劉 陽(yáng), 鄧仕萍, 劉 丹, 李姝慧, 孟紫薇

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 理學(xué)院，北京 100193)

牛生乳形成過(guò)程中的多個(gè)環(huán)節(jié)可能受到農(nóng)藥污染，如飼料原料中的農(nóng)藥殘留；在儲(chǔ)存、加工等過(guò)程中可能引入的農(nóng)藥殘留；控制養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生環(huán)境所使用的殺蟲(chóng)劑混入動(dòng)物的飼料和飲用水中導(dǎo)致的農(nóng)藥殘留等[1-2]。

目前，關(guān)于牛奶中農(nóng)藥殘留的分析報(bào)道主要集中在有機(jī)氯類(lèi)[3]、有機(jī)磷類(lèi)[4-6]、氨基甲酸酯類(lèi)[7]、新煙堿類(lèi)[8]和菊酯類(lèi)[9]等農(nóng)藥。牛奶作為脂溶性物質(zhì)的良好載體，脂溶性農(nóng)藥更容易在牛奶中殘留。正辛醇-水分配系數(shù) (LogKow) 常被作為脂溶性指標(biāo)，當(dāng)農(nóng)藥的LogKow> 3 時(shí)被認(rèn)為是脂溶性的[10]。本研究根據(jù)中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)上農(nóng)藥登記的飼料作物以及LogKow> 3，選取了目前在牛生乳基質(zhì)中相關(guān)研究較少的12 種脂溶性農(nóng)藥及其代謝物，研究其在牛生乳中的殘留水平。

目前，關(guān)于牛奶中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法主要有液液分配 (LLE)[7]、分散液液微萃取(DLLME)[8]、凝膠滲透色譜 (GPC)[11]、固相萃取(SPE)[12]、酶抑制法、免疫分析技術(shù)[13]、QuEChERS[14]等。其中，DLLME 能很大程度地節(jié)約溶劑，富集目標(biāo)物，但方法優(yōu)化影響因素多，操作復(fù)雜且平行性較差；LLE 和GPC 能除去樣品中的脂類(lèi)，但一般需耗費(fèi)大量溶劑；SPE 凈化能力強(qiáng)，但成本較高，處理過(guò)程較繁瑣[15]；酶抑制法和免疫分析技術(shù)能快速、特異性地分析樣品中的農(nóng)藥殘留，但存在重現(xiàn)性差和適用范圍窄等缺點(diǎn)。而QuEChERS方法因其簡(jiǎn)單、快速、低成本、高通量、溶劑用量少等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用在高水分和高含油基質(zhì)中農(nóng)藥殘留的測(cè)定[16-19]。

牛奶中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有：氣相色譜法[20]、氣相色譜-質(zhì)譜法[21]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[22]、高相液相色譜法[23]、液相色譜-質(zhì)譜法[24]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)等[25]。其中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法因其靈敏度高、特異性強(qiáng)、分析速度快，成為農(nóng)藥多殘留測(cè)定的首選方法[26]。本研究利用QuEChERS 前處理方法結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (HPLC-MS/MS) 檢測(cè)手段，對(duì)牛生乳中我國(guó)尚未建立最大殘留限量 (MRL) 值的12 種脂溶性農(nóng)藥及其3 種代謝物的殘留分析方法進(jìn)行研究，并對(duì)市售牛生乳進(jìn)行抽檢，旨在為我國(guó)牛生乳中農(nóng)藥MRLs 值標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 Agilent 6410B 液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 (美國(guó) Agilent 公司)；JY2002 型電子天平 (精度0.01 g，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；JA2003B 型電子天平 (0.001 g，上海越平科學(xué)儀器有限公司)；AUW220D 型電子分析天平(0.0001 g，日本島津制作所)；VORTEX-5 型旋渦混合器 (海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司)；RJTDL-40B 型低速臺(tái)式離心機(jī) (無(wú)錫市瑞江分析儀器有限公司)；HC-2517 型高速離心機(jī) (安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)；0.22 μm 尼龍有機(jī)濾膜 (上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；1 mL 無(wú)菌醫(yī)用注射器 (江蘇治宇醫(yī)療器械有限公司)；50 mL 塑料離心管 (美國(guó)康寧公司)。

