顏成敏 鄭偉 徐曉丹

摘 要： 云南櫻花品種‘紅霞（Cerasus ‘Hongxia）廣泛種植于滇中地區(qū)，3月開(kāi)花，半重瓣至重瓣，粉紅色，觀賞價(jià)值較高。‘紅霞曾被認(rèn)為是紅花高盆櫻（C. cerasoides var. rubea）的園藝品種，而其分子標(biāo)記結(jié)果卻聚在鐘花櫻（C. campanulata）種系，可見(jiàn)‘紅霞的種系歸屬存疑，對(duì)今后的育種及栽培極為不利。為探索‘紅霞的種系問(wèn)題，該研究以‘紅霞的葉片DNA為材料，應(yīng)用Illumina軟件對(duì)葉綠體基因組特征進(jìn)行測(cè)序，通過(guò)SPAdes 3.13.0、Gapcloser 1.12 和CPGAVAS2 2.0軟件進(jìn)行組裝、注釋，之后使用MISA和Geneious 10.0軟件對(duì)葉綠體基因組特征進(jìn)行分析，并使用RAxML 8.0軟件構(gòu)建Cerasus 分支系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，分析‘紅霞在櫻屬植物的系統(tǒng)關(guān)系。結(jié)果表明： （1）‘紅霞的葉綠體全基因組長(zhǎng)度為157 832 bp， 鳥(niǎo)嘌呤（Guanine）、胞嘧啶（Cytosine）含量為36.73%，包含一對(duì)反向重復(fù)（inverted repeat sequence， IR， 26 381 bp）區(qū)，由小單拷貝（short single copy， SSC， 19 120 bp）區(qū)和大單拷貝（long single copy， LSC， 85 950 bp）區(qū)分開(kāi)，共編碼128個(gè)基因，同時(shí)包括84個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因、36個(gè)tRNA基因和8個(gè)rRNA核糖體基因。（2）通過(guò)櫻屬16個(gè)葉綠體全基因組的最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)系統(tǒng)分析，發(fā)現(xiàn)‘紅霞與大葉早櫻（C. subhirtella）和日本櫻花（C. yedoensis）一支聚為姊妹群，而與高盆櫻（C. cerasoides）的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。因此該研究推測(cè)，‘紅霞可能不是高盆櫻的品種，而有可能是鐘花櫻和大葉早櫻或日本櫻花的雜交品種。該研究結(jié)果為云南櫻花品種‘紅霞的起源和遺傳育種、高盆櫻的品種鑒定與分類等研究提供了一定的參考資料。

關(guān)鍵詞： 高盆櫻， 冬櫻花， 重瓣， 品種起源， 系統(tǒng)發(fā)育

中圖分類號(hào)： Q943.2? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A? 文章編號(hào)： 1000-3142（2023）05-0972-08

Abstract： Cerasus ‘Hongxia， a Yunnan flowering cheery cultivar blooming in March with semi-double to double pink petals， have been widely cultivated in central Yunnan for its high ornamental value. It was regarded as the cultivar of Cerasus cerasoides var. rubea. However， it was clustered in C. campanulata based on molecular markers. Therefore， the phylogeny of these cultivars are doubtful， which is not conducive to their breeding and cultivation. In order to explore the origin of Cerasus ‘Hongxia， with leaf DNA of Cerasus ‘Hongxia as material， chloropast genome characteristics were sequenced by Illumina， assembled， annotated， and analyzed by bioinformatic methods， and analyzed by MISA and Genious R10. The phylogenetic tree of Cerasus was reconstructed by using RAxML 8.0， and the phylogenetic relationship of Cerasus ‘Hongxia was analyzed. The results were as follows： （1） The chloroplast genome of Cerasus ‘Hongxia was 157 832 bp in length， containing a pair of reverse repeat sequence （inverted repeat sequence，IR， 26 381 bp） regions， which were separated by a short single copy （SSC， 19 120 bp） region and a long single copy （LSC， 85 950 bp） region. A total of 128 genes were encoded， including 84 protein-coding genes， 36 tRNA genes and 8 rRNA ribosomal genes. The overall Guanine and Cytosine content of genome was 36.73%. （2） Based on the maximum likelihood phylogenetic tree analysis of 16 chloroplast genome of Cerasus， it was found that Cerasus ‘Hongxia was formed as sister to C. subhirtella and C. yedoensis， and was far away from C. cerasoides. Therefore， we speculated that Cerasus ‘Hongxia may be a hybrid cultivar of C. campanulata and C. subhirtella or C. yedoensis， rather than the cultivar of C. cerasoides. The above results are be useful for studies of the origination and genetic breeding of Cerasus ‘Hongxia， as well as the cultivar identification and classification of C. cerasoides.

