賴(lài)幸菲，鄧 權(quán)，范神光，孫伶俐，陳若虹，黎秋華，張鎮(zhèn)標(biāo)，孫世利

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/廣東省茶樹(shù)資源創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640；2.北京快雪堂茶業(yè)有限公司，北京 100020）

【研究意義】普洱茶是以云南大葉種曬青綠茶為原料加工而成的一種后發(fā)酵茶類(lèi)，按照加工工藝及品質(zhì)特征分為普洱茶生茶和普洱茶熟茶兩種類(lèi)型［1］。普洱茶生茶是云南生產(chǎn)的傳統(tǒng)歷史名茶，具有適宜長(zhǎng)期存放的特點(diǎn)。傳統(tǒng)普洱茶（生茶）的存放屬于后發(fā)酵，后發(fā)酵是云南大葉種曬青毛茶或普洱茶生茶在特定的環(huán)境條件下，經(jīng)微生物、酶、濕熱、氧化等綜合作用，其內(nèi)含物質(zhì)發(fā)生一系列轉(zhuǎn)化，形成普洱茶獨(dú)有品質(zhì)特征的過(guò)程［1］。研究證明，普洱茶及其有效成分具有抗氧化、抗腫瘤、減肥、降血脂、降血糖、抗疲勞、抗病毒、殺菌消炎、保護(hù)神經(jīng)等多種功效［2-3］。目前，有關(guān)不同儲(chǔ)存年份的普洱茶生茶抗氧化活性主要通過(guò)體外酶方法進(jìn)行研究，而對(duì)其體內(nèi)抗氧化的研究則鮮有報(bào)道。

【前人研究進(jìn)展】 馬冰凇等［4-5］對(duì)普洱茶（生茶）倉(cāng)儲(chǔ)陳化過(guò)程中的化學(xué)成分變化規(guī)律和體外抗氧化能力進(jìn)行了研究，結(jié)果表明普洱茶（生茶）倉(cāng)儲(chǔ)陳化過(guò)程中茶多酚、游離氨基酸、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）、沒(méi)食子酸兒茶素沒(méi)食子酸酯（GCG）和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）等酯型兒茶素極顯著降低，楊梅素和沒(méi)食子酸含量極顯著增加，沒(méi)食子兒茶素（GC）、表兒茶素（EC）和表沒(méi)食子兒茶素（EGC）等非酯型兒茶素呈先增加后降低的變化趨勢(shì)，咖啡堿、可可堿和槲皮素含量無(wú)顯著變化；體外抗氧化能力試驗(yàn)結(jié)果表明普洱茶（生茶）新茶的鐵離子還原/抗氧化能力、DPPH 自由基清除能力和ABTS 自由基清除能力較陳茶高，而超氧陰離子自由基清除能力則比陳茶低。戚康標(biāo)等［6］對(duì)不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶和熟茶的生化成分和抗氧化活性進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著存放時(shí)間的增加，普洱茶生茶和熟茶的茶多酚、氨基酸和可溶性糖含量均顯著下降，其體外抗氧化活性也明顯減弱。孫世利等［7］研究了不同年份普洱茶生茶物質(zhì)基礎(chǔ)和體外總抗氧化活性的變化，結(jié)果表明隨著貯存時(shí)間的增加，普洱茶生茶的茶多酚、兒茶素、氨基酸、咖啡堿含量顯著下降，沒(méi)食子酸、可溶性糖、茶紅素和茶褐素含量顯著增加，茶黃素含量則變化不大，體外總抗氧化活性差別較小。

【本研究切入點(diǎn)】本研究以不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶為試材，測(cè)定分析其生化成分的變化規(guī)律及其在自然衰老小鼠體內(nèi)抗氧化能力的差異?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)測(cè)定比較不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶生化成分的含量，探討不同儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)普洱茶生茶抗氧化能力的影響，以期為普洱茶生茶資源的開(kāi)發(fā)利用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2021 年12 月至2022 年5 月在廣東省茶樹(shù)資源創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。供試云南普洱茶生茶分別產(chǎn)于2014、2020 年，由北京快雪堂茶業(yè)有限公司提供。