1.1.2 供試材料及試劑 牛生乳 (新疆布拉合農(nóng)場(chǎng))；甲酸、氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂 (分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；甲醇和乙腈 (色譜純，F(xiàn)isher Chemicals 公司)；純凈水 (天津娃哈哈宏振飲料有限公司)；石墨化碳黑 (GCB，38～125 μm)、十八烷基硅烷鍵合硅膠 (C18，50 μm (60 ?)) 和N-丙基乙二胺 (PSA，40～60 μm (60 ?))，均購(gòu)自天津博納艾杰爾科技有限公司。

1.1.3 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品 炔草酯 (純度98.3%) 和炔草酸 (純度99.1%)，購(gòu)自上海市農(nóng)藥研究所有限公司；環(huán)丙唑醇 (純度99.6%)，購(gòu)自沈陽(yáng)化工研究院有限公司；抑霉唑 (純度98.5%)，購(gòu)自國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心；氟吡乙禾靈 (純度98.3%)、氟吡禾靈 (純度99.1%) 和乙螨唑 (純度99%)，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司；肟菌酸 (純度98%)、啶氧菌酯 (純度99.6%)、唑螨酯 (純度95%)、虱螨脲 (純度98.7%) 和氟吡甲禾靈 (純度98.0%)，購(gòu)自德國(guó) Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司；吡氟酰草胺(純度99.7%)，購(gòu)自國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心；肟菌酯 (純度99.6%)，購(gòu)自德國(guó)Bayer Corp Science；茚蟲(chóng)威 (純度97.8%)，購(gòu)自安到麥馬克西姆有限公司。15 種目標(biāo)化合物的具體信息詳見(jiàn)表1。表中11 種農(nóng)藥在動(dòng)物源性食品中的殘留物定義來(lái)自(世衛(wèi)組織/糧農(nóng)組織) 農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議 (JMPR)報(bào)告[27]，氟吡甲禾靈的殘留定義來(lái)自GB2763—2021[28]；12 種農(nóng)藥的最大殘留限量來(lái)自澳大利亞[29]和國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)[30]。

表1 15 種目標(biāo)化合物的CAS 號(hào)、分子式、LogKow、殘留物定義、最大殘留限量及登記飼料作物Table 1 CAS number, molecular formula, LogKow, definition of the residue, maximum residue limit (MRL) and registered feed crops of 15 target compounds

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

單一溶劑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取各標(biāo)準(zhǔn)品10 g(精確至0.0001g)，分別用乙腈溶解并定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度為1000 mg/L 的單一溶劑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于 -18 ℃冰箱保存。

混合溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取上述各單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用體積分?jǐn)?shù) (下同) 為1%的甲酸乙腈逐級(jí)稀釋?zhuān)渲瞥?.01、0.02、0.05、0.1、0.4 和1 mg/L 的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取10.0 g 牛生乳均質(zhì)樣品于50 mL 聚丙烯離心管中，加入10 mL 1%的甲酸乙腈溶液，渦旋提取3 min，加入3 g NaCl，渦旋5 min 后于3800 r/min 下離心 5 min。取3 mL 上清液至10 mL 聚丙烯離心管中，置于 -18 ℃冰箱冷凍5 h。取1 mL 上清液，加入裝有100 mg C18的2 mL 離心管中，渦旋2 min，于10 000 r/min 下離心 1 min。取上清液，過(guò) 0.22 μm 有機(jī)系濾膜，待HPLC-MS/MS 測(cè)定。