Key words： Cerasus cerasoides， winter flowering cheery， double petal， cultivar origination， phylogenetic analysis

云南櫻花品種‘紅霞（Cerasus ‘Hongxia）（張瓊，2013；王賢榮，2014）在昆明廣泛種植，俗稱“西府海棠”（俞德浚，1986），花期3月，半重瓣至重瓣，粉紅色，其花序傘形，2～5朵簇生，盛開(kāi)之際，滿樹(shù)繁英，一片燦爛，觀賞價(jià)值較高?！t霞的首次記錄為張瓊（2013）的碩士論文，歸屬為紅花高盆櫻（Cerasus cerasoides var. rubea）種系的新品種：‘紅霞紅花高盆櫻（C. cerasoides var. rubea ‘Hongxia），論文中還記錄了3月開(kāi)花的新品種‘碧心紅花高盆櫻（C. cerasoides var. rubea ‘Bixin）（圖1）。但是，在《中國(guó)櫻花圖志》（王賢榮，2014）中，‘紅霞‘碧心卻被記錄為高盆櫻（C. cerasoides）的新品種：‘紅霞高盆櫻（C. cerasoides ‘Hongxia）、‘碧心高盆櫻（C. cerasoides ‘Bixin）。此外，該書(shū)還記錄了3月開(kāi)花的高盆櫻（C. cerasoides）新品種：‘春潮高盆櫻（C. cerasoides ‘Chunchao）。

高盆櫻即高盆櫻桃（俞德浚，1986），又名“菁櫻桃”“云南歐李”“喜馬拉雅野櫻桃”（Xu et al.， 2018），分布于泛喜馬拉雅地區(qū)，在我國(guó)以云南為天然分布中心，屬云南省重點(diǎn)保護(hù)野生植物。高盆櫻一般在12月份左右開(kāi)花，花期可為1個(gè)月，是唯一在冬季盛開(kāi)的櫻花（張瓊，2013；Xu et al.， 2018），常被稱為“冬櫻花”（趙大克和鄭麗，2009）。

而有關(guān)‘紅霞等3月開(kāi)花的云南櫻花重瓣栽培種質(zhì)，其最早記錄是在《中國(guó)植物志》（俞德浚，1986）中（圖1），被認(rèn)為是高盆櫻桃變種——紅花高盆櫻桃的園藝品種，但是，品種名不詳。但在2003年的Flora of China（Lu et al.， 2003）中，紅花高盆櫻被歸并到高盆櫻中，花期為12月、3月。基于形態(tài)、花期的較大差異，張瓊（2013）認(rèn)為是否將紅花高盆櫻并入高盆櫻，還是作為一個(gè)種或變種，均有待進(jìn)一步研究。那么，歸屬于變種的‘紅霞等3月開(kāi)花的重瓣品種，能否直接歸屬于原種高盆櫻，還是歸屬其他種系？

