■ 王 典 李國(guó)棟 秦南冰

（內(nèi)蒙古優(yōu)然牧業(yè)有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古呼和浩特 010010）

高產(chǎn)奶量和牛群健康是當(dāng)前奶牛養(yǎng)殖業(yè)追求的主要目標(biāo)。生產(chǎn)中由環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)、生理和管理等因素引起的應(yīng)激是造成奶牛健康狀況和生產(chǎn)性能下降的常見原因[1-3]。研究表明多種應(yīng)激的機(jī)制與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)相關(guān)[4-5]。

?；撬崾且环N不參與蛋白質(zhì)合成的氨基酸，在動(dòng)物體內(nèi)可由蛋氨酸和半胱氨酸代謝生成，具有抗氧化和消炎的作用[6-7]。?；撬嶙鳛橐环N飼料添加劑在單胃動(dòng)物養(yǎng)殖中已有應(yīng)用，在飼糧中補(bǔ)充可提高豬和家禽的抗氧化能力，緩解應(yīng)激損傷和提升動(dòng)物生產(chǎn)性能[8-9]。目前，?；撬嵩诜雌c動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中的應(yīng)用和研究有限，其抗氧化和消炎的特性使其具有在過(guò)瘤胃保護(hù)的前提下提高奶?？寡趸?、免疫和生產(chǎn)性能的潛力。本試驗(yàn)?zāi)康氖翘骄匡暭Z中補(bǔ)充過(guò)瘤胃?；撬釋?duì)奶牛生產(chǎn)性能和血液抗氧化和免疫指示物的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2022年4—6月在內(nèi)蒙古呼和浩特市某牧場(chǎng)開展。試驗(yàn)將20 頭經(jīng)產(chǎn)健康荷斯坦奶牛隨機(jī)分為2 組（每組10 頭），分別飼喂以下飼糧：①牛場(chǎng)原有全混合日糧（TMR）為對(duì)照組，泌乳天數(shù)（140±32）d，初始產(chǎn)奶量（43.4±2.3）kg/d，胎次（3.1±1.2）次；②牧場(chǎng)原有TMR 基礎(chǔ)上添加100 g/（頭·d）過(guò)瘤胃?；撬幔ㄅ；撬岷繛?0%）的試驗(yàn)組，泌乳天數(shù)（139±28）d，初始產(chǎn)奶量（42.6±2.2）kg/d，胎次（2.3±0.8）次。試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期56 d，各組奶牛進(jìn)行分欄飼養(yǎng)，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致，每日07：00、14：00飼喂2次，每日07：00、13：00、19：00擠奶3次，試驗(yàn)期間自由采食和飲水。

1.2 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.2.1 飼糧采樣及測(cè)定

正試期第28 天采集對(duì)照組和試驗(yàn)組當(dāng)日兩班次TMR 樣品，等比例混合后使用濕化學(xué)法分析水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、淀粉、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、鈣、磷含量。另外，根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2483 號(hào)公告-5—2016 方法使用高效液相色譜法測(cè)定TMR 樣品?；撬岷浚⊿GS 通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，青島）。基礎(chǔ)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2.2 干物質(zhì)采食量（DMI）、產(chǎn)奶量以及牛奶理化成分測(cè)定

每日記錄試驗(yàn)各組兩班次總投料量，采集早班TMR 樣品測(cè)定干物質(zhì)含量。次日早班投料前收集各試驗(yàn)組剩料稱重記錄，計(jì)算各組平均DMI。試驗(yàn)期間，每日根據(jù)牧場(chǎng)擠奶系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄試驗(yàn)?zāi)膛．a(chǎn)奶量。于飼喂第0、28、56 天分別采集各牛只當(dāng)日早、中、晚班奶樣，按3：4：3比例混合后分為兩份，一份樣品于4 ℃保存后使用全自動(dòng)乳成分分析儀（MilkoScan-FT120，丹麥FOSS公司）測(cè)定乳脂、乳蛋白、乳糖、尿素氮含量和體細(xì)胞數(shù)，另一份樣品于-20 ℃保存后依據(jù)GB 5009.169—2016 第二法測(cè)定?；撬岷?。牛奶牛磺酸含量分析由SGS 實(shí)驗(yàn)室（SGS 通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，青島）進(jìn)行。

