何肖云 饒秋華 呂新 劉蘭英 傅建煒

摘 要：為沙門氏菌的快速檢測(cè)與鑒定提供參考，從傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法、特異性PCR、分子系統(tǒng)發(fā)育3個(gè)層面，其中傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法基于食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》、特異性PCR基于invA基因、分子系統(tǒng)發(fā)育基于16S rDNA，對(duì)能力驗(yàn)證（CFAPA-805）樣品進(jìn)行沙門氏菌的分離鑒定。結(jié)果表明：3種檢測(cè)方法結(jié)果一致，樣品341中檢出沙門氏菌，其中生化鑒定、血清學(xué)鑒定與分子系統(tǒng)發(fā)育鑒定結(jié)果顯示，此次陽性樣品中的沙門氏菌為沙門氏菌生化群（Ⅰ），腸炎沙門氏菌腸炎亞種，血清分型為O：9，12：H：g， m。本次實(shí)驗(yàn)室的能力驗(yàn)證結(jié)果為“滿意”，肯定實(shí)驗(yàn)室沙門氏菌檢測(cè)能力。通過比較，特異性PCR鑒定可以確定沙門氏菌是否檢出，生化鑒定、血清學(xué)鑒定和分子系統(tǒng)發(fā)育鑒定可以確認(rèn)沙門氏菌的生化群、血清分型與分子分型。

關(guān)鍵詞：沙門氏菌；多相鑒定；血清鑒定；特異性PCR；分子系統(tǒng)發(fā)育

中圖分類號(hào)：TS 207.4 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ??文章編號(hào)：0253-2301（2023）01-0051-07

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2023.01.008

Isolation and Polyphasic Taxonomy of Salmonella in Food Proficiency Testing Samples

HE Xiao-yun， RAO Qiu-hua， LV Xin， LIU Lan-ying， FU Jian-wei*

（Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology， Fujian Academy of Agricultural Sciences/

Fujian Key Laboratory of Agro-products Quality & Safety， Fuzhou， Fujian 350003， China）

Abstract： In order to provide reference for the rapid detection and identification of Salmonella， Salmonella was isolated and identified from the proficiency testing （CFAPA-805） samples from three aspects including the traditional standard detection methods， specific PCR and molecular phylogeny. The traditional standard detection method was based on the national food safety standard （GB 4789.4-2016） ″Salmonella Examination of Food Microbiological Examination″， the specific PCR was based on the invA gene， and the molecular phylogeny was based on the 16S rDNA. The results showed that the results of the three detection methods were consistent. Salmonella was detected in 341 samples， and the results of physiological and biochemical identification， serological identification and molecular phylogenetic identification showed that： the Salmonella in the positive samples was Salmonella biochemical group （Ⅰ）， Salmonella enteritidis subspecies， of which the serotyping was O：9， 12：H：g， m. The ability verification result of this laboratory was ″satisfactory″， affirming the laboratory′s ability to detect Salmonella. By the comparison， the specific PCR identification could determine whether Salmonella was detected. The physiological and biochemical identification， serological identification and molecular phylogenetic identification could confirm the biochemical group， serotyping and molecular typing of Salmonella.

Key words： Salmonella； Polyphasic taxonomy； Serological identification； Specific PCR； Molecular phylogeny

沙門氏菌是全球范圍內(nèi)最常見的一種食源性革蘭氏陰性桿菌，可導(dǎo)致胃腸炎、敗血癥等引起機(jī)體功能障礙的嚴(yán)重疾?。?-2］。在中國沙門氏菌同樣也是主要的食源性致病菌，據(jù)報(bào)道有70%～80%的細(xì)菌性食物中毒事件均因沙門氏菌污染所致［3］。因此，作為食源性致病菌的重點(diǎn)監(jiān)控對(duì)象，沙門氏菌的檢測(cè)具有重要的衛(wèi)生安全意義。目前沙門氏菌的檢測(cè)技術(shù)主要包括傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法、分子生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法，以及生物傳感器等新型檢測(cè)方法［4］，其中傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法與分子生物學(xué)法應(yīng)用較廣。

傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法主要基于沙門氏菌的生長(zhǎng)生化特征進(jìn)行檢驗(yàn)［5］，按照食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》［6］，分為預(yù)增菌、選擇性增菌、選擇性分離、生化鑒定和血清學(xué)鑒定5個(gè)步驟，雖然存在過程繁瑣、耗時(shí)費(fèi)力、難以批量化等缺點(diǎn)［4，7］，但是目前市場(chǎng)配套和技術(shù)成熟度高，且環(huán)境要求和技術(shù)門檻較低，具有較高的準(zhǔn)確性，檢測(cè)結(jié)果得到市場(chǎng)認(rèn)同，是國際和國內(nèi)沙門氏菌檢測(cè)的黃金標(biāo)準(zhǔn)［8］。分子生物學(xué)檢測(cè)方法是通過保守或特異的核酸序列比對(duì)實(shí)現(xiàn)細(xì)菌種屬鑒定，具有靈敏、快速、特異等優(yōu)勢(shì)［9］，目前基于16S rDNA保守序列的系統(tǒng)發(fā)育分析已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的分類鑒定［10-11］，而基于物種特異性基因的PCR技術(shù)在定性檢測(cè)中也十分常見［12-13］。因此，本研究采用傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法、特異性PCR和分子系統(tǒng)發(fā)育3種方法，對(duì)能力驗(yàn)證（CFAPA-805）樣品進(jìn)行沙門氏菌的分離鑒定，在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的同時(shí)，為沙門氏菌的快速檢測(cè)與鑒定提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

1.1.1 供試樣品

CFAPA-805食品中沙門氏菌的測(cè)定能力驗(yàn)證計(jì)劃樣品，樣品編號(hào)為和405和341，以樣品405和樣品341表示，兩份樣品均為凍干粉末狀，以西林瓶真空密封包裝，由大連中食國實(shí)檢測(cè)技術(shù)有限公司提供。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株

腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335、枯草芽孢桿菌ATCC6633采購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基與試劑

磷酸鹽緩沖液（PBS）、緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、亞硫酸鉍（BS）瓊脂、HE瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂、科瑪嘉沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基（CAS）、DBI-05沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒（北京陸橋技術(shù)股份有限公司）；A～F沙門氏菌屬診斷血清（寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司）；細(xì)菌基因組提取試劑盒、PCR Mix、瓊脂糖凝膠、PCR引物合成、PCR產(chǎn)物測(cè)序［生工生物工程（上海）股份有限公司］。

1.1.4 儀器設(shè)備

高溫高壓滅菌鍋：SQL810C，重慶雅馬拓有限公司；生物安全柜：BSC-1360ⅡA2，北京東聯(lián)哈爾有限公司；恒溫培養(yǎng)箱：IC612C，日本雅馬拓公司； PCR儀：BIO-RADTM S1000，美國伯樂公司；電泳儀：DYY-6C ，北京六一儀器廠；凝膠成像儀：BIO-RADTM Gel Doc XR+，美國伯樂公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

根據(jù)CFAPA-805《食品中沙門氏菌的測(cè)定能力驗(yàn)證計(jì)劃 參試指導(dǎo)書》中的要求，在無菌條件下開啟真空密封西林瓶，立即加入4 mL 無菌PBS水化溶解，吸出至無菌三角瓶?jī)?nèi)，反復(fù)用無菌PBS清洗西林瓶?jī)?nèi)壁，并將清洗液轉(zhuǎn)移至上述無菌三角瓶?jī)?nèi)，最終清洗液合計(jì)40 mL，即為待測(cè)原液。

1.2.2 選擇性平板分離

按照食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》，取25 mL待測(cè)原液轉(zhuǎn)至225 mL BPW中預(yù)增菌，取1 mL預(yù)增菌18 h培養(yǎng)物分別轉(zhuǎn)種至TTB和SC內(nèi)，于42℃和36℃下分別培養(yǎng)24 h，BPW預(yù)增菌液、TTB增菌液及SC增軍液分別劃線于BS平板、XLD平板和CAS平板，挑取36℃培養(yǎng)24 h。

1.2.3 生化與血清鑒定

根據(jù)GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》，以腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335作為陽性對(duì)照，挑取樣品405與樣品341選擇性平板上的可疑菌落接種至三糖鐵斜面瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺，同時(shí)接種營養(yǎng)瓊脂平板，于36℃培養(yǎng)24 h。根據(jù)三糖鐵斜面瓊脂的反應(yīng)結(jié)果，選取對(duì)應(yīng)營養(yǎng)瓊脂平板上的可疑菌落制備菌懸液，接種至沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒中，36℃培養(yǎng)18～48 h，觀察并記錄相應(yīng)的生化結(jié)果。

根據(jù)生化結(jié)果，對(duì)判定為沙門氏菌屬的菌落，用A～F沙門氏菌屬診斷血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定。首先，利用生理鹽水與目標(biāo)培養(yǎng)物混合，排除自凝集反應(yīng)。對(duì)無自凝現(xiàn)象的培養(yǎng)物，以生理鹽水為空白對(duì)照，以腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335為陽性對(duì)照，用A～F多價(jià)O血清和H因子血清進(jìn)行進(jìn)一步的O抗原鑒定和H抗原鑒定，觀察血清與目標(biāo)培養(yǎng)物的凝集現(xiàn)象。最后，根據(jù)凝集試驗(yàn)的結(jié)果，按照GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》附錄B 沙門氏菌屬抗原表判定沙門氏菌菌型。

