劉艷霞 梁文文 盧侖 劉建洋

摘 要：食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室為了更高效、準(zhǔn)確地開展實(shí)驗(yàn)，常會(huì)采用標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法。使用標(biāo)準(zhǔn)方法需要方法驗(yàn)證，使用非標(biāo)準(zhǔn)方法需要方法確認(rèn)。為了讓檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)更好地認(rèn)識(shí)方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的重要性，確保檢測(cè)方法的科學(xué)性與可靠性，更清楚地分辨方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的不同，本文對(duì)方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義、區(qū)別和參數(shù)進(jìn)行闡述，為食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室開展方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)提供參考。

關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)室；方法驗(yàn)證；方法確認(rèn)

Abstract： In order to carry out experiments more efficiently and accurately， the laboratories of food inspection and testing institutions often adopt standard methods and non-standard methods. Method validation is required when using standard methods and method verification is required when using non-standard methods. In order to let inspection and testing organizations better understand the importance of method validation and verification， to ensure the scientificity and reliability of the detection method， and more clearly distinguish the difference between method validation and verification， this paper compared method validation and verification based on definition，difference， parameter， which provided reference for the food testing laboratory to carry out the method validation and verification.

Keywords： laboratory; method validation; method verification

食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的重點(diǎn)工作是保障實(shí)驗(yàn)室的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)檢測(cè)方法有標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法（包含自制方法、改進(jìn)方法等）[1]。食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性[2]，通常會(huì)采用方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)兩種評(píng)定方法。然而，由于部分食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)管理水平差、技術(shù)能力低、檢驗(yàn)檢測(cè)知識(shí)不足，常采用單一的方法進(jìn)行合格評(píng)定，甚至有少部分食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)無法清楚地理解方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的概念和區(qū)別，使得食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)管理存在漏洞，檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果存在不確定性。

為了提高食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和可靠性，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)能力，本文對(duì)方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義、重要性、區(qū)別和參數(shù)進(jìn)行闡述，供食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)相關(guān)人員學(xué)習(xí)、理解。

1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義及重要性

1.1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義

方法驗(yàn)證是指實(shí)驗(yàn)室通過核查，能夠提供客觀、可靠、有效的證據(jù)，用以證明該實(shí)驗(yàn)室可以滿足某一檢測(cè)方法規(guī)定的所有條件[3]。目的是證明標(biāo)準(zhǔn)方法能夠被實(shí)驗(yàn)室使用[4]。簡單地說，方法驗(yàn)證是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法在食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的重現(xiàn)性、對(duì)特定方法的適應(yīng)性的確認(rèn)[5]，證明該實(shí)驗(yàn)室可以運(yùn)用該方法。

方法確認(rèn)是指實(shí)驗(yàn)室通過實(shí)驗(yàn)，能夠提供客觀的、足夠的證據(jù)予以證明某一檢測(cè)方法可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期，目的是對(duì)自制的方法或者標(biāo)準(zhǔn)方法經(jīng)過改進(jìn)后的方法是否能夠達(dá)到預(yù)期目的的證實(shí)過程。方法確認(rèn)的完成，表明實(shí)驗(yàn)室有足夠的技術(shù)能力重復(fù)已經(jīng)確認(rèn)的方法，并且能夠達(dá)到一定的性能水平。

如果實(shí)驗(yàn)室要使用標(biāo)準(zhǔn)方法開展實(shí)驗(yàn)，則需要進(jìn)行方法驗(yàn)證；如果實(shí)驗(yàn)室要使用非標(biāo)準(zhǔn)方法開展實(shí)驗(yàn)，則需要進(jìn)行方法確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室只有對(duì)將要使用的方法進(jìn)行方法驗(yàn)證或者方法確認(rèn)，并且符合《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求》和《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》規(guī)定，才具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Α?/p>

1.2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的重要性

1.2.1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有強(qiáng)制性

《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求》規(guī)定，使用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該進(jìn)行方法驗(yàn)證[6]；使用非標(biāo)準(zhǔn)方法（含自制方法、改進(jìn)方法等）前，應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)[7]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該保證優(yōu)先使用標(biāo)準(zhǔn)方法，并且保證使用的標(biāo)準(zhǔn)版本是有效的[8]。

