祝孟川,馮文婷,余強(qiáng)

(信陽(yáng)市中心醫(yī)院1.普外二科,2.急診外科, 河南 信陽(yáng) 464000)

胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在國(guó)內(nèi)發(fā)病率約為0.431‰,死亡率約為0.296‰[1]。目前,根治術(shù)仍是胃癌治療的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2],雖有較好的臨床療效,但術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)極高。術(shù)后復(fù)發(fā)是胃癌患者術(shù)后死亡的主要因素,為改善患者術(shù)后生存率,篩選胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素非常必要。甘氨酸脫羧酶(GLDC)在甘氨酸裂解過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,Chen等[3-4]發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌組織中GLDC可發(fā)揮一定抑癌作用,其表達(dá)水平與癌癥的預(yù)后有一定的相關(guān)性。Min等[5]發(fā)現(xiàn),GLDC在胃癌細(xì)胞系中也可發(fā)揮抑癌功效,但癌組織中GLDC蛋白水平是否與胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)尚需深入探討。鑒于此,本研究選取106例行根治術(shù)治療的胃癌患者,探究其胃癌組織GLDC蛋白表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系,以期為胃癌患者臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后,選取2016年3月至2019年3月在本院行根治術(shù)治療的胃癌患者106例,男75例,女31例;年齡29～81歲,中位年齡62歲;TNM分期Ⅰ期31例,Ⅱ期58例,Ⅲ期17例;腫瘤最大直徑2.4～7.5(4.39±0.78)cm。納入標(biāo)準(zhǔn):(1) 均行組織病理學(xué)分析確診為胃癌;(2) 均為原發(fā)胃癌,滿足根治術(shù)指征并接受根治術(shù);(3) 術(shù)前未行放化療且無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移;(4) 均對(duì)本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):(1) 合并其他腫瘤;(2) 圍術(shù)期內(nèi)死亡;(3) 治療前3個(gè)月內(nèi)經(jīng)歷過(guò)其它手術(shù)或創(chuàng)傷;(4) 合并嚴(yán)重的肝、腎等臟器病變;(5) 合并傳染病、血液疾病、免疫疾病。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法檢測(cè)胃癌組織及切緣正常組織GLDC蛋白表達(dá)水平 將癌組織或切緣正常組織制成蠟塊,依次進(jìn)行切片、脫蠟、水化、抗原修復(fù)、孵育、顯色、蘇木素復(fù)染、脫水、封片、顯微鏡下觀察。依據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分×陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分對(duì)蛋白表達(dá)行半定量分析,染色強(qiáng)度評(píng)分:無(wú)著色0分,淡黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分;陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分:陽(yáng)性細(xì)胞占比≤5% 記0分,6%～25%記1分,26%～50%記2分,51%～75%記3分;>75%記4分;二者乘積<4分為低表達(dá),≥4分為高表達(dá)[6]。

1.2.2 術(shù)后復(fù)發(fā)的判斷 術(shù)后通過(guò)電話隨訪和門診復(fù)診觀察復(fù)發(fā)情況,術(shù)后復(fù)診前2年每3個(gè)月1次,隨后每6個(gè)月1次,結(jié)合癥狀、體征和組織病理學(xué)綜合診斷。

1.2.3 胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素分析 統(tǒng)計(jì)患者年齡、性別、腫瘤大小、病灶部位、lauren分型、T和N分期、分化程度、術(shù)后輔助化療、癌組織GLDC蛋白表達(dá)水平等,將其記為自變量,將胃癌根治術(shù)后是否復(fù)發(fā)記為因變量,分析自變量與因變量之間的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料以例表示,行χ2檢驗(yàn),若任一理論頻數(shù)>1且<5需對(duì)檢驗(yàn)校正;采用Cox回歸分析術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素;采用Kaplan-Meier生存曲線分析不同GLDC蛋白水平患者術(shù)后3年的復(fù)發(fā)率。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織與切緣正常組織GLDC蛋白表達(dá)水平比較

胃癌組織中GLDC蛋白低表達(dá)率(48.11%)高于切緣正常組織(3.77%)(P<0.05),見(jiàn)圖1。

A.胃癌組織;B.切緣正常組織圖1 胃癌組織與切緣正常組織GLDC蛋白表達(dá)(×400)Fig 1 GLDC protein expression in gastric cancer tissue and normal tissue at the incisal edge(×400)

2.2 不同臨床特征患者胃癌組織GLDC蛋白表達(dá)水平比較

腫瘤直徑≥5 cm、lauren分型為彌漫型、T3～T4分期 、N1～N3分期胃癌患者胃癌組織GLDC蛋白低表達(dá)占比均高于腫瘤直徑<5 cm、lauren分型為腸型或混合型、T1～T2分期 、N0分期胃癌患者(P<0.05),見(jiàn)表1。

表1 不同臨床特征患者胃癌組織GLDC蛋白表達(dá)水平比較 例Tab 1 Comparison of GLDC protein expression level in gastric cancer tissues of patients with different clinical characteristics cases

2.3 胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)率及復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組胃癌組織GLDC蛋白表達(dá)水平比較

