沈慧玲 楊樹江 王可

摘 要：近年來人參保健食品的開發(fā)呈上升趨勢，稀有人參皂苷是具有更強生物活性的人參皂苷次級代謝物，在天然植物中含量極少。本文綜述了稀有人參皂苷的轉(zhuǎn)化工藝，為人參的進一步合理開發(fā)提供理論基礎(chǔ)及技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞：人參；稀有人參皂苷；轉(zhuǎn)化工藝

Abstract： In recent years， the development of Panax ginseng C.A.Meyer. health food is on the rise. Rare ginsenosides are secondary metabolites of ginsenosides with stronger biological activity， and their content in natural plants is very small. In this paper， the conversion technology of rare ginsenosides is reviewed， which provides theoretical basis and technical reference for further rational development of ginseng.

Keywords： Panax ginseng C.A.Meyer.; rare ginsenosides; conversion process

人參（Panax ginseng C.A.Meyer.）是五加科（Araliaceae）人參屬植物，經(jīng)人工曬干之后的根和根莖可入藥[1]。人參由粗大的紡錘形主根和茂密細(xì)小的須根組成，其根狀莖通常較短，直立或斜上生長。我國是人參主產(chǎn)地之一，吉林、遼寧和黑龍江等地為其主要產(chǎn)區(qū)。因此，近年來受到國內(nèi)外學(xué)者們越來越多的重視，并成為國際醫(yī)藥市場中最重要的大宗中藥材品種之一。人參皂苷多樣化的結(jié)構(gòu)特點和多重功效作用被廣泛關(guān)注，是目前研究最為廣泛、深入，開發(fā)最為成功的人參有效成分。

人參皂苷是人參的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，單體形態(tài)多以白色粉末或無色結(jié)晶形式存在。人參皂苷因其母核結(jié)構(gòu)的差異分為四環(huán)三萜類的達(dá)瑪烷型、五環(huán)三萜的齊墩果烷型、奧克梯隆型皂苷，其中達(dá)瑪烷型皂苷占人參皂苷構(gòu)型的大部分。按四環(huán)母核上C-3、C-6、C-12、C-20四個羥基中無或有C-6位羥基取代，可分為原人參二醇型和原人參三醇型。原人參二醇型皂苷在C-6位沒有羥基取代，原人參三醇型皂苷在C-6位有羥基取代。根據(jù)原人參二醇型皂苷和原人參三醇型皂苷在C-20手性碳取代位置的差異，可進一步分為20（S）和20（R）構(gòu)型的人參皂苷[1]。目前，人參中鑒定出的皂苷有100余種，這100余種人參皂苷經(jīng)研究能夠顯著改善細(xì)胞氧化和刺激功能低下的生理系統(tǒng)，還能起到抑制腫瘤的作用以及促進腫瘤細(xì)胞向良性細(xì)胞方向分化。稀有人參皂苷是人參皂苷的次級衍生物，它在天然植物中的含量非常少，但它的活性相較于人參皂苷更強，具體包括了抗腫瘤、抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、保護神經(jīng)中樞、增強免疫力、改善記憶以及抗應(yīng)激等功能[2-7]。研究表明，人參經(jīng)口服后在體內(nèi)檢測到的僅為代謝后的稀有皂苷及其皂苷元。這些稀有人參皂苷更易被人體吸收。如能開發(fā)成保健食品，將帶來巨大的社會經(jīng)濟效益。

1 稀有人參皂苷的轉(zhuǎn)化工藝

1.1 熱處理法

熱處理法常用于炮制紅參、黑參等人參炮制品。人參皂苷水溶液經(jīng)水浴加熱處理后形成相應(yīng)C-20位去糖基次級皂苷，且C-20位去糖基皂苷回收率增加，同時熱處理增加了稀有人參皂苷的含量。