1.2.2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有必要性

《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，應(yīng)該驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)方法在該實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的人員、儀器設(shè)備、試劑及環(huán)境狀態(tài)等條件下是否能夠獲得符合規(guī)定條件的結(jié)果[3]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法，如實(shí)驗(yàn)室自制方法、改進(jìn)方法等制定確認(rèn)程序[3]。

1.2.3 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果具有重要影響

實(shí)驗(yàn)室在使用某一方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果沒有經(jīng)過方法驗(yàn)證或方法確認(rèn)，可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)發(fā)生偏離，甚至造成檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤。所以，方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)不僅可以檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施設(shè)備、人員、環(huán)境和方法的適用性，而且可以保證數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性。

2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的區(qū)別

方法驗(yàn)證與方法確認(rèn)有相似之處，即都需要提供客觀、有效的證據(jù)以證明方法滿足要求。又有不同之處，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。

2.1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有不同的目的

方法驗(yàn)證的目的是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室是否有足夠的能力按照標(biāo)準(zhǔn)方法開展實(shí)驗(yàn)[9]。方法確認(rèn)的目的是證實(shí)實(shí)驗(yàn)室能否合理、合法地使用該非標(biāo)準(zhǔn)方法（包含自制方法、改進(jìn)方法等）[10]。

2.2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有不同的使用對(duì)象

方法驗(yàn)證的對(duì)象是標(biāo)準(zhǔn)方法和經(jīng)過確認(rèn)的非標(biāo)準(zhǔn)方法。方法確認(rèn)的對(duì)象非標(biāo)準(zhǔn)方法，包含修改的標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室自制的方法和超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法[3]。

2.3 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有不同的使用時(shí)機(jī)

方法驗(yàn)證的使用時(shí)機(jī)是實(shí)驗(yàn)室首次使用標(biāo)準(zhǔn)或者對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法有小幅改動(dòng)，如更換不同廠家的試劑或同類儀器設(shè)備。方法確認(rèn)的使用時(shí)機(jī)是實(shí)驗(yàn)室使用非標(biāo)準(zhǔn)方法之前或者使用標(biāo)準(zhǔn)方法但有較大改變，如儀器設(shè)備、使用試劑、環(huán)境條件等發(fā)生了改變。

3 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的參數(shù)

方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的參數(shù)有檢出限、定量限、正確度、測(cè)量不確定度、精密度、穩(wěn)健度以及線性范圍等，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)預(yù)期的用途，并且綜合考慮成本、風(fēng)險(xiǎn)和技術(shù)可行性方面進(jìn)行方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)。

3.1 檢出限

檢出限分為儀器檢出限與方法檢出限[11]。用儀器將特定分析物的信號(hào)從背景中識(shí)別出來，此時(shí)分析物最低的量為儀器檢出限。用某一方法將該分析物的被測(cè)定信號(hào)從基質(zhì)中識(shí)別出來，此時(shí)分析物最低的量為方法檢出限。確定檢出限的方法很多，較為常用的方法有目視評(píng)價(jià)法評(píng)估檢出限、空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法評(píng)估檢出限、校準(zhǔn)方程的適用范圍評(píng)估檢出限和信噪比法評(píng)估檢出限。

（1）目視評(píng)價(jià)法評(píng)估檢出限。在樣品空白中加入事先已知量的某分析物，實(shí)驗(yàn)室能夠在設(shè)定條件下準(zhǔn)確檢測(cè)出該分析物最低量的方法。

（2）空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法評(píng)估檢出限。實(shí)驗(yàn)室通過實(shí)驗(yàn)的方法，加入最低量的樣品空白或分析大量的樣品空白確定檢出限。定量檢測(cè)中檢出限的一般表示方法見表1。

（3）校準(zhǔn)方程的適用范圍評(píng)估檢出限。如果實(shí)驗(yàn)室在檢出限附近的樣品數(shù)據(jù)無法取得時(shí)，可以利用校準(zhǔn)方程的參數(shù)這一特性，評(píng)估儀器的檢出限。

（4）信噪比法評(píng)估檢出限。對(duì)于定量而言，使用已知某分析物含量的樣品的測(cè)量信號(hào)與空白樣品的測(cè)量信號(hào)進(jìn)行比較，確定實(shí)驗(yàn)室可以檢出的該分析物的最低量。常用的信噪比為3∶1或2∶1[3]。對(duì)于定性而言，可以在空白樣品中依次分別加入已知量的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制樣品的檢出率對(duì)添加濃度的曲線。

