江 斌 陳秀琴 吳勝會(huì) 林 琳 張世忠 蔡 羲

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013）

隱孢子蟲是一種主要寄生于人和多種動(dòng)物胃腸道和呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)的寄生性原蟲。 目前已知的隱孢子蟲基因型有70 多種， 主要有安氏隱孢子蟲、牛隱孢子蟲、貝氏隱孢子蟲、微小隱孢子蟲等[1]。 犢牛感染隱孢子蟲后主要表現(xiàn)為精神沉郁、 厭食、腹瀉， 排出的糞便呈灰白色或黃褐色， 內(nèi)含大量纖維素、血液及黏液，后期呈水樣，嚴(yán)重的可導(dǎo)致犢牛發(fā)病死亡。 患牛排出的糞便會(huì)污染牛場(chǎng)及水源， 糞便中的隱孢子蟲卵囊在野外進(jìn)一步發(fā)育為感染性卵囊并通過(guò)水源或土源性食物把病原傳染給其它牛只或人類，對(duì)人畜健康構(gòu)成威脅。 2022 年11 月，診療中心門診接收一腹瀉犢牛病例， 經(jīng)診斷為牛隱孢子蟲病，取患牛的糞樣分別采用1%甲醛溶液、1%二氯異氰脲酸鈉溶液、2%燒堿溶液以及密封厭氧發(fā)酵處理，經(jīng)5 d、10 d、15 d、20 d 后分別采用蔗糖漂浮、涂片、改良抗酸染色檢測(cè)樣本中牛隱孢子蟲卵囊數(shù)量，評(píng)價(jià)不同處理措施對(duì)糞樣中牛隱孢子蟲卵囊的殺滅效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 陽(yáng)性糞樣卵囊數(shù)確定 取在診療中心被診斷為牛隱孢子蟲感染陽(yáng)性犢牛糞樣2 g，置于燒杯中，加入蒸餾水10 mL，攪勻后用160 目銅篩過(guò)濾，濾液置于錐形量杯中，3 000 r/min 離心5 min，棄去上清液，留下杯底糞渣，加飽和蔗糖溶液攪拌均勻，吸取表層液50 μL 進(jìn)行涂片， 晾干后采用改良抗酸染色， 并在油鏡下檢查圓形或橢圓形并呈紅色的隱孢子蟲卵囊數(shù)量[2]。 計(jì)算4 個(gè)視野的卵囊數(shù)平均為13.25 個(gè)。 把該陽(yáng)性糞樣100 g 分為5 份， 每份約20 g，分別裝入100 mL 塑料容器內(nèi)進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。

1.1.2 消殺試劑 配制1%甲醛溶液、1%二氯異氰脲酸鈉溶液、2%燒堿溶液。

1.2 方法 把100 g 牛隱孢子蟲陽(yáng)性糞樣均勻分別裝入5 個(gè)100 mL 規(guī)格的螺口塑料容器內(nèi)， 分別編號(hào)為A 組、B 組、C 組、D 組以及對(duì)照組。A 組糞樣中加入1%甲醛溶液5 mL；B 組糞樣加入1%二氯異氰脲酸鈉溶液5 mL；C 組糞樣加入2%燒堿溶液5 mL；D 組糞樣不加任何物質(zhì)并旋緊瓶口保持封閉狀態(tài)；對(duì)照組糞樣不加蓋，自然放置于室內(nèi)作為對(duì)照組。5 d、10 d、15 d、20 d 時(shí)各組分別取2 g 糞樣進(jìn)行過(guò)濾、離心、漂浮、涂片、改良抗酸染色、鏡檢，計(jì)算每組4 個(gè)視野的隱孢子蟲卵囊數(shù)量的平均數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 進(jìn)行整理， 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以P＜0.05 為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

從表1 看出，A 組糞樣經(jīng)處理后5 d、10 d、15 d、20 d 時(shí)檢出卵囊數(shù)量平均為3.5 枚、0.5 枚、0 枚、0 枚；B 組糞樣經(jīng)處理后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)卵囊數(shù)量平均為1.75 枚、0.25 枚、0 枚、0 枚；C 組糞樣經(jīng)處理后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)卵囊數(shù)量平均為7.5 枚、5.25 枚、2.75 枚、0.75 枚；D 組糞樣經(jīng)處理后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)卵囊數(shù)量平均為9.75 枚、6.50 枚、4.75 枚、3.00 枚； 對(duì)照組糞樣經(jīng)處理后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)卵囊數(shù)量平均為10.50 枚、8.50 枚、8.00 枚、7.25 枚。 三組消毒劑對(duì)牛隱孢子蟲均有不同程度的殺滅效果，其中B 組（二氯異氰脲酸鈉）效果較好，其次為A 組和C 組。 B 組與A 組之間差異顯著（P＜0.05），B 組與C 組之間差異極顯著（P＜0.01），A、B、C 三組與對(duì)照組之間差異極顯著（P＜0.01）。 密封厭氧發(fā)酵（D 組）對(duì)卵囊殺滅也有一定效果，與對(duì)照組之間差異顯著（P＜0.05）。