熱處理過程可引起氧化、水解、酯化、甲基化、乙?；?、羥基化和羰基化等反應(yīng)發(fā)生。利用化合物之間的相互轉(zhuǎn)變，改變各種化合物的比例，使藥物的活性提高或產(chǎn)生新的活性物質(zhì)。鮮參中常見的成分有人參皂苷Rb1、Rb2、Rd、Rg1、Re和Rf等。人參皂苷Rs3、Rs4和Rg5常見于處理后的人參中[8-9]。ZHANG等[10]將人參、西洋參和三七根部和莖葉經(jīng)熱處理后用酸溶液轉(zhuǎn)化人參皂苷。經(jīng)檢測，3種原植物中的小極性皂苷的含量在轉(zhuǎn)化后大于中極性皂苷的含量。

1.2 化學(xué)處理法

化學(xué)轉(zhuǎn)化法是指利用化學(xué)試劑使人參皂苷的側(cè)鏈在酸性或堿性條件下發(fā)生脫水、環(huán)和、雙鍵移位的反應(yīng)，該反應(yīng)能得到豐富的反應(yīng)產(chǎn)物。酸水解法、堿降解法是常用的化學(xué)轉(zhuǎn)化法。

1.2.1 酸水解法

酸水解法會使糖苷配基的結(jié)構(gòu)變化，形成原人參二醇型皂苷和原人參三醇型皂苷及C-20差向異構(gòu)[20（S）和20（R）構(gòu)型的人參皂苷][11]。相較于熱處理法，酸水解的產(chǎn)物更加豐富且產(chǎn)量較高。傳統(tǒng)的酸水解法大多采用高濃度無機酸，會使人參皂苷的苷元側(cè)鏈發(fā)生脫水、環(huán)和、雙鍵移位，從而導(dǎo)致產(chǎn)物復(fù)雜多變。其缺點是反應(yīng)劇烈且對環(huán)境污染嚴(yán)重，目前研究的熱點在于選用更加綠色環(huán)保且高效低廉的水解酸溶液。例如，天然產(chǎn)物中的有機酸有無需分離就可以直接用于功能性食品領(lǐng)域的優(yōu)勢。成樂琴等[12]選用與10 mg·mL-1原人參二醇組皂苷等體積的乳酸水溶液進行酸水解反應(yīng)，水浴加熱后的水解產(chǎn)物用飽和Na2CO3水溶液中和后用等體積的水飽和正丁醇反復(fù)萃取，濃縮萃取液后得到人參皂苷Rg3。根據(jù)正交試驗設(shè)計得到制備Rg3的適宜條件。人參皂苷Rg3可以分離得到兩種構(gòu)型的人參皂苷，即20（R）-Rg3和20（S）-Rg3。其還進一步研究了實驗條件的變化對人參皂苷Rg3向兩種不同構(gòu)型人參皂苷的轉(zhuǎn)化過程的影響。

1.2.2 堿降解法

堿降解法反應(yīng)較為溫和，通過使C-3位的糖苷鍵發(fā)生斷裂，得到僅含一個糖基的次級人參皂苷或皂苷元。所得產(chǎn)物易于分離純化，且產(chǎn)物沒有構(gòu)象的變化等優(yōu)點。

李緒文等[13]采用高沸點有機溶劑將西洋參莖葉總皂苷在強堿條件下溶解，在常壓高溫條件下進行降解，經(jīng)正交試驗確定，20（S）-原人參二醇的最佳降解條件是m（NaOH）/m（西洋參莖葉總皂苷）=2.0，V（甘油）/m（西洋參莖葉總皂苷）為15.0；在235 ℃下反應(yīng)200 min經(jīng)硅膠柱色譜、乙酸乙酯結(jié)晶和ODS柱色譜分離，最終得到20（S）-原人參二醇，產(chǎn)率為5.01%。

