胡瑞，張艷亮，張娟

1.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，云南昆明 650032；2.云南省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明 650032；3.蒙自市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南蒙自 661199

流感（F1u）是由流感病毒（influenza virus）引起的急性發(fā)熱性呼吸道傳染病，主要經(jīng)呼吸道飛沫傳播，臨床典型表現(xiàn)為突起畏寒、高熱、頭痛、全身酸痛、疲乏、食欲減退等，全身中毒癥狀明顯，而呼吸道癥狀較輕。具有潛伏期短、傳染性強(qiáng)、傳播速度快、發(fā)病率高等特點(diǎn)，通常還會(huì)并發(fā)較為嚴(yán)重的肺炎，更甚者還會(huì)致使患者出現(xiàn)腎、心臟等重要器官的衰竭，嚴(yán)重者還會(huì)致死，對(duì)公共衛(wèi)生及人們身心健康帶來(lái)重大威脅。依據(jù)基質(zhì)蛋白與核衣殼蛋白的同源性，一般將流感病毒分為3 種類型（甲、乙和丙）[1]。其中人類中最為流行的病毒主要為乙型流感病毒（influenza B virus, IB）和甲型流感病毒（influenza A virus, IA），而以上兩種病毒歸屬為正粘病毒科（onhomyxoviridae），為8 節(jié)段、單股負(fù)鏈RNA 病毒[2]。作為引起數(shù)次世界范圍較大流行的病毒，依據(jù)IA 表面的糖蛋白、神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase,NA）和血凝素（hemagglutinin, HA），可將IA 進(jìn)一步化分為：H7N9、H3N2、H1N1、H5N1[3]。乙型流感病毒根據(jù)抗原特性和血凝素基因的核苷酸序列，可分為Yamagata 和Victoria 兩大譜系，乙型流感病毒的感染性和傳播能力較甲型弱且只感染人類，一般會(huì)引起局部流行。近年來(lái)世界各地都曾發(fā)生以甲型流感病毒或乙型流感病毒為主的流感流行[4]。因此，利用實(shí)驗(yàn)室診斷方法快速、準(zhǔn)確鑒別流感病毒至關(guān)重要，實(shí)現(xiàn)早診斷、早隔離、早治療。本文就目前常用的甲、乙型流感病毒病原學(xué)相關(guān)檢驗(yàn)方法進(jìn)行綜述，旨在為臨床提供快速準(zhǔn)確的診斷依據(jù)?，F(xiàn)綜述如下。

1 病毒分離培養(yǎng)

作為國(guó)際上較為常用的篩選流感疫苗株以及對(duì)流感病毒進(jìn)行監(jiān)測(cè)的一種實(shí)驗(yàn)室方法，病毒分離培養(yǎng)法是目前流感監(jiān)測(cè)研究中一種可靠的檢測(cè)手段[5]。病毒分離培養(yǎng)法具有敏感性高且精確度高等優(yōu)點(diǎn)，在一定條件下可獲得更多、更全面的流感毒株信息情況，對(duì)后續(xù)了解流感病毒的耐藥性以及指導(dǎo)臨床制定科學(xué)有效的治療方案都具有十分重要的意義[6]。但也有一定局限性，如對(duì)操作要求高且繁瑣，細(xì)胞分離培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)必須在BSL-2級(jí)及以上實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，存在一定安全隱患，不利于在流行期間做出快速診斷，故在基層醫(yī)院中不建議進(jìn)行臨床推廣應(yīng)用。

2 免疫學(xué)方法

對(duì)于流感病毒的檢測(cè)，免疫學(xué)方法屬于一種相對(duì)成熟的病毒檢測(cè)技術(shù)。常用的方法有膠體金法、免疫熒光法、流式細(xì)胞儀法、血清學(xué)檢測(cè)方法等。

