◎ 文/魏凱 馬龍 李小龍 劉鑫

通過在飼料中添加不同硒源，研究其對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和肝臟抗氧化能力的影響，結(jié)果顯示，在飼料中添加適量硒元素后，細(xì)鱗鮭幼魚的生長(zhǎng)性能和肝臟抗氧化性能有顯著提升，并對(duì)其脂肪代謝有一定促進(jìn)作用。這對(duì)降低細(xì)鱗鮭幼魚階段死亡率、發(fā)展細(xì)鱗鮭生態(tài)健康養(yǎng)殖模式、加快恢復(fù)其野外種群規(guī)模具有一定參考價(jià)值。

細(xì)鱗鮭（Brachymystax lenok），屬鮭形目，鮭科，細(xì)鱗鮭屬，在我國(guó)主要分布于黑龍江流域、綏芬河、圖們江、潮河、灤河、額爾齊斯河，以及秦嶺山區(qū)渭河及其支流上游、漢水支流湑水河和太白河等。由于環(huán)境變化和人類活動(dòng)干擾等原因，細(xì)鱗鮭的自然資源量急劇下降，分布區(qū)域縮小，目前已被列入《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄》。細(xì)鱗鮭是我國(guó)名貴的冷水性魚類，其肉質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，國(guó)內(nèi)很早就開展了相關(guān)人工繁育技術(shù)研究。但由于細(xì)鱗鮭在人工養(yǎng)殖開口期存活率偏低，生長(zhǎng)速度較慢，影響了其規(guī)模化生產(chǎn)。

硒（Selenium，Se）在1817年被瑞典化學(xué)家Berzlius發(fā)現(xiàn)，作為魚類必需的微量元素之一，在適量的范圍內(nèi)添加可以提高魚體抗氧化功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，還具有一定的解毒功能。目前，國(guó)內(nèi)學(xué)者開展了一些在飼料中添加不同硒源對(duì)魚類生長(zhǎng)和免疫水平的研究。本實(shí)驗(yàn)將12000尾細(xì)鱗鮭幼魚隨機(jī)分為4組，分別投喂3種等氮等能飼料和一款商品化開口料，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1000尾魚，開展了不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和肝臟抗氧化性影響的研究。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)用魚和飼養(yǎng)管理

細(xì)鱗鮭幼魚是由吉林省延邊朝鮮族自治州琿春市細(xì)鱗水產(chǎn)良種場(chǎng)進(jìn)行細(xì)鱗鮭親魚人工繁育后，將受精卵運(yùn)回至北京市水生野生動(dòng)植物救護(hù)中心進(jìn)行培育后得到。實(shí)驗(yàn)魚均選取無病無傷、體質(zhì)健壯的個(gè)體，平均體長(zhǎng)（2.303±0.116）cm，平均體重（0.055±0.011）g。本實(shí)驗(yàn)分4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1000尾魚，置于長(zhǎng)1.5m、寬0.5m、深0.8m的玻璃鋼水槽內(nèi)，流水養(yǎng)殖，養(yǎng)殖周期30d。實(shí)驗(yàn)采用曝氣后的地下水，水溫（12.2±1.1）℃，溶解氧（7.8±0.5）mg/L，pH值7.5～7.8。

（二）實(shí)驗(yàn)飼料

本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3種等氮等能飼料，分別為基礎(chǔ)料對(duì)照組（命名為G1-NON）、酵母硒組（命名為G2-SeY）和無機(jī)硒組（命名為G3-SeI），3種飼料均做成微膠囊顆粒（0.4mm），保存于-20℃環(huán)境中備用，飼料組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1，并添加一組正規(guī)飼料廠家生產(chǎn)的商品化開口料（命名為G4）進(jìn)行對(duì)比。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（%）

（三）指標(biāo)測(cè)定

生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別統(tǒng)計(jì)各組實(shí)驗(yàn)魚存活數(shù)，每組隨機(jī)取30尾魚，測(cè)量體長(zhǎng)、體重、內(nèi)臟重等指標(biāo)。

各指標(biāo)計(jì)算公式如下：

增重率（WGR %）=（Wf-Wi）/Wi×100

特定生長(zhǎng)率（S G R %/d）=（lnWf-lnWi）/t×100

存活率（SR %）=Nf/Ni×100

肥滿度（CF g/cm3）=W/L3×100

臟體比（VSI %）=Wv/W×100

式中Nf代表試驗(yàn)終末魚尾數(shù)，Ni代表實(shí)驗(yàn)初始魚尾數(shù)，Wf代表末體重（g），Wi代表初體重（g），t為試驗(yàn)天數(shù)（d），Wv為魚體內(nèi)臟質(zhì)量（g），W代表魚體體重（g），L代表魚體體長(zhǎng)（cm）。