近年來(lái)，核基因組內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS和葉綠體間隔序列（petA-psbJ、trnH-psbA、rpl32-trnL和trnL-trnF）的測(cè)序分析結(jié)果記錄了，紅花高盆櫻與鐘花櫻（C. campanulata）聚為姊妹群，而與高盆櫻的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)（付濤等，2018）。SSR分子標(biāo)記研究表明（Ma & Margaret，2005；張瓊，2013；聶超仁等，2018），‘紅霞等3月開(kāi)花的云南櫻花重瓣品種聚在鐘花櫻種系，而不是高盆櫻種系。這說(shuō)明‘紅霞等品種的種系可能是鐘花櫻，而不是高盆櫻。綜上表明，‘紅霞等3月開(kāi)花的重瓣云南櫻花品種的種系存疑，對(duì)后期的品種分類和遺傳育種等研究工作的開(kāi)展極為不利。

與葉綠體間隔序列petA-psbJ等相比，葉綠體全基因組能夠更為全面地揭示物種間的系統(tǒng)關(guān)系（王雪芹等，2021）。為此，本研究將以云南櫻花品種‘紅霞為研究對(duì)象，對(duì)其開(kāi)展葉綠體全基因組測(cè)序及分析，同時(shí)結(jié)合在細(xì)胞核層面的研究報(bào)道，進(jìn)一步分析‘紅霞的種系歸屬，以期為‘紅霞等3月開(kāi)花的重瓣櫻花品種的起源及演化提供科學(xué)依據(jù)，為云南櫻花的研究和利用提供一定的參考資料。

1 材料與方法

實(shí)驗(yàn)材料為云南櫻花品種‘紅霞（圖2）的成熟健康葉片，采集地點(diǎn)位于云南省昆明市昆明理工大學(xué)呈貢校區(qū)（102.856 5° E、24.852 5° N）。

葉綠體DNA測(cè)序流程按照Illumina公司提供的標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行，使用CTAB法（Doyle & Doyle， 1987）提取基因組DNA，經(jīng)檢測(cè)合格后，用超聲波將DNA片段化，然后對(duì)片段化的DNA進(jìn)行純化、末端修復(fù)、3′端加A、連接測(cè)序接頭，再用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行片段大小選擇，采用全基因組鳥(niǎo)槍法策略，對(duì)DNA樣品構(gòu)建1個(gè)350 bp的文庫(kù)，建好的文庫(kù)先進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)檢，質(zhì)檢合格的文庫(kù)用Illumina NovaSeq進(jìn)行雙末端測(cè)序，長(zhǎng)度為150 bp。

高通量測(cè)序得到的原始圖像數(shù)據(jù)文件經(jīng)堿基識(shí)別（base calling）分析轉(zhuǎn)化為5.1G的原始數(shù)據(jù)（raw reads），結(jié)果以FASTQ文件格式存儲(chǔ)。原始測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)低質(zhì)量數(shù)據(jù)過(guò)濾得到5G的有效數(shù)據(jù)（clean reads）。使用的過(guò)濾軟件為SOAPnuke V 1.3.0（https：//github.com/BGI-flexlab/SOAPnuke），過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）去除N堿基含量超過(guò)5%的數(shù)據(jù)（reads）；（2）去除低質(zhì)量（質(zhì)量值小于等于5）堿基數(shù)目達(dá)到50%的數(shù)據(jù)（reads）；（3）去除有接頭（adapter）污染的數(shù)據(jù)（reads）。

使用SPAdes V 3.13.0（https：//github.com/ablab/spades/）軟件進(jìn)行基因組拼接，將拼接結(jié)果與近緣種高盆櫻的葉綠體全基因組（MF621234）與給定的核酸序列與核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行比對(duì)，基于比對(duì)情況并確定候選序列組裝結(jié)果。連接好的序列，若包含gap（含N序列），則使用Gapcloser（Version： 1.12）進(jìn)一步補(bǔ)洞，得到最終的拼接結(jié)果。利用專門針對(duì)葉綠體的注釋軟件CPGAVAS2 V 2.0（http：//47.96.249.172：16019/analyzer/annotate/）進(jìn)行基因注釋后并繪圖。測(cè)序后，使用Bankit將注釋好的序列提交至NCBI（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/），獲得Genbank登錄號(hào)：OP022428。