2.1 膠體金法

作為臨床上較為普遍使用的一種標(biāo)記技術(shù)，膠體金法是利用追蹤標(biāo)志物（膠體金）與抗原抗體進(jìn)行結(jié)合，從而達(dá)到免疫標(biāo)記的一種新型技術(shù)，具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。近年已在各種生物醫(yī)學(xué)研究中廣泛使用。這也成為臨床免疫學(xué)研究的重點(diǎn)及熱點(diǎn)，受到臨床醫(yī)學(xué)科研界的廣泛關(guān)注[7]。膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)是現(xiàn)今臨床研究使用較多的一種檢測(cè)流感病毒的手段。在國(guó)內(nèi)外已上市的流感病毒檢測(cè)產(chǎn)品中，流感抗原檢測(cè)試劑檢測(cè)的手段基本上都是依據(jù)快速免疫檢測(cè)原理而進(jìn)行的免疫層析以及免疫滲濾等方法[8]。膠體金法是一種快速簡(jiǎn)便的方法，可在15～30 min 內(nèi)獲得檢測(cè)結(jié)果，具有不需特殊實(shí)驗(yàn)設(shè)備、可用肉眼判定、試劑保存方便、穩(wěn)定性和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于人群現(xiàn)場(chǎng)快速初篩定性，及時(shí)監(jiān)控感染人群防止繼續(xù)傳播具有很大的優(yōu)勢(shì)。當(dāng)然其也有不足之處，如膠體金法定性試驗(yàn)檢測(cè)準(zhǔn)確度較低、假陽(yáng)性率高、陰性不能排除病毒感染、難以進(jìn)行質(zhì)量控制等。

2.2 免疫熒光法

免疫熒光法主要是在熒光物質(zhì)的幫助下對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記，從而達(dá)到對(duì)抗原進(jìn)行定位的目的，同時(shí)其進(jìn)行標(biāo)記的熒光色素對(duì)抗原抗體的活性沒(méi)有任何影響，其在抗體上通過(guò)與對(duì)應(yīng)的抗原進(jìn)行結(jié)合后會(huì)顯現(xiàn)出一種特異性的熒光反應(yīng)。在李曉光等[9]的研究中對(duì)472 例患者采用免疫熒光法檢測(cè)，對(duì)乙型/甲型流感進(jìn)行單獨(dú)或者聯(lián)合檢測(cè)，其檢測(cè)的特異度以及靈敏度均相對(duì)較高。Diallo D 等[10]應(yīng)用Sofia 免疫熒光法對(duì)238 例兒科急診患兒進(jìn)行甲、乙型流感病毒檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性組得到明確診斷，故住院率明顯降低。免疫熒光法幫助患者機(jī)體內(nèi)部組織中的病毒抗原與抗病毒抗體（標(biāo)有熒光素）進(jìn)行相應(yīng)的結(jié)合，具有高度的特異性以及敏感性，對(duì)流感患者明確診斷，指導(dǎo)治療，改善預(yù)后均有重要意義，是目前很多基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室流感病毒檢測(cè)的主流方法[11]。但是該種方法的操作步驟相對(duì)復(fù)雜，且對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷時(shí)有較大主觀性，因此假陽(yáng)性的概率相對(duì)較高，無(wú)法滿足臨床檢測(cè)所需要的高效、快速等要求。

2.3 流式細(xì)胞儀法

流式細(xì)胞儀法檢測(cè)甲、乙型流感病毒抗原是運(yùn)用待測(cè)抗原與熒光素標(biāo)記抗體特異性反應(yīng)，將懸浮細(xì)胞染色和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)原理相結(jié)合。劉冬蘭等[12]采用流式細(xì)胞儀及直接熒光素標(biāo)記抗體以檢測(cè)甲、乙型流測(cè)病毒抗原，針對(duì)157 份鼻咽拭子標(biāo)本，兩種檢測(cè)方法的結(jié)果一致性較好。應(yīng)用流式細(xì)胞儀法檢測(cè)能夠?qū)崿F(xiàn)高通量檢測(cè)，不僅結(jié)果準(zhǔn)確可靠、操作簡(jiǎn)便，而且檢測(cè)速度相對(duì)較快，其一般同時(shí)進(jìn)行篩查和鑒定兩項(xiàng)工作，并在2 h 內(nèi)提供結(jié)果，故臨床檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值相對(duì)較高。但需用專用儀器，標(biāo)本陳舊、運(yùn)輸或保存不當(dāng)?shù)瓤芍驴乖到獬霈F(xiàn)假陰性結(jié)果。