1.4 HPLC-MS /MS 檢測(cè)條件

1.4.1 液相色譜條件 Athena C18-WP 色譜柱(50 mm ×4.6 mm, 5 μm)；柱溫 30℃；流速 0.3 mL/min；進(jìn)樣量 5 μL；流動(dòng)相A 相為乙腈，B 相為體積分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸水溶液。梯度洗脫程序：0～1.5 min，5%A；>1.5～6 min，55%～65% A；>6～9 min，65%～80% A；>9～10 min，80%～5% A；>10～15 min，5% A。

1.4.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源(ESI)，正離子模式下采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式采集數(shù)據(jù)。離子噴霧電壓4000 V；霧化氣壓力240 MPa；干燥氣流速10 L/min；干燥氣溫度350 ℃。MRM 模式下15 種目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)詳見(jiàn)表2。

表2 15 種目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)Table 2 Retention time and mass spectrometry parameters of 15 target compounds

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 液相色譜條件的優(yōu)化 1) 流動(dòng)相的選擇。在20 min 內(nèi)，將有機(jī)相比例從0 線性升高至100%，考察了甲醇-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液在相同梯度洗脫條件下，對(duì)15 種目標(biāo)化合物的分離度、響應(yīng)值和峰形的影響。結(jié)果表明：以甲醇-水作為流動(dòng)相時(shí)，20 min 內(nèi)15 種目標(biāo)化合物尚未完全出峰(圖1 A-I)，說(shuō)明此流動(dòng)相體系出峰時(shí)間較晚；而以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相時(shí)，各目標(biāo)化合物色譜峰形良好，響應(yīng)值均能達(dá)到最低檢測(cè)需求，單針運(yùn)行時(shí)間短，色譜峰分離度更優(yōu) (圖1 A-Ⅱ)。因此，選用乙腈-0.1%甲酸水溶液作為15 種目標(biāo)化合物色譜分離的流動(dòng)相。

圖1 線性提高有機(jī)相比例時(shí) (A) 及梯度洗脫程序下 (B) 15 種目標(biāo)化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 (0.1 mg/L) 的色譜圖Fig.1 Chromatogram of mixed standard solutions (0.1 mg/L) of 15 target compounds when linearly lifting the organic phase (A) and under gradient elution procedure (B)

2) 洗脫條件的優(yōu)化。梯度洗脫總時(shí)間tg為20 min，第1 個(gè)峰為ti，最后1 個(gè)峰為tf，兩者的差值Δtg= (tf-ti)。若 Δtg＜ 0.25tg，則適用等度洗脫；若Δtg> 0.25tg，則適用梯度洗脫。如圖1 A-Ⅱ所示，ti(抑霉唑) 的保留時(shí)間為12.2 min，tf(唑螨酯) 的保留時(shí)間為18.7 min。Δtg= (ti-tf) = 6.5 min > 0.25tg(5 min)，表明該方法適合梯度洗脫。梯度洗脫程序按1.4.1 節(jié)所述，15 種目標(biāo)化合物在此色譜條件下分離出11 個(gè)色譜峰，色譜圖詳見(jiàn)圖1B。

2.1.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 以乙腈-0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，在全掃描 M2 Scan 模式下提取母離子，SIM 模式下優(yōu)化碎裂電壓，比較正離子 (ESI+)和負(fù)離子 (ESI-) 掃描模式下15 種目標(biāo)化合物的質(zhì)譜響應(yīng)值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，15 種目標(biāo)化合物在 ESI+模式下均可得到穩(wěn)定的[M + H]+離子峰，響應(yīng)值明顯優(yōu)于 ESI-模式。以 Product Ion 為掃描類(lèi)型確定碎片離子，取其中豐度較高的作為子離子，然后在MRM 模式下優(yōu)化各子離子的碰撞能量，最終根據(jù)色譜峰的響應(yīng)值確定不同化合物的定性離子和定量離子。15 種目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子詳見(jiàn)表2。