（四）血清采集和生化指標(biāo)測(cè)定

每組隨機(jī)取10尾魚，麻醉（MS-222）后在超凈臺(tái)內(nèi)使用1mL注射器采集尾靜脈血液，采集的血樣于4℃下靜置2h，于3000r/min離心15min（4℃），取上層血清分裝后放入-80℃冰箱保存，用于分析血清生化指標(biāo)。血清樣品中的總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（High Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（Low Density Lipoprotein Choles terol，LDL-C）、葡萄糖（Glucose，GLU）、總蛋白（Total Protein，TP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine Transaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate Transaminase，AST）活性均按照試劑盒說明書測(cè)定。

每組再隨機(jī)取10尾魚，取出肝臟后保存于-80℃冰箱中。待測(cè)抗氧化指標(biāo)有丙二醛（Malonaldehyde，MDA）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GPX）等。

（五）數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，采用Excel2007進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏多重比較分析組間的差異顯著性，顯著水平為P<0.05。圖形由GraphPad Prism9.0繪制。

二、結(jié)果

（一）不同硒源細(xì)鱗鮭的生長(zhǎng)性能

由表2可知，G2-SeY組和G3-SeI組細(xì)鱗鮭的終末體長(zhǎng)和終末體重均顯著高于其他兩組（P<0.05），而G2-SeY組細(xì)鱗鮭終末體長(zhǎng)顯著高于G3-SeI組，終末體重差異不明顯。在細(xì)鱗鮭幼魚存活率方面，G3-SeI和G4組的細(xì)鱗鮭幼魚開口期存活率顯著低于其他兩組（P<0.05），與G3-SeI組相比，G2-SeY組細(xì)鱗鮭存活率可以提高約5%。細(xì)鱗鮭幼魚的增重率在G2-SeY組和G3-SeI組顯著高于G1-NON組和G4組（P<0.05）（見圖1），特定生長(zhǎng)率在G2-SeY組和G3-SeI組顯著高于G1-NON組，且G2-SeY組顯著高于G4組（P<0.05）（見圖2），肥滿度在G3-SeI組最高，顯著高于G1-NON組和G2-SeY組（P<0.05），與G4組無顯著差異（P>0.05）（見圖3），而臟體比在G1-NON組顯著高于G3-SeI組和G4組（P<0.05），與G2-SeY組無顯著差異（P>0.05）（見圖4）。

圖1 各組細(xì)鱗鮭增重率的差異

圖2 各組細(xì)鱗鮭特定生長(zhǎng)率的差異

圖3 各組細(xì)鱗鮭肥滿度的差異

圖4 各組細(xì)鱗鮭臟體比的差異

表2 不同硒元素組細(xì)鱗鮭的生長(zhǎng)性能指標(biāo)

（二）不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，G2-SeY組的TC、TG、HDL/C、TPRO顯著高于G1-NON組（P＜0.05），略高于G3-SeI和G4組；LDL/C、GLU、ALT、AST在各組中無顯著差異（P＞0.05）。

（三）不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，G2-SeY組的SOD、CAT、GPX顯著高于G1-NON組（P＜0.05），G3-SeI和G4組之間無顯著差異，略高于G1-NON組。G2-SeY組的MDA顯著低于其他三組，G3-SeI和G4組之間無顯著差異（P＞0.05），略低于G1-NON組。

表4 不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚肝臟抗氧化能力的影響

三、討論

（一）不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚生長(zhǎng)性能的影響

1957年，美國(guó)人Schwarz和Flotz首次證明動(dòng)物需要硒元素營(yíng)養(yǎng)，世界衛(wèi)生組織也已確認(rèn)硒是動(dòng)物必需的營(yíng)養(yǎng)元素。目前，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中多以飼料添加劑形式添加不同形態(tài)硒，主要包括無機(jī)硒、有機(jī)硒、納米硒等。硒元素對(duì)維持魚體正常生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要，是一種生長(zhǎng)所需的微量元素，長(zhǎng)期缺硒會(huì)導(dǎo)致魚體生長(zhǎng)緩慢，機(jī)體抗氧化性能下降，死亡率上升。因此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者開展了很多對(duì)飼料中添加適量的硒，從而來判斷其是否會(huì)提高魚類生長(zhǎng)性能的研究。