2.4 血清學(xué)檢測(cè)方法

人體內(nèi)部一但感染病毒后，病毒就會(huì)在人的機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的病毒特異性抗體，而且由于在患者感染流感病毒（甲型、乙型）后，潛伏期相對(duì)較短，故大多數(shù)情況下患者血清中的抗體都是在病程后或者結(jié)束期才得以被檢測(cè)出，且對(duì)于急性期的患者血清，在其處于恢復(fù)階段，其機(jī)體內(nèi)部血清會(huì)造成某種類型的流感病毒的中和抗體滴度呈現(xiàn)出4 倍及以上升高的趨勢(shì)，從而對(duì)患者是否感染了以上亞型的流感病毒進(jìn)行確診。而血清學(xué)的檢測(cè)方法對(duì)甲、乙型流感病毒檢驗(yàn)的特異度相對(duì)較高，同時(shí)該種檢測(cè)方法在對(duì)疫情的監(jiān)控、鑒別流感的分型等流行病學(xué)的相關(guān)研究以及對(duì)于疫苗的評(píng)估都擁有相對(duì)舉足輕重的作用。但是在進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn)時(shí)，往往需要對(duì)患者急性期和恢復(fù)期的血液分別進(jìn)行采集，且進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的周期相對(duì)較長(zhǎng)，同時(shí)擁有較多的干擾因素，因此不建議作為早期對(duì)病毒進(jìn)行快速診斷的方法。

3 病毒核酸檢測(cè)方法

近幾年，病毒核酸檢測(cè)技術(shù)已被越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于診斷病原體的檢測(cè)中，對(duì)甲、乙型流感病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，主要是通過(guò)在核酸擴(kuò)增的幫助下對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)，且其對(duì)于病毒檢測(cè)以及診斷的特異性、靈敏度相較于其他檢測(cè)方法更高。

3.1 聚合酶鏈反應(yīng)

作為一種能夠在體外擴(kuò)增特定DNA 片段的分子生物學(xué)技術(shù)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction, PCR）具有敏感性、特異性高等優(yōu)點(diǎn)，可在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)流感病毒進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)早期診斷流感病毒感染具有較高價(jià)值[13]。目前，對(duì)甲、乙型流感病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)的PCR 法，大多數(shù)采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）法和常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）法。其中常規(guī)RT-PCR 能夠?qū)?biāo)本中的流感病毒核酸展開檢驗(yàn)，此外，其還能夠通過(guò)將擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后，對(duì)序列進(jìn)行分析，從而依據(jù)系統(tǒng)分析對(duì)病毒的對(duì)應(yīng)亞型進(jìn)行判斷，但是常規(guī)RT-PCR 需要進(jìn)行開放式電泳的相關(guān)步驟，因此容易對(duì)樣本造成交叉污染。而實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 通過(guò)將Taqman 與RT-PCR 技術(shù)進(jìn)行結(jié)合，在熒光標(biāo)記物的幫助下采用相對(duì)較為封閉的檢測(cè)，同時(shí)還能夠?qū)颖局械牟《据d量進(jìn)行相關(guān)的定量分析[14]，通常情況下不用對(duì)PCR 的產(chǎn)物在整個(gè)進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程進(jìn)行下一步的處理，所以該種檢測(cè)的整體檢測(cè)時(shí)間就相對(duì)較短，具有較高的檢測(cè)效率，同時(shí)其假陽(yáng)性的發(fā)生率以及檢測(cè)中的感染率均相對(duì)較低；且其主要通過(guò)應(yīng)用特異性探針的方法對(duì)非特異性擴(kuò)增的情況進(jìn)行檢測(cè)，因此與常規(guī)RT-PCR 進(jìn)行對(duì)比，該種方法擁有相對(duì)較為簡(jiǎn)單的操作過(guò)程，且特異度以及靈敏度均相對(duì)較強(qiáng)，還可達(dá)到高通量檢測(cè)的目的[15]。該種方法是預(yù)防甲、乙型流感疫情暴發(fā)流行的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，能夠消減傳染高峰、延緩傳播速度。