1.2.4 特異性PCR反應(yīng)鑒定

按照細(xì)菌基因組提取試劑盒的操作規(guī)程對(duì)SC增菌液進(jìn)行DNA提取，得到目的基因后，測(cè)定DNA濃度并進(jìn)行PCR。PCR反應(yīng)體系（25 μL）為：2X SanTaq PCR Master Mix 12.5 μL，引物F 1 μL，引物R 1 μL，DNA模板 1 μL，ddH2O 9.5 μL。PCR反應(yīng)程序見表1，其中特異性PCR以沙門氏菌侵襲蛋白A invA基因（F：5′-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3′，R：5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′）作為目的基因［13］， PCR產(chǎn)物用于電泳分析，普通PCR以16S rDNA（27F： 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′， 1492R： 5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）為目的基因，以枯草芽孢桿菌ATCC6633為陰性對(duì)照， 腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335為陽性對(duì)照，對(duì)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、樣品405、樣品341進(jìn)行invA基因的特異性擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序，并將序列上傳至NCBI，樣品405、樣品341和腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335的GenBank Accession Number 分別標(biāo)記為OM666544、OM666543、OM666545。

1.2.5 分子系統(tǒng)發(fā)育

將測(cè)序后的陽性對(duì)照菌株腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335、樣品405和樣品341的16S序列通過BLAST進(jìn)行初步判斷，按照沙門氏菌的分子分型［14］，選擇亞利桑那亞種Salmonella enterica subsp.arizonae、雙亞利桑那亞種Salmonella enterica subsp.diarizonae、腸炎亞種Salmonella enterica subsp.enterica、豪頓亞種Salmonella enterica subsp.houtenae、印度亞種Salmonella enterica subsp.indica、薩拉姆亞種Salmonella enterica subsp.salamae這6個(gè)腸炎沙門氏菌亞種和邦戈沙門氏菌Salmonella bongori作為參考序列，選擇弗氏檸檬酸桿菌Citrobacter freundii作為外群，進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。利用MEGA v7對(duì)目標(biāo)序列進(jìn)行比對(duì)，構(gòu)建最大似然樹（ML Tree）。

2 結(jié)果與分析

2.1 選擇性平板分離

沙門氏菌屬因不同選擇性培養(yǎng)基中成分及濃度的不同，呈現(xiàn)不同的菌落特征［15-16］，在BS平板上表現(xiàn)為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色菌落，周圍培養(yǎng)基黑色或棕色，或?yàn)榛揖G色菌落，周圍培養(yǎng)基不變；在XLD平板上表現(xiàn)為粉紅色帶或不帶黑色中心菌落，或?yàn)閹Т蠊鉂珊谏行幕蛉亢谏洌驗(yàn)辄S色帶或不帶黑色中心菌落［6］；在CAS平板上表現(xiàn)為淡紫色菌落，或培養(yǎng)24～48 h后才出現(xiàn)紫色菌落。根據(jù)已知沙門氏菌屬的菌落特征，挑選樣品405和樣品341中的可疑菌落，具體見表2。 對(duì)比預(yù)增菌液（BPW）和增菌液（TTB和SC）的分離結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在不同選擇性平板上，兩種增菌程度的可疑菌落特征未表現(xiàn)出明顯差異。對(duì)比同種增菌液在不同選擇性平板上的分離結(jié)果，發(fā)現(xiàn)樣品在不同選擇性平板上表現(xiàn)出不一樣的菌落特征，其中樣品405與陽性對(duì)照差異較大，但仍可BS與XLD的沙門氏菌菌落描述中找到對(duì)應(yīng)的特征，卻與CAS的沙門氏菌菌落特征描述不符，樣品341則表現(xiàn)出與陽性對(duì)照腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335相似的菌落特征。

2.2 生化與血清鑒定

由表3可知，樣品405的可疑菌落在三糖鐵瓊脂斜面和底層均產(chǎn)酸，且賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)結(jié)果為陰性，可初步判斷為非沙門氏菌屬，結(jié)合靛基質(zhì)、尿素、氰化鉀的生化結(jié)果，可判定為非沙門氏菌屬。樣品341的可疑菌落與陽性對(duì)照菌株生化結(jié)果一致，在三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸、硫化氫陽性、產(chǎn)氣陽性、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)陽性可初步判斷樣品341中存在可疑沙門氏菌屬，靛基質(zhì)、尿素、氰化鉀、β-半乳糖苷酶、丙二酸鹽的生化結(jié)果表明，基于GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》樣品341可判定為沙門氏菌生化群Ⅰ［6］，基于第 2 版《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》 （2005）樣品341可判定為S.enterica subsp.enterica（Ⅰ）［17］。

