張曉鴻 潘劍蕾 張曉強(qiáng) 王鈺歆 林慧純 王瑞

摘 要：建立兩種不同前處理方法聯(lián)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中12種農(nóng)藥的多殘留檢測方法。選擇西葫蘆作為空白基質(zhì)，進(jìn)行3個(gè)濃度添加水平（0.01 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1）的6個(gè)平行樣品試驗(yàn)，經(jīng)兩種不同前處理方法提取、凈化和濃縮，用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行上機(jī)檢測，選擇一對定量離子、兩對定性離子的MRM模式下監(jiān)測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在0.01～0.20 μg·mL-1線性關(guān)系良好，方法定量限均達(dá)到0.01 mg·kg-1，回收率在60%～120%，精密度在0.9%～13.4%。兩種不同前處理方法各有優(yōu)勢，適用于蔬菜中多農(nóng)藥殘留的檢測，可為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢機(jī)構(gòu)提供方法選擇和參考。

關(guān)鍵詞：蔬菜；農(nóng)藥殘留；前處理方法；氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

Abstract： Establishment of two different pretreatment methods combined with gas chromatography tandem mass spectrometry for the determination of multiple residues of 12 pesticides in vegetables. Zucchini was selected as a blank substrate for six parallel sample tests at three concentration levels （0.01 mg·kg-1， 0.05 mg·kg-1， 0.10 mg·kg-1）. After being extracted， purified， and concentrated by two different pretreatment methods， gas chromatography tandem mass spectrometry （GC-MS-MS） was used for machine detection. One pair of quantitative ions and two pairs of qualitative ions were selected for monitoring under MRM mode， and external standard method was used for quantification. The results showed that the linear relationship was good in the range of 0.01～0.20 μg·mL-1， the limit of quantitation was 0.01 mg·kg-1， the recovery was in the range of 60%～120%， and the precision was in the range of 0.9%～13.4%. The two different pretreatment methods have their respective advantages. They are suitable for the detection of multi pesticide residues in vegetables and can provide method selection and reference for agricultural product quality inspection institutions.

Keywords： vegetable; pesticide residues; pretreatment method; gas chromatography tandem mass spectrometry

我國作為農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)消費(fèi)大國，近年來食品安全狀況雖有了顯著改善，但隨著果蔬產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展和產(chǎn)量的提高，農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題仍層出不窮，影響著人們“舌尖上的安全”[1]。

農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)作為保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的堅(jiān)強(qiáng)后盾，建立高效、快速、準(zhǔn)確和靈敏的蔬菜農(nóng)藥多殘留定性定量檢測方法十分必要。由于蔬菜、水果、食用菌等不同樣品的基質(zhì)效應(yīng)不同，各類型儀器條件的靈敏度、精確度等也不同，樣品前處理過程和儀器類型的選擇會(huì)直接影響到最終的定性和定量結(jié)果[2]。

農(nóng)藥殘留檢測前處理方法中常用的主要有固相萃取法[3]、固相微萃取法[4]、凝膠滲透色譜法[5]等，目前ANASTASSIADES等[6]發(fā)明的QuEChERS前處理檢測技術(shù)，由于其快速、簡便、廉價(jià)、高效、穩(wěn)定和安全等優(yōu)點(diǎn)已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)殘檢測過程中。常用的農(nóng)殘檢測儀器方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液質(zhì)聯(lián)用法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS/MS）等[7]，而氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用可更好地發(fā)揮兩者的優(yōu)勢，有效地排除基質(zhì)干擾，簡化前處理過程，提高檢測效率，可分析果蔬菌、動(dòng)物源食品及其加工品等復(fù)雜基質(zhì)中的農(nóng)殘[8]。