小鼠規(guī)格：SPF級(jí) C57BL/6雄性小鼠，10月齡，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0008。飼養(yǎng)條件：小鼠飼養(yǎng)于25（±2）℃恒溫環(huán)境中，相對(duì)濕度為50%～60%，光照12 h/d，自由攝食飲水，在SPF級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后進(jìn)行試驗(yàn)。

試劑：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase，ALT/GPT）測(cè)試盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic oxalacetic transaminase，AST/GOT）測(cè)試盒、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）測(cè)試盒、微量還原型谷胱甘肽（Glutathione，GSH）測(cè)試盒、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）測(cè)試盒，均購(gòu)自南京建成生物工程有限公司。BCA 蛋白定量測(cè)試盒，Thermo Fisher Scientific；8 種兒茶素單體兒茶素（Catechin，C）、沒(méi)食子兒茶素（Gllocatechin，GC）、兒茶素沒(méi)食子酸酯（Catechin gallate，CG）、沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（Gallocatechin-3-gallate，GCG）、表兒茶素（Epicatechin，EC）、表沒(méi)食子兒茶素（Epigallocatechin，EGC）、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epicatechin-3-gallate，ECG）和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG），購(gòu)自Sigma 公司；咖啡堿、沒(méi)食子酸，購(gòu)自上海源葉生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈，色譜純；其他試劑均為分析純。

試驗(yàn)儀器和設(shè)備：TriStar LB941 多功能酶標(biāo)儀（德國(guó)Berthold Technologies 公司）；高速冷凍離心機(jī) Eppendorf、1200 高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；JH-12-06 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）；OHAUS 準(zhǔn)微量電子天平（奧豪斯儀器（常州）有限公司）；ZMQS5001 型Millipore 純水儀（密理博公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 普洱茶生茶水提物的制備 按茶水比（W/V）1:30 在95 ℃水浴中用沸蒸餾水浸提20 min，重復(fù)浸提2 次，浸提結(jié)束后過(guò)濾得到茶湯濾液，合并兩次茶湯濾液，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸餾濃縮，冷凍干燥成凍干粉后，置于干燥器內(nèi)密封避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 普洱茶生茶生化成分測(cè)定 按照GB 5009.3—2016《食品中水分的測(cè)定》測(cè)定茶葉水分含量，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“GB/T 8305-2013 茶水浸出物測(cè)定”測(cè)定茶水浸出物含量，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“GB/T 8313—2018 茶葉中茶多酚和兒茶素類(lèi)含量的檢測(cè)方法”測(cè)定茶多酚含量，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“GB/T 8314—2013 茶游離氨基酸總量的測(cè)定”測(cè)定茶葉中的游離氨基酸總量，采用蒽酮-硫酸比色法測(cè)定可溶性總糖含量，采用三氯化鋁比色法測(cè)定黃酮類(lèi)含量。兒茶素單體、沒(méi)食子酸、咖啡堿含量參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“GB/T 8313—2018 茶葉中茶多酚和兒茶素類(lèi)含量的檢測(cè)方法”進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行了改進(jìn)，具體色譜條件如下：

色譜柱：phenomenex C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；檢測(cè)溫度28 ℃；流動(dòng)相A：含0.5%乙酸、1%乙腈和2%甲醇的水溶液，流動(dòng)相B：含0.5%乙酸、10%乙腈和20%甲醇的水溶液；洗脫步驟：在30 min 內(nèi)，A 相由72.5%到20%，B 相由27.5%到80%，30 min 后在5 min 內(nèi)，A 相由20%恢復(fù)到72.5%，B相由80%恢復(fù)到27.5%，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。以外標(biāo)法按峰面積進(jìn)行定量。

