柯昌虎 ， 吳亞晴 ， 丁雪茹 ， 黃慧敏 ， 嚴(yán)慧

1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬國(guó)藥東風(fēng)總醫(yī)院，湖北 十堰 442008；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，湖北 十堰 442000

新型冠狀病毒感染（corona virus disease 2019，COVID-19，簡(jiǎn)稱新冠感染）是由嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2，簡(jiǎn)稱新冠病毒）引起的一種急性傳染病，在全球范圍內(nèi)迅速蔓延，已成為構(gòu)成嚴(yán)重威脅人類健康的突發(fā)公共衛(wèi)生事件［1］。初期，尚無(wú)治療COVID-19的特效藥物，治療方案主要是對(duì)癥支持。在臨床治療中發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)藥在COVID-19的治療中發(fā)揮了重要作用，它們能夠加快輕中度患者康復(fù)，顯著降低感染患者由中度向重度發(fā)展比例，有效改善重癥和危重癥患者的呼吸困難，穩(wěn)定血氧飽和度，促進(jìn)疾病好轉(zhuǎn)［2］。中醫(yī)藥全面參與COVID-19的救治過程，使用中藥治療的患者達(dá)到90%，有效率為80%，且無(wú)不良反應(yīng)。相關(guān)研究證實(shí)中藥可以抑制病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，阻止SARS-CoV-2與宿主結(jié)合，并減輕病毒感染引起的細(xì)胞因子風(fēng)暴和免疫缺陷［3］，從而有效發(fā)揮抗COVID-19的作用。

金銀花口服液的主要藥效成分為金銀花。《神農(nóng)本草經(jīng)》中指出金銀花性寒味甘，具有清熱解毒、涼血化瘀之功效。研究發(fā)現(xiàn)，金銀花具有抗炎、抗病毒、調(diào)節(jié)非特異性免疫等作用［4］，且是連花清瘟膠囊、雙黃連口服液、痰熱清注射液、清開靈顆粒等諸多COVID-19治療藥物的重要組分。湖北省衛(wèi)生健康委員會(huì)在2021、2022年均將金銀花口服液納入《湖北省新冠肺炎中醫(yī)藥防治方案》，作為兒童預(yù)防、隔離人群防治結(jié)合、無(wú)癥狀感染者治療的推薦用藥。臨床應(yīng)用證實(shí)，金銀花口服液對(duì)187例COVID-19普通型患者的肺部病變具有較好地改善作用，并能夠縮短住院天數(shù)及病毒核酸轉(zhuǎn)陰時(shí)長(zhǎng)［5］。金銀花湯劑中的MIR2911在體內(nèi)可以有效抑制新冠病毒復(fù)制，加速新冠患者轉(zhuǎn)陰［6］。金銀花聯(lián)合常規(guī)治療有利于COVID-19患者肺部CT、臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的改善和臨床治愈率的提高，降低重癥轉(zhuǎn)化率［7］?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，金銀花可以抑制SARS-CoV-2 Mpro活性，從而抑制病毒的侵入和復(fù)制［8］；金銀花水提取物可以在體內(nèi)外誘導(dǎo)let-7a抑制腸道病毒71型（enterovirus 71，EV71）復(fù)制和發(fā)病，并對(duì)SARSCoV-2產(chǎn)生抑制作用［9］。盡管金銀花口服液在臨床上應(yīng)用廣泛，但其防治COVID-19的作用機(jī)制尚待明確。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討金銀花口服液防治COVID-19的分子機(jī)制，以期為后續(xù)金銀花口服液的臨床應(yīng)用及深入研究防治COVID-19的機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 金銀花口服液成分及靶點(diǎn)的篩選

以“金銀花”為檢索詞，在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP，https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）收集金銀花口服液的活性成分，以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%和類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18進(jìn)行成分篩選［10］。在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）查找成分的SMILES格式，并將其導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.swisstargetprediction.ch/）中，獲取可能性（probability）＞0的靶點(diǎn)。