2.2 提取方法的優(yōu)化

QuEChERS 方法提取農(nóng)藥殘留時(shí)，常以乙腈作為提取溶劑，乙腈在NaCl 鹽析的作用下與水相分層，可以很好地去除蛋白質(zhì)和糖類(lèi)等極性物質(zhì)[31]。本研究中12 種目標(biāo)農(nóng)藥的LogKow> 3，脂溶性較強(qiáng)，在乙腈中有很好的溶解度。牛生乳中含蛋白質(zhì)較多，僅以乙腈提取會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)的共提取，為了減少蛋白質(zhì)的共提取并提高牛生乳中15 種目標(biāo)化合物的提取效率，考察了純乙腈以及0.5%、1%和3%的甲酸乙腈對(duì)15 種目標(biāo)化合物提取效果的影響，如圖2 所示。

圖2 提取溶劑對(duì)牛生乳中15 種目標(biāo)化合物的回收率(A)和基質(zhì)效應(yīng)(B)的影響 (n = 3)Fig.2 Effects of extraction solvents on the recovery (A) and matrix effect (B) of 15 target compounds in raw milk (n = 3)

圖2A 中，以乙腈為提取溶劑時(shí)，15 種目標(biāo)化合物中除炔草酸、啶氧菌酯、炔草酯、氟吡甲禾靈、茚蟲(chóng)威和氟吡乙禾靈6 種化合物的回收率在92%～110%之間外，其余目標(biāo)化合物的回收率在73%～97% 之間；以酸化乙腈為提取溶劑時(shí)，15 種目標(biāo)化合物的回收率在87%～115%之間，表明乙腈的提取效率相對(duì)較低，而3 種酸化乙腈對(duì)目標(biāo)物的提取效率之間差異不明顯。圖2B 的結(jié)果表明，以乙腈作為提取溶劑時(shí)，氟吡禾靈和肟菌酸的基質(zhì)效應(yīng)明顯高于酸化乙腈的基質(zhì)效應(yīng)。但1%的甲酸乙腈溶液作為提取溶劑時(shí)的基質(zhì)效應(yīng)最弱。綜上所述，選用1%甲酸乙腈溶液作為牛生乳中15 種目標(biāo)化合物的提取溶劑。

2.3 凈化方法的優(yōu)化

2.3.1 低溫冷凍除脂 在牛生乳基質(zhì)中，影響回收率結(jié)果的主要是基質(zhì)中的脂類(lèi)，低溫冷凍可以有效去除基質(zhì)提取液中的脂肪[32-33]。本研究將3 mL 鹽析后的提取上清液加入到10 mL 聚丙烯離心管中，置于低于 -18 ℃的冰箱中冷凍除脂?？疾炝死鋬鰰r(shí)間分別為0、1、2、3、4 和5 h，對(duì)牛生乳基質(zhì)提取液中15 種目標(biāo)化合物的回收率和基質(zhì)效應(yīng)的影響。如圖3 所示：低溫冷凍0～5 h 內(nèi)，15 種目標(biāo)化合物在牛生乳中的回收率在81%～110%之間，RSD 在0.040%～2.7%之間。冷凍5 h 時(shí)，抑霉唑、炔草酸、氟吡禾靈、肟菌酸、啶氧菌酯、吡氟酰草胺和虱螨脲的基質(zhì)效應(yīng)均小于其他冷凍時(shí)間的，其余化合物的基質(zhì)效應(yīng)在 -5.7%～0.40%之間，均表現(xiàn)出輕度基質(zhì)效應(yīng)[34-35]，表明低溫冷凍5 h 凈化效果較好。

圖3 冷凍時(shí)間對(duì)牛生乳基質(zhì)提取溶液中 15 種目標(biāo)化合物回收率(A)和基質(zhì)效應(yīng)(B)的影響 (n = 3)Fig.3 Effects of freezing time on recovery (A) and matrix effect (B) of 15 target compounds in raw milk ( n = 3)