本文就選取傳統(tǒng)的手動(dòng)QuEChERS法和全自動(dòng)固相萃取儀進(jìn)行對比，結(jié)合氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，對方法準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度進(jìn)行比較和分析，以期更好地滿足食用農(nóng)產(chǎn)品檢測技術(shù)工作需求，實(shí)現(xiàn)多種更加高效、快速、準(zhǔn)確的方法用于多農(nóng)藥殘留檢測，為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢機(jī)構(gòu)提供方法選擇和參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈（色譜純，德國Merck公司）；丙酮（色譜純，德國Merck公司）；氯化鈉（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；無水硫酸鎂（分析純，CNW公司）；乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA，Agilent公司）；固相萃取鹽包（含氯化鈉0.1 mg，硫酸鎂0.4 mg，檸檬酸鈉0.11 g、檸檬酸氫二鈉0.05 g）；凈化內(nèi)管（含硫酸鎂0.6 mg，PSA 0.1 g）；陶瓷均質(zhì)子顆粒；0.45 μm微孔濾膜（有機(jī)相）；50 mL塑料離心管；15 mL塑料離心管。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（Agilent 6890A-7000B，配電子轟擊源EI）；電子天平（SQP/PRACTUM2102-1CN，北京賽多利斯公司）；全自動(dòng)萃取儀（SiO-6512，北京本立科技有限公司）；自動(dòng)勻漿機(jī)（海斯特公司）；高速離心機(jī)（Sigma公司）；氮吹儀（美國Organomation Associ-ates公司）；旋渦混合器（姜堰市康健醫(yī)療器具有限公司）。

1.3 農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液

1.3.1 混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液

蠅毒磷、聯(lián)苯菊酯、蟲線磷、百治磷、滅線磷、特丁硫磷、艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑、甲氰菊酯、異丙威和仲丁威12種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，濃度為50 mg·L-1，購于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司（CNW）。

1.3.2 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈?，加?.0 mL相應(yīng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液復(fù)溶，過微孔濾膜。基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。空白基質(zhì)溶液取樣量與相應(yīng)的樣品處理取樣量一致。

1.4 前處理方法

1.4.1 前處理方法一（手動(dòng)QuEChERS法）

準(zhǔn)確稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL塑料離心管中，加入20 mL乙腈用自動(dòng)勻漿機(jī)提取

2 min，加入5～7 g氯化鈉，再劇烈振蕩1 min，將離心管放入離心機(jī)，于10 000 r·min-1離心3 min。移取6 mL上層乙腈提取液于15 mL離心管中，加入300 mg PSA，旋渦振蕩1 min后于9 000 r·min-1離心3 min。移取4.00 mL上清液于試管中，50 ℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，用丙酮定容?.00 mL，混勻，過0.45 μm濾膜，供GC-MS-MS測定。

1.4.2 前處理方法二（全自動(dòng)固相萃取法）

準(zhǔn)確稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL塑料離心管中，加入陶瓷均質(zhì)子，加入4 mL一級水，再加入10 mL乙腈，最后加入固相萃取鹽包后插入凈化內(nèi)管后迅速搖勻1 min后置于全自動(dòng)固相萃取儀，上機(jī)提取凈化后，移取凈化內(nèi)管內(nèi)上層清液

2 mL，50 ℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，用丙酮定容?.00 mL，混勻，過0.45 μm濾膜，供GC-MS-MS測定。

1.5 GC-MS-MS儀器條件

色譜柱：HP-5MS（30 m×25 mm，0.25 μm）；載氣：氦氣（純度為99.999%，流量為1.1 mL·min-1）；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1.0 μL；離子源：EI；采集方式：MRM；離子源溫度：280 ℃；前后四極桿溫度：150 ℃；加熱器溫度：280 ℃；碰撞氣：氮?dú)猓髁浚?.5 mL·min-1）；淬滅氣：氦氣（流量：2.25 mL·min-1）；升溫程序：初始溫度60 ℃，保持1 min后以40 ℃·min-1升至120 ℃，然后以5 ℃·min-1升至310 ℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 監(jiān)測離子對

