韓麗麗,張 平,王 芳,陳珊珊,扈瑞春,張紹菊

(1.河北省廊坊市人民醫(yī)院腎內(nèi)科,河北 廊坊 065000;2.河北省廊坊市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,河北 廊坊 065000)

腎衰竭是各種原因?qū)е履I功能損傷和進(jìn)行性惡化而使其不能完成正常生理功能的疾病,在重癥監(jiān)護(hù)室的患者發(fā)病率可高達(dá)30%左右,分急性和慢性2種,發(fā)病原因較多,包括手術(shù)、外傷、感染、藥物過敏等[1-2]。腎衰竭患者在不同階段的表現(xiàn)各不相同,早期患者無任何癥狀,或僅表現(xiàn)為乏力、夜間排尿次數(shù)增加、食欲減退,隨著疾病的進(jìn)展,中晚期患者可出現(xiàn)明顯癥狀,如消化道癥狀、口有尿味、乏力頭暈、四肢麻木、皮膚干燥瘙癢,容易出現(xiàn)骨病、高血鉀,威脅患者的生命健康安全[3-4]。腎衰竭患者的預(yù)后因人而異,目前尚缺乏有效、快速預(yù)測(cè)評(píng)估患者預(yù)后的方法和指標(biāo)。成纖維細(xì)胞生長因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)屬于近年在腎臟疾病中研究較多的一種參與血磷調(diào)節(jié)的成纖維細(xì)胞因子,同時(shí)也是一種分泌蛋白,可導(dǎo)致腎衰竭患者鈣磷代謝紊亂,在心血管疾病中可反映冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度和預(yù)后,FGF23高表達(dá)水平可影響腎衰竭患者生存,死亡風(fēng)險(xiǎn)較高,因此認(rèn)為FGF23與腎衰竭預(yù)后有關(guān)[5-6]。食欲素A(orexin A)屬于神經(jīng)多肽類激素,可能經(jīng)腎臟清除,生理功能主要是刺激進(jìn)食,在肥胖、肝癌、肺損傷常見報(bào)道,關(guān)于在腎衰竭中的表達(dá)變化國內(nèi)外罕見報(bào)道[7]。骨形態(tài)發(fā)生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)作為骨誘導(dǎo)劑的生物學(xué)功能較多,如在骨骼疾病中可修復(fù)骨缺損,同時(shí)在腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)中具有較強(qiáng)的腎、神經(jīng)再生效應(yīng),作為重要的抗纖維化因子,在腎衰竭患者中可維持腎臟功能,改善預(yù)后,因此,該因子可能具有評(píng)估腎衰竭預(yù)后的作用[8-9]?；诖?本研究旨在探討FGF23、orexin A、BMP-7在腎衰竭患者中的表達(dá)水平及與臨床預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2020年4月—2021年4月我院收治的腎衰竭患者65例為研究組,其中男性30例,女性35例,年齡50～65歲,平均(56.35±5.11)歲,體重指數(shù)20～25,平均22.35±1.25,高血壓28例,高血脂36例;另選同期65名健康體檢人群為對(duì)照組,男性36例,女性29例,年齡50～65歲,平均(55.48±5.41)歲,體重指數(shù)20～25,平均22.55±1.36,高血壓23例,高血脂30例。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。所有研究對(duì)象均知情同意且簽署知情同意書。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):①研究組患者符合《腎衰竭診斷治療學(xué)》[10]的診斷標(biāo)準(zhǔn),患者有明確慢性腎病史,明顯貧血,食欲下降、四肢乏力、尿量減少、活動(dòng)后心悸、氣短等癥狀,實(shí)驗(yàn)室檢查白細(xì)胞數(shù)增高、血小板降低、細(xì)胞沉降率加快,尿滲透壓降低比重低,尿量減少每日1 000 mL以下,白蛋白減少,血磷增高,血肌酐超過133 μmol/L,同時(shí)經(jīng)X線尿路平片、造影、腎穿刺活檢檢查確診;②年齡≥50歲。

