張博 劉賀 顧貴波 蘭德松 李寅博 王哲 祁思霖 姚偉 高原

摘要 通過(guò)觀察清原馬鹿發(fā)情時(shí)的表現(xiàn)，并建立動(dòng)物模型，通過(guò)比較多種發(fā)情鑒定方法來(lái)確定最佳人工輸精時(shí)間。通過(guò)比較不同發(fā)情鑒定方法受胎率的差異，篩選出受胎率最高的發(fā)情鑒定方法。結(jié)果表明：母鹿拒絕公鹿爬跨后2 h為最佳輸精時(shí)間；CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法的受胎率高達(dá)91.7%，是最適合清原馬鹿人工輸精的發(fā)情鑒定方法。

關(guān)鍵詞 清原馬鹿；發(fā)情鑒定；人工輸精；受胎率

中圖分類(lèi)號(hào) S 825? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2023）12-0082-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.12.018

Estrus Identification of Qingyuan Wapiti and Its Effects on Sperm Delivery Efficiency

ZHANG Bo1，LIU He1，GU Gui-bo2 et al

（1.Centre for Modern Agriculture， Poverty Alleviation and Development in Fushun City， Fushun， Liaoning 113006;2. Centre for Agricultural Development Service in Liaoning Province， Shenyang， Liaoning? 110031）

Abstract The performance of Qingyuan Wapiti was observed during estrus，? animal models were established. Through comparing a variety of estrus identification methods， the optimum time point of artificial insemination was confirmed. By comparing the difference of conception rate under different estrus identification methods， the estrus identification method with the highest conception rate was screened out. The results showed that the optimum insemination time was 2 hours after the female deer refused to fuck with the male deer. The conception rate of CIDR+PMSG+A3 synchronized estrus reached 91.7%， CIDR+PMSG+A3 synchronized estrus method was the most suitable estrous identification method for Qingyuan Wapiti before artificial insemination.

Key words Qingyuan Wapiti;Estrus identification;Artificial insemination;Conception rate

基金項(xiàng)目 撫順市“撫順英才計(jì)劃”項(xiàng)目（FSYC202104002）。

作者簡(jiǎn)介 張博（1987—），女，遼寧撫順人，高級(jí)獸醫(yī)師，碩士，從事動(dòng)物疫病防控和畜牧技術(shù)推廣工作。*通信作者，正高級(jí)獸醫(yī)師，碩士，從事獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)、疫病防控與畜牧技術(shù)研究和推廣工作。

收稿日期 2022-07-06

馬鹿屬于大型鹿科動(dòng)物，具有采食飼料種類(lèi)廣泛、對(duì)飼養(yǎng)管理和飼養(yǎng)環(huán)境要求低以及抗病性強(qiáng)等特點(diǎn)，成年雄性馬鹿的鹿茸具有可再生的特性［1］。清原馬鹿為天山馬鹿的人工馴養(yǎng)品種，多分布于東北地區(qū)，至今有30多年的發(fā)展歷史，由于地理環(huán)境因素和飼養(yǎng)方式的改變，在外貌和鹿茸產(chǎn)量上都有所改變。清原馬鹿與純種的天山馬鹿相比具有早期豐產(chǎn)、高產(chǎn)期長(zhǎng)、產(chǎn)仔成活率高、耐寒性強(qiáng)以及鹿茸枝頭大、肥嫩、雙門(mén)樁小、根細(xì)等特點(diǎn)［2-3］，是目前產(chǎn)茸量最高的馬鹿品種，具有較高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

鹿類(lèi)養(yǎng)殖作為我國(guó)畜牧業(yè)的一部分，其養(yǎng)殖技術(shù)與豬、牛、羊、禽類(lèi)等傳統(tǒng)家畜相比存在很大差距，對(duì)馬鹿尤其是清原馬鹿的研究存在基礎(chǔ)薄弱、技術(shù)能力不足等問(wèn)題［4］。筆者通過(guò)觀察清原馬鹿發(fā)情時(shí)的表現(xiàn)，并建立動(dòng)物模型，采用多種發(fā)情鑒定方法來(lái)確定最佳人工輸精時(shí)間，通過(guò)比較不同發(fā)情鑒定方法的受胎率，篩選出受胎率最高的發(fā)情鑒定方法，旨在為解決清原馬鹿在實(shí)際養(yǎng)殖中受胎率浮動(dòng)性較大、產(chǎn)仔率不穩(wěn)定等問(wèn)題提供理論基礎(chǔ)和研究思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

