李培謙 馮寶珍 ，* 趙燕飛 王 琳

（1運城學(xué)院生命科學(xué)系，山西 運城 044000；2運城學(xué)院理科實驗中心，山西 運城 044000；3太原海關(guān)技術(shù)中心，山西 太原 030000）

芍藥（PaeonialactifloraPall.）是中國的傳統(tǒng)名花，品種多、花色豐富、花型多變，被譽為“五月花神”，具有很高的觀賞價值［1］。芍藥適應(yīng)性強，能露地越冬，各地園林普遍栽培。近年來，因其花期稍長，花色豐富，已成為深受大眾喜愛的切花材料，在國內(nèi)外都有廣闊的市場［2］。另外，芍藥肉質(zhì)根是常用的中藥材［3-4］。近年來，隨著芍藥種植面積的擴大和種植品種的增多，病害發(fā)生逐年增多，危害越來越重。芍藥紅斑病，又稱黑斑病、褐斑病，是一種嚴重危害芍藥葉片、枝干的真菌病害。植株發(fā)病后，葉片及枝干上出現(xiàn)不規(guī)則紅褐色病斑，導(dǎo)致植株光合能力下降，嚴重影響芍藥長勢及觀賞價值［5-6］。

目前已有很多關(guān)于芍藥病害病原調(diào)查的研究，病害的防治大多采用篩選抗性品種、加強管理等農(nóng)業(yè)措施［7-9］。不同病原物可能引起相似的癥狀，某種植物病害在不同生態(tài)條件、不同地域也可能存在病原菌的差異。關(guān)于芍藥紅斑病病原方面的研究，前人報道的病原包括枝孢屬（Cladosporiumpaeoniae）［7］、二岐枝孢（Dichocladosporiumchlorocephalum）［5］、鏈格孢（Alternaria alternata）［9］等侵染，以及鏈格孢（A.alternata）和細極鏈格孢（A.tenuissima）復(fù)合侵染［10］，可見不同地域不同生態(tài)條件下，芍藥紅斑病病原菌差異較大。

明確當?shù)丶t斑病病原菌并篩選殺菌效果良好的藥劑，對于芍藥紅斑病的科學(xué)防治具有重要意義。因此，本研究以山西省運城市舜帝公園發(fā)病芍藥為研究對象，從病株上分離純化病原物，根據(jù)病原菌的形態(tài)學(xué)特征，并利用病原菌多基因，即核糖體基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（rDNA-internal transcribed spacer，rDNA-ITS）、真核延伸因子（translation elongation factors 1α，TEF-1α）以及RNA 聚合酶II 第二大亞基（the second largest RNA polymerase subunit，RPB2）基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定病原菌分類地位，明確病原菌適宜培養(yǎng)基、最適碳源、氮源等生長條件，同時對7 種常用殺菌劑進行毒力測定，篩選該病害防治的有效藥劑，以期為運城市芍藥紅斑病的有效防控提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 發(fā)病樣品采集

2020年5月至2022年的8月在運城市舜帝公園芍藥種植園里選取疑似芍藥紅斑病的植株。記錄其發(fā)病癥狀、發(fā)病部位，拍照后采集發(fā)病樣品，用無菌自封袋封裝并帶回實驗室，置于4 ℃冰箱中保存待用。

1.2 分離純化病原菌

利用組織分離法分離病原菌［11］。將采集的芍藥發(fā)病組織用清水沖洗并晾干，在病健交界處剪取病變組織，發(fā)病葉片和發(fā)病莖段約5 mm×5 mm 大小，先用75%酒精消毒1 min，再用0.1%的升汞消毒2 min，無菌水沖洗3 遍，置于濾紙上吸干表面水分，接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)5～7 d，待病樣組織周圍長出菌落后，采用單孢分離法對病原菌進行純化［12］，至菌落形體一致。純化后，切取帶有培養(yǎng)基的菌絲條，裝入含有少許無菌水的2 mL凍存管，于4 ℃冰箱保存。