將12種農(nóng)藥的單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液在三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀上采用SCAN的方法進(jìn)樣，找到特征離子，再打碎一次，進(jìn)行產(chǎn)物離子掃描，找到下一個(gè)離子組成離子對，利用儀器自動(dòng)優(yōu)化功能找到最佳碰撞能量后，采用MRM方法進(jìn)行樣品采集。常規(guī)檢測只需一組定量和定性離子對即可，本研究采用兩組定性離子對，可更加準(zhǔn)確定性。12種農(nóng)藥的監(jiān)測離子對信息見表1。

2.2 線性范圍和定量限

分別用前處理方法一和二對空白基質(zhì)（以西葫蘆為例）進(jìn)行提取、凈化后吹干，加入一系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度分別為0.01 mg·L-1、0.02 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1和0.20 mg·L-1，上機(jī)測試后繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到曲線相關(guān)系數(shù)。以信噪比S/N=10時(shí)的進(jìn)樣溶液質(zhì)量濃度為最低定量濃度，樣品經(jīng)過兩種前處理方法1.4.1和1.4.2分別提取后，經(jīng)儀器檢測確定方法的定量限，結(jié)果見表2。

2.3 加標(biāo)回收率

為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性，以西葫蘆為空白基質(zhì)，稱取6個(gè)平行樣品，各自添加以上12種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加3個(gè)濃度水平，分別為0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1（定量限、5倍定量限和10倍定量限），依照上述兩種前處理方法1.4.1和1.4.2分別制備提取液，上機(jī)檢測，采用單點(diǎn)外標(biāo)法對農(nóng)藥定量。根據(jù)6次平行試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得到平均回收率，結(jié)果見表3。

2.4 精密度

以西葫蘆為空白基質(zhì)，稱取6個(gè)平行樣品，各自添加以上12種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加3個(gè)濃度水平，分別為0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1，依照上述兩種前處理方法1.4.1和1.4.2分別制備提取液，上機(jī)檢測，根據(jù)6次平行試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得到相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），用來衡量方法的精密度，結(jié)果見表4。

2.5 結(jié)果比較

兩種前處理方法的實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果進(jìn)行比較，從效率上對比，以完成一批10個(gè)樣品的前處理為例，傳統(tǒng)手動(dòng)QuEChERS法與自動(dòng)固相萃取儀法均需約2 h，而自動(dòng)固相萃取儀法可在提取和凈化過程節(jié)省一定的人力；在線性范圍、準(zhǔn)確度、靈敏度等方面二者均能滿足所檢測蔬菜中12種農(nóng)藥的日常檢測要求，但從精密度結(jié)果可看出，方法一的RSD值總體比方法二均相對較高，且仲丁威和百治磷用方法一處理結(jié)果的精密度存在超過10%的情況，由于傳統(tǒng)手動(dòng)QuEChER法在提取、凈化和濃縮等步驟中存在人為操作的不一致性，而全自動(dòng)固相萃取法能完成12個(gè)樣品的同步實(shí)驗(yàn)，可降低人為操作的不穩(wěn)定性，因此后者的平行性較好，結(jié)果精密度較高。

3 結(jié)論

本研究中兩種不同的前處理方法結(jié)合GC-MS-MS技術(shù)，檢測結(jié)果均能滿足GB/T 27404—2008[9]和中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告2386號[10]中關(guān)于回收率、精密度、定量限的要求，適用于準(zhǔn)確快速地測定蔬菜中12種農(nóng)藥多殘留。方法一傳統(tǒng)手動(dòng)QuEChERS法操作簡單，回收率高，但在平行性控制上存在人工的提取和凈化步驟，影響結(jié)果的精密度；方法二采用全自動(dòng)固相萃取儀，可同時(shí)操作12個(gè)樣品的自動(dòng)提取和凈化，減少了人為操作的不平行性和隨機(jī)誤差，精密度較高，回收率也均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

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