(kāi)啟了向低毒力、高免疫性、能區(qū)分自然感染等的布魯氏菌疫苗新的研究方向。

研究人員對(duì)布魯氏菌的探索從病原學(xué)診斷到疫苗免疫及監(jiān)測(cè)，從基因型分類(lèi)到機(jī)體作用機(jī)制逐步深入。標(biāo)記疫苗有望滿足安全性、保護(hù)性、功能性俱佳的條件，尤其是基因缺失疫苗幾乎完全符合學(xué)者們的期盼，成為了近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。目前我國(guó)已成功上市了牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12株），其特點(diǎn)為低毒、有效、能鑒別野毒感染。

2.1 A19- △VirB12 株疫苗 VirB12 蛋白是布魯氏菌免疫蛋白中IV 型分泌系統(tǒng)（T4SS）的成員。IV 型分泌系統(tǒng)（T4SS）是幫助布魯氏菌在巨噬細(xì)胞中定植、逃避溶酶體降解的一個(gè)復(fù)合蛋白體，包括VirB1～VirB12 共12 種蛋白，是布魯氏菌的關(guān)鍵的毒力因子，與布魯氏菌胞內(nèi)復(fù)制和感染相關(guān)。在這12 個(gè)蛋白中有三個(gè)是非必需蛋白，即VirB12 蛋白、VirB1 蛋白、VirB7 蛋白，它們的作用是增強(qiáng)T4SS 分泌和感染細(xì)胞功能。因此VirB12 基因的缺失只會(huì)弱化T4SS 系統(tǒng)的免疫功能，進(jìn)而影響和降低布魯氏菌的毒力，而且不會(huì)改變布魯氏菌菌株的生理和化學(xué)特性，可制成VirB12 基因缺失疫苗。

牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12 株）是將布魯氏菌A19 株通過(guò)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)敲除VirB12 基因而獲得的基因缺失疫苗。該疫苗于2020年7 月獲得中華人民共和國(guó)新獸藥注冊(cè)證書(shū)《布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12 株）》獲批上市。新疆維吾爾自治區(qū)畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所和天康生物制藥有限公司已對(duì)該基因缺失疫苗進(jìn)行了十余年的研究、試驗(yàn)和論證，證實(shí)了該疫苗的安全性和有效性。同時(shí)，該疫苗為我國(guó)第一株可以鑒別牛布魯氏菌疫苗免疫和野毒株天然感染的疫苗。

2.2 疫苗免疫和野毒株天然感染的鑒別 牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12 株）可以利用VirB12 蛋白的表達(dá)與否來(lái)鑒別天然感染的野毒株和疫苗免疫，具有鑒別功效。鐘旗等建立了用A19-ΔVirB12 株中因敲除基因無(wú)法表達(dá)的VirB12 蛋白作為標(biāo)記抗原的一種間接ELISA 方法，目的用于鑒別和區(qū)分牛布魯氏菌A19-ΔVirB12 疫苗免疫所產(chǎn)生的抗體和天然感染產(chǎn)生的抗體。任立松等發(fā)明建立了將VirB12 蛋白、BMEI 1330（內(nèi)參蛋白）兩個(gè)蛋白按比例混合后作為酶標(biāo)底物的一種間接ELISA 技術(shù)同樣可以鑒別和區(qū)分布魯氏菌病A19-ΔVirB12 疫苗的免疫與天然野毒株感染，且已經(jīng)組裝成了標(biāo)準(zhǔn)試劑盒。

2.3 免疫程序 牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12株）用于預(yù)防牛布魯氏菌病，免疫有效期為12 個(gè)月。疫苗免疫后15～180 d 可用ELISA（VirB12）方法區(qū)分本疫苗和野毒株感染。3～8 月齡皮下注射5 mL/頭，根據(jù)抗體水平和布魯氏菌病流行情況進(jìn)行補(bǔ)免。疫苗2～8 ℃或-15 ℃條件下貯存，有效期為12 個(gè)月，需冷藏運(yùn)輸。免疫疫苗時(shí)要注意人員配備和防護(hù)，對(duì)使用過(guò)的一次性用品、疫苗空瓶等進(jìn)行無(wú)害化處理。

3 政府引導(dǎo)

