蔣金燕 楊媛媛

（中國(guó)人民解放軍陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院輸血科，山東 濰坊，261000）

母體、新生兒的血型融合度低或不融合，是導(dǎo)致ABO血型不合新生兒溶血?。ˋBO-HDN）發(fā)生的主要原因，本病為血型免疫反應(yīng)疾病[1]。母體在孕育胎兒的過程中產(chǎn)生的血型抗體無法與胎兒抗原相匹配，但血型抗體隨胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，導(dǎo)致同族免疫性溶血[2]。這類患兒的母親多為O型血，新生兒多為A/B型血，O型血母體內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生大量的抗A、抗B免疫球蛋白，拮抗A型血與B型血，當(dāng)母體血液從胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，極易使其發(fā)生溶血。產(chǎn)前IgG抗體的降低，也是導(dǎo)致ABO-HDN發(fā)生的關(guān)鍵原因[3]。新生兒出生后尚未完全適應(yīng)外在環(huán)境，抗A、抗B型抗體并未產(chǎn)生，與成人相比，新生兒紅細(xì)胞表面血型抗原的表達(dá)能力弱，因此無法利用成人血型鑒定方式對(duì)新生兒血型進(jìn)行鑒定[4]。新生兒有ABO血型不合新生兒溶血病（ABO-hemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）傾向時(shí)需盡早診斷，確診后要做好輸血前檢驗(yàn)工作，通過交叉配血選擇與患兒血液相容度較高的同型血液。在交叉配血篩查中，重點(diǎn)篩查抗A、抗B的存在，以提升臨床檢驗(yàn)結(jié)果的精確性，避免誤診，為后續(xù)臨床制訂相應(yīng)的治療方案奠定基礎(chǔ)[5]。在眾多檢驗(yàn)方法中，大量學(xué)者認(rèn)為微柱凝膠技術(shù)（microbubes gel technology，MGT）在ABO-HDN診斷中具有較大優(yōu)勢(shì)，且用于輸血前檢驗(yàn)的安全性高。微柱凝膠法的基本原理是將生物分子放入一種叫作凝膠的特殊介質(zhì)中，然后用電流將它們分離出來。凝膠是一種半固體、稠厚的物質(zhì)，它可以將生物分子分離出來，并且可以控制分子的運(yùn)動(dòng)方向。凝膠的結(jié)構(gòu)可以由電流控制，從而使生物分子在凝膠中沿著一定的方向移動(dòng)，從而實(shí)現(xiàn)分離。因此本研究以2021年2月—2023年2月收治的58例ABO-HDN新生兒為對(duì)象，分析MGT技術(shù)優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年2月—2023年2月中國(guó)人民解放軍陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院收治的58例ABO-HDN新生兒為研究對(duì)象。新生兒中男、女患兒分別為30例、28例；日齡2～12 d，平均日齡（6.15±0.25）d；體質(zhì)量4687.58～6584.56 g，平均體質(zhì)量（5964.45±25.13）g；分娩方式：自然分娩、剖宮產(chǎn)分別40例、18例；HDN分型：輕型、中型、重型分別24例、25例、9例。胎齡38～41周，平均胎齡（39.45±1.23）周；血型：A型、B型分別30例、28例；網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍為21.56×109/L～89.65×109/L。患兒資料完整，可進(jìn)行后續(xù)報(bào)道。本研究所納入患兒的家長(zhǎng)對(duì)研究?jī)?nèi)容知情同意，并簽署知情同意書。本研究經(jīng)中國(guó)人民解放軍陸軍第八十集團(tuán)軍醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合ABO-HDN的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②足月新生兒；③生長(zhǎng)發(fā)育正常。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①無惡性腫瘤等合并癥；合并先天性心臟病等先天疾病；②新生兒家族存在精神病史；③對(duì)藥物過敏；④生存時(shí)間＜3個(gè)月。⑤合并先天性畸形；⑥合并肝腎功能異常。

1.3 方法

對(duì)58例ABO-HDN患兒分別進(jìn)行MGT和MPT檢驗(yàn)，同時(shí)與5份ABO同型紅細(xì)胞制劑進(jìn)行急性交叉配血試驗(yàn)。

樣本采集：取患兒空腹靜脈血6 mL，分為兩份。正定、反定凝集強(qiáng)度分別達(dá)到3+、2+，且正反定型血型復(fù)查一致，即樣本質(zhì)量符合檢測(cè)要求。

MPT檢驗(yàn)過程：取一支干凈空試管，滴入2滴ABO-HDN患兒的紅細(xì)胞放散液/血漿，同時(shí)加入同型ABO-HDN紅細(xì)胞懸液（3%～5%），再加入低離子介質(zhì)（0.7 mL），所有液體加入完成后完全混合，再加入凝聚胺溶液。利用離心機(jī)（生產(chǎn)企業(yè)：長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，型號(hào)：TD-3A）高速離心處理，靜置10 min后去掉上清液，對(duì)紅細(xì)胞凝聚狀況進(jìn)行評(píng)估，存在凝集狀態(tài)需重新進(jìn)行上述操作。

