徐彩娟

三都水族自治縣動物疫病預(yù)防控制中心,貴州 三都 558100

0 引言

免疫接種是預(yù)防動物疫病的重要措施之一,而免疫抗體水平是檢驗免疫效果以及防控重大動物疫病最直接、有效的方法?？贵w水平直接反映動物群體對疫病抵抗能力的高低。國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定畜禽免疫抗體水平須在70%及以上,但影響畜禽免疫效果的因素較多,在實際動物防疫工作中,免疫抗體水平偏低的情況仍然存在。通過集中監(jiān)測掌握三都水族自治縣重大動物疫病疫苗免疫效果,探討影響動物免疫抗體水平的因素,了解抗體水平低下的原因,繼而采取有效的應(yīng)對措施,有利于提高免疫抗體合格率,降低重大動物疫情發(fā)生風(fēng)險,減少養(yǎng)殖業(yè)損失,促進畜禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測對象

三都水族自治縣6個鎮(zhèn)2個街道進行重大動物疫苗免疫的豬、牛、羊和禽類。

1.2 監(jiān)測項目

畜禽通過接種口蹄疫、豬瘟、小反芻獸疫、高致病性禽流感、新城疫等疫苗所產(chǎn)生的免疫抗體水平。

1.3 檢測材料

對全縣6個鎮(zhèn)2個街道進行口蹄疫、豬瘟、小反芻獸疫、禽流感、新城疫等疫苗接種后28 d以上的畜禽,采集血清樣品共計346份(其中豬血清48份、牛血清39份、羊血清105份、雞血清154份)開展2022年秋季集中監(jiān)測。

1.4 使用試劑

集中監(jiān)測使用的檢測試劑有洛陽萊普生信息科技有限公司生產(chǎn)的口蹄疫病毒O型競爭ELISA抗體檢測試劑盒(批號:TE220902-1);洛陽萊普生信息科技有限公司生產(chǎn)的口蹄疫病毒A型競爭ELISA抗體檢測試劑盒(批號:E211002-1);鄭州中道生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒(批號:20220401);鄭州中道生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的羊小反芻獸疫病毒競爭ELISA抗體檢測試劑盒(批號:20220302);哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產(chǎn)的禽流感病毒H5亞型(Re-14株)血凝抑制試驗抗原(批號:20220503);哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產(chǎn)的禽流感病毒H7亞型(Re-4株)血凝抑制試驗抗原(批號:20220503);青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)的新城疫血凝抑制試驗抗原(批號:010132003)。

1.5 使用儀器設(shè)備

酶標儀、恒溫箱、單道移液器、多道移液器、振蕩器。

1.6 檢測方法

禽流感、新城疫免疫抗體檢測分別按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2020)、《新城疫診斷技術(shù)》(GB/T 16550-2020)的血凝和血凝抑制試驗技術(shù)進行;口蹄疫免疫抗體檢測按照《口蹄疫診斷技術(shù)》(GB/T18935-2018)固相競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)進行;豬瘟免疫抗體檢測按照《豬瘟抗體間接ELISA檢測方法》(GB/T35906-2018)的酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)進行;小反芻獸疫免疫抗體檢測按照《小反芻獸疫診斷技術(shù)》(GB/T27982-2011)的競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)進行。

2 抗體監(jiān)測結(jié)果

對從養(yǎng)殖場、散養(yǎng)戶采集的346份血清樣本分別進行高致病性禽流感H5亞型、H7亞型、豬瘟、O型口蹄疫、A型口蹄疫、小反芻獸疫、新城疫等重大動物疫病免疫抗體效價監(jiān)測。檢測O型口蹄疫187份,抗體合格152份,合格率81.3%;檢測A型口蹄疫143份,抗體合格96份,合格率67.1%;檢測豬瘟48份,抗體合格40份,合格率83.3%;檢測高致病性禽流感H5亞型154份,抗體合格136份,合格率88.3%;檢測高致病性禽流感H7亞型154份,抗體合格139份,合格率90.3%;檢測新城疫93份,抗體合格83份,合格率89.2%;檢測小反芻獸疫92份,抗體合格92份,合格率100%(見表1)。