供試動(dòng)物為體態(tài)健康、繁殖性能和遺傳性能穩(wěn)定的清原馬鹿［5］，分別來(lái)自撫順市清林家庭農(nóng)場(chǎng)、長(zhǎng)峰鹿場(chǎng)、北大林清原馬鹿場(chǎng)、良鄉(xiāng)鹿場(chǎng)、愛(ài)民鹿場(chǎng)，共馬鹿154頭，其中能繁母鹿144頭、公鹿10頭。

1.2 試驗(yàn)材料

孕馬血清促性腺激素注射液（PMSG，購(gòu)自杭州動(dòng)物藥品廠，1 000 IU/支）；綿羊用孕酮陰道栓（CIDR，新西蘭進(jìn)口，孕酮含量100 mg/支）；三合激素注射液（上海第九制藥廠）；前列腺素F2α（PGF2α，成都興旺動(dòng)物藥業(yè)有限公司）。

試驗(yàn)精液為撫順市清原滿(mǎn)族自治縣清林家庭農(nóng)場(chǎng)種公鹿9號(hào)的凍精，公鹿3鋸后產(chǎn)茸量在24.3 kg/a以上，身體健康、無(wú)疾病，有效精子數(shù)量≥0.32億個(gè)/mL，精子活力≥50%，規(guī)格為0.25 mL/支。

1.3 發(fā)情表現(xiàn)的觀察

通過(guò)公鹿試情的方式，觀察發(fā)情初期、發(fā)情盛期、發(fā)情末期3個(gè)發(fā)情階段母鹿的表現(xiàn)和變化，包括行為表現(xiàn)、生殖器官的變化、卵巢的變化、陰道上皮細(xì)胞的變化［6］、陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化程度以及每個(gè)階段持續(xù)時(shí)間。

1.4 最佳輸精時(shí)間的確定

選擇長(zhǎng)峰鹿場(chǎng)的馬鹿作為供試動(dòng)物，觀察公鹿試情后母鹿的變化表現(xiàn)，以母鹿拒絕爬跨時(shí)間為臨界值，在母鹿拒絕爬跨后1～4 h進(jìn)行人工輸精，比較不同輸精時(shí)間下受胎率，確定最佳輸精時(shí)間。

1.5 不同發(fā)情鑒定方法對(duì)受胎率的影響分析

以自然發(fā)情本交法作為對(duì)照組，

試驗(yàn)組采用其他發(fā)情鑒定方法，通過(guò)比較對(duì)照組和各試驗(yàn)組的受胎率，分析不同發(fā)情鑒定方法對(duì)清原馬鹿人工輸精后受胎率的影響。

對(duì)照組：采用自然發(fā)情本交法，公母馬鹿的比例為1∶15。

試驗(yàn)組Ⅰa：采用CIDR+PMSG 同期發(fā)情方法，即母鹿陰道埋入CIDR栓劑，12 d后麻醉取出，同時(shí)注射PMSG，60 h后進(jìn)行人工輸精。

試驗(yàn)組Ⅰb：采用CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法，即母鹿陰道埋入CIDR栓劑，12 d后麻醉取出，同時(shí)注射PMSG，取栓后48 h肌肉注射A3，12 h后進(jìn)行人工輸精，并再次注射A3。

試驗(yàn)組Ⅰc：采用GnRH+AD+PG+GnRH+AD同期發(fā)情方法，即給母鹿注射GnRH和AD注射液，7 d后注射PG，48 h 后再次注射GnRH和AD注射液，24 h后進(jìn)行人工輸精。

試驗(yàn)組Ⅰd：采用三合激素注射液注射的同期發(fā)情方法，即對(duì)母鹿肌肉注射三合激素注射液，48 h后進(jìn)行人工輸精。

試驗(yàn)組Ⅰe：采用PGF2α+PMSG同期發(fā)情方法，即在母鹿前一次發(fā)情第9天注射PGF2α，次日再次注射PGF2α，第3天注射PMSG，3 d后進(jìn)行人工輸精。