采用MISA V 1.0（http：//pgrc.ipk-gatersleben.de/misa/misa.html/），使用默認(rèn)參數(shù)對(duì)葉綠體進(jìn)行SSR檢測(cè)；并且對(duì)應(yīng)的各個(gè)重復(fù)單元（unit size）最少重復(fù)次數(shù)分別為1-8、2-4、3-4、4-3、5-3、6-3，如1-8表示以單核苷酸為重復(fù)單位時(shí)，其重復(fù)數(shù)至少為8才可被檢測(cè)到。

采用Geneious R10（Biomatters， Ltd.， New Zealand）軟件從NCBI線上數(shù)據(jù)庫(kù)下載櫻屬植物的葉綠體全基因組15個(gè)，分析“云南櫻花”品種‘紅霞的系統(tǒng)位置和親緣關(guān)系。以Malus prunifolia（KU851961）（Lu et al.， 2003）為外類群。所有cp基因組序列均在Genious R10中采用MAFFT進(jìn)行排列（align）。最后在RAxML V 8.0（Stamatakis， 2014）中根據(jù)最大似然標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，并使用1 000次重復(fù)自檢（bootstrap）計(jì)算各分支支持率。

2 結(jié)果與分析

2.1 ‘紅霞的葉綠體基因組

通過(guò)組裝，獲得了完整的‘紅霞葉綠體全基因組，其葉綠體全長(zhǎng)為157 832 bp，包含一對(duì)反向重復(fù)（inverted repeat sequence， IR，26 381 bp）區(qū)，由小單拷貝（short single copy，SSC，19 120 bp）區(qū)和大單拷貝（long single copy， LSC，85 950 bp）區(qū)間隔開(kāi)來(lái)（表1），基因組的鳥(niǎo)嘌呤（Guanine）、胞嘧啶（Cytosine）含量為36.73%?！t霞葉綠體基因組共編碼128個(gè)基因（圖3），具體包括ATP合成酶（atpA、atpH、atpE、atpB、atpI、atpF）、RNA聚合酶（rpoA、rpoC2、rpoC1、rpoB）、閱讀框（ycf）（ycf4、ycf1、ycf2、ycf3）、轉(zhuǎn)移RNA（trnL-CAA、trnR-ACG、trnC-GCA、trnW-CCA、trnS-CGA、trnD-GUC、trnN-GUU、trnL-UAA、trnK-UUU、trnR-UCU、trnY-GUA、trnH-GUG、trnP-UGG、trnS-GGA、trnM-CAU、trnT-UGU、trnA-UGC、trnL-UAG、trnV-GAC、trnS-UGA、trnE-UUC、trnT-GGU、trnG-GCC、trnQ-UUG、trnF-GAA、trnS-GCU）、蛋白酶（clpP）、還原型輔酶Ⅰ（NADH）脫氫酶（ndhJ、ndhK、ndhE、ndhC、ndhF、ndhH、ndhG、ndhD、ndhI、ndhA、ndhB）、核糖體蛋白（LSU）（rpl2、rpl33、rpl23、rpl20、rpl22、rpl16、rpl14、rpl36、rpl32）、核糖體RNA（rrn4.5S、rrn16S、rrn23S、rrn5S）、細(xì)胞色素b/f復(fù)合物（petB、petL、petN、petG、petD、petA）、RubisCO大亞基（rbcL）、成熟酶（matK）、光系統(tǒng)I（psaI、psaA、psaB、psaJ、psaC）、核糖體蛋白（SSU）（rps2、rps11、rps3、rps8、rps16、rps19、rps15、rps4、rps12、rps14、rps7、rps18）、光系統(tǒng)Ⅱ（psbM、psbH、psbI、psbE、psbC、psbJ、psbZ、psbL、psbK、psbA、psbN、psbB、psbT、psbD、psbF）、其他基因（accD、cemA、ccsA）。