表1 三都水族自治縣2022年下半年動物疫苗免疫抗體監(jiān)測結(jié)果統(tǒng)計表

從監(jiān)測結(jié)果可以看出,除A型口蹄疫外,三都2022年秋季動物疫病免疫抗體平均水平均達到國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜禽免疫抗體規(guī)定標準。但是個別鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢測場點抗體合格率低于70%,如大河鎮(zhèn)、九阡鎮(zhèn)豬O型口蹄疫抗體合格率均為0;大河鎮(zhèn)豬瘟免疫抗體合格率僅為20%;中和鎮(zhèn)禽流感H5亞型抗體合格率僅為30.4%,禽流感H7亞型抗體合格率僅為47.8%具體如表2所示。

3 影響免疫抗體效價原因分析

3.1 疫苗品質(zhì)不佳

目前疫苗生產(chǎn)廠家較多,近年常報道部分疫苗存在質(zhì)量問題。通過近年來三都的檢測情況分析,發(fā)現(xiàn)牛、羊口蹄疫O型、A型二價滅活苗會出現(xiàn)以下情況:O型口蹄疫檢測合格的檢測場點,其A型免疫抗體檢測卻不合格,或是O、A型口蹄疫免疫抗體檢測均合格,但兩者合格率相差較大,口蹄疫O型合格率明顯比口蹄疫A型合格率高。本次2022年下半年三都集中監(jiān)測發(fā)現(xiàn),鳳羽街道、三合街道、中和鎮(zhèn)牛O型口蹄疫免疫抗體檢測合格率均為100%,而A型口蹄疫抗體免疫檢測合格率分別為0、0、25%;大河鎮(zhèn)牛羊、中和鎮(zhèn)羊O、A型口蹄疫免疫抗體檢測均合格,但合格率相差較大,因此可通過相關(guān)措施來確定是否為疫苗質(zhì)量問題造成。

3.2 疫苗運輸保存不當

疫苗從生產(chǎn)到免疫接種前,均需要在低溫環(huán)境下進行運輸保存。根據(jù)疫苗的不同特性,分為冷凍和冷藏。例如小反芻獸疫、豬瘟等活疫苗須在-15 ℃保存,禽流感、口蹄疫等滅活疫苗保存的適宜溫度是2～8 ℃。三都日常疫苗運輸常租用冷藏車,為了降低運輸成本,常把需要冷藏和冷凍的疫苗全部放在一起運輸,且部分鎮(zhèn)、村各層級領(lǐng)取疫苗時,缺乏冷藏設(shè)備,無法實現(xiàn)冷鏈無縫對接,導(dǎo)致部分疫苗在使用時已經(jīng)失去了活性,從而影響了疫苗效價[1-2]。

3.3 免疫方法不當

1) 在一定范圍內(nèi),抗體與疫苗呈正相關(guān)關(guān)系,疫苗使用劑量過大會造成機體產(chǎn)生免疫耐受,用量過小無法產(chǎn)生免疫應(yīng)答,但部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)防疫技術(shù)人員仍有疫苗接種的劑量越大效果越好的錯誤認識。且一瓶疫苗的容量為50～250 mL,村防疫技術(shù)人員有時為節(jié)約疫苗,減少損耗,在疫苗開封后來不及在規(guī)定時間內(nèi)使用完,也會降低疫苗效價。

2)部分村防疫員年齡偏大,文化水平不高,僅根據(jù)以往的經(jīng)驗接種疫苗。未認真閱讀疫苗使用說明書進行免疫接種,亦對免疫結(jié)果產(chǎn)生影響。同時,受養(yǎng)殖場舍建設(shè)條件限制,動物在免疫過程中保定不徹底,進而逃脫免疫或造成漏免或是打“飛針”。在隨機采樣時,未免動物樣品所占比例高,導(dǎo)致群體免疫合格率低。

3)部分養(yǎng)殖場認為疫苗免疫越多越好,除了接種國家強制免疫疫苗外,還混合接種了其他疫苗。疫苗免疫種類多、頻率高,多種疫苗同時使用或在相近的時間內(nèi)接種,疫苗進入機體可能產(chǎn)生干擾作用,造成競爭性抑制,從而影響抗體形成。

3.4 應(yīng)激反應(yīng)