試驗(yàn)組 Ⅱ：采用公鹿試情法，定時(shí)驅(qū)趕公鹿到母鹿群，通過(guò)觀察母鹿對(duì)公鹿的反應(yīng)，從而判斷母鹿是否發(fā)情，按照公鹿試情后母鹿拒絕爬跨所確定的最佳輸精時(shí)間，進(jìn)行人工輸精。

試驗(yàn)組Ⅲ：采用小圈公鹿試情觀察法，即將試情公鹿單獨(dú)飼養(yǎng)在小圈內(nèi)，公鹿和母鹿的圈舍相通，每天定時(shí)將公鹿放入母鹿圈舍尋找發(fā)情母鹿，通過(guò)觀察母鹿對(duì)公鹿的反應(yīng)表現(xiàn)判斷，發(fā)情母鹿從興奮轉(zhuǎn)為安靜后，對(duì)發(fā)情母鹿進(jìn)行人工輸精。

試驗(yàn)組Ⅵ：采用陰道上皮細(xì)胞檢查法，即選擇試驗(yàn)組Ⅱ的發(fā)情母鹿，用無(wú)菌的棉拭子在其陰道深處擦拭，獲取陰道上皮細(xì)胞，再通過(guò)蘇木精-伊紅染色法染色后在顯微鏡下觀察。根據(jù)視野中的細(xì)胞形態(tài)來(lái)確定母鹿的發(fā)情階段，并進(jìn)行人工輸精。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)情表現(xiàn)

通過(guò)公鹿試情后母鹿在發(fā)情初期、發(fā)情盛期、發(fā)情末期3個(gè)發(fā)情階段的行為表現(xiàn)、生殖器官變化、卵巢變化、陰道上皮細(xì)胞變化、陰道上皮細(xì)胞角質(zhì)化程度以及每個(gè)階段持續(xù)時(shí)間均不同，詳見(jiàn)表1。

2.2 最佳輸精時(shí)間的確定

以母鹿拒絕爬跨時(shí)間為臨界值，在拒絕爬跨后1～4 h進(jìn)行人工輸精，其受胎率有所不同。拒絕爬跨后1～3 h進(jìn)行人工輸精，其受胎率均高于60.0%，而拒絕爬跨后2 h受胎率最高（80.0%），拒絕爬跨后4 h受胎率低于50.0%（表2）。由此可見(jiàn)，通過(guò)公鹿試情后進(jìn)行人工輸精的最佳時(shí)間是拒絕爬跨后2 h。

2.3 不同發(fā)情鑒定方法對(duì)清原馬鹿母鹿受胎率的影響

該試驗(yàn)共采用4類(lèi)共8種發(fā)情鑒定方法，根據(jù)發(fā)情鑒定方法的不同，清原馬鹿通過(guò)人工輸精后的受胎率有所不同，詳見(jiàn)表3～4。試驗(yàn)組Ⅰ采用5種同期發(fā)情方法，受胎率為76.0%；公鹿試情法（試驗(yàn)組Ⅱ）受胎率為76.9%；小圈公鹿試情觀察法（試驗(yàn)組Ⅲ）的受胎率為50.0%；陰道上皮細(xì)胞檢查法（試驗(yàn)組Ⅵ）受胎率為73.3%。4個(gè)試驗(yàn)組的受胎率由高到低依次為試驗(yàn)組Ⅱ>試驗(yàn)組Ⅰ>試驗(yàn)組Ⅵ>試驗(yàn)組Ⅲ。通過(guò)對(duì)各試驗(yàn)組發(fā)情鑒定方法的比較發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組與試驗(yàn)組Ⅰ、試驗(yàn)組Ⅱ、試驗(yàn)組Ⅵ受胎率差異不顯著，試驗(yàn)組Ⅲ與其他組差異極顯著（表3）。

由表4可知，試驗(yàn)組Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc、Ⅰd、Ⅰe受胎率分別為63.6%、91.7%、90.9%、66.7%和62.5%，其中CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法（試驗(yàn)組Ⅰb）的受胎率最高（91.7%）。試驗(yàn)組Ⅰ的受胎率由高到低依次為試驗(yàn)組Ⅰb>試驗(yàn)組Ⅰc>試驗(yàn)組Ⅰd>試驗(yàn)組Ⅰa>試驗(yàn)組Ⅰe。除了試驗(yàn)組Ⅰb、試驗(yàn)組Ⅰc外，其他試驗(yàn)Ⅰ組受胎率均低于對(duì)照組（80.0%）。試驗(yàn)組Ⅰa、試驗(yàn)組Ⅰd、試驗(yàn)組Ⅰe與試驗(yàn)組Ⅰb、試驗(yàn)組Ⅰc間差異極顯著；試驗(yàn)組Ⅰa、試驗(yàn)組Ⅰd與試驗(yàn)組Ⅰe間差異未達(dá)到顯著水平；試驗(yàn)組Ⅰb與試驗(yàn)組Ⅰc差異未達(dá)到顯著水平。