基于生化試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)樣品341和陽性對(duì)照菌株進(jìn)行進(jìn)一步的血清學(xué)鑒定。由表4可知，樣品341和陽性對(duì)照菌株在生理鹽水下表現(xiàn)為不凝集，表明樣品341菌株與陽性對(duì)照菌株腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335同為非粗糙型菌株。腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335 的血清學(xué)鑒定結(jié)果O抗原為O9，12，H抗原第1相為g，m。樣品341在O抗原鑒定試驗(yàn)中，被A～F多價(jià)O血清凝集，后續(xù)依次用O2、O4、O5等多種因子血清做凝集試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品341被O9和O4，12因子血清凝集，且不被O4因子血清凝集，查GB 4789.4-2016附錄B可知，樣品341的O抗原可判定為D群。在H抗原的鑒定試驗(yàn)中，利用單因子血清進(jìn)行逐一驗(yàn)證，結(jié)果表明樣品341被Hg和Hm因子血清凝集。綜上可知，樣品341的血清分型為O：9，12：H：g，m，血清鑒定結(jié)果與腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335一致。因此樣品341中檢出沙門氏菌，且血清型為O：9，12：H：g，m，是腸炎沙門氏菌S.enterica serovar enteritidis。

2.3 特異性PCR反應(yīng)鑒定

invA基因是沙門氏菌編碼吸附和侵染上皮細(xì)胞表面蛋白的毒力基因，是沙門氏菌的侵染基礎(chǔ)［7］。因其在血清型分類中的廣譜性和沙門氏菌特異性，已被設(shè)計(jì)成沙門氏菌的特異性引物廣泛應(yīng)用于沙門氏菌的快檢中［18］?；趇nvA基因的特異性PCR電泳結(jié)果見圖1，陽性對(duì)照菌株腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335與樣品341表現(xiàn)出invA基因特異性，約280 bp處出現(xiàn)明顯的目的條帶，與報(bào)道中invA基因的大小相符［13］，樣品405擴(kuò)增出3條模糊的條帶，大小分別約為2 000、400、250 bp，明顯不具備invA基因特異性，陰性對(duì)照菌株枯草芽孢桿菌ATCC6633未出現(xiàn)條帶。由此可得，樣品341與陽性對(duì)照菌株腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335的特異性PCR結(jié)果一致，表明樣品305檢出沙門氏菌。

2.4 分子系統(tǒng)發(fā)育

由圖2可知，樣品405區(qū)別于沙門氏菌的7個(gè)亞種，與弗氏檸檬酸桿菌聚類在同一分支，因此，樣品405應(yīng)為沙門氏菌陰性。樣品341和陽性對(duì)照菌株腸炎沙門氏菌CMCC（B）50335，與沙門氏菌的7個(gè)亞種聚類在同一大分支中，且對(duì)應(yīng)的分支嵌在沙門氏菌7個(gè)亞種中拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中，由此可知樣品341檢出沙門氏菌陽性。此外，樣品341聚類在Salmonella enterica subsp.enterica這一小分支中，且其分支嵌于Salmonella enterica subsp.enterica的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中，因此樣品341中沙門氏菌的分子分型為腸炎沙門氏菌腸炎亞種。

3 討論與結(jié)論

常規(guī)分離培養(yǎng)作為易普及、易操作的傳統(tǒng)基礎(chǔ)方法仍在微生物檢測(cè)領(lǐng)域，尤其是食品沙門氏菌常規(guī)檢測(cè)中發(fā)揮重要作用［19］。在本研究中，選擇性平板分離階段的不同增菌程度菌液表現(xiàn)出一致的可疑菌落特征，但在日常檢測(cè)中，BPW預(yù)增菌液直接劃線于選擇性平板中，存在雜菌蔓延速度過快，陽性菌落因不具空間競(jìng)爭(zhēng)與營養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，導(dǎo)致陽性菌落瘦小不典型等情況，容易出現(xiàn)漏檢［20］。另外，對(duì)比所用的BS、XLD與CAS 3種選擇性培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)CAS在分離鑒別時(shí)，受干擾菌影響較小，能更直觀區(qū)分雜菌，這與研究報(bào)道中的描述相符［19-21］。CAS培養(yǎng)基作用原理主要是依于沙門氏菌特有的辛酯酶反應(yīng)，是在生化反應(yīng)的基礎(chǔ)上開發(fā)的新技術(shù)，具有較高的靈敏性和特異性，目前在沙門氏菌的快速檢測(cè)中已得到廣泛應(yīng)用［21-23］，但是CAS同樣無法做到鑒別所有沙門氏菌，因此建議選用CAS與多種選擇性培養(yǎng)基的組合模式［19，21］，并且對(duì)選擇性培養(yǎng)基中的可疑菌落進(jìn)行后續(xù)生化與血清鑒定，可提高檢出率，以防漏檢［24］。

