●胡如芳 吳雪松 楊 亮

（吉安市林業(yè)科學研究所 江西 吉安 343011）

雙牌泡果薺（Hilliella shuangpaiensis）為十字花科泡果薺屬的一種藥食同源植物，俗稱砍菜，為一種辛辣的風味小吃。1986年張渝華記錄并建立十字花科一新屬—泡果薺屬，1988年李振宇等[1]發(fā)現(xiàn)泡果薺屬一新種并命名為“雙牌泡果薺”，主要特征為基生羽狀復葉具小葉3～9片，根莖肉質(zhì)，其與山葵、芥末口感較為接近。研究發(fā)現(xiàn)雙牌泡果薺有13種辛辣成分，其中含大量NO.1-烯丙烷、NO.33-丁烯、NO.44-戊烷等異硫氰酸酯類物質(zhì)，其獨特的辛辣風味即來源于異硫氰酸酯類化合物。研究表明異硫氰酸酯類化合物的主要功能有增進食欲、促進維生素B1的合成、抗氧化、抗菌、抗寄生蟲、抑制腫瘤細胞生長[2-3]。

雙牌泡果薺在民間深受群眾喜愛，長期采集其野生植株根莖食用，但幾乎無人工種植，導致野生種源逐年減少，其原因在于雙牌泡果薺雖有結實，但種子發(fā)育不全，發(fā)芽率低，自然環(huán)境下繁殖困難。本試驗以雙牌泡果薺莖段為材料，研究不同培養(yǎng)基、生長激素等對外植體增殖、生根的影響，為雙牌泡果薺無性快繁提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料的選擇

于2019年在吉安市遂川縣營盤圩鄉(xiāng)篩選雙牌泡果薺優(yōu)良母株，引種移植在吉安市林科所實驗基地內(nèi)。

1.2 方法

1.2.1 外植體采集分別在4月、6月、8月，天氣連續(xù)晴好3 d以上，在晴天的上午09∶00～10∶00采集雙牌泡果薺莖段，將采集的雙牌泡果薺莖段去除葉片，剪成1 cm長的段，用流動自來水沖洗2 h并小心剝?nèi)グ~，處理干凈后置于超凈工作臺備用。

1.2.2 外植體消毒將雙牌泡果薺莖段先用75%酒精振蕩清洗30 s，用無菌水沖洗3次，再將莖段分為3組，用0.1%升汞分別滅菌4，6，8 min，再用無菌水沖洗3次，將莖段放在無菌濾紙上吸干表面水分，統(tǒng)一接種在MS+1.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA培養(yǎng)基上，每個處理30瓶，每瓶1個莖段，3次重復，接種5～7 d后，統(tǒng)計污染率、褐化率和萌芽率。

1.2.3 初代培養(yǎng)外植體滅菌接種5～7 d后，篩選出無污染、無褐化的材料，在超凈工作臺內(nèi)將其接種于以MS為基本培養(yǎng)基，分別添加濃度為6-BA 1～3 mg/L 和NAA 0.2，0.4 mg/L的5種不同激素配比的初代培養(yǎng)基中。每個處理5瓶，每瓶接種6個，3次重復。接種后第5天開始觀察愈傷組織誘導和叢生芽萌發(fā)情況。

1.2.4 繼代培養(yǎng)將培養(yǎng)好的叢生芽在無菌條件下剪成至少帶1芽的1 cm小段，轉(zhuǎn)接于以MS為基本培養(yǎng)基，分別添加了濃度為6-BA 0.5～1.5 mg/L 和NAA 0.2～0.6 mg/L的9種不同激素配比的繼代增殖培養(yǎng)基中。每處理5瓶，每瓶接種6個，3次重復，每天觀察生長情況，30 d后在無菌條件下調(diào)查增殖系數(shù)。

1.2.5 生根培養(yǎng)在培養(yǎng)好的增殖叢生芽中選取高度3 cm以上、葉片3片以上的粗壯單芽，從芽團上切下，分別轉(zhuǎn)接于以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，分別添加了濃度為IAA 0～0.2 mg/L 和IBA 0.1～0.2 mg/L的5種不同激素配比的生根培養(yǎng)基中。每個處理5瓶，每瓶接種6個，3次重復，每天觀察生長情況，30 d后打開培養(yǎng)瓶在室內(nèi)放置2 d，取出試管苗，用水洗掉培養(yǎng)基，調(diào)查主根數(shù)和生根率。

1.2.6 移栽生根培養(yǎng)25 d左右，將高度4～7 cm，葉片4片以上，已生根良好的組培苗移至透光率20%～35%，溫度25～30℃的大棚內(nèi)煉苗7～10 d，將生根苗移至瓶外，清洗干凈生根苗根部的培養(yǎng)基，移栽前用0.5%多菌靈溶液消毒10～15 min，移栽至基質(zhì)裝入穴盤內(nèi)，移栽后仍然保持空氣濕度大于90%，基質(zhì)保持濕潤，移栽30 d后統(tǒng)計成活率。