1.3 分離菌株的致病性測定

根據(jù)柯赫氏法則，采集大富貴芍藥健康幼嫩莖葉，采用離體接種法進行致病性測定［13-14］。首先配制新鮮病原菌孢子懸浮液，調(diào)節(jié)濃度至1×106個·mL-1備用。先用無菌水沖洗再用75%酒精對芍藥健康幼嫩莖葉表面消毒，在葉片或莖稈組織上用無菌注射器制造微創(chuàng)傷口，然后將20 μL 孢子懸液滴在傷口處，以無菌水為空白對照。然后將接種組織置于鋪有濕潤濾紙的無菌培養(yǎng)皿中，25 ℃恒溫培養(yǎng)，每隔24 h 觀察記錄組織發(fā)病情況，待發(fā)病后重新分離病原菌并檢驗形態(tài)特征是否與接種病原一致。

1.4 分離菌株的形態(tài)學(xué)鑒定

從純化后的菌落邊緣挑取少許病原菌菌絲，接種在PDA 平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)5～7 d，每天觀察菌落生長快慢、大小、顏色等特征。待菌絲產(chǎn)孢后，挑取少量菌絲制作裝片，在顯微鏡下觀察分生孢子和分孢梗形態(tài)特征，對孢子形狀、顏色、縱橫隔膜等形態(tài)特征進行記錄，測量孢子大小，參考文獻［15-16］的方法確定病原菌種類。

1.5 分離菌株的分子生物學(xué)鑒定

將分離菌株菌絲塊接種于液體馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液（potato dextrose broth，PDB），25 ℃、150 r·min-1條件下震蕩培養(yǎng)5 d 后收集菌絲，根據(jù)基因組DNA 提取試劑盒說明書（北京天根生化科技有限公司）提取基因組DNA。分子鑒定所用引物（表1）由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。根據(jù)文獻［17］所述的方法擴增目的基因片段并測序，將獲得的ITS、TEF-1α和RPB2基因序列在NCBI 數(shù)據(jù)庫（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cg）進行BLAST比對分析，并上傳至GenBank 數(shù)據(jù)庫（https：//submit.ncbi.nlm.nih.gov/about/genbank）。下載GenBank 中鏈格孢屬參考菌株的相應(yīng)序列，并使用BioEdit 7.0.9.0 軟件［18］將各菌株的3 個基因序列進行整合。經(jīng)過軟件CLUSTALX 1.83 進行多重序列比對［19］，利用MEGA-X采用鄰接法（neighborjoining methods，NJ）對整合序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹，設(shè)置1 000 次循環(huán)檢驗［20］，選擇囊狀匍柄霉（Stemphylium vesicarium）作為外群，根據(jù)分離菌株與已知菌株的親緣關(guān)系確定其分類地位［17，21］。

表1 分子鑒定所用引物Table 1 Primers for molecular identification

1.6 生物學(xué)特性測定

1.6.1 不同培養(yǎng)基對病原菌菌落生長影響 參照文獻［22-23］中對病原菌生物學(xué)特性的研究方法，將制備好的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA、馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（potato sucrose agar，PSA）、馬鈴薯胡蘿卜瓊脂培養(yǎng)基（potato and carrot agar，PCA）、燕麥培養(yǎng)基（oatmeal agar，OA）、查氏培養(yǎng)基（Czapek’s）、淀粉瓊脂培養(yǎng)基（starch agar，SA）、葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（glucose peptone agar，GPA）、麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基（maltose agar，MA）、酵母浸膏瓊脂培養(yǎng)基（yeast extract agar，YEA）融化后倒在9 cm 培養(yǎng)皿中制成平板。在已活化的病原菌平板邊緣用打孔器打取5 mm菌餅，每平板中央接種一個菌餅，3 個重復(fù)，25 ℃培養(yǎng)7 d后，觀察病原菌在不同培養(yǎng)基上菌落形態(tài)并用十字交叉法測量菌落直徑。

1.6.2 不同碳源、氮源對病原菌菌落生長影響 以查氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基和對照［9］，查氏培養(yǎng)基中的蔗糖分別以等質(zhì)量的可溶性淀粉、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖代替。以硝酸鉀、硝酸銨、硝酸鈣、氯化銨、蛋白胨、牛肉浸膏等質(zhì)量替換查氏培養(yǎng)基中的NaNO3配制成不同氮源培養(yǎng)基。鋪制平板并接種病原菌，按照1.6.1 中的方法分析不同碳源、氮源對菌絲生長的影響。