此外，共檢測(cè)到‘紅霞葉綠體基因組的SSR序列247個(gè)（圖3），包括163個(gè)復(fù)雜重復(fù)序列（綠色短桿）和84個(gè)簡(jiǎn)單重復(fù)序列（其中兩堿基重復(fù)序列73個(gè)，黑色短桿；四堿基重復(fù)序列10個(gè)，黃色短桿；六堿基重復(fù)序列1個(gè)）。葉綠體基因組圖譜的內(nèi)圈為MISA（V.1.0）識(shí)別的微衛(wèi)星序列，外圈是用CPGAVAS2（V.2）繪制，顯示質(zhì)體上的基因結(jié)構(gòu)，基因的顏色根據(jù)它們的功能分類來(lái)區(qū)分。

2.2 ‘紅霞葉綠體基因組的系統(tǒng)分析

通過(guò)構(gòu)建櫻屬16個(gè)葉綠體全基因組的最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖4）。圖4結(jié)果顯示，大葉早櫻（MN695296）、日本櫻花（KP732472）聚為姊妹群（支持率為96%）。‘紅霞與上述姊妹群聚為一支，又與蜜腺櫻桃（Cerasus discadenia）聚為一支，并且均獲得了100%的支持率。大葉早櫻+日本櫻花+‘紅霞+腺蜜櫻桃和高盆櫻+紅毛櫻桃（C. rufa）雖聚為姊妹群，但獲得的支持率僅為37%。由此可見(jiàn)，‘紅霞和大葉早櫻、日本櫻花的親緣關(guān)系最近，而與高盆櫻的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

通過(guò)葉綠體全基因組的序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)‘紅霞與高盆櫻（ID：MF621234）的葉綠體全基因組DNA相似率僅為89.1%，而與近緣種鐘花櫻葉綠體基因組DNA（MH491529）的相似率則為89.4%，均低于‘紅霞與大葉早櫻葉綠體基因組DNA（MN695296）的相似率（89.8%）。由此可見(jiàn)，與‘紅霞親緣關(guān)系最近的物種并不是高盆櫻。

綜上認(rèn)為，3月開(kāi)花的云南櫻花品種‘紅霞可能不是高盆櫻（12月開(kāi)花）的品種。

3 討論

3.1 基于葉綠體全基因組的‘紅霞品種溯源

本研究中，曾被認(rèn)為是變種紅花高盆櫻（俞德浚，1986）的品種‘紅霞，其葉綠體全基因卻與高盆櫻的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，這與前人的研究結(jié)果（‘紅霞等品種均不聚在高盆櫻種系）（張瓊，2013；付濤等，2018；聶超仁等，2018）一致。從形態(tài)特征來(lái)看，‘紅霞的萼筒寬鐘形、萼裂片寬卵狀三角形、先端突尖、先葉開(kāi)放、3月開(kāi)花等特征，與高盆櫻的“萼筒鐘形、萼裂片三角形、先端急尖、花葉同放、10—12月開(kāi)花”有顯著的差異（俞德浚，1986；張瓊，2013）。‘紅霞等品種的樹(shù)體、葉片和花朵，常顯著大于高盆櫻。因此，‘紅霞的種系可能并不是高盆櫻，兩者可能有不同的起源。

在我國(guó)的植物標(biāo)本庫(kù)中，僅有一份關(guān)于紅花高盆櫻的標(biāo)本記錄［KUN 1312617 （cvh.ac.cn）］，采集地點(diǎn)在云南滄源縣勐董鎮(zhèn)的壩卡山頂，所述的采樣時(shí)間是2010年3月29日，標(biāo)本的果實(shí)已完全成熟，果實(shí)成熟期與‘紅霞的花期基本一致。因此，這一標(biāo)本的花期可能是在冬季，極有可能是高盆櫻原種。盡管如此，‘紅霞等3月開(kāi)花的云南櫻花重瓣品種是否可以直接歸屬于高盆櫻，今后仍可前往上述標(biāo)本采集點(diǎn)進(jìn)行實(shí)地考察，進(jìn)一步從形態(tài)和分子等水平展開(kāi)深入的研究。