1.2 COVID-19疾病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選

以“COVID-19”為檢索詞，分別在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/）、比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)（comparative toxicogenomics database，CTD，http：//ctdbase.org/）、治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（therapeutic target database，TTD，https：//db.idrblab.net/ttd/）和DrugBank（https：//www.drugbank.com/）中篩選COVID-19相關(guān)靶點(diǎn)，其中GeneCards根據(jù)相關(guān)性評(píng)分（relevance score）篩選前500的靶點(diǎn)，CTD根據(jù)推理得分（inference score）大小順序取前500個(gè)靶點(diǎn)。

1.3 藥物-疾病共有靶點(diǎn)的篩選

在Venny分析平臺(tái)（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）上傳金銀花口服液與COVID-19的靶點(diǎn)，分別命名為藥物名稱、疾病名稱，風(fēng)格（style）選擇“顏色（colors）”，其余條件默認(rèn)。繪制韋恩圖，獲取二者的共有靶點(diǎn)。

1.4 藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

使用Cytoscape 3.8.2軟件，繪制金銀花口服液防治COVID-19的“藥物-成分-疾病-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，使用軟件的Network Analyzer功能，以節(jié)點(diǎn)度值（degree）為指標(biāo)進(jìn)行可視化。

1.5 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將共有靶點(diǎn)上傳至String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.string-db.org/），選擇最低要求互動(dòng)得分（minimum required interaction score）＞0.4的靶點(diǎn)，下載TSV格式文件并導(dǎo)入Cytoscape 3.8.2軟件中進(jìn)行可視化。

1.6 功能和通路富集分析

在DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/）進(jìn)行基因本體論（gene ontology，GO）功能富集與京都基因和基因組百科全書（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，以P＜0.05為閾值進(jìn)行篩選，探討金銀花口服液防治COVID-19的生物學(xué)過程和信號(hào)通路。

1.7 分子對(duì)接

利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取成分的mol2格式，從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.rcsb.org/）中下載對(duì)應(yīng)的蛋白受體的三維結(jié)構(gòu)。在AutoDock軟件中對(duì)關(guān)鍵蛋白和成分進(jìn)行對(duì)接分析，再應(yīng)用PyMOL軟件對(duì)生成的結(jié)果進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物主要活性成分及作用靶點(diǎn)

在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中共獲取236個(gè)金銀花口服液成分，經(jīng)OB≥30%和DL≥0.18篩選后獲得23個(gè)活性成分。在Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取probability＞0的靶點(diǎn)，去除重復(fù)靶點(diǎn)同時(shí)剔除沒有對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的成分，最后得到16種成分，對(duì)應(yīng)314個(gè)靶點(diǎn)，具體結(jié)果見表1。

表1 金銀花口服液的活性成分信息Table 1 Information on active components of Jinyinhua oral liquid

2.2 疾病靶點(diǎn)檢索及藥物-疾病共有靶點(diǎn)篩選

使用GeneCards、CTD、TTD和DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)篩選COVID-19的靶點(diǎn)，依次得到靶點(diǎn)數(shù)目為500、500、65、23個(gè)，合并去重后共獲得968個(gè)靶點(diǎn)。在Venny中繪制金銀花口服液防治COVID-19的韋恩圖，最后得到共有靶點(diǎn)88個(gè)（圖1）。

圖1 金銀花口服液防治COVID-19的靶點(diǎn)匹配韋恩圖Fig. 1 Venn diagram of Jinyinhua oral liquid in the treatment of COVID-19

2.3 藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將金銀花口服液中16個(gè)成分與共有靶點(diǎn)信息輸入Cytoscape 3.8.2軟件中，繪制“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖。從圖2可以看出，共有106個(gè)節(jié)點(diǎn)，395條邊，其中黃色六邊形代表金銀花口服液，綠色菱形代表藥物成分，藍(lán)色圓形代表共有靶點(diǎn)，紅色四邊形代表COVID-19。Degree排名前6位的成分依次是傘房花耳草素（degree=33）、金圣草素（degree=32）、木犀草素（degree=32）、亞油酸乙酯（degree=31）、山奈酚（degree=31）、槲皮素（degree=31），它們可能是金銀花口服液防治COVID-19的關(guān)鍵活性成分。