1.2.3 普洱茶生茶體內(nèi)抗氧化活性測(cè)定（1）小鼠分組與給藥。取供試小鼠30 只，隨機(jī)分成3組，每組10 只，分別設(shè)為正常對(duì)照組、2014 年普洱茶生茶組（2014 年產(chǎn)的普洱茶生茶水提物，1 000 mg/kg·BW）、2020 年普洱茶生茶組（2020年產(chǎn)的普洱茶生茶水提物，1 000 mg/kg·BW）。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，第2 周開(kāi)始每天對(duì)小鼠進(jìn)行普洱茶生茶水提物灌胃，正常對(duì)照組用蒸餾水灌胃，連續(xù)灌胃21 d，每天灌胃1 次，自由攝食、飲水，每隔3 d 測(cè)量記錄小鼠體重、進(jìn)食量和飲水量；第21 d 灌胃前禁食12 h，自由飲水，對(duì)各組小鼠進(jìn)行給藥處理，末次灌胃結(jié)束1 h 后麻醉小鼠，進(jìn)行心臟取血，解剖取肝臟、腎臟和脾臟組織稱(chēng)重。

（2）小鼠肝臟ALT、AST、SOD活性和GSH、MDA 含量的測(cè)定。采血完成后處死小鼠，迅速解剖取出肝臟，用預(yù)冷生理鹽水漂洗并用濾紙吸干。剪取少量肝組織加入9 倍體積預(yù)冷的生理鹽水進(jìn)行勻漿，于4 ℃、2 500 r/min 離心15 min，得到上清液。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法測(cè)定肝臟組織中ALT、AST、SOD 活性和GSH、MDA含量。肝組織定量蛋白按照BCA 蛋白定量測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)的方法對(duì)肝組織上清液進(jìn)行蛋白定量。

（3）小鼠血清中AST、SOD 活性和MDA 含量的測(cè)定。收集小鼠血液靜置30 min 后，于4 ℃、3 000 r/min 離心20 min，分離得到血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法檢測(cè)血清中AST、SOD 活性和MDA 含量。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 8.0 軟件進(jìn)行繪圖和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以±s 表示，采用t檢驗(yàn)（Student’s t test）或單因素方差（one-way ANOVA）分析差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同年份普洱茶生茶生化成分分析比較

由表1 可知，2014 年的普洱茶生茶水浸出物、氨基酸、咖啡堿含量分別為40.11%、3.15%、4.18%，2020 年的普洱茶生茶水浸出物、氨基酸、咖啡堿含量分別為40.78 %、3.32%、5.83%，前者這3 個(gè)成分含量均極顯著低于后者；前者的沒(méi)食子酸含量（0.38%）極顯著高于后者（0.20%）。由表2 可知，2014 年普洱茶生茶的GC、EGC、C、EC、EGCG、CG 含量分別為0.21%、0.84%、0.61%、2.46%、6.90%、0.10%，非酯型兒茶素含量（4.11%）、酯型兒茶素含量（13.44%）和兒茶素總量（17.55%）均極顯著低于2020 年的普洱茶生茶。綜上，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的增加，普洱茶生茶的水浸出物、氨基酸、咖啡堿及兒茶素含量均有所下降，沒(méi)食子酸則有所增加。

表1 不同年份普洱茶生茶生化成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）Table 1 Contents of the biochemical components in Pu-erh raw tea in different years(%)

表2 不同年份普洱茶生茶兒茶素質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）Table 2 Contents of catechins in Pu-erh raw tea in different years (%)

2.2 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠體重、飲水量和進(jìn)食量的影響

由圖1A 可知，灌胃21 d 后，正常對(duì)照組小鼠體重與初始體重相比沒(méi)有顯著增加，各給茶組小鼠體重與初始體重相比有所下降，但差異不顯著，與正常組相比差異也不顯著。圖1B、C 結(jié)果表明，在試驗(yàn)期間，正常組小鼠飲水量和進(jìn)食量呈現(xiàn)先增加后減少趨勢(shì)，各給茶組小鼠的飲水量和進(jìn)食量也呈現(xiàn)出相同的趨勢(shì)，與正常組相比，給茶組小鼠的飲水量和進(jìn)食量有所下降，但差異均不顯著。

圖1 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠體重（A）、飲水量（B）和進(jìn)食量（C）的影響Fig.1 Effects of Pu-erh raw tea in different years on weight (A),water consumption (B) and food intake (C) of aged mice

