蔡 燕 吳 順

（中南林業(yè)科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 湖南長(zhǎng)沙 410004）

丹參（Salvia miltiorrhizaBge.），鼠尾草屬，曬干后的根莖作為中藥材，在臨床中有抗炎、抗氧化、抗帕金森、保護(hù)神經(jīng)組織和抗病毒等多種功效［1］。植物的抗氧化酶活力受許多因素的影響，包括植物本身的因素，也有環(huán)境的因素。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)丹參葉片生長(zhǎng)的不同時(shí)期，通過(guò)測(cè)定開(kāi)花前后的抗氧化酶活力，掌握其生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，為控制其生長(zhǎng)發(fā)育提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

本實(shí)驗(yàn)所有材料均來(lái)自中南林業(yè)科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)種植基地，丹參植株種植于2021 年10 月，在整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程中都采用相同的種植管理措施。自丹參幼苗期起始，采樣頻率為1 次/（7 d），均隨機(jī)采取健康葉片用于相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定?？偛蓸哟螖?shù)為7次。

1.2 方法

稱取紫花丹參葉片1 g 于預(yù)冷的研缽中，將4 mL 0.05 mol/L（pH=7.8）的磷酸緩沖劑用移液槍添加到研缽中，然后將試樣粉碎為均勻的漿液，并將漿液裝入離心管（10 mL）中，再用緩沖劑清洗研缽，并移至離心管，最后用磷酸緩沖液定容至10 mL。6 000 r/min 離心10 min，取上清液備用。分別測(cè)定其丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力、過(guò)氧化氫酶活性、過(guò)氧化物酶活力和可溶性蛋白含量等。實(shí)驗(yàn)中，數(shù)據(jù)取3次重復(fù)的平均值進(jìn)行分析。利用SPSS 18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 丹參生長(zhǎng)過(guò)程中丙二醛含量的變化

從圖1可以看出，MDA含量隨時(shí)間的推移呈現(xiàn)出先降后升、再降、再升的趨勢(shì)。在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段，丙二醛的含量明顯下降。但在丹參形成花蕾之前，丙二醛的含量在穩(wěn)步上升。到了開(kāi)花期，丙二醛的含量又出現(xiàn)了下降趨勢(shì)，開(kāi)花初期丙二醛的含量達(dá)到了峰值，隨后又出現(xiàn)了下降的情況。由此可知，丹參在開(kāi)花過(guò)程中丙二醛的含量是呈現(xiàn)“M”型變化，但總體還是呈現(xiàn)上升趨勢(shì)的。

圖1 丙二醛含量變化

2.2 丹參生長(zhǎng)過(guò)程中超氧化物歧化酶活力的變化

由圖2 可見(jiàn)丹參在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的平均SOD 活性低于開(kāi)花期的SOD 活性，丹參葉片中的SOD 活性在形成花蕾的初期達(dá)到最低值，為3.099 U/g，于花蕾完全形成時(shí)達(dá)到峰值為36.55 U/g?；ɡ傩纬沙跗诤屯耆纬蓛蓚€(gè)時(shí)期之間的差異顯著（P=0.016＜0.05）。出現(xiàn)SOD 活性大幅上升的原因可能是丹參在花蕾形成過(guò)程中，葉片內(nèi)的超氧自由基的產(chǎn)生量大幅增加，為消除葉片內(nèi)的超氧自由基，葉片隨之大量產(chǎn)生SOD 來(lái)防止膜脂過(guò)氧化對(duì)細(xì)胞造成損害。

圖2 超氧化物歧化酶活力變化

2.3 丹參生長(zhǎng)過(guò)程中過(guò)氧化氫酶活力的變化

由圖3可見(jiàn)在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和開(kāi)花期，丹參葉片中的過(guò)氧化氫酶活力都隨時(shí)間的變化呈先上升后下降的趨勢(shì)。并且越接近開(kāi)花時(shí)期，過(guò)氧化氫酶活力越高。出現(xiàn)這種變化趨勢(shì)的原因可能是在丹參開(kāi)花的過(guò)程中由于SOD 活性的增加，植物體內(nèi)的H2O2也不斷累積，為消除H2O2以免對(duì)于植物造成不利影響，植物增加了對(duì)于CAT 的合成，導(dǎo)致葉片內(nèi)的CAT活性增加。

圖3 過(guò)氧化氫酶活力變化

2.4 丹參生長(zhǎng)過(guò)程中過(guò)氧化物酶活力的變化

由圖4可見(jiàn)，在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期，丹參葉片內(nèi)的過(guò)氧化物酶活性差異不顯著（P＞0.05）。而花蕾期開(kāi)始的開(kāi)花期，丹參葉片內(nèi)的過(guò)氧化物酶的活性呈下降趨勢(shì)。且營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期與開(kāi)花期之間的差異顯著（P=0.035＜0.05）。由此可以看出，丹參葉片中的POD 活性在開(kāi)花的過(guò)程中不斷下降，而且營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和開(kāi)花期相比POD 活性差異較大。其原因可能是由于在開(kāi)花過(guò)程中SOD 活性在不斷增大，導(dǎo)致CAT 活性增大，細(xì)胞內(nèi)的H2O2已經(jīng)被CAT 大量清除，POD的活性隨之減小。

圖4 過(guò)氧化物酶活性變化

2.5 丹參生長(zhǎng)過(guò)程中可溶性蛋白質(zhì)含量的變化

由圖5可知，營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期間，可溶性蛋白質(zhì)的含量在不斷下降，且營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)初期與末期有顯著性差異（P=0.003＜0.05），出現(xiàn)這種情況的原因可能是由于氣溫下降，導(dǎo)致丹參的御寒性能增強(qiáng)，減少了體內(nèi)的代謝活動(dòng)。而在開(kāi)花以后，隨著氣溫的上升，丹參葉片中的可溶性蛋白質(zhì)含量也會(huì)逐漸增多，這說(shuō)明溫度越高，其氨基酸的含量就越高，所以適度的高溫和降雨對(duì)氨基酸的合成有利［2］。

圖5 可溶性蛋白質(zhì)含量變化

3 結(jié)論

根據(jù)本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，開(kāi)花后MDA 和可溶性蛋白含量均較營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期高，SOD、POD 活性均有增加，開(kāi)花比營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期高；結(jié)果表明，在丹參的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，MDA 含量和可溶性蛋白質(zhì)含量之間存在正相關(guān)關(guān)系，與抗氧化酶之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。同時(shí)，抗氧化酶的活性也會(huì)對(duì)植株的老化速率產(chǎn)生一定的影響，增加其對(duì)延緩衰老的作用。因此，可以適當(dāng)在開(kāi)花期對(duì)丹參進(jìn)行外源干擾，增強(qiáng)抗氧化酶活性，減緩植物衰老，有利于根部有效物質(zhì)的積累，提升丹參產(chǎn)量。