1.2.3 血液樣品采集和分析

于飼喂第0、28、56天晨飼前采集尾根靜脈血液樣品20 mL，于3 000 r/min 條件下離心15 min 后分離血清，于-20 ℃保存后分析超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，總抗氧化能力（total antiox‐idant capacity，T-AOC）及還原型谷胱甘肽（glutathi‐one，GSH）、活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）、牛磺酸、血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A，SAA）、結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，HP）、白細(xì)胞介素1（interleukin-1，IL-1）、白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）、免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）含量。上述指標(biāo)的分析根據(jù)GB/T 14926.50—2001 使用酶聯(lián)免疫吸附法按照相應(yīng)試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行測(cè)定。試劑盒與血清樣品生物化學(xué)指標(biāo)分析由應(yīng)節(jié)生物科技實(shí)驗(yàn)室（應(yīng)節(jié)生物科技有限公司，南京）提供并進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SAS 9.4軟件分析。以周為單位計(jì)算試驗(yàn)期間奶牛平均日產(chǎn)奶量，將各周平均產(chǎn)奶量（預(yù)試期～飼喂8 周）使用PROC MIXED 過(guò)程以?；撬崽幚怼r(shí)間、?；撬崽幚怼?xí)r間作為固定因素進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析。牛奶成分和血液指標(biāo)數(shù)據(jù)（0、28、56 d）使用與上述相同模型進(jìn)行分析。分析結(jié)果中P<0.05視為差異顯著。在進(jìn)行分析之前，評(píng)估各變量在上述模型中的殘差是否符合正態(tài)分布。

2 結(jié)果與分析

2.1 DMI、產(chǎn)奶量和牛奶理化成分

由圖1可知，試驗(yàn)組DMI在飼喂第1周時(shí)較預(yù)試期有所下降，第1周平均DMI比對(duì)照組低2.3 kg/d。在飼喂第2 周，試驗(yàn)組DMI 恢復(fù)至預(yù)試期相近水平，兩組DMI在飼喂第2～8周末表現(xiàn)出明顯的差異。試驗(yàn)期間試驗(yàn)組（24.7 kg/d）和對(duì)照組（25.3 kg/d）平均DMI差異不顯著（P>0.05）。由圖2 可知，奶牛產(chǎn)奶量受?；撬崽幚砗蜁r(shí)間因素影響不顯著（P>0.05），但?；撬崽幚砗蜁r(shí)間因素呈現(xiàn)顯著的相互作用（P<0.05）。處理和時(shí)間因素的相互作用反映對(duì)照組和試驗(yàn)組產(chǎn)奶量隨飼喂時(shí)間延長(zhǎng)有不同的變化趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為對(duì)照組產(chǎn)奶量在飼喂第2 周出現(xiàn)明顯下降，而后在飼喂第3 周有所上升，但同期試驗(yàn)組產(chǎn)奶量未出現(xiàn)類似變化趨勢(shì)。兩組產(chǎn)奶量隨時(shí)間的不同變化趨勢(shì)導(dǎo)致飼喂第2 周時(shí)試驗(yàn)組產(chǎn)奶量顯著高于對(duì)照組（P<0.05），但其余時(shí)間段兩組產(chǎn)奶量差異不顯著（P>0.05）。由圖3 可知，乳脂、乳蛋白、乳糖、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮和?；撬岷烤闯尸F(xiàn)顯著的處理×?xí)r間效應(yīng)（P>0.05）。

圖1 試驗(yàn)?zāi)膛８晌镔|(zhì)采食量

圖2 試驗(yàn)?zāi)膛．a(chǎn)奶量

2.2 血清抗氧化和免疫指標(biāo)水平

試驗(yàn)?zāi)膛Ｑ蹇寡趸笜?biāo)水平見圖4。T-AOC呈現(xiàn)顯著的牛磺酸處理×?xí)r間效果（P<0.05），表現(xiàn)為在飼喂第0、28 天，兩組血清T-AOC 差異不顯著（P>0.05），但在飼喂第56 天試驗(yàn)組血清T-AOC 顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。其他抗氧化指標(biāo)，包括SOD 和GSH-Px活性以及GSH、ROS和?；撬岷?，均未呈現(xiàn)顯著的?；撬崽幚怼?xí)r間效應(yīng)（P>0.05）。