2.3 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠臟器指數(shù)的影響

小鼠臟器指數(shù)的變化可以間接反映動(dòng)物體衰老的程度。肝臟、腎臟是動(dòng)物機(jī)體重要的代謝器官，若肝腎指數(shù)降低，會(huì)影響動(dòng)物代謝能力；脾臟是動(dòng)物體內(nèi)的免疫器官，脾臟重量若降低、萎縮可使動(dòng)物免疫功能下降。由圖2 可知，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與正常對(duì)照組的老齡小鼠相比，各給茶組小鼠的肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)稍有下降，但差異均不顯著。

圖2 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠肝臟指數(shù)（A）、腎臟指數(shù)（B）和脾臟指數(shù)（C）的影響Fig.2 Effects of Pu-erh raw tea in different years on liver index (A),kidney index (B) and spleen index (C) of aged mice

2.4 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠肝臟和血清中ALT 和AST 活性的影響

ALT 和AST 活性偏高是反映肝臟功能不正常的一個(gè)重要指標(biāo)，體內(nèi)炎癥和氧化應(yīng)激均可引起ALT 和AST 活性偏高。由圖3A、B 可知，與正常對(duì)照組小鼠相比，給茶組小鼠肝臟的ALT 和AST活性有所下降，但未達(dá)到顯著差異。圖3C 結(jié)果表明，正常對(duì)照組小鼠血清AST 的活性為59.60 U/L，2014 年普洱茶生茶組小鼠血清AST 活性為21.49 U/L，2020 年普洱茶生茶組小鼠血清AST 活性為29.50 U/L，給茶組小鼠血清的AST 活性均極顯著下降（P＜0.01）。

圖3 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠肝臟和血清中ALT 和AST 活性的影響Fig.3 Effects of Pu-erh raw tea in different years on ALT and AST activity in the liver and the serum of aged mice

2.5 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠肝臟和血清SOD 活性、GSH 和MDA 含量的影響

SOD 是機(jī)體主要抗氧化酶，保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷。由圖4A 可知，與正常對(duì)照組小鼠肝臟SOD 活性（288.53 U/mgprot）相比，給茶組小鼠肝臟SOD 的活性（363.41、343.53 U/mgprot）均有所增加，但均未達(dá)到顯著差異；圖4B 的結(jié)果也顯示，與正常組對(duì)照組小鼠血清SOD 活性（38.59 U/mL）相比，給茶組小鼠血清SOD 活性（38.52、34.79 U/mL）均未有增加。

圖4 不同年份普洱茶生茶對(duì)老齡小鼠肝臟和血清中SOD 活性、GSH 和MDA 含量的影響Fig.4 Effects of Pu-erh raw tea in different years on SOD activity,GSH and MDA content in the liver and the serum of aged mice

GSH 是機(jī)體內(nèi)最重要的非酶性抗氧化物，其含量越高，機(jī)體抗氧化能力越強(qiáng)。由圖4C 可知，正常對(duì)照組小鼠肝臟GSH 含量為19.17 μmol/gprot，2014 年普洱茶生茶組小鼠肝臟GSH 含量為77.28 μmol/gprot，2020 年普洱茶生茶組小鼠肝臟GSH 含量為41.54 μmol/gprot?？梢?jiàn)，與正常對(duì)照組相比，給茶組小鼠肝臟GSH 含量均明顯增加，差異極顯著（P＜0.01）。

MDA 含量可間接反映機(jī)體細(xì)胞損傷程度，其含量越高，機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度越高，細(xì)胞損傷程度也越高。由圖4D 可知，正常對(duì)照組小鼠肝臟MDA含量為1.78 nmol/mgprot，2014 年普洱茶生茶組小鼠肝臟MDA 含量為1.16 nmol/mg prot，2020 年普洱茶生茶組小鼠肝臟MDA 含量為1.32 nmol/mgprot，與正常組對(duì)照組相比，給茶組小鼠肝臟MDA 含量均有所下降，但未達(dá)到顯著差異。圖E 的結(jié)果表明，與正常對(duì)照組小鼠血清MDA 含量（18.53 nmol/mL）相比，2014 年普洱茶生茶組小鼠血清MDA 含量（17.78 nmol/mL）略有下降，2020 年普洱茶生茶組小鼠血清MDA 含量（11.67 nmol/mL）下降較多，但均未達(dá)到顯著差異。