2.3.2 凈化劑種類(lèi)的選擇 牛生乳中主要含有脂肪、脂肪酸、蛋白質(zhì)、乳糖等雜質(zhì)。PSA 常用于除去糖類(lèi)、脂肪酸和有機(jī)酸等極性雜質(zhì)；C18的比表面積大、吸附能力強(qiáng)，可有效去除脂肪和脂類(lèi)等非極性雜質(zhì)[36]。無(wú)水MgSO4不僅可以去除體系中殘余的水分，也能通過(guò)微放熱效應(yīng)減少其他凈化劑對(duì)目標(biāo)物的吸附[13]。本研究中，考察了C18、PSA、C18+ 無(wú)水MgSO4和PSA + 無(wú)水MgSO44 種凈化方式對(duì)牛生乳基質(zhì)提取液凈化效果的影響。結(jié)果 (圖4) 表明：分別以PSA、PSA + 無(wú)水MgSO4和C18+ 無(wú)水MgSO4為凈化劑時(shí)，啶氧菌酯、肟菌酸、炔草酸、氟吡禾靈的回收率均不能滿(mǎn)足農(nóng)藥殘留分析回收率在 70%～120% 的要求[37]。以C18為凈化劑時(shí)，15 種目標(biāo)化合物的回收率在81%～109%之間，除虱螨脲的基質(zhì)效應(yīng)為-30%，表現(xiàn)為中度抑制外，其余目標(biāo)化合物均表現(xiàn)為輕度基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，故選用C18作為牛生乳基質(zhì)的凈化劑。

圖4 凈化劑組合對(duì)牛生乳基質(zhì)提取液中15 種目標(biāo)化合物回收率 (A) 和基質(zhì)效應(yīng) (B) 的影響 (n = 3)Fig.4 Effects of cleanup sorbents on the recovery (A) and matrix effect (B) of 15 target compounds in matrix extracts of raw milk (n = 3)

2.3.3 C18用量的優(yōu)化 在其他試驗(yàn)條件一致的情況下，分別考察了20、40、60、80 和100 mg C18對(duì)15 種目標(biāo)化合物在牛生乳中的回收率和基質(zhì)效應(yīng)的影響。結(jié)果 (圖5) 表明：不同用量的C18對(duì)15 種目標(biāo)化合物的平均回收率 (94%～111%)影響不大。但隨著C18用量的增加，除抑霉唑、炔草酯和肟菌酯外，其余目標(biāo)化合物的基質(zhì)效應(yīng)均有降低的趨勢(shì)。當(dāng)C18用量為100 mg 時(shí)，抑霉唑、炔草酯和肟菌酯的基質(zhì)效應(yīng)分別為0.10%、3.3%和1.4%，表現(xiàn)為輕度增強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。因此選擇C18用量為100 mg。

圖5 C18 用量對(duì)牛生乳基質(zhì)提取液中15 種目標(biāo)化合物回收率 (A) 和基質(zhì)效應(yīng) (B) 的影響(n = 3)Fig.5 Effects of amount of C18 on recovery (A) (n = 3) and matrix effect (B) of 15 target compounds in matrix extract of raw milk (n = 3)

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)是樣品中除了被分析物以外的成分，對(duì)目標(biāo)物的影響也不相同，也會(huì)對(duì)分析方法的線性、靈敏度、精密度和正確度造成干擾，這些影響和干擾被稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng) (ME)[34]。當(dāng)ME = 0 時(shí)，表示無(wú)基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng) -20% ≤ ME ≤ 20%時(shí)，表示弱基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)可以忽略；當(dāng)20% ＜ME ≤ 50%或者 -50% ≤ ME ＜ -20%時(shí)，表示中度基質(zhì)增強(qiáng)或者中度基質(zhì)抑制效應(yīng)；當(dāng)ME > 50%或者 ＜ -50%時(shí)，表示重度基質(zhì)增強(qiáng)或重度基質(zhì)抑制效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)越接近0，說(shuō)明凈化效果越好[35]。由表3 可知，除虱螨脲屬中度基質(zhì)抑制效應(yīng)外，其余14 種目標(biāo)化合物的基質(zhì)效應(yīng)范圍在-0.50%～11%之間，屬于弱基質(zhì)效應(yīng)。綜合考慮，采用牛生乳基質(zhì)空白溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，外標(biāo)法定量。