1.6.3 溫度條件對病原菌菌落生長的影響 按照1.6.1 的方法打取菌餅并接種在PDA 平板上，溫度處理分別設(shè)置為5、10、15、20、25、30、35、40 ℃，每個處理3 個重復(fù)。連續(xù)培養(yǎng)7 d 后，用十字交叉法測量菌落直徑［24］。

1.6.4 不同pH 值對病原菌菌落生長的影響 用1 mol·L-1的HCL 和NaOH 分別將PDA 培養(yǎng)基調(diào)節(jié)其pH值至4、5、6、7、8、9、10、11，鋪制平板，接種病原菌，每處理重復(fù)3皿，25 ℃連續(xù)培養(yǎng)7 d后按照1.6.1的方法測量菌落直徑分析不同pH值對菌落生長的影響［22］。

1.7 不同濃度殺菌劑對病原菌的室內(nèi)毒力測定

1.7.1 含藥平板的制備 選擇7 種目前常用于防治鏈格孢病害的化學(xué)藥劑，將供試藥劑按照表2 濃度稀釋備用。無菌條件下，分別取0.5 mL 各濃度的農(nóng)藥加入49.5 mL 冷卻至60 ℃左右的PDA 培養(yǎng)基中，最終稀釋倍數(shù)如表2所示，混勻后倒入4個培養(yǎng)皿制成含藥平板，以不加農(nóng)藥的PDA平板作為對照［22］。

表2 供試藥劑及其稀釋倍數(shù)Table 2 Different fungicides and their dilution multiple

1.7.2 不同藥劑對病原菌菌絲生長的毒力測定 用直徑為5 mm 的打孔器從活化的病原菌平板邊緣打取菌餅，將其貼在各含藥PDA 平板中央，各供試藥劑及濃度見表2，以加無菌水為空白對照，每處理4次重復(fù)。25 ℃恒溫培養(yǎng)，待7 d后，對照組菌落基本長滿平板，按照1.6.1的方法測量不同藥劑濃度平板上的菌落直徑，參考前人的方法計算各藥劑處理對菌絲生長抑制率和獨立回歸方程、抑制中濃度（EC50）和相關(guān)系數(shù)［18，25］。

1.8 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010 軟件進行統(tǒng)計分析，并利用Duncan氏新復(fù)極差法進行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀

2020—2022 年，連續(xù)兩年在運城市舜帝公園和運城學(xué)院芍藥種植園調(diào)查發(fā)現(xiàn)，每年6—8 月，芍藥紅斑病發(fā)生嚴重，危害葉片、莖稈，發(fā)病率達50%以上。發(fā)病初期，葉片、莖稈上出現(xiàn)黃綠色小點，隨后逐漸擴大至圓形或不規(guī)則形病斑，可連片生長，病斑一般發(fā)生在葉脈兩側(cè)或葉片邊緣，病斑中心呈黃褐色透明狀（圖1-a），后期病斑中間成焦枯狀，嚴重時整個葉片焦枯死亡。受害莖稈初期出現(xiàn)紫紅色的（長）圓形小點，隨后病斑逐漸擴展，直至相連成片，病斑長軸擴展至1～3 cm，略有凹陷（圖1-b），最后整株凋萎。

圖1 芍藥紅斑病的癥狀Fig.1 Symptoms of peony red spot disease

2.2 病原菌分離及致病性測定

從發(fā)病組織病健交界處隨機分離病原，經(jīng)形態(tài)初篩主要分離到兩種疑似病原菌，分別選取代表性菌株SY-1、SY-6 制備孢子懸浮液對芍藥健康葉片和莖稈進行室內(nèi)接種試驗。結(jié)果表明，2 d后葉片接種處開始出現(xiàn)直徑約3 mm 黑色圓形病斑，5 d后，病斑直徑擴展至8～10 mm，病斑中央出現(xiàn)壞死狀；莖稈病斑處呈暗褐色，略有凹陷，周圍有暗紫色擴展暈圈，而接種無菌水對照組葉片和莖稈上未見病斑出現(xiàn)。兩病原菌接種后的葉片、莖稈發(fā)病癥狀與田間發(fā)病癥狀相同（圖1-c～e）。從發(fā)病組織上重新分離得到與接種病原菌一致的病原物，因此，確定病原物SY-1和SY-6均為芍藥紅斑病的致病菌。