3 討論

傳統(tǒng)的普洱茶生茶是以符合普洱茶產(chǎn)地環(huán)境條件下生產(chǎn)的云南大葉種茶樹(shù)鮮葉為原料，經(jīng)殺青、揉捻、日光干燥、蒸壓成型等工藝制成的緊壓茶，而后存放中經(jīng)微生物、酶、濕熱、氧化等綜合作用，其內(nèi)含物質(zhì)發(fā)生一系列轉(zhuǎn)化，形成普洱茶獨(dú)有品質(zhì)［1,8-9］。有研究者采用代謝組學(xué)方法研究普洱生茶貯存過(guò)程中內(nèi)含物質(zhì)的變化，結(jié)果顯示普洱生茶在貯存前期內(nèi)含物質(zhì)變化不大，貯存5 年后其內(nèi)含物質(zhì)才有明顯變化［10］。眾多研究結(jié)果表明，隨著貯存時(shí)間增加，普洱茶生茶的茶多酚和氨基酸的含量明顯減少，沒(méi)食子酸含量明顯增加［4-7,11］，本研究結(jié)果與前人的研究結(jié)果相符。馬冰凇等［4］研究發(fā)現(xiàn)，隨著貯存時(shí)間增加，普洱茶生茶的兒茶素總量及兒茶素單體中酯型兒茶素EGCG、GCG、ECG 的含量明顯下降，非酯型兒茶素GC、EC、EGC 的含量呈先上升再下降的趨勢(shì)，咖啡堿的含量則變化不大；孫世利等［7］研究結(jié)果表明，兒茶素總量、8 種兒茶素單體以及咖啡堿的含量均隨著貯存時(shí)間增加而減少；宋瑩等［11］的研究顯示，兒茶素總量和咖啡堿的含量變化不明顯。本研究中，2020 年產(chǎn)的普洱茶生茶的兒茶素總量、各兒茶素單體和咖啡堿的含量均比2014 年產(chǎn)普洱茶生茶高，這與孫世利等［7］的研究結(jié)果相符。馬冰凇等［4］、戚康標(biāo)等［6］研究表明，普洱茶生茶的可溶性糖含量隨著貯存時(shí)間增加呈下降趨勢(shì)，孫世利等［7］的研究結(jié)果則相反，而宋瑩等［11］研究表明可溶性糖含量變化不明顯。本研究結(jié)果顯示，2014 年產(chǎn)普洱生茶的可溶性糖含量比2020 年的高。綜上，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的增加，普洱茶生茶中茶多酚、兒茶素、氨基酸含量呈減少趨勢(shì)，沒(méi)食子酸含量呈增加趨勢(shì)，咖啡堿、可溶性糖等的含量可能受茶葉原料、貯存條件和時(shí)間等影響而表現(xiàn)出不同的變化規(guī)律，這有待進(jìn)一步研究。