政府部門(mén)對(duì)本地區(qū)牛布魯氏菌病的發(fā)生流行情況進(jìn)行檢測(cè)和調(diào)查，根據(jù)實(shí)際情況制定牛布病防控實(shí)施方案，提出防控目標(biāo)、防控機(jī)制、防控措施，需投入大量資金用以布病防控。布病防控的基本原則堅(jiān)持人病獸防、關(guān)口前移、堅(jiān)持科技引領(lǐng)，推動(dòng)畜間布病快速鑒別診斷技術(shù)和防控模式創(chuàng)新應(yīng)用。政府部門(mén)在布病監(jiān)測(cè)排查、強(qiáng)制免疫和評(píng)價(jià)、布病凈化和無(wú)疫小區(qū)建設(shè)、調(diào)運(yùn)監(jiān)管、基層動(dòng)物防疫檢疫人員生物安全防護(hù)、布病防治和群眾知識(shí)普及等方面需加強(qiáng)組織領(lǐng)導(dǎo)、保障經(jīng)費(fèi)投入、強(qiáng)化部門(mén)協(xié)作。

4 討論與結(jié)論

布魯氏菌病的防控已成為世界難題，尤其在人畜共患病方面。因人的布魯氏菌病無(wú)法根除治療，給患者的身心造成了嚴(yán)重的傷害。2022 年我國(guó)報(bào)道的人間布病71437 例，較2021 年增加了1670 例，可見(jiàn)我國(guó)人間布病仍在增加，防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻。在人畜共患病防控方面，我國(guó)提出“人病獸防、關(guān)口前移”，因此做好畜間布病的防控對(duì)人間布病的控制尤為重要。

當(dāng)前，畜牧業(yè)發(fā)展日新月異，奶牛產(chǎn)業(yè)勢(shì)頭正盛、肉牛產(chǎn)業(yè)蒸蒸日上，而疫病防控風(fēng)險(xiǎn)也伴隨提高，集約化、數(shù)字化、綜合化的規(guī)模養(yǎng)牛場(chǎng)已成為市場(chǎng)主力。規(guī)模養(yǎng)牛場(chǎng)在牛的健康養(yǎng)殖上越發(fā)積極，在疫病防控上越發(fā)重視，且牛場(chǎng)的管理制度也越發(fā)健全完善，尤其在牛場(chǎng)的生物安全管理上越發(fā)科學(xué)規(guī)范。做好生物安全管理和生物安全體系建設(shè)是更直接、更有效、更低成本的防控疫病、保障養(yǎng)殖、增加效益的方法，因此，做好牛的布病的防控首先要做好生物安全體系建設(shè)。生物安全體系建設(shè)不僅可以有效控制牛布病發(fā)生和流行，也能做好其他疫病的防制。

疫苗不僅可以保障規(guī)模場(chǎng)牛的養(yǎng)殖，更能保障無(wú)法建立生物安全體系的散養(yǎng)戶牛的健康養(yǎng)殖和利益。牛布魯氏菌疫苗的使用是現(xiàn)階段我國(guó)防控牛布病的主要方法，能夠很好的預(yù)防牛感染布病。我國(guó)牛布魯氏菌疫苗的安全性、穩(wěn)定性、有效性越來(lái)越高，新型疫苗的研制使疫苗的可供選擇性也越來(lái)越多，這對(duì)牛布病防控來(lái)說(shuō)及其有利。

奶牛原則上不免疫布魯氏菌疫苗，為保障奶牛健康除了做好生物安全體系建設(shè)外，更應(yīng)該做好布病凈化。布病凈化可以依據(jù)完善的法律法規(guī)，采取“檢測(cè)- 撲殺- 無(wú)害化處理- 監(jiān)測(cè)- 凈化”的技術(shù)路線和科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑u(píng)估方式，建立布病凈化場(chǎng)和無(wú)疫小區(qū)。肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)也應(yīng)當(dāng)建立凈化制度，做好凈化管理。布魯氏菌病的凈化將成為布病防控今后一個(gè)階段的主要目標(biāo)和任務(wù)。

牛布魯氏菌病的防控模式可從建立生物安全體系、新型疫苗利用、布病凈化和政府政策等方面進(jìn)行探索，尋找出實(shí)際可行的防控新模式。