排除標(biāo)準(zhǔn):①存在嚴(yán)重心、肝臟器疾病和嚴(yán)重感染、貧血者;②存在消化道疾病需腸內(nèi)外營養(yǎng)支持者;③接受腎臟移植治療和存在惡性腫瘤者。

1.3方法 取靜脈血5 mL,自然凝固10 min后以3 500 r/min離心10 min,取上清,采用臻科生物FGF23酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)ZK-0066試劑盒、帛科BMP-7 ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)FGF23、BMP-7,取酶標(biāo)板,設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)孔加標(biāo)準(zhǔn)液、待測(cè)樣品孔加40 μL的稀釋液和10 μL待測(cè)樣品、空白孔不加試劑,輕晃混勻后在37 ℃下溫育30 min,加洗滌液靜置30 s后棄去液體并甩干,反復(fù)5次,處空白孔外,每孔加50 μL酶標(biāo)試劑,再次溫育、洗滌,反復(fù)5次,每孔加入顯色劑A、B,各50 μL,混勻后在37 ℃下避光顯色15 min,每孔再加50 μL終止液,以450 nm波長測(cè)量各孔的吸光度。

空腹取研究對(duì)象靜脈血3 mL,置于乙二胺四乙酸紫色抗凝管中,顛倒搖勻后加到有抑肽酶的干凈試管內(nèi),再次顛倒搖勻,離心后取血漿,采用研尊生物食欲素A ELISA檢測(cè)試劑盒、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)ELISA試劑盒檢測(cè)orexin A、CRP,設(shè)置并標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔、空白孔并分別加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品、空白,有混勻后靜置120 min,洗滌液洗滌,每孔加入10 μL的第一抗體工作液,混勻后在37 ℃下靜置60 min,反復(fù)5次,再每孔加入100 μL的酶標(biāo)工作液,37 ℃下靜置30 min,再次洗滌5次后加入100 μL的底物工作液,37℃下避光反應(yīng)15 min,每孔加100 μL終止液混勻,用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)吸光值。

1.4觀察指標(biāo) 比較2組FGF23、orexin A、BMP-7及相關(guān)指標(biāo)表達(dá)水平,相關(guān)指標(biāo)包括血肌酐、尿酸、血尿素氮,然后對(duì)65例患者進(jìn)行1年的隨訪,將死亡和進(jìn)行腎移植記為預(yù)后不良組,腎衰竭患者生存和未進(jìn)行腎移植記為預(yù)后良好組,比較不同腎衰竭患者不同預(yù)后的臨床資料,并進(jìn)行單因素分析,包括患者的性別、年齡,測(cè)量患者的身高體重并計(jì)算體重指數(shù),詢問并記錄患者有無高血壓、高血脂等。抽取患者靜脈血5 mL,采用BIOBASE全自動(dòng)生化分析儀BK-280檢測(cè)血肌酐、尿酸、血尿素氮。分析FGF23、orexin A、BMP-7與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后的相關(guān)性,并采用COX回歸分析影響腎衰竭患者預(yù)后不良的多因素,繪制FGF23、orexin A、BMP-7預(yù)測(cè)腎衰竭患者預(yù)后不良的接受者操作特性曲線(receiver operating characteristic curve,ROC)圖。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn);FGF23、orexin A、BMP-7與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后的相關(guān)性采用Pearson分析;采用COX回歸分析影響腎衰竭患者預(yù)后不良的多因素,繪制ROC曲線圖預(yù)測(cè)FGF23、orexin A、BMP-7對(duì)腎衰竭患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組FGF23、orexin A、BMP-7及相關(guān)指標(biāo)表達(dá)水平比較 與對(duì)照組比較,研究組FGF23、orexin A表達(dá)水平及血肌酐、尿酸、血尿素氮、CRP水平較高,BMP-7表達(dá)水平較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組FGF23、orexin A、BMP-7及相關(guān)指標(biāo)表達(dá)水平比較Table 1 Comparison of expression levels of FGF23, orexin A, BMP-7 and related indexes in two groups