圖4 奶牛血清抗氧化指標(biāo)水平

試驗(yàn)?zāi)膛Ｑ迕庖咧笜?biāo)水平見圖5。血清SAA和HP 含量的牛磺酸處理×?xí)r間效應(yīng)顯著（P<0.05）。其中對(duì)照組血清SAA 含量在飼喂0～56 d 期間總體呈上升趨勢(shì)，試驗(yàn)組血清SAA 含量在飼喂0～28 d 期間下降，在飼喂28～56 d 期間上升，兩組血清SAA 含量在飼喂56 d 時(shí)差異顯著（試驗(yàn)組<對(duì)照組；P<0.05）。飼喂0 天時(shí)，試驗(yàn)組血清HP 含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05），在飼喂0～56 d期間，對(duì)照組血清HP含量略有升高，而試驗(yàn)組血清HP含量有所下降，使兩組血清HP含量的初始差異在飼喂28、56天消失（P>0.05）。

圖5 奶牛血清免疫指標(biāo)水平

3 討論

3.1 飼糧中補(bǔ)充牛磺酸對(duì)奶牛DMI、產(chǎn)奶量和牛奶?；撬岷康挠绊?/h3>

試驗(yàn)初期（飼喂1 周時(shí)），試驗(yàn)組DMI 出現(xiàn)短暫下降，可能為奶牛對(duì)飼糧中添加過(guò)瘤胃?；撬岬倪m應(yīng)過(guò)程。試驗(yàn)組DMI在隨后一周內(nèi)恢復(fù)至預(yù)試期水平，對(duì)過(guò)瘤胃牛磺酸的適應(yīng)過(guò)程未明顯降低奶牛試驗(yàn)期間的平均DMI。

飼糧中補(bǔ)充過(guò)瘤胃牛磺酸未顯著影響試驗(yàn)期間整體產(chǎn)奶量。牛磺酸作為一種在動(dòng)物體內(nèi)存在的細(xì)胞抗氧化劑，有清除活性氧自由基和維持細(xì)胞氧化還原平衡的作用[7]，在禽類飼料中添加能緩解由環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和生理等因素引起的應(yīng)激[10]，特別是有提升熱應(yīng)激期間家禽生產(chǎn)性能的作用[8]。奶牛養(yǎng)殖中的各種應(yīng)激因素（包括環(huán)境、生理、營(yíng)養(yǎng)、管理因素）是造成產(chǎn)奶量降低的常見原因[1-3]，因此?；撬岬目寡趸匦允蛊渚哂芯徑饽膛?yīng)激、提高應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)奶量的潛力，但目前鮮有反芻動(dòng)物相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表。本試驗(yàn)于春季開展，試驗(yàn)期間不存在由溫度因素引起的慢性應(yīng)激，在缺乏明顯慢性應(yīng)激因素的情況下向奶牛補(bǔ)充?；撬釤o(wú)法提升試驗(yàn)期間的平均產(chǎn)奶量。但值得注意的是，飼喂第2 周時(shí)試驗(yàn)組產(chǎn)奶量高于對(duì)照組。觀察兩組產(chǎn)奶量隨時(shí)間變化的趨勢(shì)后發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組產(chǎn)奶量在飼喂第2 周出現(xiàn)短暫降低，可能為某種應(yīng)激因素導(dǎo)致，但在飼養(yǎng)管理一致的前提下同期試驗(yàn)組產(chǎn)奶量未觀察到下降，可能反映牛磺酸對(duì)奶牛應(yīng)激的緩解作用。

給奶牛補(bǔ)充過(guò)瘤胃?；撬嵛锤淖兣Ｄ袒A(chǔ)化學(xué)成分（乳脂、乳蛋白、乳糖含量）。此前，使用奶牛乳腺上皮細(xì)胞的體外研究結(jié)果表明，?；撬峥赏ㄟ^(guò)刺激GPR87-PI3K-SETD1A通路增加乳蛋白和乳脂合成[11]，但類似結(jié)果未在本試驗(yàn)中觀察到。此外，本試驗(yàn)中向奶牛飼喂?；撬嵛刺嵘Ｄ讨械呐；撬岷?。在動(dòng)物體內(nèi)牛磺酸可通過(guò)蛋氨酸—半胱氨酸代謝途徑進(jìn)行合成[7]，有研究發(fā)現(xiàn)對(duì)奶牛補(bǔ)充60 g/（頭·d）過(guò)瘤胃蛋氨酸使牛奶中?；撬岷繌?.42 mg/100 g 提升至0.56 mg/100 g[12]。本試驗(yàn)中?；撬犸曃沽縖有效成分100 g/（頭·d）]與上述研究中過(guò)瘤胃蛋氨酸飼喂量具有可比性，但試驗(yàn)處理未影響牛奶牛磺酸含量，說(shuō)明化學(xué)合成的?；撬崤c通過(guò)體內(nèi)代謝生成的?；撬嵯蛉橹械霓D(zhuǎn)化率可能存在差異。