MGT檢驗(yàn)：取微柱凝膠卡，將紅細(xì)胞放散液/血漿滴入2滴，然后將血樣加入凝膠卡中，持續(xù)離心處理5 min，轉(zhuǎn)速1500 r/min，觀測(cè)最終結(jié)果。

溶血試驗(yàn)：（1）游離抗體試驗(yàn)：準(zhǔn)備三支試管，分別標(biāo)號(hào)A、B、O，在各試管中加入50 μL紅細(xì)胞懸液（濃度0.8%），再加入血清25 μL，置于孵育器中快速處理，等待15 min，然后高速離心10 min，離心速度2500 r/min。（2）直接抗球蛋白試驗(yàn)：取一張抗人球蛋白卡，將A、B與O三孔標(biāo)記出來，加入濃度為0.8%的紅細(xì)胞懸液，劑量50 μL，持續(xù)離心1 min，觀察離心結(jié)果。（3）抗體釋放試驗(yàn)：取一張空白的抗人球蛋白卡，將A、B與O三孔標(biāo)記出來，加入濃度為0.8%的紅細(xì)胞懸液，劑量50 μL，滴入放散液后持續(xù)孵育15～20 min，離心10 min后觀察結(jié)果。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）統(tǒng)計(jì)不同溶血檢驗(yàn)下，ABO-HDN的診斷結(jié)果。（2）記錄MGT與MPT檢驗(yàn)方式下，直抗與血清交叉配血的結(jié)果。（3）記錄MGT與MPT檢驗(yàn)方式下，直抗與放散液交叉配血的結(jié)果。（4）統(tǒng)計(jì)血清MGT與MPT配血的結(jié)果。（5）統(tǒng)計(jì)放散液MGT與MPT配血的結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一致性檢驗(yàn)利用Kappa檢驗(yàn)，Kappa值大小與一致性程度成正比。K為0～1。

2 結(jié)果

2.1 直抗、游離及放散診斷結(jié)果

三種溶血試驗(yàn)結(jié)果顯示，直抗、游離及放散檢驗(yàn)為陽性分別為29例（50.00%）、44例（75.86%）、58例（100.00%），見表1。

表1 直抗、游離及放散診斷結(jié)果 [n（%）]

2.2 直抗與血清交叉配血

58例ABO-HDN患兒共進(jìn)行290次交叉配血試驗(yàn)，MGT試驗(yàn)顯示不合格率為173/290次（59.66%），MPT不合格率為82次（28.78%），MGT檢出不合格率顯著高于MPT試驗(yàn)（χ2=57.955，P=0.001）。直抗+與直抗-交叉配血的不合格率分別為137/290（47.24%）、118/290（40.69%），陽性高于陰性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.239，P=0.001＜0.05），見表2。

表2 直抗與血清交叉配血 [n（%）]

2.3 直抗與放散液交叉配血

58例ABO-HDN患兒共進(jìn)行290次交叉配血試驗(yàn)，MGT試驗(yàn)顯示不合格率為155次（53.45%），MPT不合格率為73次（25.17%），MGT檢出不合格率顯著高于MPT試驗(yàn)（χ2=48.594，P=0.001）。直抗+與直抗-交叉配血的不合格率分別為120/290（41.38%）、108/290（37.24%），陽性高于陰性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.041，P=0.037＜0.05），見表3。

表3 直抗與放散液交叉配血 [n（%）]

2.4 配血結(jié)果（血清MGT與MPT）

血清MGT與MPT配血結(jié)果顯示，MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性。Kappa檢驗(yàn)顯示MGT與MPT一致性較差（Kappa值=0.215，P=0.002），見表4。

表4 配血結(jié)果（血清MGT與MPT） [n（%）]

2.5 配血結(jié)果（放散液MGT與MPT）

放散液MGT與MPT配血結(jié)果顯示，MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性。Kappa檢驗(yàn)顯示MGT與MPT一致性較差（Kappa值=0.185，P=0.001），見表5。

表5 配血結(jié)果（放散液MGT與MPT） [n（%）]

3 討論

臨床常采用抗體釋放、游離血清等方法對(duì)ABO-HDN進(jìn)行檢測(cè)，確診后需根據(jù)患兒狀況給予輸血治療[7]。先進(jìn)行交叉配血再輸血，能摒除與患兒血液相容性較差的血型，通過對(duì)放散液和游離血清同時(shí)進(jìn)行交叉配血，能保證交叉配血全面性[8-9]。采用放散液交叉配血，能有效評(píng)估細(xì)胞溶血性抗體、紅細(xì)胞的不相容程度。采用游離血清交叉配血，能評(píng)估血液溶血抗體、紅細(xì)胞的不相容程度，細(xì)胞和血液兼顧，有效提升交叉配血精度[10]。在眾多檢測(cè)技術(shù)中，MGT技術(shù)的應(yīng)用效果較為理想。