1.3 微生物及酶轉(zhuǎn)化法

微生物及酶轉(zhuǎn)化法是利用微生物產(chǎn)生的某種酶或酶系來催化底物或外源化合物，使目標(biāo)初級產(chǎn)物產(chǎn)生更高的經(jīng)濟價值。微生物及酶轉(zhuǎn)化法具有培養(yǎng)難度低、種類多、靶向性強以及轉(zhuǎn)化效率高的優(yōu)點。

SONG等[14]從人參田中的土壤中分離出近150種微生物，并鑒定出一株生長迅速、繁殖力高和酶產(chǎn)率高的青霉屬菌株。此菌株具有很強的人參皂苷轉(zhuǎn)化能力。在pH值為7.0的條件下與人參皂苷Rd溫育后，使人參皂苷Rd轉(zhuǎn)化為人參皂苷CK。DUAN等[15]將蝸牛酶（內(nèi)切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶）與10%人參皂苷Rb1溶解于乙酸-乙酸鈉緩沖液中反應(yīng)。蝸牛酶選擇性切斷人參皂苷Rb1的β-D-吡喃葡萄糖苷鍵，得到人參皂苷CK。經(jīng)單變量實驗設(shè)計和響應(yīng)面方法確定了蝸牛酶將人參皂苷Rb1轉(zhuǎn)化為人參皂苷CK的最佳水解條件，即pH值為5.12，溫度為51 ℃，蝸牛酶∶底物為0.21，反應(yīng)時間為48 h。此外，添加1.0 mmol·L-1鐵離子可顯著改善蝸牛酶的酶解能力。在上述條件下，人參皂苷CK的最大轉(zhuǎn)化率達(dá)到89.7%。

目前對于20（S）型人參皂苷的研究較多，而對20（R）型人參皂苷的研究較少。實際上，具有不同化學(xué)構(gòu)型的人參皂苷通常表現(xiàn)出不同的生物活性。例如，人參皂苷20（R）-Rg3比人參皂苷20（S）-Rg3具有更有效的佐劑活性[16]。

1.4 Smith降解法

Smith降解法可以將碘酸鈉氧化苷的糖部分（具有鄰二羥基結(jié)構(gòu)）氧化為二元醛，并用四氫硼鈉還原生成相應(yīng)的二元醇。該二元醇可以通過簡單的縮醛結(jié)構(gòu)來降低糖苷鍵的穩(wěn)定性，從而在室溫下可以被稀酸水解，避免了劇烈的酸水解反應(yīng)，最終獲得原糖苷配基[17]。

ZHANG等[18]利用Smith降解法制備原人參二醇。其精密稱取50 g人參提取物，溶于4 L水中，加入217 g NaIO4后攪拌反應(yīng)280 min，過濾混合液后，先用硫酸溶液洗后再用水洗，沉淀物用750 mL 70%乙醇液溶解，加入17 g NaBH4室溫孵育17 h，用水稀釋，用2倍體積硫酸溶液調(diào)節(jié)pH放置過夜后經(jīng)乙酸乙酯萃取后經(jīng)硅膠柱色譜分離得到20（S）-原人參二醇。

2 結(jié)語

隨著人們對健康生活的追求越來越高，人參皂苷已經(jīng)不能滿足人們的需求，稀有人參皂苷具有更為豐富的生物活性，將人參皂苷轉(zhuǎn)化為稀有人參皂苷對于保健食品深開發(fā)有重要意義。人參皂苷的轉(zhuǎn)化在原材料的選擇方面也具有多樣化，作為副產(chǎn)物的人參莖葉、花蕾、果實部分都可以用于轉(zhuǎn)換稀有人參皂苷。化學(xué)轉(zhuǎn)化法的優(yōu)點是反應(yīng)產(chǎn)物多樣，可以根據(jù)需求得到不同的C-20位構(gòu)型人參皂苷，但該法反應(yīng)劇烈，并存在酸堿殘留、副產(chǎn)物較多、后期分離實驗難度大及對環(huán)境具有污染的缺點。目前，微生物及酶轉(zhuǎn)化法將人參皂苷轉(zhuǎn)化為稀有人參皂苷是研究的熱門，該法反應(yīng)溫和，專一性強，高效且對環(huán)境污染小。

參考文獻(xiàn)

[1]楊鑫寶，楊秀偉，劉建勛.人參中皂苷類化學(xué)成分的研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2013，15（5）：349-358.