不同的發(fā)情鑒定方法在人工輸精后的受胎率存在一定差異，試驗(yàn)組Ⅲ小圈公鹿試情觀察法的受胎率與對(duì)照組受胎率相差30.0百分點(diǎn)，與試驗(yàn)組Ⅱ受胎率相差26.9百分點(diǎn)。對(duì)于同期發(fā)情鑒定方法，采用不同的方法受胎率也存在較大差異。試驗(yàn)組Ib CIDR+PMSG+A3方法的受胎率高達(dá)91.7%，與試驗(yàn)組Ie相比高29.2百分點(diǎn)。

以上結(jié)果表明，發(fā)情鑒定方法對(duì)清原馬鹿受胎率有重要的影響。在4類(lèi)發(fā)情鑒定方法中，采用同期發(fā)情法后的受胎率較高，其中試驗(yàn)組Ib （CIDR+PMSG+A3）的受胎率最高。

3 討論

近年來(lái)，隨著馬鹿飼養(yǎng)繁殖技術(shù)的日趨成熟，人工輸精已成為馬鹿保種和良種推廣的重要技術(shù)手段。對(duì)于國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖量較少的清原馬鹿，在生產(chǎn)實(shí)踐中仍然存在諸多問(wèn)題，其中母鹿的發(fā)情鑒定不準(zhǔn)確是人工輸精技術(shù)推廣應(yīng)用的制約因素之一［7-8］。

（1）母畜的行為表現(xiàn)、生殖器官的變化、卵巢的變化以及陰道上皮細(xì)胞的變化是觀察家畜發(fā)情鑒定的重要依據(jù)［9］。發(fā)情鑒定準(zhǔn)確與否關(guān)系到輸精時(shí)間是否準(zhǔn)確，而確定最佳輸精時(shí)間是提高母畜受胎率的前提。通過(guò)比較不同輸精時(shí)間下的受胎率發(fā)現(xiàn)，母鹿拒絕公鹿爬跨后2 h為最佳輸精時(shí)間。由于季節(jié)、氣候等自然因素以及飼料、營(yíng)養(yǎng)水平等飼養(yǎng)管理因素不同，最佳輸精時(shí)間會(huì)因排卵的提前或延后而存在個(gè)體差異。因此，在生產(chǎn)實(shí)踐中不僅要充分利用拒絕公鹿爬跨后2 h這一最佳輸精時(shí)間，而且要結(jié)合實(shí)際情況來(lái)確定最佳輸精時(shí)間。

（2）采用不同的發(fā)情鑒定方法其受胎率存在一定的差異。通過(guò)對(duì)照組與4個(gè)試驗(yàn)組的對(duì)比，自然本交法、同期發(fā)情法、公鹿試情法和陰道上皮細(xì)胞檢查法母鹿受胎率有所差異但未達(dá)到顯著差異。其中，自然本交法不用人為進(jìn)行發(fā)情鑒定，受胎率為80.0%，但不利于優(yōu)良品種的利用。同期發(fā)情法不需要進(jìn)行發(fā)情鑒定，且受胎率高達(dá)76.0%。通過(guò)激素的選擇和輸精程序的設(shè)定促使母鹿的發(fā)情相對(duì)集中，合理的同期發(fā)情方法便于管理，還可以大大提高母鹿的受胎率。公鹿試情法發(fā)情鑒定的準(zhǔn)確性高，受胎率較高（76.9%），但母鹿受到的應(yīng)激刺激較強(qiáng)，操作過(guò)程中需要更多的人力和物力，配種人員存在一定的不安全性。陰道上皮細(xì)胞檢查法的發(fā)情鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，受胎率較高（73.3%），但陰道上皮細(xì)胞檢查法在操作和理論上都有較高要求，且工作強(qiáng)度相對(duì)較大，對(duì)于普通養(yǎng)殖戶(hù)來(lái)說(shuō)存在一定的困難。通過(guò)綜合比較發(fā)現(xiàn)，同期發(fā)情法更適用于人工輸精前的發(fā)情鑒定。