生化鑒定技術(shù)主要是根據(jù)不同種屬微生物酶系統(tǒng)、代謝途徑和代謝產(chǎn)物的差異性，利用代謝產(chǎn)物的不同生化特征進(jìn)而鑒定微生物種類。沙門氏菌屬最早就是通過生化反應(yīng)實(shí)現(xiàn)分類鑒定［1］，第 2 版《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》 （2005） 采用了目前國際認(rèn)可的沙門氏菌分類方案，將沙門氏菌屬分為了邦戈?duì)柹抽T菌、腸炎沙門菌（包括6個(gè)亞種）兩個(gè)種。GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》中依據(jù)沙門氏菌的生化反應(yīng)分類方案，將沙門氏菌屬劃分成6個(gè)生化群，雖與主流分類方案相似，但無法完全等同。而血清分型對(duì)沙門氏菌屬的分類更為細(xì)化，已多達(dá)2 600多個(gè)，其中絕大部分屬于腸炎沙門氏菌［25］。本研究中，分離得到的沙門氏菌正是腸炎沙門氏菌，根據(jù)國標(biāo)歸屬于沙門氏菌生化群I，根據(jù)《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》歸屬于腸炎沙門氏菌腸炎亞種（I），血清型為O：9， 12：H：g，m，是較為常見的沙門氏菌株。在日常檢測(cè)中，生化鑒定是必做項(xiàng)目，而血清學(xué)鑒定屬于選做項(xiàng)目［6］，但是若為了進(jìn)一步研究沙門氏菌致病性及傳染源的追蹤、溯源等，血清型鑒定是不可或缺的一項(xiàng)［26］。

目前，對(duì)于沙門氏菌鑒定的分子技術(shù)已多有研究報(bào)道，沙門氏菌的特異性PCR是通過成功擴(kuò)增沙門氏菌基因組中的特異性基因片段，實(shí)現(xiàn)沙門氏菌的檢測(cè)，其中inva基因是沙門氏菌中編碼入侵蛋白的基因，在沙門氏菌鑒定中得到廣泛應(yīng)用［7，12-13］，PCR體系及程序已相對(duì)成熟，在本研究中也得到成功驗(yàn)證，在陽性對(duì)照和陽性樣本中成功檢出沙門氏菌，在陰性對(duì)照和陰性樣本中未檢出沙門氏菌。16S rDNA是細(xì)菌鑒定的通用引物，本研究中將其應(yīng)用于沙門氏菌的檢測(cè)中，構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹不僅成功確定樣本沙門氏菌的是否檢出，而且明確參試菌種的分類，表明本研究中的沙門氏菌為腸炎沙門氏菌腸炎亞種，作為陰性樣品的干擾菌為弗氏檸檬酸桿菌。與常規(guī)生化血清鑒定相比，分子方法具有簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)，在快檢技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用具有巨大的優(yōu)勢(shì)［7］，但GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》中并未涉及，因此分子方法可作為傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的補(bǔ)充。

采用傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法、特異性PCR與分子系統(tǒng)發(fā)育3種不同方法對(duì)能力驗(yàn)證（CFAPA-805）樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果一致，樣品341中檢出沙門氏菌，能力驗(yàn)證結(jié)果為“滿意”，驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)室沙門氏菌的檢測(cè)能力。比較發(fā)現(xiàn)，選擇性培養(yǎng)可以確定是否存在可疑沙門氏菌，特異性PCR可以確定沙門氏菌是否陽性檢出，可應(yīng)用于沙門氏菌快速檢測(cè)，是傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法的補(bǔ)充；生化鑒定、血清學(xué)鑒定和分子系統(tǒng)發(fā)育鑒定可以確認(rèn)沙門氏菌的生化群為沙門氏菌生化群（Ⅰ），血清分型為O：9，12：H：g，m，分子分型為腸炎沙門氏菌腸炎亞種，適用于沙門氏菌具體鑒定分型，可應(yīng)用于沙門氏菌的致病性、流行病溯源。

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