2.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

在String數(shù)據(jù)庫(kù)中錄入金銀花口服液和COVID-19共有靶點(diǎn)，物種設(shè)定為“Homo sapiens”，選取置信度＞0.4的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)，游離靶點(diǎn)2個(gè)，得到金銀花口服液防治COVID-19的靶點(diǎn)蛋白互作數(shù)據(jù)，并進(jìn)行可視化分析。由圖3可知，共有97個(gè)節(jié)點(diǎn)，1645條邊，緊密度（closeness centrality）平均值為0.5088，介度（betweenness centrality）平均值為0.0119，degree平均值為28.8214，大于平均度值靶點(diǎn)的有45個(gè)。Degree排名前10位的靶點(diǎn)為RAC-α絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（RAC-alpha serine/threonine protein kinase，AKT1，degree=61）、類固醇受體輔助活化因子（steroid receptor coactivator，SRC，degree=49）、表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR，degree=45）、缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF1A，degree=43）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator activated receptor gamma，PPARG，degree=39）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（human matrix metalloproteinase 9，MMP9，degree=39）、雌激素受體α（estrogen receptor alpha，ESR1，degree=36）、絲裂原活化蛋白激酶1（mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1，degree=35）、前列腺素內(nèi)過氧化物合成酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2，PTGS2，degree=34）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（human matrix metalloproteinase 2，MMP2，degree=33），這些蛋白可能在治療COVID-19中具有重要的調(diào)控作用。

圖3 靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig. 3 Interaction network of targets

2.5 GO功能分析結(jié)果

GO分析結(jié)果顯示，共有399個(gè)條目（P＜0.05），其中生物過程（biological process，BP）共275條，主要涉及細(xì)胞遷移的正調(diào)控、對(duì)外源性刺激的反應(yīng)、膠原蛋白分解代謝過程、平滑肌細(xì)胞增殖的正調(diào)控等；細(xì)胞組分（cell component，CC）共45條，主要涉及質(zhì)膜、胞液、細(xì)胞質(zhì)、膜筏等；分子功能（molecular function，MF）共79條，主要涉及腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate，ATP）結(jié)合、酶結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性等。分別選取3個(gè)部分排名前10的條目繪制氣泡圖（圖4）。結(jié)果表明金銀花口服液通過調(diào)控多重生物學(xué)過程對(duì)COVID-19發(fā)揮防治的作用。

2.6 KEGG通路分析結(jié)果

KEGG分析結(jié)果顯示，共獲得108條信號(hào)通路（P＜0.05），主要涉及HIF-1信號(hào)通路（11個(gè)靶點(diǎn)）、化學(xué)致癌-受體激活（14個(gè)靶點(diǎn)）、內(nèi)分泌抵抗（10個(gè)靶點(diǎn)）、粘著斑（13個(gè)靶點(diǎn)）、磷脂酰肌醇3激酶-絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（phosphati dylinositol 3 kinase-serine/threonine kinase，PI3K-Akt）信號(hào)通路（16個(gè)靶點(diǎn)）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）信號(hào)通路（8個(gè)靶點(diǎn)）、松弛素信號(hào)通路（10個(gè)靶點(diǎn)）、紅細(xì)胞白血病病毒致癌基因同源物（erythroblastic leukemia viral oncogene homolog，ErbB）信號(hào)通路（8個(gè)靶點(diǎn)）、丙型肝炎（10個(gè)靶點(diǎn)）、乙型肝炎（10個(gè)靶點(diǎn)）、RAS相關(guān)蛋白1（RAS-associated protein 1，RAP1）信號(hào)通路（11個(gè)靶點(diǎn)）、雌激素信號(hào)通路（9個(gè)靶點(diǎn)）、催乳素信號(hào)通路（7個(gè)靶點(diǎn)）、磷脂酶D信號(hào)通路（9個(gè)靶點(diǎn)）、甲狀腺激素信號(hào)通路（8個(gè)靶點(diǎn)）等。選擇前30條繪制氣泡圖（圖5），這些結(jié)果表明金銀花口服液的作用靶點(diǎn)分布于不同的信號(hào)通路中，并經(jīng)多途徑對(duì)COVID-19起到防治作用。