3.2 恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)

恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)是利用各種酶、引物、核苷酸、模板核酸以及緩沖液的混合物在同一溫度下溫浴一定時(shí)間，讓不同的酶與核酸進(jìn)行反應(yīng)，從而達(dá)到特定核酸片段的快速擴(kuò)增目的。與傳統(tǒng)的PCR核酸擴(kuò)增相比，恒溫核酸擴(kuò)增不需要在不同溫度之間的轉(zhuǎn)換，只要保持酶反應(yīng)的最佳溫度即可。需要使用的設(shè)備比較簡(jiǎn)單，可以將檢測(cè)成本大大降低，從而有效地提高現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的效率，縮短現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)所需要的時(shí)間[16]。該檢測(cè)方法的建立，對(duì)甲、乙型流感病毒的臨床快速診斷和預(yù)防控制具有重要的意義，恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)在季節(jié)性高流行期間有望取代傳統(tǒng)PCR 診斷技術(shù)[17]。目前檢測(cè)甲、乙型流病毒較常用的恒溫?cái)U(kuò)增法有重組酶聚合酶擴(kuò)增（recombinase polymerase amplification, RPA）、依賴核酸序列擴(kuò)增（nucleic acid sequence-based amplification,NASBA）、環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）等。

3.2.1 LAMP 技術(shù) LAMP 技術(shù)主要是對(duì)靶序列特異位置的引物、BstDNA 聚合酶及擁有的鏈置換活性進(jìn)行識(shí)別，在等溫條件時(shí)，其能夠自動(dòng)循環(huán)進(jìn)行鏈置換核酸擴(kuò)增反應(yīng)，在反應(yīng)期間，能夠產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的白色沉淀。而該種檢測(cè)的操作方法相對(duì)簡(jiǎn)單，且處于等溫的環(huán)境中就能夠發(fā)生核酸的擴(kuò)增以及變性，無(wú)需其他儀器設(shè)備進(jìn)行輔助，僅需要肉眼即可對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判定；該種方法具有高效率且擴(kuò)增快速的特點(diǎn)，不需要預(yù)先雙鏈DNA 熱變性，并且短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增指數(shù)可達(dá)109以上；該種方法具有較高的檢測(cè)特異性，其對(duì)6～8 個(gè)靶序列區(qū)域設(shè)計(jì)的4～6條特異性引物，任何區(qū)域與引物不匹配均不能進(jìn)行核酸擴(kuò)增。RT-LAMP 技術(shù)是一步核酸擴(kuò)增技術(shù)，采用LAMP 和逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行病毒RNA 檢測(cè)。與RT-PCR 一樣，RT-LAMP 使用逆轉(zhuǎn)錄酶從RNA 制備互補(bǔ)DNA，并通過(guò)使用DNA 聚合酶進(jìn)一步擴(kuò)增。這在用RNA 基因組檢測(cè)病毒方面非常有效。崔淑娟等[18]的研究中指出，在對(duì)甲型流感病毒的檢測(cè)中，RT-LAMP 方法靈敏度較高（檢測(cè)限下限：50 拷貝/ul），且對(duì)比該種方法與實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)后可發(fā)現(xiàn)，該種方法更適用于在現(xiàn)場(chǎng)或者基層進(jìn)行相對(duì)較快的檢測(cè)。但LAMP 技術(shù)只能定性，引物設(shè)計(jì)難度高，操作過(guò)程中極易受到污染而至假陽(yáng)性結(jié)果。3.2.2 RPA 技術(shù) 作為一種較為新型的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，RPA 技術(shù)是在鏈置換DNA 聚合酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白（single strand DNA-binding protein, SSB）以及能結(jié)合寡核苷酸引物的重組酶的幫助下完成檢測(cè)。以上各種酶的混合物需要在37℃的環(huán)境下才可進(jìn)行反應(yīng)。引物通過(guò)蛋白-DNA 復(fù)合物（重組酶與引物結(jié)合的產(chǎn)物）的幫助，可以對(duì)同源序列的位置進(jìn)行確定，并于確定后生成鏈交換反應(yīng)，并于以上物質(zhì)生成的同時(shí)啟動(dòng)DNA 的合成，并采取指數(shù)式的方式對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增[19]。以上被替換的DNA 鏈為了防止出現(xiàn)進(jìn)一步的替換，則會(huì)和SSB 進(jìn)行結(jié)合。且因?yàn)樵摲N方法所需要的反應(yīng)環(huán)境溫度相對(duì)較低，僅需保持溫度在25～42℃，且反應(yīng)的速度相對(duì)較快(＜1 h)，檢測(cè)的靈敏度較高，因此可以廣泛應(yīng)用于臨床病原微生物核酸的快速檢測(cè)上。在對(duì)探針、RPA 引物進(jìn)行設(shè)計(jì)時(shí)，只需要一個(gè)探針以及一對(duì)引物即可幫助熒光檢測(cè)的反應(yīng)體系對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行擴(kuò)增，還可在整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程中對(duì)擴(kuò)增進(jìn)展進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)控[20]。截止目前，普遍認(rèn)為PCR 核酸檢測(cè)技術(shù)能夠被RPA 技術(shù)取代，但受技術(shù)制約，其仍存在不足，如擴(kuò)增體系中含有大量蛋白質(zhì)、PEG 等成分，造成RPA 產(chǎn)物檢測(cè)困難；沒(méi)有PCR 的熱循環(huán)來(lái)避免引物之間的結(jié)合，故恒定溫度下反應(yīng)難以避免部分非特異性擴(kuò)增。