同時(shí)，本研究中，‘紅霞與鐘花櫻的親緣關(guān)系也較遠(yuǎn)；而在我國(guó)南方野生櫻屬植物的系統(tǒng)發(fā)育分析中，紅花高盆櫻和同為細(xì)齒組的鐘花櫻等關(guān)系較近（付濤等，2018）。本研究中，‘紅霞和鐘花櫻的親緣關(guān)系差異較大，主要原因可能是基于葉綠體全基因組構(gòu)建的最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)；而付濤等（2018）是利用細(xì)胞核ITS+4段葉綠體組合序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，兩者結(jié)果不完全相同。此外，采樣存在的差異也可能導(dǎo)致結(jié)果不一樣。

從形態(tài)特征來(lái)看，‘紅霞的萼裂片寬卵狀三角形、先葉開(kāi)放、3月開(kāi)花等特征，與鐘花櫻更為接近（俞德浚，1986），這與細(xì)胞核層面的分子研究結(jié)果（‘紅霞‘碧心均聚在鐘花櫻種系）（張瓊，2013；付濤等，2018；聶超仁等，2018）一致。而在葉綠體基因組層面，‘紅霞和大葉早櫻、日本櫻花的親緣關(guān)系最為相近。因此本研究推測(cè)，‘紅霞等3月開(kāi)花的重瓣品種可能是鐘花櫻和日本早櫻或大葉早櫻的雜交品種，甚至可能是雜交多倍化形成的異源多倍體。因?yàn)樵诖蠖鄶?shù)植物中，葉綠體基因?qū)儆谀感赃z傳，所以如果‘紅霞的品種起源涉及雜交事件的話，雜交母本最有可能是大葉早櫻或日本櫻花，而雜交父本最有可能是鐘花櫻。但是，上述推測(cè)還需要進(jìn)一步的細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)等證據(jù)來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。

3.2 高盆櫻（冬櫻花）的栽培種質(zhì)亟待整理

《植物名實(shí)圖考》（吳其濬，1848）中記載：“冬海棠生云南山中，園圃中亦植之，樹(shù)如山桃，葉似櫻桃而長(zhǎng)，冬天開(kāi)桃色花……”。由此可見(jiàn)，高盆櫻在云南的栽培歷史悠久。近30年來(lái)，高盆櫻在園林中的栽培與日俱增，對(duì)提升亞熱帶地區(qū)的冬季景觀發(fā)揮了非常重要的作用，得到了人們的普遍認(rèn)可和關(guān)注。目前，高盆櫻已被引種至全國(guó)多地乃至東南亞栽培，可見(jiàn)，高盆櫻的國(guó)際化已拉開(kāi)序幕、勢(shì)在必行。

高盆櫻的栽培種質(zhì)正逐漸增多，如云南萬(wàn)家紅園藝有限公司報(bào)道的“重瓣冬櫻花”（13～15瓣）和3個(gè)品種‘仙女散花‘翡翠‘冬之舞；沈鑫等（2019）報(bào)道的高盆櫻品種‘改良和‘重瓣；大理鶴慶縣報(bào)道的“小陽(yáng)春”；李秀琴（2018）報(bào)道的“重瓣冬櫻花”；安寧市報(bào)道的“滇鶴紅櫻”；謝鳳云等（2017）報(bào)道的“粉冬櫻花”“綠冬櫻花”“重瓣冬櫻花”“新品冬櫻花”；楊曉東（1992）等報(bào)道的“石屏冬櫻花”等。這些栽培種質(zhì)的花瓣有單瓣、重瓣和復(fù)瓣；花色有白色、粉紅色、玫紅色；花萼有綠色、紅色，為高盆櫻的品種分類提供了多樣的性狀。

然而，根據(jù)《國(guó)際栽培植物命名法規(guī)》（《International Code of Nomenclature for Cultivated Plants》，ICNCP，第八版）（靳曉白等，2013），部分品種名稱的規(guī)范性還有待提升，如‘改良‘重瓣等。雙引號(hào)標(biāo)注的“滇鶴紅櫻”等，也只能視為俗稱，如要稱為品種，應(yīng)選用單引號(hào)。此外，雖然各栽培群體從本地移栽的優(yōu)良野生類型越來(lái)越多，但這部分栽培種質(zhì)卻沒(méi)有規(guī)范的品種名稱。