根據(jù)Denh am Harman 衰老的自由基學(xué)說(shuō)，其認(rèn)為衰老過(guò)程中的退行性變化是由于細(xì)胞正常代謝過(guò)程中產(chǎn)生的自由基的有害作用造成的［12］。天然抗氧化活性物質(zhì)被人體吸收后，能提高體內(nèi)相關(guān)抗氧化酶類(lèi)活性，可直接清除自由基［13］。國(guó)內(nèi)外大量研究結(jié)果表明，茶葉及其有效成分在體內(nèi)和體外均具有良好的抗氧化活性［14-19］。本研究以自然衰老小鼠為研究對(duì)象，探討不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶的體內(nèi)抗氧化能力。隨著年齡增長(zhǎng)，機(jī)體內(nèi)的器官逐漸衰竭，功能活性呈下降趨勢(shì)。ALT 和AST 分布于人體多個(gè)器官組織中，其中肝臟內(nèi)含量最多，當(dāng)肝組織細(xì)胞受到損傷時(shí)，肝臟細(xì)胞和血清中的ALT 和AST 活性會(huì)提高［19］。本研究結(jié)果顯示，儲(chǔ)存時(shí)間較長(zhǎng)的普洱茶生茶（2014 年）能極顯著降低老齡小鼠血清和肝臟的AST 活性，儲(chǔ)存時(shí)間較短的普洱茶生茶（2020 年）除了能極顯著降低老齡小鼠血清和肝臟的AST 活性外，還能極顯著降低肝臟的ALT 活性。衰老的自由基理論認(rèn)為，隨著年齡的增加，體內(nèi)抗氧化酶活性及非酶性抗氧化物含量下降，過(guò)氧化產(chǎn)物增多，自由基生成和消除失衡，氧自由基大量積聚，造成組織細(xì)胞的過(guò)氧化損傷［20］。SOD 是機(jī)體的主要抗氧化酶，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，SOD 能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷［21］。本研究結(jié)果表明，灌胃普洱茶生茶后老齡小鼠肝臟的SOD 活性有所增加，但與正常對(duì)照組相比沒(méi)有達(dá)到顯著差異，且對(duì)老齡小鼠血清中的SOD 活性沒(méi)有影響。GSH是機(jī)體內(nèi)最重要的非酶性抗氧化物，具有清除自由基、解毒、促進(jìn)鐵質(zhì)吸收，維持紅細(xì)胞膜的完整性、脫氧核糖核酸的生物合成、細(xì)胞的正常生長(zhǎng)發(fā)育及細(xì)胞免疫等多種重要生理功能。GSH 是一種低分子清除劑，可清除O2-、H2O2、LOOH，因而GSH 含量是衡量機(jī)體抗氧化能力的重要因素［22］。本研究結(jié)果表明，通過(guò)灌胃普洱茶生茶后，老齡小鼠肝臟的GSH 含量與正常對(duì)照組相比均有所增加，其中2014 年產(chǎn)普洱茶生茶的GSH 含量極顯著增加。MDA 含量常常可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度［23］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同云南古茶樹(shù)茶水浸提液后，給茶組小鼠肝臟的MDA 含量與正常對(duì)照組相比均有所下降，但未達(dá)到顯著差異?？梢?jiàn)，不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶均具有體內(nèi)抗氧化作用并有所差異，這可能與其存放過(guò)程中兒茶素生化成分變化有關(guān)，不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶的體內(nèi)抗氧化作用分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

與2020 年普洱茶生茶相比，2014 年普洱茶生茶的水浸出物（40.11%）、氨基酸（3.15%）、咖啡堿（4.18%）、GC（0.21%）、EGC（0.84%）、C（0.61%）、EC（2.46%）、EGCG（6.90%）、CG（0.10%）、非酯型兒茶素（4.11%）、酯型兒茶素（13.44%）和兒茶素總量（17.55%）均極顯著下降，而沒(méi)食子酸含量（0.38%）極顯著增加，且隨著存放時(shí)間的增加普洱茶生茶的生化成分差異較大。2014 年普洱茶生茶可極顯著地降低老齡小鼠血清的AST 活性（21.49 U/L），提高肝臟GSH 的含量（77.28 μmol/gprot）、SOD 活性，降低肝臟的AST 活性和MDA 含量；2020 年普洱茶生茶可極顯著地降低老齡小鼠血清的AST 活性（29.50 U/L），提高肝臟的SOD 活性和GSH 含量，降低肝臟的ALT 和AST 活性以及肝臟和血清中的MDA 含量。不同儲(chǔ)存時(shí)間普洱茶生茶均具有體內(nèi)抗氧化作用并表現(xiàn)出差異，儲(chǔ)存時(shí)間較長(zhǎng)的普洱茶生茶提高體內(nèi)抗氧化酶類(lèi)SOD 活性和提高GSH含量的能力較強(qiáng)。