圖5 金銀花口服液防治COVID-19的KEGG富集分析Fig. 5 KEGG pathway enrichment bubble chart of Jinyinhua oral liquid in the treatment of COVID-19

2.7 分子對(duì)接結(jié)果

從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選受體AKT1、SRC、EGFR、HIF1A、PPARG、MMP9、ESR1、MAPK1、PTGS2、MMP2的蛋白三維結(jié)構(gòu)，將其分別與配體傘房花耳草素、金圣草素、木犀草素、亞油酸乙酯、山奈酚、槲皮素在AutoDock中進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)合能小于0，則表明受體和配體可以進(jìn)行自發(fā)結(jié)合，結(jié)合能越小則越穩(wěn)定，金銀花口服液中10個(gè)靶點(diǎn)與6個(gè)活性成分之間均可以自發(fā)產(chǎn)生結(jié)合（圖6）。

圖6 結(jié)合能熱圖Fig. 6 Heat map of binding energy

受體MMP9與配體傘房花耳草素、金圣草素、木犀草素、亞油酸乙酯、山奈酚、槲皮素均可以產(chǎn)生較強(qiáng)的結(jié)合，結(jié)合能＜-6.0 kcal·mol-1，如圖7所示。其中，MMP9與傘房花耳草素可以通過氨基酸殘基ALA242、GLU247、TYR248、VAL223產(chǎn)生5個(gè)氫鍵作用，與金圣草素可以通過氨基酸殘基ARG249、GLU227、PRO240產(chǎn)生4個(gè)氫鍵作用，與木犀草素可以通過氨基酸殘基ARG249、GLU227、PRO240產(chǎn)生5個(gè)氫鍵作用，與亞油酸乙酯可以通過氨基酸殘基ALA189、GLU227、HIS226、HIS230、HIS236產(chǎn)生5個(gè)氫鍵作用，與山奈酚可以通過氨基酸殘基ALA242、ARG249、GLU227產(chǎn)生4個(gè)氫鍵作用，與槲皮素可以通過氨基酸殘基ALA189、GLU227、LEU188、LEU243、TYR245、TYR248產(chǎn)生9個(gè)氫鍵作用。

圖7 分子對(duì)接圖Fig. 7 Diagrams of molecular docking

3 討論

COVID-19是由新型冠狀病毒引發(fā)的傳染疾病，屬于中醫(yī)疫病范疇，病因?yàn)楦惺芤哽逯畾猓?1］。中醫(yī)藥“治未病”思想和辨證論治凸顯特色，未病先防、已病防變、病愈促康，深度介入新冠肺炎預(yù)防、救治、康復(fù)全過程，突出中醫(yī)藥在新冠肺炎疫情常態(tài)化防控工作中的優(yōu)勢(shì)作用［12］。金銀花口服液是臨床上常用的抗炎抗病毒中成藥，對(duì)機(jī)體起到清熱解毒、疏散風(fēng)熱的作用。臨床應(yīng)用證實(shí)，金銀花口服液應(yīng)用于1例輕型或普通型COVID-19患者，不僅可以緩解癥狀，還可以明顯改善肺部影像［13］。在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用金銀花口服液，可以顯著緩解80例COVID-19患者的發(fā)熱等癥狀，并加速核酸轉(zhuǎn)陰［14］。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)金銀花口服液防治COVID-19的機(jī)制進(jìn)行了探討。