環(huán)境的劇烈變化會造成畜禽不安,產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),影響機體免疫系統(tǒng)和功能,降低機體防衛(wèi)能力,造成免疫抑制[4]。村級防疫員待遇低,愿意從事該項工作的人員積極性、責(zé)任心均不足,有些村防疫員為快速完成疫苗免疫接種,在注射疫苗時較為直接粗暴,通過驅(qū)趕、強按、強扭等方式免疫疫苗,造成畜禽驚嚇、恐慌,應(yīng)激大,降低了畜禽免疫應(yīng)答的能力[5]。

3.5 樣品采集方法有誤

一方面動物在進行疫苗接種后免疫抗體水平逐漸上升,當達到峰值后會維持一段時間,之后逐漸下降[3],不同疫苗在動物體內(nèi)產(chǎn)生抗體并達到峰值所需的時間不同,進行動物免疫抗體監(jiān)測時,血清樣品采集的時間過早或過晚,都會對免疫抗體水平造成影響;另一方面,樣品采集后未及時進行血清分離,或是未按照相關(guān)要求進行按時送檢,且有些鄉(xiāng)鎮(zhèn)因氣溫降低便將送檢養(yǎng)殖直接用塑料袋包裝送至實驗室,缺少低溫保存、運輸,導(dǎo)致部分樣品溶血、變質(zhì),這些情況均會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。

3.6 檢測儀器有問題

檢測儀器設(shè)備質(zhì)量的好壞、是否靈敏同樣會影響檢測結(jié)果的準確性。在此次集中監(jiān)測過程中,發(fā)現(xiàn)其中使用的1把50～300 μL多道移液器個別孔位抽取的液體體積不夠,造成試驗過程中個別孔位反應(yīng)體積不均,無法有效進行反應(yīng),極有可能導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)偏差,對實驗結(jié)果的準確性造成嚴重的影響。

4 應(yīng)對措施

1)三都的縣、鎮(zhèn)兩級足額保障疫苗運輸經(jīng)費,改善疫苗運輸保存環(huán)境,確保疫苗運輸過程中冷鏈無縫對接。同時督促鎮(zhèn)(街道)、村級加強冰柜、保溫箱等冷鏈設(shè)備的管理使用,避免疫苗因保存不當而失效,造成浪費。

2)加大對重大動物防疫工作的督查力度,督促大河鎮(zhèn)對豬O型口蹄疫、豬瘟的補免,普安鎮(zhèn)對?？谔阋?、豬瘟的補免,中和鎮(zhèn)對禽流感的補免,九阡鎮(zhèn)對豬、?？谔阋叩难a免工作。補免結(jié)束后在規(guī)定的時間內(nèi)再次采樣送縣級獸醫(yī)實驗室檢測抗體效價。同時,督促各鎮(zhèn)(街道)及時對新增補欄和集中免疫漏免的畜禽進行補免,實現(xiàn)應(yīng)免盡免,確保免疫密度和質(zhì)量,構(gòu)筑有效的防疫安全屏障。

3)根據(jù)三都近年來已經(jīng)發(fā)生或可能發(fā)生的動物疫病指導(dǎo)養(yǎng)殖場制定科學(xué)、合理、可行的免疫程序,避免不同種疫苗接種產(chǎn)生的免疫干擾。

4)積極爭取上級補助資金,提高村級動物防疫員工作待遇,提高工作積極性和責(zé)任感,組建一支作風(fēng)過硬、技術(shù)精湛的動物防疫隊伍?？h相關(guān)部門應(yīng)組織開展技術(shù)培訓(xùn),邀請上級專家、老師蒞臨指導(dǎo),鼓勵防疫員參加省、州組織的動物防疫技能競賽,以賽促學(xué),以學(xué)提能,以此提高防疫人員隊伍專業(yè)技能。

5)按照三都獸醫(yī)實驗室《質(zhì)量管理手冊》《操作規(guī)程》等規(guī)定,正確使用移液器、恒溫箱、酶標儀等實驗室設(shè)備儀器,并對實驗儀器進行定期維護和校準,正確設(shè)置相關(guān)的試驗參數(shù),減少誤差,確保檢測結(jié)果的準確性。

5 結(jié)束語

從監(jiān)測結(jié)果可以看出,除A型口蹄疫外,三都2022年秋季動物疫病免疫抗體平均水平均達到國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜禽免疫抗體規(guī)定標準。但是個別鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢測場點抗體合格率低于70%,應(yīng)積極對影響免疫抗體效價原因進行分析,進而采取合理的針對性改善措施,以提高動物疫病免疫抗體水平。