106例胃癌患者根治術(shù)后隨訪3年,失訪3例(GLDC低表達(dá)2例,高表達(dá)1例),余103例,復(fù)發(fā)67例(GLDC低表達(dá)39例),未復(fù)發(fā)36例(GLDC低表達(dá)10例),復(fù)發(fā)率為65.05%(67/103)。復(fù)發(fā)組胃癌組織GLDC蛋白低表達(dá)占比高于未復(fù)發(fā)組(χ2=8.695,P=0.003)。

2.4 胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素分析

復(fù)發(fā)組腫瘤直徑≥5 cm、T3～T4分期、N1～N3分期占比均高于未復(fù)發(fā)組(P<0.05),行術(shù)后輔助化療占比低于未復(fù)發(fā)組(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)與臨床病理特征的關(guān)系 例Tab 2 Relationship between recurrence and clinicopathological characteristics of patients with gastric cancer after radical surgery cases

Cox分析結(jié)果顯示,腫瘤大小、T分期、N分期是胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素(P<0.05),術(shù)后輔助化療、胃癌組織GLDC蛋白高表達(dá)水平是其保護(hù)因素(P<0.05),見(jiàn)表3。

表3 Cox回歸分析Tab 3 Cox regression analysis

2.5 胃癌組織GLDC蛋白不同表達(dá)患者根治后3年復(fù)發(fā)的Kaplan-Meier曲線

GLDC蛋白低表達(dá)的胃癌患者根治術(shù)后3年復(fù)發(fā)率明顯高于GLDC蛋白高表達(dá)患者(Log-rank檢驗(yàn)χ2=10.801,P=0.001),見(jiàn)圖2。

圖2 GLDC蛋白高表達(dá)組與低表達(dá)組生存曲線Fig 2 Survival curve of GLDC protein high expression group and low expression group

3 討 論

胃癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤,手術(shù)是目前公認(rèn)唯一能治愈胃癌的方法[7],但即使行根治術(shù)治療,術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)率仍超過(guò)40%,而復(fù)發(fā)正是胃癌患者病死率高的重要原因[8],故分析胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素非常必要。

本研究表明,胃癌組織GLDC蛋白低表達(dá)率高于切緣正常組織,表明胃癌組織中GLDC會(huì)異常低表達(dá)。GLDC是一種甘氨酸代謝酶,其基因在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中突變,啟動(dòng)子脫氧核糖核酸發(fā)生了高度甲基化,抑制信使核糖核酸的轉(zhuǎn)錄,影響了基因表達(dá)與蛋白的合成,故胃癌組織中GLDC蛋白的表達(dá)水平下調(diào),本研究結(jié)果與Min等[5]報(bào)道的一致,證實(shí)了胃癌組織中GLDC蛋白低表達(dá)。李哲豐等[9-10]發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞、前列腺癌組織中,GLDC呈現(xiàn)高表達(dá),發(fā)揮促癌功效,與在胃癌組織中的表達(dá)水平和作用相反,可能與GLDC在不同類型的癌癥中的作用機(jī)制不同有關(guān),有待深入探討。

本研究顯示,胃癌組織GLDC蛋白表達(dá)水平與腫瘤大小、lauren分型、T分期、N分期相關(guān),且復(fù)發(fā)組癌組織GLDC蛋白低表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組,Cox分析顯示GLDC蛋白高表達(dá)是胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)的保護(hù)因素。GLDC基因在胃癌細(xì)胞中發(fā)揮抑癌基因功效,其GLDC基因組不僅參與細(xì)胞的增殖與分化、誘導(dǎo)細(xì)胞G1-S-G2分裂期阻滯,還可通過(guò)增強(qiáng)絲切蛋白的泛素化影響細(xì)胞骨架重塑,通過(guò)降低機(jī)體活性氧自由基的水平增強(qiáng)細(xì)胞的自噬能力發(fā)揮抑癌功效[11],且GLDC蛋白能抑制癌細(xì)胞的增殖、遷徙、浸潤(rùn)等行為,促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡,削弱癌細(xì)胞的擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移能力,進(jìn)而抑制腫瘤進(jìn)展,降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[12]。本研究Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示,胃癌組織GLDC 蛋白低表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率明顯高于高表達(dá)患者,進(jìn)一步證實(shí)了胃癌組織GDCL蛋白的表達(dá)水平與患者行根治術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性。此外,Cox多因素分析結(jié)果顯示,腫瘤大小、T分期、N分期均是胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素,術(shù)后輔助化療是保護(hù)因素。腫瘤直徑越大,浸潤(rùn)的范圍越廣,T分期級(jí)別越高,浸潤(rùn)的程度越深;N分期越高,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多,侵犯程度越大,越容易導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā);術(shù)后輔助化療可更徹底清掃手術(shù)時(shí)可能殘存的癌組織,提升根治切除率,與既往研究[13-15]結(jié)果一致。

綜上所述,GDCL蛋白在胃癌患者癌組織中表達(dá)水平下調(diào),在根治術(shù)后復(fù)發(fā)的胃癌患者癌組織中表達(dá)水平更低,GDCL蛋白表達(dá)水平、腫瘤大小、T分期、N分期、術(shù)后輔助化療均是胃癌患者根治術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素。建議臨床增加對(duì)胃癌組織GDCL蛋白低表達(dá)患者術(shù)后隨訪頻率,結(jié)合腫瘤直徑和T、N分期給予合理輔助化療方案,以降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),改善患者預(yù)后。