從金銀花口服液中篩選出傘房花耳草素、金圣草素、木犀草素、亞油酸乙酯、山奈酚、槲皮素等活性成分。其中，木犀草素、山奈酚、槲皮素屬于黃酮類化合物，具有抗炎、抗病毒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。研究發(fā)現(xiàn)，木犀草素可以作為SARSCoV-2潛在的抑制劑［15］，具有明顯地抑制奧密克戎毒株核酸復(fù)制的作用［16］。山奈酚可以通過抑制氧化應(yīng)激、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxidesynthase，iNOS）和細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）通路，減輕膿毒癥引起的小鼠急性肺損傷［17］；也對(duì)SARSCoV-2具有抑制活性，可以減少Vero E6細(xì)胞感染引起的細(xì)胞病變效應(yīng)，能夠保護(hù)細(xì)胞免受病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡［18］。槲皮素是一種對(duì)抗傳染性非典型肺炎（severe acute respiratory syndrome，SARS）和中東呼吸綜合征（Middle East respiratory syndrome，MERS）的活性劑，可以作用于ACE2、3CLpro、IL-6等，對(duì)COVID-19發(fā)揮治療作用［19］。例如，槲皮素通過抑制NLRP3炎癥小體成分和pro-IL-1β的產(chǎn)生，干擾NF-κB等信號(hào)通路，從而在COVID-19中發(fā)揮抗炎作用［20］；對(duì)SARS-CoV-2具有中和作用，與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（angiotensinconverting enzyme 2，ACE2）具有良好的結(jié)合親和力，從而影響病毒S蛋白與ACE2受體的結(jié)合［21］；可以通過抑制mTOR和HIF1A對(duì)SARS-CoV-2感染和COVID-19相關(guān)癌癥進(jìn)展發(fā)揮潛在作用［22］。因此，槲皮素被認(rèn)為是抑制COVID-19的病理生理過程中發(fā)揮作用的最重要的中藥成分之一，有望作為COVID-19治療的潛在藥物。

經(jīng)金銀花口服液和COVID-19共有靶點(diǎn)交集篩選出AKT1、SRC、EGFR、HIF1A、PPARG、MMP9、ESR1、MAPK1、PTGS2、MMP2等靶點(diǎn)。其中，SARS-CoV-2感染后Akt/mTOR信號(hào)激活和HIF1A被抑制，Akt/mTOR/HIF-1信號(hào)級(jí)聯(lián)的失調(diào)可能是COVID-19治療干預(yù)的潛在目標(biāo)［23］。EGFR在SARS-CoV-2等許多病毒進(jìn)入細(xì)胞和復(fù)制中發(fā)揮重要作用，EGFR的參與影響COVID-19患者C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）水平、D-二聚體水平以及重癥患者的肺纖維化的發(fā)展［24］。HIF1A可以抑制ACE2受體和跨膜蛋白酶絲氨酸2（transmembrane serine protease 2，TMPRSS2），并上調(diào)去整合素-金屬蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase 17，ADAM17），HIF1A的蛋白靶點(diǎn)與促炎細(xì)胞因子表達(dá)的激活和隨后的炎癥過程有關(guān)［25］。PPARG（PPARγ）在脂肪組織和巨噬細(xì)胞中高度表達(dá)，PPARG激動(dòng)劑通過靶向COVID-19患者的細(xì)胞因子風(fēng)暴可以作為炎癥和免疫調(diào)節(jié)藥物調(diào)節(jié)劑，通過增加ACE2的表達(dá)在COVID-19的治療中發(fā)揮有益作用［26］。MMP-9和MMP-2水平與COVID-19之間存在顯著的關(guān)聯(lián)。在COVID-19重癥患者中，MMP-2下調(diào)而MMP-9上調(diào)，MMP-2與COVID-19疾病的死亡率獨(dú)立相關(guān)，可能是COVID-19的潛在預(yù)后預(yù)測(cè)因子［27］。雌激素可以與ESR 1/2受體相互作用，通過抑制SARS-CoV-2感染引起的炎癥和免疫反應(yīng)來降低COVID-19患者的死亡率［28］。MAPK調(diào)節(jié)許多細(xì)胞過程，對(duì)免疫細(xì)胞功能至關(guān)重要。例如，miR-194-5p通過磷酸酶張力蛋白樣同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）/AKT途徑靶向MAPK1的表達(dá)，抑制心肌細(xì)胞凋亡和損傷［29］。