表3 15 種目標(biāo)化合物的線性方程、決定系數(shù)、檢出限、定量限和基質(zhì)效應(yīng) (線性范圍：0.01～1 mg/L)Table 3 Linearity equations, determination coefficients, limit of detection (LOD) , limit of quantification (LOQ) and matrix effect (ME) of 15 target compounds (Linear range: 0.01-1 mg/L )

2.5 方法確證

2.5.1 靈敏度和線性范圍 按本研究建立的前處理方法及儀器測(cè)定方法對(duì)牛生乳中15 種目標(biāo)物的線性關(guān)系、正確度、精密度、檢出限 (LOD) 和定量限(LOQ)進(jìn)行了考察。結(jié)果 (表3) 表明：15 種目標(biāo)化合物在質(zhì)量濃度0.01～1 mg/L 范圍內(nèi)，決定系數(shù)R2≥ 0.9954。牛生乳中15 種目標(biāo)化合物的方法LOQ 在0.001～0.01 mg/kg 之間，LOD 在0.0003～0.003 mg/kg 之間，小于CAC[30]和澳大利亞[29]在牛生乳上建立的MRL 值。

2.5.2 正確度和精密度 結(jié)果(表4)表明：在牛生乳中添加0.01、0.1 和1 mg/kg 3 個(gè)水平的15 種目標(biāo)化合物，每個(gè)水平5 個(gè)重復(fù)，平均回收率在87%～109%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 在0.30%～11%之間。表明本方法正確度和精密度均可滿(mǎn)足農(nóng)藥殘留分析的要求[37]。

表4 15 種目標(biāo)化合物在牛生乳中的添加平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 4 The average recoveries and relative standard deviations (RSD) of 15 target compounds in raw milk

2.6 實(shí)際樣品監(jiān)測(cè)

對(duì)我國(guó)牛生乳主產(chǎn)區(qū) (內(nèi)蒙古、新疆和寧夏)進(jìn)行抽檢，每地采樣10 份，共30 份樣本。檢測(cè)結(jié)果表明：有22 份樣品中僅檢出乙螨唑1 種農(nóng)藥殘留，最大為0.0036 mg/kg，其余14 種目標(biāo)化合物均未檢出。

3 結(jié)論

本研究對(duì)牛生乳中12 種農(nóng)藥及其3 種代謝物的檢測(cè)方法基于QuEChERS 方法，樣品經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為1%的甲酸乙腈提取，NaCl 鹽析，渦旋、離心后取上清液，冷凍5 h 后過(guò)C18凈化，經(jīng)HPLCMS/MS 測(cè)定。結(jié)果表明，15 種目標(biāo)化合物在牛生乳中的基質(zhì)效應(yīng)為 -31%～11%，在0.01～1 mg/L線性范圍內(nèi)，決定系數(shù) (R2) ≥0.9954，表明各目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度與其對(duì)應(yīng)的色譜峰面積間呈良好的線性關(guān)系。在0.01、0.1 和1 mg/kg 添加水平下，15 種目標(biāo)化合物的平均回收率在87%～109%之間，RSD 在0.30%～11%之間，LOD 為0.0003～0.003 mg/kg，LOQ 為0.001～0.01 mg/kg，滿(mǎn)足農(nóng)藥殘留分析的要求。本方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高，重現(xiàn)性好，可有效去除基質(zhì)的干擾，實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)化合物的同時(shí)快速分析。該研究結(jié)果也可為其他動(dòng)物源性基質(zhì)中農(nóng)藥殘留分析方法的建立提供借鑒，并為我國(guó)牛生乳中12 種農(nóng)藥MRL 值的建立及膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供參考。