（3）同期發(fā)情法是人為使用激素制劑來(lái)調(diào)整家畜的發(fā)情周期，使母畜發(fā)情相對(duì)集中，在家畜的繁殖育種方面得到了廣泛應(yīng)用。同期發(fā)情法可以在較短的時(shí)間和最大的范圍內(nèi)將

精液的效率提升至最高，集中配種、集中受孕、后期集中產(chǎn)崽和集中出售，節(jié)省了很多時(shí)間和費(fèi)用［10-11］。該試驗(yàn)采用5種同期發(fā)情方法，母鹿受胎率均高于60.0%，其中試驗(yàn)組Ib、Ic的受胎率在90.0%以上，試驗(yàn)組Ib（CIDR+PMSG+A3同期發(fā)情方法）的受胎率高達(dá)91.7%。由此可見(jiàn)，CIDR+PMSG+A3的受胎率最高，操作相對(duì)簡(jiǎn)單，大大節(jié)省了人力和物力，最適于人工輸精前的發(fā)情鑒定。

（4）然而，馬鹿的同期發(fā)情人工輸精的成功與否受諸多因素的制約。一是確保母鹿處于健康狀態(tài)且具有良好的繁殖能力，在配種期間所采食的飼料要合理配比；二是要保證種公鹿的精液質(zhì)量，主要取決于凍精解凍程序、輸精的時(shí)間和輸精手法；三是馬鹿同期發(fā)情人工輸精過(guò)程中馬鹿需要經(jīng)歷多次麻醉，藥物種類(lèi)較多［12］。同期發(fā)情使用的激素制劑消耗較大，因此為了保證不過(guò)多損耗母鹿和藥物成本，應(yīng)熟練掌握人工輸精操作程序，盡量避免人為失誤，減少麻醉藥

和激素制劑的損耗。

參考文獻(xiàn)

［1］ 王欣，寧浩然，鮑坤，等.蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)對(duì)梅花鹿鹿茸生長(zhǎng)的研究進(jìn)展［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011（11）：26-28.

［2］ 趙列平，韓歡勝，李會(huì)寧，等.寒區(qū)馬鹿繁殖規(guī)律研究［J］.經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2008，12（4）：193-196.

［3］ 韓歡勝，趙列平，樊娜，等.寒區(qū)馬鹿發(fā)情鑒定與最佳輸精時(shí)間的確定［J］.黑龍江動(dòng)物繁殖，2008，16（6）：11-12.

［4］ 劉玉太，金學(xué)林，劉文華，等.影響茸鹿繁殖效率的因素及其研究進(jìn)展［J］.特產(chǎn)研究，2022，44（3）：129-136.

［5］ 韓歡勝. 提高梅花鹿人工輸精受胎率技術(shù)研究［D］.哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.

［6］ 韓歡勝，趙列平，柴孟龍，等.梅花鹿發(fā)情期陰道細(xì)胞形態(tài)變化與最適輸精期［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2016，52（5）：28-31.

［7］ 賀賀千，庫(kù)爾班·吐拉克，華興耀，等.不同同期排卵-定時(shí)輸精程序?qū)︸R鹿繁殖效果的影響［J］.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，42（5）：355-359.

［8］ 侯扶江，常生華，于應(yīng)文.我國(guó)鹿況簡(jiǎn)介［J］.草業(yè)科學(xué)，2003，20（11）：47-50.

［9］ 趙裕方，李武.東北馬鹿母鹿的發(fā)情鑒定［J］.野生動(dòng)物，1992，13（4）：27-31.

［10］ 田成武，于耀波.鹿的同期發(fā)情和排卵控制［J］.黑龍江動(dòng)物繁殖，2016，24（3）：39-40.

［11］ 關(guān)偉國(guó)，于恒艷.茸鹿同期發(fā)情與人工授精經(jīng)驗(yàn)談［J］.特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物，2009，12（4）：6.

［12］ 陸明海.馬鹿同期發(fā)情人工授精技術(shù)研究［D］.哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.