3.2 定量限

定量限通常分為儀器定量限與方法定量限。儀器能夠準(zhǔn)確檢出并且被精準(zhǔn)定量的分析物的最低濃度或最低量稱為儀器檢出限。特定基質(zhì)中、一定可信度內(nèi)，某方法能夠準(zhǔn)確檢出并且被定量的分析物的最低濃度或最低量稱為方法檢出限。一般將空白值加上10倍的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差或3倍的檢出限或者高于方法確認(rèn)中使用最低加標(biāo)量的50%作為定量限。

3.3 正確度

正確度是指實(shí)驗(yàn)室通過無窮多次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，參考值和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值之間的接近程度，常用偏倚表示，而偏倚又可以通過回收試驗(yàn)計(jì)算回收率進(jìn)行評(píng)估，并且回收率的偏差要在規(guī)定的范圍內(nèi)。

3.4 精密度

某條件下，對(duì)同一被測(cè)樣品或相似被測(cè)樣品多次重復(fù)測(cè)量所得數(shù)據(jù)或測(cè)得的數(shù)據(jù)之間的一致程度即為精密度，通常用標(biāo)準(zhǔn)方法、方差或者概率分布函數(shù)表示。精密度一般分為重復(fù)性精密度與再現(xiàn)性精密度[12]，重復(fù)性精密度體現(xiàn)的是測(cè)量結(jié)果的短期偏離程度，也常用于評(píng)估某一批次實(shí)驗(yàn)中多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)可能存在的差異；再現(xiàn)性精密度體現(xiàn)的是測(cè)量結(jié)果的長期復(fù)現(xiàn)性，即便是在不同的實(shí)驗(yàn)室，不同的實(shí)驗(yàn)人員使用不同的實(shí)驗(yàn)儀器，使用同一實(shí)驗(yàn)方法對(duì)同一樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有復(fù)現(xiàn)性。

3.5 穩(wěn)健度

穩(wěn)健度是指實(shí)驗(yàn)室某一條件發(fā)生變化時(shí)，對(duì)分析方法產(chǎn)生的影響程度，可以由實(shí)驗(yàn)室預(yù)先設(shè)計(jì)好某些微小的、可能的變化因素，并且逐一引入、逐一分析其影響而得出。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)室情況對(duì)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這些因素包含但不局限實(shí)驗(yàn)室溫濕度、試劑來源、試劑和樣品的保存方法、樣品的提取等。實(shí)驗(yàn)室對(duì)其分析出的可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素作逐一改變，進(jìn)行穩(wěn)健度試驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)某一因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該再次實(shí)驗(yàn)，確定影響因素對(duì)測(cè)定結(jié)果影響的允許極限。

3.6 線性范圍

用線性計(jì)算模型定義儀器響應(yīng)與濃度的關(guān)系，該計(jì)算模型的應(yīng)用范圍稱為線性范圍。校準(zhǔn)用的校準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)均勻地分布在關(guān)注的濃度范圍內(nèi)，并且能夠覆蓋該范圍，濃度范圍通常覆蓋關(guān)注濃度的0%～150%。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法做定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)至少包括6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)，并且線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.99。

3.7 測(cè)量不確定度

影響不確定度的因素有很多，如標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、試劑的純度、樣品的體積和質(zhì)量、樣品的預(yù)處理、試劑的加入等。測(cè)量不確定度重要的是明確指出被測(cè)量與對(duì)測(cè)量不確定度有貢獻(xiàn)的分量之間的關(guān)系、分量的分組和分解、評(píng)估測(cè)量不確定度的數(shù)學(xué)模型。通過測(cè)量不確定度進(jìn)行方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)已經(jīng)得到了廣泛的認(rèn)同。

4 結(jié)語

為了保證食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)及時(shí)開展方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)，這也是開展日常檢測(cè)工作的基本要求和必要前提。食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)該把方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)歸入質(zhì)量管理體系，用文件進(jìn)行規(guī)范，形成程序。通過方法驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室能夠證明有能力用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；通過方法確認(rèn)，實(shí)驗(yàn)室能夠證明有能力用非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能地完善方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的程序和參數(shù)，確保實(shí)驗(yàn)室所提供數(shù)據(jù)的可靠性、有效性和公正性。

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