2.3 病原菌鑒定

2.3.1 形態(tài)學(xué)特征 從發(fā)病芍藥組織上分離到病原真菌12 株，經(jīng)純化和單孢培養(yǎng)，得到兩種疑似病原菌，選取代表菌株SY-1、SY-6，于PDA平板上25 ℃培養(yǎng)培養(yǎng)1～2 d，菌絲呈白色絨毛狀，氣生菌絲發(fā)達致密，3 d后，SY-6菌落轉(zhuǎn)為灰色至灰黑色、墨綠色，背面黑褐色，菌落隆起呈不規(guī)則圓形（圖2-a）；SY-1菌落初期白色，3 d后轉(zhuǎn)為灰色、灰綠色，菌絲較短，菌落輻射狀生長，無明顯隆起，邊緣顏色略淺，菌落背面灰黑色（圖2-b）。顯微鏡下，SY-1分生孢子倒棒狀、狹長卵形或長橢圓形，淺褐色，約（6.5～7.8）μm×（28.5～35.6）μm，具縱橫隔膜，有細長柱狀喙或假喙（圖2-d）。SY-6 分生孢子梗暗色直立，分枝或不分枝、長短不一，分生孢子深褐色，有深色縱橫隔膜，分隔處大多具有縊縮現(xiàn)象，呈橢圓形、卵圓形、倒梨形，孢子大小為（6.3～9.6）μm×（9.5～21.6）μm，短喙為淺褐色柱狀或錐狀（圖2-c）。綜合菌落特征和分生孢子形態(tài)，參照《真菌鑒定手冊》［15］及《中國真菌志》［26］初步鑒定SY-6 為鏈格孢（Alternaria alternata），SY-1為細極鏈格孢（A.tenuissima）。

圖2 芍藥紅病病原菌SY-1和SY-6的菌落形態(tài)及分生孢子特征Fig.2 Colony morphology and conidial characteristics of the pathogen causing red spot disease on peony

2.3.2 多基因序列聯(lián)合分析 以病原菌SY-1 和SY-6 的基因組DNA 為模板，分別用引物對ITS1/ITS4、EF1-728/EF1-986R、RPB2-5F2/RPB2-7cR 進行PCR擴增并測序。菌株SY-1的ITS、TEF-1α、RPB2的序列長度分別為573、280、980 bp，測序結(jié)果提交至GenBank（ITS 為OP962320，TEF-1α為OP980552，RPB2為OP980553）；SY-6的ITS、TEF-1α、RPB2的序列長度分別為572、282、978 bp，測序結(jié)果提交至GenBank（ITS為OP962321，TEF-1α為OP980554，RPB2為OP980555）；基于rDNA ITS、TEF-1α和RPB2基因聯(lián)合序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示（圖3），菌株SY-1、SY-6 分別與A.tenuissimaCBS 918.96、A.alternataCBS 130263 聚為一支。結(jié)合病原菌的形態(tài)特征、致病性測定和多基因序列聯(lián)合分析，芍藥紅斑病為鏈格孢菌（A.alternata）和細極鏈格孢菌（A.tenuissima）復(fù)合侵染引起。

圖3 基于rDNA-ITS、TEF-1α和RPB2 基因序列系統(tǒng)發(fā)育分析Fig.3 Phylogenetic analysis based on multiple sequences of rDNA-ITS，TEF-1α and RPB2

2.4 病原菌的生物學(xué)特性

2.4.1 不同培養(yǎng)基對病原菌生長的影響 病原菌SY-1 和SY-6 在供試培養(yǎng)基上均能生長，其菌落直徑在不同培養(yǎng)基上存在顯著差異（P<0.05）。兩種供試菌株在PDA 和PSA 培養(yǎng)基上菌株生長旺盛，菌落直徑最大，其次是OA、GPA 和MA 培養(yǎng)基，而在PCA、SA、Czapek′s 以及YEA 培養(yǎng)基上生長緩慢，菌落直徑明顯小于其他培養(yǎng)基上的菌落直徑（圖4）。

圖4 不同培養(yǎng)基對病原菌菌株SY-1、SY-6菌絲生長的影響Fig.4 Effects of different media on mycelial growth of strains SY-1 and SY-6