本實(shí)驗(yàn)中，酵母硒的添加能顯著提高細(xì)鱗鮭幼魚的增重率和特定生長(zhǎng)率，這與很多學(xué)者的研究結(jié)果一致，例如廣西大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)研究所許友卿等研究表明，0.6mg/kg的酵母硒能顯著提高鳡魚的增重率和特定生長(zhǎng)率，提高飼料轉(zhuǎn)化效率；上海海洋大學(xué)王亭亭等研究發(fā)現(xiàn)0.5mg/kg的酵母硒對(duì)鱉的生長(zhǎng)性能具有顯著促進(jìn)作用；中國(guó)海洋大學(xué)梁萌青等發(fā)現(xiàn)飼料中硒的水平達(dá)到0.4mg/kg時(shí)，鱸魚的生長(zhǎng)性能達(dá)到最大。西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院水產(chǎn)系蘇傳福等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中硒含量0.66mg/kg能顯著提高草魚的增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率、蛋白質(zhì)效率和飼料蛋白沉積效率，降低飼料系數(shù)。

（二）不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚血清生化指標(biāo)的影響

魚類的血清生化指標(biāo)可以在一定程度上反映魚類的營(yíng)養(yǎng)水平、代謝能力和疾病情況，是衡量魚體健康狀況的重要依據(jù)。血清中的總蛋白（TPRO）不僅反映了飼料中蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)水平，還體現(xiàn)了機(jī)體蛋白質(zhì)合成與代謝的強(qiáng)弱程度。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，飼料中添加不同硒源均能夠顯著提高TPRO，說明硒元素的添加對(duì)魚體生長(zhǎng)中蛋白質(zhì)的組織沉積有促進(jìn)作用，有助于提升生長(zhǎng)性能。總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）反映了動(dòng)物體內(nèi)脂類的吸收與代謝狀況，而高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的作用促進(jìn)了膽固醇進(jìn)行代謝。

本實(shí)驗(yàn)中，添加不同硒源的各組在TC、TG、HDL-C含量方面均有不同程度的上升，但TC和TG仍處于參考范圍內(nèi)，HDL-C含量的增加說明適量的添加硒元素能改善細(xì)鱗鮭幼魚血液中脂肪的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，有利于維持魚體健康狀態(tài)，這與在其它動(dòng)物中的得出的結(jié)果相似。谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）與谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）是動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能的兩種重要的氨基酸轉(zhuǎn)移酶，在肝臟中含量較高，能夠衡量肝細(xì)胞是否正常，血清轉(zhuǎn)氨酶升高表明肝細(xì)胞有損傷。本實(shí)驗(yàn)中各組的ALT和AST均無顯著差異，說明在飼料中適當(dāng)添加硒元素不會(huì)造成魚體肝臟受損。

血清中葡萄糖（GLU）水平直接關(guān)系著魚類的生長(zhǎng)速度，可作為機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況的衡量指標(biāo)。GLU含量高，則魚類攝食積極，蛋白質(zhì)合成代謝旺盛，魚體生長(zhǎng)迅速，健康狀況良好。本實(shí)驗(yàn)中各組細(xì)鱗鮭幼魚血清中的GLU水平無顯著差異。綜上所述，硒元素確實(shí)能夠調(diào)節(jié)細(xì)鱗鮭機(jī)體脂肪代謝并改善其血清生化指標(biāo)，但最適宜的硒元素添加量還沒有明確，有待于今后進(jìn)一步研究。

（三）不同硒源對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚肝臟抗氧化能力的影響

超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）是動(dòng)物體內(nèi)主要的抗氧化酶，而丙二醛（MDA）含量被認(rèn)為是脂類和蛋白質(zhì)氧化損傷的生物標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)中，通過添加不同硒源，均可以使細(xì)鱗鮭幼魚肝臟的SOD、CAT、GPX活性升高，而MDA含量下降，說明硒元素的適量添加提高了肝臟的抗氧化能力，可保護(hù)肝臟免受損傷，這與在其它動(dòng)物中的試驗(yàn)得出的結(jié)果相似。綜上所述，飼料中添加硒元素可以改善細(xì)鱗鮭幼魚機(jī)體的抗氧化能力，也是提高器官抗氧化能力的有效方法，但最適宜的硒元素添加量還沒有明確，有待于今后進(jìn)一步研究。

四、結(jié)論

飼料中添加酵母硒（硒元素含量1.92mg/kg）可以提高細(xì)鱗鮭幼魚的生長(zhǎng)性能。

本實(shí)驗(yàn)條件下，通過測(cè)定血清中總蛋白、總膽固醇、甘油三酯等指標(biāo)，可證明在飼料中添加硒元素對(duì)細(xì)鱗鮭幼魚具有一定的脂肪代謝促進(jìn)作用，并可以改善其血清生化指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)條件下，通過測(cè)定肝臟中的抗氧化酶活性發(fā)現(xiàn)，硒元素的添加提高了SOD、CAT、GPX的活力，降低了MDA含量，說明硒元素對(duì)肝臟的抗氧化性也有明顯的改善作用。