3.2.3 NASBA 技術(shù) NASBA 技術(shù)是一項(xiàng)在PCR 基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的以RNA 為模板的快速等溫?cái)U(kuò)增并能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)結(jié)果的檢測(cè)方法，在恒定的溫度條件下即可直接擴(kuò)增單鏈RNA。該種方法的反應(yīng)主要是在噬菌體T7RNA 多聚酶、核糖核酸酶H、AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶以及兩種特殊的寡核苷酸引物的幫助下識(shí)別其中一個(gè)引物（5’端帶有T7RNA 聚合酶）的啟動(dòng)子序列，而檢測(cè)另一引物（5’端擁有和標(biāo)記電化學(xué)）的探針互補(bǔ)序列，借助光電信號(hào)輔助，完成流感病毒的RNA 相關(guān)定性、定量研究[21]。NASBA 技術(shù)屬于一種高通量的檢測(cè)方法，需要反應(yīng)的條件相對(duì)較為溫和，且具有全封閉式反應(yīng)的特點(diǎn)，能有效避免污染物，且在同時(shí)篩查多個(gè)樣本時(shí)，具有一定的優(yōu)勢(shì)，可通過(guò)使用不同熒光基團(tuán)對(duì)分子信標(biāo)進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)在同一個(gè)反應(yīng)中進(jìn)行擴(kuò)增并對(duì)不同的目標(biāo)RNA 擴(kuò)增情況進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)[22]。雖然該種檢測(cè)方法出現(xiàn)假陰性、假陽(yáng)性的可能性也不小，但隨著便攜式NASBA 檢測(cè)儀的面市，使用該技術(shù)更適于現(xiàn)場(chǎng)快速診斷，對(duì)于季節(jié)性甲、乙型流感病毒快速篩查具有一定的優(yōu)勢(shì)。

3.3 液相基因芯片技術(shù)