表1 不同處理措施對(duì)牛糞樣中隱孢子蟲卵囊的殺滅效果

3 討 論

從試驗(yàn)看，1%甲醛溶液、1%二氯異氰脲酸鈉溶液、2%燒堿溶液對(duì)牛隱孢子蟲卵囊均有較好的殺滅作用， 密封厭氧處理對(duì)牛隱孢子蟲也有一定的殺滅效果。 甲醛殺滅卵囊的機(jī)理是甲醛與卵囊殼的蛋白質(zhì)相結(jié)合，導(dǎo)致蛋白質(zhì)凝固變性，起到對(duì)卵囊壁的破壞作用[3]。 一些報(bào)道也證實(shí)了甲醛的滅蟲效果[4]，在4 ℃條件下， 隱孢子蟲卵囊接觸到10%福爾馬林18 h 后會(huì)降低卵囊的感染性。 二氯異氰脲酸鈉加水后可生成活性氯和新生態(tài)氧， 對(duì)卵囊壁蛋白質(zhì)產(chǎn)生氯化和氧化反應(yīng)，故對(duì)卵囊有較好的殺滅作用[3]，孟德磊也證實(shí)氯消毒劑殺滅卵囊的效果，6%漂白粉持續(xù)作用2 h 可滅活92%隱孢子蟲卵囊[4]。在本試驗(yàn)中，燒堿對(duì)牛隱孢子蟲卵有較好的殺滅效果，但效果不如二氯異氰脲酸鈉和甲醛， 分析可能與燒堿HO-不能破壞卵囊壁有關(guān)。 但也有研究表明堿類消毒劑中的HO-也能滲透到卵囊內(nèi)或孢子囊內(nèi)， 起到抑殺球蟲卵囊發(fā)育作用[5]。 在密封厭氧條件下，糞便會(huì)在厭氧條件下不斷發(fā)酵產(chǎn)生生物熱， 致使糞便溫度升高，高溫對(duì)孢子蟲卵囊的發(fā)育有抑制或殺滅作用，據(jù)報(bào)道， 在45～60 ℃潮濕環(huán)境下持續(xù)5～9 min 可完全滅活隱孢子蟲卵囊的活性[4]。

評(píng)價(jià)消毒劑對(duì)隱孢子蟲卵囊的的抑殺效果，除了檢查樣本卵囊數(shù)量變化外， 還可以通過(guò)在顯微鏡下觀察卵囊內(nèi)孢子發(fā)育情況（即卵囊孢子化率）進(jìn)行評(píng)價(jià)，相關(guān)試驗(yàn)有待進(jìn)一步研究。

隱孢子蟲病是一種重要的多種動(dòng)物共患病，會(huì)對(duì)人和動(dòng)物健康構(gòu)成巨大的威脅， 也會(huì)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。隱孢子蟲主要通過(guò)糞口途徑傳播，易感動(dòng)物或人類通過(guò)攝入含有孢子化卵囊的水、 食物或接觸到被污染的物品而感染。 衛(wèi)生措施對(duì)于減少環(huán)境中的隱孢子蟲至關(guān)重要。 首先在養(yǎng)殖場(chǎng)要做好動(dòng)物糞便的無(wú)害化處理，及時(shí)清理糞便，可以采用糞便的堆集發(fā)酵或異位發(fā)酵來(lái)殺滅糞便中的孢子化卵囊，平時(shí)做好養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境衛(wèi)生是防控該病的主要措施。其次， 對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)產(chǎn)生的污水和尿液要集中進(jìn)行厭氧發(fā)酵生產(chǎn)沼氣， 經(jīng)過(guò)處理的沼液或沼渣可用于農(nóng)作物澆灌或堆肥。第三，對(duì)被污染的地面要采用含氯或醛制劑等消毒藥進(jìn)行消毒，并保持地面干燥，阻止卵囊的孢子化。對(duì)飲用水要定期采用氯制劑進(jìn)行消毒，可以抑殺水源中細(xì)菌和卵囊，確保水源干凈和無(wú)公害。