2.2腎衰竭不同預(yù)后患者的臨床資料比較 經(jīng)1年的隨訪,預(yù)后良好組48例,預(yù)后不良組17例,患者性別,年齡,體重指數(shù),有無高血壓、高血脂等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與預(yù)后良好組比較,預(yù)后不良組患者血肌酐、尿酸、血尿素氮、CRP、FGF23、orexin A表達(dá)水平較高,BMP-7表達(dá)水平較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 腎衰竭不同預(yù)后患者的臨床資料比較Table 2 Comparison of clinical data of patients with different prognoses of renal failure

2.3影響腎衰竭患者預(yù)后不良的單因素COX回歸分析 FGF23、orexin A、BMP-7與腎衰竭患者預(yù)后不良有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

2.4FGF23、orexin A、BMP-7與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后的相關(guān)性分析 FGF23、orexin A與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后呈正相關(guān),BMP-7與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后呈負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表4。

2.5影響腎衰竭患者預(yù)后不良的多因素分析 以患者預(yù)后不良為因變量,FGF23、orexin A、BMP-7水平為協(xié)變量,建立預(yù)后COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型,經(jīng)COX回歸分析,FGF23、orexin A是影響腎衰竭患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,BMP-7是保護(hù)因素,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表5,6。

表6 影響腎衰竭患者預(yù)后不良的多因素分析Table 6 Multivariate analysis of factors affecting poor prognosis in patients with renal failure

2.6FGF23、orexin A、BMP-7預(yù)測(cè)腎衰竭患者預(yù)后不良的ROC曲線 FGF23、orexin A、BMP-7AUC分別為0.920、0.697、0.849,對(duì)腎衰竭患者預(yù)后不良具有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值見表7,圖1。

表7 FGF23、orexin A、BMP-7預(yù)測(cè)腎衰竭患者預(yù)后不良的ROC曲線Table 7 ROC curves of FGF23, orexin A, and BMP-7 for predicting poor prognosis in patients with renal failure

圖1 FGF23、orexin A、BMP-7預(yù)測(cè)腎衰竭患者預(yù)后不良的ROC曲線圖

3 討 論

腎臟是人體最主要的排泄器官,具有內(nèi)分泌功能,可通過尿液排出體內(nèi)多余水分,調(diào)節(jié)人體的電解質(zhì)和酸堿平衡,腎衰竭在臨床可由多種疾病共同發(fā)展而成,患者血液可出現(xiàn)高凝狀態(tài),引發(fā)心血管疾病,嚴(yán)重時(shí)可影響患者的生命安全[11-12]。對(duì)于腎衰竭目前常以藥物、透析、腎移植進(jìn)行治療,雖然血液透析和腎移植技術(shù)在不斷提高,但提高腎衰竭患者的生存率仍為醫(yī)學(xué)界的一大難題[13]。

FGF23由骨細(xì)胞產(chǎn)生,并作用于腎臟,能夠調(diào)節(jié)磷和鈣離子的重吸收,經(jīng)過大量的研究顯示,多數(shù)疾病均可改變循環(huán)中FGF23的表達(dá)水平,在心血管疾病中,FGF23高表達(dá)水平與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān),可導(dǎo)致心臟功能出現(xiàn)異常,在腎病中,FGF23高表達(dá)水平可增加心血管風(fēng)險(xiǎn)[14-15]。orexin A作為神經(jīng)多肽,是具有調(diào)節(jié)人體食欲的信號(hào)分子,當(dāng)人體處于饑餓狀態(tài)時(shí),orexin A的表達(dá)水平可升高[16]。BMP-7又名成骨蛋白1,是由431個(gè)氨基酸組成的糖蛋白,屬于轉(zhuǎn)化生長因子β家族的一員,具有異位成骨作用,后有研究顯示,BMP-7對(duì)腎臟具有保護(hù)作用,但機(jī)制尚不明確[17]。