經(jīng)GO功能分析獲取細(xì)胞遷移的正調(diào)控、對(duì)外源性刺激的反應(yīng)、膠原蛋白分解代謝過程、質(zhì)膜、胞液、細(xì)胞質(zhì)、ATP結(jié)合、酶結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性等399條生物學(xué)過程。經(jīng)KEGG通路分析獲取HIF-1、化學(xué)致癌-受體激活、內(nèi)分泌抵抗、粘著班、PI3K-Akt、VEGF、松弛素、ErbB、丙型肝炎、乙型肝炎、Rap1等108條信號(hào)通路。其中，HIF-1調(diào)節(jié)可以控制連接缺氧和新冠肺炎的不同信號(hào)通路，HIF1A通過減少ACE2的表達(dá)來抑制SARS-CoV-2對(duì)肺上皮細(xì)胞的感染［30］；在SARSCoV-2感染期間，開放閱讀框（open reading frames，ORF）3a誘導(dǎo)HIF1A，進(jìn)而加劇病毒感染和炎癥反應(yīng)［31］。PI3K/AKT/mTOR信號(hào)在細(xì)菌感染誘導(dǎo)的敗血癥以及冠狀病毒感染中的宿主反應(yīng)中至關(guān)重要，SARS-CoV-2 S蛋白在感染早期通過激活PI3K/AKT途徑抑制肺泡上皮Ⅱ型細(xì)胞的炎癥反應(yīng)［32］。SARS-CoV-2刺突假病毒（SCV-2-S）通過上調(diào)細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平來抑制PI3K/AKT/mTOR途徑，促進(jìn)自噬反應(yīng)，并引發(fā)感染細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡［33］。VEGFR-2在SARS-CoV-2感染中表達(dá)上調(diào)，VEGF/VEGFR-2相互作用與SARS-CoV-2相關(guān)的肺水腫有關(guān)，以VEGF/VEGFR-2信號(hào)通路為靶點(diǎn)可能是治療新冠感染的潛在治療策略［34］。SARS-CoV-2可以刺激腸中產(chǎn)生過量的VEGF，細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）/VEGF可以作為腸道炎癥和COVID-19疾病進(jìn)展的潛在生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)［35］。內(nèi)皮的血管通透性過高，導(dǎo)致COVID-19等各種疾病的發(fā)生和發(fā)展，Rap1可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮通透性，可能是預(yù)防血管通透性過高相關(guān)疾病中血管屏障功能障礙的理想藥物靶點(diǎn)［36］。最后，通過分子對(duì)接發(fā)現(xiàn)藥物成分與靶點(diǎn)之間具有較強(qiáng)的結(jié)合作用，表明金銀花口服液具有防治COVID-19的功效。

綜上所述，本研究以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)聯(lián)合分子對(duì)接方法對(duì)金銀花口服液防治COVID-19的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)金銀花口服液中的傘房花耳草素、金圣草素、木犀草素、山奈酚、槲皮素等成分可以作用于AKT1、SRC、EGFR、HIF1A、PPARG、MMP9、ESR1、MAPK1、PTGS2、MMP2等靶點(diǎn)通過多途徑防治COVID-19，從而為金銀花口服液的臨床應(yīng)用和機(jī)制研究提供了依據(jù)。然而由于數(shù)據(jù)庫(kù)的局限性，本研究基于分子水平的預(yù)測(cè)以及黃酮類成分對(duì)COVID-19的影響仍需進(jìn)一步的細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。