因此，高盆櫻栽培種質(zhì)在形態(tài)、細(xì)胞和分子水平的遺傳多樣性亟待開(kāi)展系統(tǒng)的研究，分析其雜交或多倍化事件，進(jìn)而系統(tǒng)整理高盆櫻的栽培品種，提出符合ICNCP的品種名錄和基于種系的分類系統(tǒng)，為高盆櫻的遺傳育種研究、品種鑒定與分類、國(guó)際化應(yīng)用等提供重要的基礎(chǔ)資料。

3.3 鐘花櫻的分類地位

鐘花櫻曾被認(rèn)為是高盆櫻分布區(qū)偏東、低海拔地區(qū)的變種（朱淑霞等，2019）。雖然鐘花櫻和高盆櫻在滇東南周邊有一定的重疊分布，但Flora of China （Lu et al.， 2003）和付濤等（2018）將高盆櫻和鐘花櫻認(rèn)定成兩個(gè)種。高盆櫻與相似分布區(qū)的紅毛櫻桃（Cerasus rufa）聚為姊妹群，親緣關(guān)系最近，而與鐘花櫻的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。從葉綠體全基因組的系統(tǒng)關(guān)系分析來(lái)看，本研究認(rèn)為鐘花櫻單獨(dú)成種更為合理，而不是作為高盆櫻的變種。

參考文獻(xiàn)：

DOYLE JJ， DOYLE JL， 1987. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue ［J］. Phytochemistry， 19（18）： 11-15.

FU T， WANG ZL， LIN LJ， et al.， 2018. Molecular phylogenetic analysis of wild Cerasus plants in South China ［J］. J Nucl Agric Sci， 32（11）： 2126-2134. ［付濤， 王志龍， 林樂(lè)靜， 等， 2018. 我國(guó)南方野生櫻屬植物的分子系統(tǒng)發(fā)育分析 ［J］. 核農(nóng)學(xué)報(bào)， 32（11）： 2126-2134.］

JIN XB， CHENG FY， ZHANG QX， 2013. International code of nomenclature for cultivated plants： 8th ed ［Z］. China Forestry Publishing House. ［靳曉白， 成仿云， 張啟翔， 2013. 國(guó)際栽培植物命名法規(guī)： 第8版 ［Z］. 中國(guó)林業(yè)出版社.］

LI XQ， 2018. Study on the ornamental characteristics of double winter cherry blossom and its application in gardens ［J］. Value Eng， 37（17） ： 227-228. ［李秀琴， 2018. 重瓣冬櫻花的觀賞特性及其在園林中的應(yīng)用研究 ［J］. 價(jià)值工程， 37（17）： 227-228.］

LU LD， GU CZ， LI CL， et al.， 2003. Flora Reipublicae Popularis Sinicae： Rosaceae ［M］. Oxalidaceae though Aceraceae， 9： 422.

MA HM， MARGARET P， 2005. Genotyping of ornamental flowering cherry germplasm （Prunus species） using SSR technology ［J］. Hortscience， 40（4）： 1003.

NIE CR， ZHANG SS， YU JY， et al.， 2018. Genetic diversity and relationship analysis of 54 Prunus subgenus Cerasus ornamental plants with fluorescent SSR markers detected by capillary electrophoresis ［C］. Advances in Ornamental Horticulture of China. Beijing： China Forestry Publishing House： 549-556. ［聶超仁， 張思思， 于靜亞， 等， 2018. SSR熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳檢測(cè)法分析54個(gè)李屬櫻亞屬觀賞植物的遺傳多樣性和親緣關(guān)系 ［C］. 中國(guó)觀賞園藝研究進(jìn)展. 北京： 中國(guó)林業(yè)出版社： 549-556.］