2.4.2 不同溫度對病原菌生長的影響 5～40 ℃的環(huán)境下病原菌都能生長，但溫度為25～30 ℃時病原菌菌絲生長迅速，菌落生長良好，并且菌株SY-1和SY-6均在28 ℃時菌落直徑最大，然而當溫度低于5 ℃時或超過35 ℃時菌落生長非常緩慢，說明菌株SY-1 和SY-6生長適宜溫度為25～30 ℃（圖5）。

圖5 溫度對病原菌菌株 SY-1、SY-6菌絲生長的影響Fig.5 Effects of different temperatures on mycelial growth of the isolates SY-1 and SY-6

2.4.3 不同pH 對病原菌生長的影響 如圖6 所示，病原菌菌株生長具有比較寬泛的pH 范圍，pH 值為4.0～11.0 的環(huán)境下均能生長，但是不同pH 值條件下的菌落生長狀態(tài)之間存在顯著差異（P<0.05）。整體來看，兩種菌株適宜生長的pH 值范圍為7.0～8.0，此時，菌落生長良好，菌落直徑最大。

圖6 不同pH下病原菌菌株 SY-1、SY-6菌落大小差異Fig.6 Effects of different pH on mycelial growth of the isolates SY-1 and SY-6

2.4.4 不同碳源、氮源對病原菌生長的影響 碳源測試結(jié)果顯示，病原菌SY-1和SY-6在以麥芽糖、可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基上菌落生長良好，菌落直徑顯著大于以蔗糖為碳源的對照組；以葡萄糖、果糖為碳源的培養(yǎng)基上菌落大小與對照差異不顯著；而以半乳糖和木糖為碳源的培養(yǎng)基上菌落直徑較小，顯著小于對照組（表3）。氮源測試結(jié)果顯示，病原菌SY-1 和SY-6在以NaNO3、蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上菌落生長良好；在以NH4NO3、NH4Cl、Ca（NO3）2及牛肉膏為氮源的培養(yǎng)基上菌落生長不良，菌落直徑顯著小于對照組（表3）。上述結(jié)果表明，菌株SY-1和SY-6傾向利用麥芽糖、可溶性淀粉作為碳源，NaNO3、蛋白胨作為氮源。

表3 不同碳源及氮源對菌株SY-1、SY-6菌絲生長的影響Table 3 Effect of different carbon and nitrogen sources on mycelial growth of the strain SY-1 and SY-6

2.5 病原菌對殺菌劑的敏感性

參照抑制率計算公式，得出各藥劑的抑菌情況。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，病原菌對測試的7 種殺菌劑均表現(xiàn)不同程度的敏感性。由表4 可知，病原菌SY-1對25%吡唑醚菌酯、50%咯菌腈敏感性較好，其EC50<1.0 mg·L-1；對10%苯醚甲環(huán)唑、80%代森錳鋅、30%戊唑醇敏感性次之，為1.0 mg·L-110 mg·L-1。而菌株SY-6 對10%苯醚甲環(huán)唑、25%吡唑醚菌酯、50%咯菌腈敏感性較好，其EC50<1.0 mg·L-1；對80%代森錳鋅、30%戊唑醇敏感性次之，為1.0 mg·L-110 mg·L-1。室內(nèi)測試結(jié)果表明，25%吡唑醚菌酯和50%咯菌腈對芍藥紅斑病菌SY-1、SY-6 的防治效果最佳。

表4 7 種殺菌劑對菌株SY-1、SY-6的室內(nèi)毒力測定結(jié)果Table 4 Determination of the virulence of seven fungicides to Strain SY-1and SY-6 in laboratory