[2]WANG R F，LI J，H H J，et al.Chemical transformation and target preparation of saponins in stems and leaves of Panax notoginseng[J].Journal of ginseng research，2018，42（3）：270-276.

[3]陶厚全，姚明，鄒壽椿，等.血管生成抑制劑Rg3對胃癌生長和轉(zhuǎn)移抑制作用的研究[J].中華外科雜志，2002，40（8）：602-608.

[4]辛穎，倪勁松，王新蕊，等.20（S）-人參皂苷Rg3抗B16黑色素瘤轉(zhuǎn)移的作用[J].吉林大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2004，30（4）：540-542.

[5]KIM J H，CHO S Y，LEE J H，et al.Neuroprotective effects of ginsenoside Rg3 against homocysteine induced excitotoxicity in rat hippocampus[J].Brain Res，2007，1136（1）：190-199.

[6]王庭富，孟正木.人參皂苷Rg3對免疫功能的影響[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，1999，30（2）：133-135.

[7]張晶，王世榮，陳全成，等.人參皂苷Rg3（R），人參皂苷Rg3（S）、Rg5、Rk1對乙醇致小鼠記憶阻礙改善作用的影響[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，28（3）：293-295.

[8]AN Y E，AHN S C，YANG D C，et al.Chemical conversion of ginsenosides in puffed red ginseng[J].LWT-Food Science&Technology，2011，44（2）：370-374.

[9]LEE G S，NAM K Y，CHOI J E.Ginsenoside composition and quality characteristics of red ginseng extracts prepared with different extracting methods[J].Med Crop Sci，2013，21（4）：276-281.

[10]ZHANG F X，TANG S J，ZHAO L，et al.Stem-leaves of Panax as a rich and sustainable source of less-polar ginsenosides：comparison of ginsenosides from Panax ginseng， American ginseng and Panax notoginseng prepared by heating and acid treatment[J].Journal of Ginseng Research，2021，45（1）：163-175.

[11]陳業(yè)高，張燕.人參達(dá)瑪烷型皂苷的化學(xué)[J].云南師范大學(xué)學(xué)報，2001，21（3）：39-42.

[12]成樂琴，金富標(biāo).檸檬汁輔助雪梨汁催化轉(zhuǎn)化原人參二醇組皂苷制備稀有人參皂苷Rg3[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2015，36（5）：82-86.

[13]李緒文，金永日，桂明玉，等.堿降解法制備抗癌活性化合物20（S）-原人參二醇[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報，2006，27（3）：478-481.

[14]SONG X l，WU H，PIAO X C，et al.Microbial transformation of ginsenosides extracted from Panax ginseng adventitious roots in an airlift bioreactor[J].Electronic Journal of Biotechnology，2017，26：20-26.

[15]DUAN Z G，ZHU C H，SHI J J，et al.High efficiency production of ginsenoside compound K by catalyzing ginsenoside Rb1 using snailase[J].Chinese Journal of Chemical Engineering，2018，26（7）：1591-1597.

[16]李雪，趙幻希，苗瑞，等.基于HPLC-HRMS/MSn/QqQ技術(shù)的人參皂苷Rb1化學(xué)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與途徑分析[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報，2017，38（10）：1730-1736.

[17]史公良，童然珣，趙余慶.人參稀有抗腫瘤皂苷制備方法的研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2006，8（6）：31-34.

[18]ZHANG J.Biotransformation of 20（ S ）-protopanaxatriol by Mucor spinosus and the cytotoxic structure activity relationships of the transformed products[J].Phytochemistry，2007，68（20）：2523-2530.