SHEN X， LU G， LIU XH， et al.， 2019. Study on growth variation pattern of Cerasus cultivars with red flowers in the seedling stage ［J］. N Hortic， （7）： 85-93. ［沈鑫， 盧剛， 柳新紅， 等， 2019. 櫻花紅色系品種苗期生長(zhǎng)特性及變異規(guī)律分析 ［J］. 北方園藝， （7）： 85-93.］

STAMATAKIS A， 2014. RAxML version 8： a tool for phylogenetic analysis and post-analysis of large phylogenies ［J］. Bioinformatics， 30（9）： 1312-1313.

WANG XQ， SONG WW， XIAO JJ， et al.， 2021. Phylogeny of Myrtales and related groups based on chloroplast genome ［J］. Guihaia， 41（1）： 68-80. ［王雪芹， 宋衛(wèi)武， 肖建加， 等， 2021. 基于葉綠體基因組探討桃金娘目及其近緣類群的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系 ［J］. 廣西植物， 41（1）： 68-80.］

WANG XR， 2014. An illustrated monograph of cherry cultivars in China ［M］. Beijing： Science Press. ［王賢榮， 2014. 中國(guó)櫻花品種圖志 ［M］. 北京： 科學(xué)出版社.］

WU QJ， 1848. An illustrated book of plants ［M］. Beijing： The Commercial Press. ［吳其濬， 1848. 植物名實(shí)圖考 ［M］. 北京： 商務(wù)印書(shū)館.］

XU XD， WEN J， WANG W， et al.， 2018. The complete chloroplast genome of the threatened Prunus cerasoides， a rare winter blooming cherry in the Himalayan region ［J］. Conserv Genet Resour， 10（3）： 499-502.

XIE FY， DAI MZ， ZHANG F， et al.， 2017. Introduction and cultivation of winter cherry blossom and its application in gardens ［J］. Mod Agric Sci Technol， （3）： 140-141. ［謝鳳云， 戴明仲， 張飛， 等， 2017. 冬櫻花的引種栽培及其在園林中的應(yīng)用 ［J］. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， （3）： 140-141.］

YANG XD， ZHANG WB， LI SF， 1992. Cherry and Prunus Majtstica in Yunnan ［J］. Yunnan Agric Sci Technol， （6）： 36-38. ［楊曉東， 張文炳， 李樹(shù)發(fā)， 1992. 云南的櫻桃和櫻花 ［J］. 云南農(nóng)業(yè)科技， （6）： 36-38.］

YU DJ， 1986. Flora Reipublicae Popularis Sinicae ［M］. Beijing： Science Press： 46-89. ［俞德浚， 1986. 中國(guó)植物志 ［M］. 北京： 科學(xué)出版社： 46-89.］

ZHANG Q， 2013. Study on the cultivar resources investigation of flowering cherry （Cerasus） in China and analysis of partial species and cultivars using SSR markers ［D］. Nanjing： Nanjing Forestry University. ［張瓊， 2013. 櫻屬觀賞品種資源調(diào)查及部分種與品種SSR分析 ［D］. 南京： 南京林業(yè)大學(xué).］

ZHAO DK， ZHENG L， 2009. Characteristics of Cerasus cerasoides （D. Don） Sok and its application in landscape ［J］. J Yunnan Agric Univ， 24： 778-782. ［趙大克， 鄭麗， 2009. 云南冬櫻花及其在園林中的應(yīng)用 ［J］. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 24（5）： 778-782.］

ZHU SX， ZHU H， CHENG L， et al.， 2019. Modeling geographical distribution pattern and comparison of ecological characteristics between Cerasus cerasoides and C. campanulata ［J］. Guihaia， 39（10）： 1398-1406. ［朱淑霞， 朱弘， 程琳， 等， 2019. 高盆櫻桃與鐘花櫻桃的地理分布模擬及生態(tài)特征比較分析 ［J］. 廣西植物， 39（10）： 1398-1406.］

（責(zé)任編輯 李 莉 王登惠）