周松華，陳 晨，秦霄雯，孫 靜，申 棟

（1.山東省計(jì)量科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250014；2.曲阜市人民醫(yī)院，山東 曲阜 273100）

1 引言

隨著人們生活水平的提高，血糖數(shù)值也逐漸升高，血糖數(shù)值高對患者不會帶來較大的威脅，但若無法將血糖控制在標(biāo)準(zhǔn)的范圍內(nèi)，其并發(fā)癥的發(fā)生會嚴(yán)重威脅患者的生活質(zhì)量以及生命健康。糖化血紅蛋白（HbA1c）是一種血紅蛋白糖基化的不可逆變化的產(chǎn)物，其測定結(jié)果，不受患者是否空腹的影響，能夠正確檢測出患者近3 個月以內(nèi)的血糖平均水平。臨床檢驗(yàn)糖化血紅蛋白的方法目前主要有離子交換層析法、親和層析法、免疫法、乳膠凝集法、酶法，方法多種多樣，因此對于不同原理血糖儀的校準(zhǔn)非常重要。文章分別校準(zhǔn)美國BIO-RAD D-10 糖化血紅蛋白儀（全自動離子交換高效液相色譜法）和日立7170A生化分析儀（乳膠凝集免疫比濁法），通過對比示值誤差、重復(fù)性、線性相關(guān)性，來測量儀器是否滿足實(shí)際需求。

在糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)方面，糖化血紅蛋白分析儀缺少全面完善的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，不同濃度下的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)正在研制中。在檢定規(guī)程和校準(zhǔn)規(guī)范方面不足，為彌補(bǔ)空白，國家2012 年出臺了JJG714--2012《血細(xì)胞檢定規(guī)程》，2014 年出臺了YY/T1246—2014《糖化血紅蛋白儀校準(zhǔn)規(guī)范》，2020 年國家新出了《糖化血紅蛋白分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》JJF1841—2020，在此規(guī)范中規(guī)定低值范 圍4.5%～5.5%（25.7mmol/mol-36.6mmol/mol），高值范圍9.5%～10.5%（80.3mmol/mol-91.2mmol/mol），這些規(guī)范在糖化血紅蛋白儀的校準(zhǔn)領(lǐng)域提供了新的方法指引。

2 血糖儀的不同原理以及代表性型號

2.1 離子交換層析法

原理是將血紅蛋白的β 鏈N 末端氨酸糖基化，在酸性溶液中，讓糖化血紅蛋白和血紅蛋白A 帶正電荷，用磷酸緩沖溶液對其進(jìn)行洗脫，通過分析色譜圖，可以得到糖化血紅蛋白的含量。離子交換層析法的代表性儀器為美國BIO-RAD 公司的D-10，PRIMUS公司的Hb9210，上?；葜械腗Q-2000PT，日本Tosoh 公司生產(chǎn)的G7。

2.2 免疫比濁法

免疫比濁法是根據(jù)糖化血紅蛋白的不同結(jié)構(gòu)進(jìn)行分離，原理是用單克隆以及多克隆抗體與糖化血紅蛋白表面特定的抗原相結(jié)合，抗原與抗體之間形成復(fù)合物，通過比濁（比色）的方法測定糖化血紅蛋白的濃度。免疫比濁法的代表性儀器為日本東芝的TBA-2000FR，檢測試劑盒德國西門子的DAC，該方法操作過程簡單、特異性好，但標(biāo)本之前會互相產(chǎn)生影響，標(biāo)本之間容易發(fā)生交叉感染，因此會引入誤差。

2.3 乳膠凝集法

運(yùn)用抗原抗體直接測定糖化血紅蛋白的含量。這種免疫反應(yīng)是糖化血紅蛋白與試劑中的抗體結(jié)合而形成凝集，凝集量隨糖化血紅蛋白濃度的大小而變化。使用生化分析儀器檢測糖化血紅蛋白的濃度，代表性儀器為貝克曼的DXC-800，日立的7170A 型全自動生化分析儀。