本研究先對(duì)ABO-HDN患兒進(jìn)行溶血檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：放散檢驗(yàn)的陽性率為100%，可見放散檢驗(yàn)在是ABO-HDN患兒的首選方法，配合游離與直抗試驗(yàn)?zāi)軌颢@得更加精確的診斷結(jié)果。在確定所有患兒都為ABO-HDN類型后，給予MGT檢驗(yàn)，獲得良好效果。MGT與MPT配血結(jié)果也顯示，MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性，且兩者一致性差，MGT檢驗(yàn)不合格率較高。由統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果可知，MGT技術(shù)在ABO-HDN新生兒診斷中具有明顯優(yōu)勢(shì)，其診斷精確率明顯高于MPT，能夠更加準(zhǔn)確地檢驗(yàn)出不合格交叉配血情況，提高輸血安全性。

本次獲得上述良好結(jié)果，與MGT的實(shí)施有密切關(guān)系。與其他檢驗(yàn)技術(shù)相比，MGT技術(shù)在診斷ABO-HDN中優(yōu)勢(shì)突出，兼具可重復(fù)、診斷結(jié)果準(zhǔn)確、無創(chuàng)等優(yōu)勢(shì)，在檢驗(yàn)的同時(shí)保證患兒安全性，避免對(duì)患兒造成二次損傷[11]。同時(shí)在交叉配血過程中應(yīng)用MGT技術(shù)，能有效提升檢驗(yàn)敏感度，減少假陰性可能[12]。但MGT技術(shù)無法完全避免假陰性結(jié)果，因此在臨床檢驗(yàn)過程中，需配合放散液、血清兩種交叉配血方式，提高不合格交叉配血檢出率，進(jìn)而降低漏檢、誤檢風(fēng)險(xiǎn)[13]。由于ABO-HDN患兒的個(gè)體化差異，身體的抗體數(shù)量、紅細(xì)胞血型抗原表達(dá)強(qiáng)度等都存在差異性，加上胎兒時(shí)期被動(dòng)接收的溶血性抗體數(shù)量不同，都會(huì)對(duì)交叉配血靈敏度產(chǎn)生不同程度的影響，因此在利用MGT技術(shù)進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)時(shí)，要合理把控靈敏度的彈性范圍[14]。

直接抗人球蛋白檢測(cè)，是當(dāng)前ABO-HDN廣泛應(yīng)用的方法，但受到多種因素的限制，應(yīng)用MPT技術(shù)所獲得的診斷結(jié)果仍存在較大爭(zhēng)議性[15]。與MPT技術(shù)相比，MGT技術(shù)是近年來臨床認(rèn)可度較高的診斷技術(shù)，總結(jié)該項(xiàng)技術(shù)優(yōu)勢(shì)主要包括：操作過程簡(jiǎn)單，檢驗(yàn)人員只需按照特定程序，依次完成各個(gè)檢測(cè)步驟，就能獲得相應(yīng)結(jié)果，且檢測(cè)過程無需洗滌，檢驗(yàn)時(shí)間短，滿足患者即時(shí)查看結(jié)果的需求；MGT檢驗(yàn)的判讀方式簡(jiǎn)單，可通過存盤、拍照方式進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果清晰且穩(wěn)定；檢驗(yàn)過程自動(dòng)化程度高，有效避免人工檢驗(yàn)導(dǎo)致的誤差；MGT技術(shù)具有較高的靈敏度，結(jié)合條形碼技術(shù)進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，有利于降低檢測(cè)錯(cuò)誤率，保證交叉配血檢驗(yàn)的精準(zhǔn)度。但需要注意的是，MGT技術(shù)并不是十全十美的，交叉配血檢驗(yàn)過程中仍存在誤診風(fēng)險(xiǎn)，因此臨床檢驗(yàn)過程中，仍需注意規(guī)避相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)[16-17]。

楊鑫等[18]的報(bào)道中，對(duì)MGT技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)，收治284例ABO-HDN新生兒，分別進(jìn)行MGT檢驗(yàn)及MPT檢驗(yàn)，結(jié)果顯示：直抗、血清、放散試驗(yàn)陽性率分別為53.1%、85.2%、100.00%，MGT檢出不合格率均顯著高于MPT試驗(yàn)（P＜0.05），直抗+與直抗-交叉配血的不合格率相比，“+”均高于“-”（P＜0.05），本研究結(jié)果與上述報(bào)道具有一致性，可見本次結(jié)果具有較高的可信度。盡管本次研究初步取得成效，但仍存在漏診、樣本量少、健康教育不到位等問題[19-20]。

綜上所述，ABO-HDN患兒診斷及輸血前檢驗(yàn)中，MGT技術(shù)的血液檢驗(yàn)不合格率較高，且陽性檢出高于MPT。