本研究通過對(duì)腎衰竭患者和健康人群進(jìn)行FGF23、orexin A、BMP-7檢測(cè),結(jié)果顯示,腎衰竭患者的FGF23、orexin A表達(dá)水平較正常體檢人群高,而腎衰竭患者的BMP-7表達(dá)水平較正常體檢人群低,表明FGF23、orexin A在腎衰竭患者中呈現(xiàn)高表達(dá)水平,BMP-7呈現(xiàn)低表達(dá)水平。腎衰竭患者由于腎臟清除、代謝能力下降,腎功能降低,出現(xiàn)FGF23清除障礙,腎臟對(duì)磷的重吸收功能降低后導(dǎo)致磷增多,刺激骨分泌FGF23,導(dǎo)致FGF23呈現(xiàn)高表達(dá)水平。orexin A是調(diào)節(jié)食欲的主要激素,可促進(jìn)食欲,而食欲減退是腎衰竭患者常見的癥狀,一般推理下,認(rèn)為腎衰竭患者由于食欲降低,食欲素水平應(yīng)該呈低水平,本研究顯示orexin A呈高表達(dá)水平,由于orexin A屬于神經(jīng)多肽激素,可能由腎臟進(jìn)行清除,而腎衰竭患者腎功能降低,因此,orexin A呈高表達(dá)水平可能與腎臟對(duì)orexin A的清除能力下降有關(guān),但其主要機(jī)制需進(jìn)一步研究。卿山林等[17]在腎衰竭患者的治療對(duì)BMP-7的影響的研究表示,腎衰竭患者在治療前BMP-7的表達(dá)水平較高,經(jīng)過治療后可降低,通過調(diào)節(jié)BMP-7表達(dá)水平,可改善患者腎功能。本研究經(jīng)1年的隨訪,與預(yù)后良好組比較,預(yù)后不良組尿酸、FGF23、orexin A表達(dá)水平較高,BMP-7表達(dá)水平較低,表明尿酸、FGF23、orexin A、BMP-7與腎衰竭患者的預(yù)后有關(guān)。尿酸是機(jī)體尿液中的代謝產(chǎn)物,與腎功能密切相關(guān),研究表明,尿酸升高時(shí),大量的尿酸會(huì)在腎小管結(jié)晶沉積,可進(jìn)一步造成腎功能下降[18]。本研究結(jié)果顯示,FGF23、orexin A與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后呈正相關(guān),BMP-7與腎衰竭患者臨床不良預(yù)后呈負(fù)相關(guān),并經(jīng)COX回歸分析,FGF23、orexin A是影響腎衰竭患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,BMP-7是保護(hù)因素,同時(shí)通過ROC曲線圖分析,FGF23、orexin A、BMP-7 對(duì)腎衰竭患者預(yù)后不良具有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。袁仲飛等[19]研究表示,FGF23是影響腎病患者發(fā)生過不良心血管事件的危險(xiǎn)因素,通過檢測(cè)該水平制定干預(yù)方案,能有效改善患者的預(yù)后。李琳等[20]的研究也表示,FGF23可加速冠狀動(dòng)脈鈣化,增加心血管事件風(fēng)險(xiǎn),對(duì)腎衰竭患者進(jìn)行FGF23水平檢測(cè),可對(duì)患者的疾病進(jìn)行診療和預(yù)測(cè)預(yù)后。BMP-7可抑制足細(xì)胞損傷,在腎功能逐漸降低的腎衰竭患者中,通過BMP-7抑制多種蛋白因子的依賴物抵消轉(zhuǎn)化生長因子β1介導(dǎo)的腎小管上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,從而減緩疾病進(jìn)展,因此屬于腎衰竭

患者的保護(hù)因素,對(duì)腎衰竭患者及進(jìn)行BMP-7檢測(cè),對(duì)患者的診療和預(yù)后具有重要意義。

綜上所述,腎衰竭患者FGF23、orexin A表達(dá)水平較高,BMP-7表達(dá)水平較低,同時(shí)與患者的預(yù)后關(guān)系密切,可預(yù)測(cè)患者的預(yù)后結(jié)局,對(duì)患者的治療和預(yù)后具有重要意義。