3 糖化血紅蛋白分析儀校準(zhǔn)方法

選擇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定結(jié)果，測試示值誤差和重復(fù)性，計(jì)算線性相關(guān)性。相關(guān)結(jié)果越低，證明儀器準(zhǔn)確度越好。

3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇

在最新的校準(zhǔn)規(guī)范中，校準(zhǔn)器為糖化血紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

根據(jù)在國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)資源共享平臺上獲取的信息，現(xiàn)有不同濃度的糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)如表1。

表1 糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

3.2 示值誤差

一般以準(zhǔn)確度衡量示值誤差，用高值和低值的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別校準(zhǔn)血糖儀，用每個濃度水平校準(zhǔn)三次，計(jì)算三次校準(zhǔn)結(jié)果的平均值。根據(jù)公式（1）得出儀器的示值誤差：

其中：Δx—示值誤差；

—三次測量的平均值；

xi—標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定值。

說明：三個數(shù)值均無量綱。

3.3 重復(fù)性

重復(fù)性也叫作變異系數(shù)，測量重復(fù)性的方法為用最低濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)重復(fù)校準(zhǔn)儀器二十次，根據(jù)公式（2）計(jì)算儀器的重復(fù)性：

其中：RSD—相對標(biāo)準(zhǔn)偏差；

yi—第i次標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測量值；

—二十次測量結(jié)果的平均值；

i—測量序號。

說明：除相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，其余數(shù)值均無量綱。

3.4 線性相關(guān)性

將糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，稀釋成至少五個濃度，濃度范圍在低值至高值中間，用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)血糖儀3 次，取測量結(jié)果的平均值。不同的濃度梯度為自變量、測量結(jié)果的平均值為因變量，做線性回歸方程，并計(jì)算相關(guān)系數(shù)R 的值。

4 校準(zhǔn)結(jié)果

4.1 精密度驗(yàn)證結(jié)果

精密度驗(yàn)證結(jié)果見表2，有關(guān)報(bào)告說明，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的數(shù)值應(yīng)小于5%，最理想值小于3%。高值、中值、低值的示值誤差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于理想中的精密度，精密度符合要求。糖化血紅蛋白儀（全自動離子交換高效液相色譜法）檢測HbA1c 結(jié)果的準(zhǔn)確度優(yōu)于全自動生化分析儀（乳膠凝集免疫比濁法），在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)將其作為參考方法。

4.2 線性驗(yàn)證

線性驗(yàn)證結(jié)果見表3 和圖1、 圖2。 糖化血紅蛋白分析儀的回歸方程Y=0.968x+1.58，R2=0.999，線性良好。全自動生化分析儀的回歸方程Y=1.024x-1.26，R2=0.999，線性良好。

圖1 糖化血紅蛋白分析儀的線性相關(guān)性

圖2 全自動生化分析儀的線性相關(guān)性

表3 有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)不同原理血糖儀的線性相關(guān)性結(jié)果

4.3 線性相關(guān)性

5 總結(jié)

糖化血紅蛋白數(shù)值的大小是衡量糖尿病患者病情的重要指標(biāo)，文章對比了糖化血紅蛋白分析儀和全自動生化分析儀校準(zhǔn)結(jié)果，相關(guān)數(shù)據(jù)均在規(guī)定范圍之內(nèi)。通過對比校準(zhǔn)結(jié)果，糖化血紅蛋白分析儀結(jié)果高于全自動生化分析儀，全自動生化分析儀由于同源的糖化血紅蛋白變體也有同樣的N 末端結(jié)構(gòu)，從而影響校準(zhǔn)結(jié)果，使糖化血紅蛋白分析儀的分析結(jié)果偏高。市場上血糖儀的種類逐漸增多，目前對不同原理的血糖儀進(jìn)行校準(zhǔn)的研究尚有缺失。根據(jù)最新頒布的規(guī)范，計(jì)量相關(guān)部門可以開展校準(zhǔn)工作，使血糖儀的檢測更準(zhǔn)確化、精密化。