1.2.7 培養(yǎng)環(huán)境

所有培養(yǎng)基均含蔗糖3%，瓊脂0.8%，pH值5.8～6.0。培養(yǎng)溫度25～28℃，日照時間12 h，光照強度2000 lx。

2 結果與分析

2.1 采集時間對外植體組培情況的影響

由圖1可知，隨著采集時間的推后，外植體污染率和褐化率均顯著升高，萌芽率顯著降低，4月采集的外植體污染率、褐化率最低，分別為18.5%，10.3%，顯著低于6月和8月；萌芽率最高，為53.1%，顯著高于6月和8月，因此，4月是采集雙牌泡果薺莖段進行組織培養(yǎng)的最佳時間。

圖1 不同采集時間外植體組培情況

2.2 消毒時間對外植體組培情況的影響

由圖2可知，隨著消毒時間的增加，雙牌泡果薺組織培養(yǎng)污染率逐漸降低。用0.1%升汞消毒4 min時，雙牌泡果薺外植體污染率達53.16%，顯著高于其他處理，且萌芽率最低；消毒8 min外植體污染率最低，萌發(fā)率次低；消毒時間6 min時污染率為22.36%，萌發(fā)率為56.72%，萌發(fā)率最高。因此，雙牌泡果薺組織培養(yǎng)外植體消毒6 min為最佳時間。

圖2 不同消毒時間外植體組植體組培情況

2.3 初代培養(yǎng)

由表1～3可知，不同處理對外植體初代培養(yǎng)的影響差異極顯著，不同濃度的6-BA與NAA組合均可誘導雙牌泡果薺的叢生芽萌發(fā)，其中6-BA濃度為3.0 mg/L、NAA濃度為0.4 mg/L的組合萌發(fā)率為91.13%，優(yōu)于其他組合，該組合的株高也達到4.2 cm。因此，初代培養(yǎng)較合理的培養(yǎng)基組合為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L。

表1 不同處理外植體初代培養(yǎng)情況

表2 不同處理對外植體初代培養(yǎng)的影響方差分析

表3 不同處理對外植體繼代培養(yǎng)的影響顯著性差異檢驗表

2.4 繼代培養(yǎng)

由表4～6可知，不同處理對外植本繼代培養(yǎng)的影響差異極顯著，不同濃度的6-BA和NAA均能誘導萌發(fā)叢生芽。當6-BA濃度為1.5 mg/L、NAA濃度為0.4 mg/L時組培苗平均增殖系數(shù)達到3.76，優(yōu)于其他處理，當6-BA濃度為1.5 mg/L、NAA濃度為0.4 mg/L及6-BA濃度為0.5 mg/L、NAA濃度為0.6 mg/L時，增殖苗平均株高分別為4.07 cm和4.21 cm，優(yōu)于其他處理，因此，雙牌泡果薺最佳增殖培養(yǎng)基是MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L。

表4 不同處理外植體繼代培養(yǎng)情況

表5 不同處理對外植體繼代培養(yǎng)的影響方差分析

表6 不同處理對外植體繼代培養(yǎng)的影響顯著性差異檢驗表

2.5 生根培養(yǎng)

由表7～9可知，不同濃度的IBA與IAA組合均能促使組培苗生根，其中IBA濃度為0.2 mg/L、IAA濃度為0.1 mg/L時生根率為91.13%，主根數(shù)為3.92，毛細根生長情況好，為5個組合中的最優(yōu)，因此，生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.2 mg/L+IAA 0.1 mg/L。

表7 不同處理組培苗生根情況

表8 不同處理組培苗生根率方差分析

表9 不同處理對組培苗生根率的影響顯著性差異檢驗表

2.6 試驗苗移栽

生根培養(yǎng)25 d左右移栽，移栽30 d后成活率可達90%以上，苗高15 cm時移入栽培基地定植。

3 討論與結論

以雙牌泡果薺莖段為外植體，研究不同采集時間、消毒時間及植物激素種類及濃度對外植體初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的影響，結果表明，不同采集時間及消毒時間對外植體組織培養(yǎng)情況影響較大，其中4月采集的外植體表現(xiàn)最好，原因可能為幼化程度高，生長期短，受病菌或病毒感染少；消毒時間對污染率和萌發(fā)率存在影響，原因可能為消毒時間短，病菌、病毒消滅不徹底，消毒時間過長又對外植體造成損傷，6 min是最佳消毒時長。培養(yǎng)基的配比也對雙牌泡果薺影響較大，試驗表明雙牌泡果薺最佳誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L，最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.2 mg/L+IAA 0.1 mg/L。綜上，植物的外植體誘導、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)都與激素的種類與濃度有關。外植體的來源不同，內(nèi)源激素水平也不同，而且培養(yǎng)基中所含的激素濃度也不同，造成來源不同的外植體分化能力等也存在差異[4]。