3.2 飼糧中補(bǔ)充?；撬釋?duì)奶?？寡趸芰Φ挠绊?/h3>

在飼糧中補(bǔ)充?；撬嵛刺嵘囼?yàn)組奶牛血清牛磺酸含量。此前，Zhou等[13]發(fā)現(xiàn)向圍產(chǎn)期奶牛飼糧補(bǔ)充占干物質(zhì)基礎(chǔ)0.08%的過(guò)瘤胃蛋氨酸能提升血漿?；撬岷俊Ｑ簶悠奉愋偷牟煌ㄑ搴脱獫{）可能是導(dǎo)致本試驗(yàn)結(jié)果與Zhou 等[13]研究結(jié)果有差異的原因。

牛磺酸攝入對(duì)抗氧化能力的提升已在單胃動(dòng)物中被證實(shí)，相關(guān)研究表明?；撬嵬ㄟ^(guò)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控抑制豬和禽類的氧化應(yīng)激[14-15]。另外，攝入?；撬釋?duì)動(dòng)物體抗氧化能力的促進(jìn)作用也表現(xiàn)為血液中相關(guān)指示物含量的變化。例如，?；撬崮芴嵘笫笱錞-AOC、GSH-Px 活性和GSH 含量，并降低MDA 含量[16]；給肉雞飼喂牛磺酸能提升血清T-AOC 和SOD、GSH-Px 活性，并降低MDA 含量[17]。本試驗(yàn)中，飼喂過(guò)瘤胃?；撬?6 d 后試驗(yàn)組血清T-AOC 高于對(duì)照組，反映?；撬釋?duì)奶?？寡趸阅艿奶嵘饔茫坏瑫r(shí)本試驗(yàn)中未觀察到?；撬釘z入影響奶牛血清SOD、GSH-Px 活性和GSH、ROS 含量等其他指示抗氧化水平的指標(biāo)。

3.3 飼糧中補(bǔ)充牛磺酸對(duì)奶牛免疫性能的影響

此前，單胃動(dòng)物研究證明牛磺酸具有消炎作用，可抑制TNF-α、IL-1、IL-6等炎性細(xì)胞因子的合成[18]。本試驗(yàn)中，飼喂?；撬釋?duì)奶牛血清中上述炎性細(xì)胞因子含量沒(méi)有影響，但有降低奶牛血清急性期蛋白SAA和HP 含量的趨勢(shì)。急性期蛋白是動(dòng)物體對(duì)外界或體內(nèi)的刺激進(jìn)行非特異性應(yīng)答時(shí)合成的一類蛋白[19]，其在血液中的含量隨動(dòng)物體內(nèi)炎癥水平而變化，能反映奶牛的應(yīng)激程度[20]。因此，試驗(yàn)組奶牛血清SAA 和HP含量降低說(shuō)明飼糧中補(bǔ)充牛磺酸可能降低了奶牛的炎癥水平和應(yīng)激反應(yīng)。另外，有研究發(fā)現(xiàn)飼喂牛磺酸能提升肉鴨[21]和鵪鶉[22]血清IgG含量，但本試驗(yàn)中未觀察到飼糧中補(bǔ)充?；撬岣淖兡膛Ｑ錓gG和IgA含量。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，向荷斯坦奶牛飼糧中補(bǔ)充100 g/（頭·d）過(guò)瘤胃?；撬幔ㄅ；撬岷繛?0%）能提升奶牛抗氧化性能和抗應(yīng)激水平，降低炎癥水平。但該處理未顯著影響產(chǎn)奶量，且不影響牛奶中基礎(chǔ)乳成分和?；撬岷?。