液相基因芯片技術(shù)的主要原理依據(jù)為流式細(xì)胞儀、熒光染料編碼的微球。在各個(gè)種類的微球上都偶聯(lián)著具有一定針對(duì)性的探針（含有核苷酸片段），且對(duì)以上探針以及特異性引物的雙重設(shè)計(jì)可以保證該種方法進(jìn)行檢測(cè)的特異性。作為一種相對(duì)新型的檢測(cè)技術(shù)，液相基因芯片主要是在多標(biāo)志物的幫助下對(duì)檢測(cè)通量進(jìn)行檢測(cè)[23]。在陳錦龍等[24]的研究中，設(shè)計(jì)了特異性引物以及探針（甲、乙型流感病毒M 基因的核苷酸序列），且在甲、乙型流感病毒的分型鑒別中，具有相對(duì)較高的特異性和重復(fù)性。且液相基因芯片主要是通過(guò)核酸分子的雜交對(duì)流感病毒進(jìn)行相關(guān)分型，并以探針和PCR 產(chǎn)物之間的互補(bǔ)作為進(jìn)行檢測(cè)的基礎(chǔ)，因此擁有相對(duì)較高的檢測(cè)準(zhǔn)確性[25]。近年來(lái)，多重?zé)晒釸T-PCR 方法被普遍應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室流行病毒分型研究中，且目前多應(yīng)用于鑒別甲型、乙型流病毒分型。液相基因芯片技術(shù)主要通過(guò)將兩種方法進(jìn)行結(jié)合（多重PCR技術(shù)、液相基因芯片技術(shù)），可以有效克服設(shè)計(jì)難度高的多重?zé)晒鈾z測(cè)方法的弊端，并可以同時(shí)對(duì)兩種類型的流感病毒的分型進(jìn)行檢測(cè)，有利于流感病毒的快速鑒定和診斷。

4 小結(jié)與展望

甲、乙型流感是分布于全球的感染性疾病，在歷史上已經(jīng)出現(xiàn)過(guò)較多的大流行以及爆發(fā)流行，對(duì)人類身心健康具有較為直接的危害，也給國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展及社會(huì)穩(wěn)定造成一定威脅，故尋求安全可靠的甲、乙型流感病毒檢測(cè)方式成為臨床研究重點(diǎn)[26]。近年來(lái)，臨床上對(duì)于檢測(cè)甲、乙型流感病毒的技術(shù)隨著時(shí)間的發(fā)展也在不斷地進(jìn)步，且隨著多種商品化試劑盒以及新的診斷技術(shù)的不斷涌現(xiàn)。依據(jù)抗原以及核酸進(jìn)行快速檢測(cè)的方法由于具有準(zhǔn)確而快速的特點(diǎn)，在臨床上對(duì)于乙型、甲型流感的檢測(cè)診斷中發(fā)揮著舉足輕重的作用。然而，對(duì)于傳統(tǒng)的病毒進(jìn)行對(duì)應(yīng)分離以及培養(yǎng)是現(xiàn)今臨床的研究重點(diǎn)，同時(shí)其擁有便宜且容易對(duì)新毒株進(jìn)行檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。而血清學(xué)方法檢測(cè)需要等體內(nèi)病毒水平蓄積到一定程度才可發(fā)現(xiàn)，雖然其檢測(cè)診斷的速度較慢且無(wú)法早期進(jìn)行診斷，但仍然可以用于甲、乙型流感流行病學(xué)的相關(guān)調(diào)查以及對(duì)應(yīng)的疫苗評(píng)估。因此，在甲、乙型流感預(yù)防控制的不同環(huán)節(jié)，可根據(jù)診斷技術(shù)的各自特點(diǎn)和公共衛(wèi)生的需要，結(jié)合不同地區(qū)對(duì)流感病毒檢測(cè)的要求，對(duì)檢測(cè)設(shè)備以及方法進(jìn)行合適的選擇，是提高診斷效率的重點(diǎn)。由于臨床上流感病毒（甲、乙型）對(duì)應(yīng)藥物的耐藥性的不斷增加，且該類病毒的基因組也在不斷變異，因此現(xiàn)今的診斷技術(shù)仍需不斷的進(jìn)步，以便于克服將來(lái)可能面對(duì)的巨大挑戰(zhàn)。