3 討論

紅斑病是芍藥栽培中常見病害，嚴重影響了芍藥的植株長勢和觀賞價值［5-6］。因此，準確鑒定該病害的致病菌進而篩選有效防治藥劑對芍藥栽培十分重要。本研究對山西運城地區(qū)芍藥紅斑病的癥狀進行了描述，對紅斑病病原菌進行了分離、致病性測定，通過多基因序列聯(lián)合系統(tǒng)發(fā)育分析，明確了芍藥紅斑病的病原菌為鏈格孢（A.alternata）和細極鏈格孢（A.tenuissima）。本研究病原菌鑒定結(jié)果與李麗等［10］報道的山東地區(qū)芍藥紅斑病病原鑒定結(jié)果一致。但是植株發(fā)病癥狀略有不同：本研究發(fā)病芍藥葉片病斑中心呈黃褐色透明狀，受害莖稈上病斑后期略有凹陷；而山東發(fā)病芍藥葉片病斑圓形或不規(guī)則形，呈現(xiàn)紅色、紅褐色、栗褐色至黑色，莖受害后，病斑從紫紅色至深紅褐色如燒焦狀，部分凸起，說明同樣的病原菌在不同環(huán)境下，引起的植物癥狀存在差異。芍藥紅斑病可由多種病原菌侵染引起，研究發(fā)現(xiàn)枝孢霉（Cladosporiumpaeoniae）能夠引起芍藥紅斑病［7，27-28］；鏈格孢（A.alternata）［9］、Dichocladosporium chlorocephalum［3］單一侵染也可引起芍藥葉部紅斑病?？梢?，同一寄主在不同環(huán)境下也會發(fā)生“同癥不同病”現(xiàn)象。

鏈格孢屬（Alternaria）真菌菌落特征、孢子形態(tài)等具有明顯的特征，屬級特征可通過形態(tài)學(xué)鑒定。但是，病原菌小孢子形態(tài)特征容易受寄主植物、環(huán)境條件影響，種級特征變異較大，種類鑒定需要結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和系統(tǒng)發(fā)育分析［26，29］。近年來，人們借助分子生物技術(shù)，利用甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）基因［30］，ITS、抗原相關(guān)蛋白Alt、TEF1-α3 個基因［31］，ITS、Alt、ATPase、His34 個基因［32］或者ITS、tef1、LSU、SSU、GAPDH、RPB26 個基因［33］等構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹來確定分類地位。例如：利用ITS、EF-1ɑ、β-tubulin3個基因聯(lián)合分析鑒定了珠芽魔芋葉斑病菌為細極鏈格孢（A.tenuissima）［34］。本研究利用ITS、TEF-1ɑ、RPB23 個基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，通過進化分支確定病原菌為鏈格孢（A.alternata）和細極鏈格孢（A.tenuissima）。

病原菌SY-1 和SY-6 對溫度、pH 值、培養(yǎng)基種類等要求不嚴格，表明病原菌能適應(yīng)較寬的環(huán)境溫度、廣泛的酸堿環(huán)境和多種碳氮源，具有較強的適應(yīng)能力，這也是病害能夠在運城干旱、炎熱的夏季發(fā)生流行的原因。本研究中病原菌的最佳碳源為麥芽糖、可溶性淀粉，最佳氮源為NaNO3、蛋白胨，而青海櫻桃葉斑病鏈格孢（A.alternata）最適為碳源肌醇和乳糖［22］；芒果鏈格孢葉斑病菌（A.tenuissima）最適氮源為KNO3和L-天冬酰胺［35］。這說明鏈格孢（Alternaria）屬不同菌株的最適生長條件不同，其生物學(xué)特性受寄主植物、地域環(huán)境的影響而存在差異。

本研究所選7 種藥劑對病原菌均有不同程度的抑制作用，病原菌對吡唑醚菌酯、咯菌腈敏感性較好，其EC50低于1.0 mg·L-1，對百菌清、異菌脲敏感性較差，其EC50均大于10 mg·L-1，這一結(jié)果為芍藥紅斑病的防治提供了理論數(shù)據(jù)。而本研究結(jié)果僅是室內(nèi)敏感性測定，田間藥劑防治效果還需綜合考慮對芍藥生長的安全性、對環(huán)境的影響及用藥成本等因素，因此還需要進一步開展田間防治效果的相關(guān)研究。

4 結(jié)論

芍藥紅斑病由鏈格孢A.alternata和細極鏈格孢A.tenuissima復(fù)合侵染引起的。該病原菌最適培養(yǎng)基為PSA、PDA，菌絲生長最適溫度為25～30 ℃，最適pH 值為7～8，病原菌最適碳源為麥芽糖和可溶性淀粉，最適氮源為NaNO3和蛋白胨。室內(nèi)毒力測定發(fā)現(xiàn)25%吡唑醚菌酯和50%咯菌腈對病原菌抑制效果良好，可用于芍藥紅斑病化學(xué)防治。