姜 遙，林玉婷，梁家源，王立忠，李博文，陳 艷

（韶關(guān)學院，廣東 韶關(guān) 512000）

蟯蟲病是兒童常見的寄生蟲病之一，高發(fā)于夏秋季節(jié)[1]，特別是在溫帶氣候地區(qū)更為嚴重[2]。據(jù)調(diào)查研究顯示，全球蟯蟲病的發(fā)病率達4% ～28%[3]。人群對蟯蟲普遍易感，但在4 ～7 歲兒童中感染率最高[4]，其原因主要與蟯蟲病“易治難防”、易反復感染和感染途徑多的特性有關(guān)。我國溫度、濕適宜度的東南和西南地區(qū)是蟯蟲病的主要流行區(qū)（發(fā)病率≥5.00%）[4]。蟯蟲感染危害人類的身心健康。對于兒童來說，輕中度的蟯蟲感染對其生長發(fā)育影響較小，而重度的蟯蟲反復感染1 年以上則會導致兒童生長發(fā)育滯后[5]。蟯蟲也可發(fā)生異位寄生。已有相關(guān)報道顯示蟯蟲寄生可致闌尾炎、陰囊炎、子宮內(nèi)膜炎、陰道炎、泌尿系統(tǒng)感染等[6-9]。不僅兒童，成人在感染蟯蟲后亦可造成嚴重后果。例如，已有報道肝蟯蟲感染誤診為結(jié)腸腺癌肝轉(zhuǎn)移[10-11]及增加患焦慮癥、抑郁癥和睡眠障礙的風險[12]等。蟯蟲卵大小約為（50 ～60 μm）×（20 ～30 μm），卵殼無色透明，有兩層殼質(zhì)，蛋白質(zhì)膜光滑[13]，在外界環(huán)境中具有較強的抵抗力。蟯蟲卵可以在涼爽、潮濕的環(huán)境中存活6 ～8 周，而在干燥的環(huán)境中只能存活幾天[14]。蟯蟲卵對消毒劑的強抵抗力[15]和在外界環(huán)境中的高存活率[16-17]給蟯蟲病的反復發(fā)作創(chuàng)造了條件。蟯蟲感染的監(jiān)測一直是國內(nèi)外關(guān)于寄生蟲感染重點實施的項目。蟯蟲卵的體外保存時效既是影響臨床檢測的一個重要因素，也可能是引起蟯蟲病反復發(fā)作的因素?；谶@兩個因素，現(xiàn)將在4 ℃冰箱及其他兩個溫度環(huán)境中，新鮮蟯蟲卵樣本保存條件和時間對蟲卵檢出率的影響作一分析，為蟯蟲病普查和實驗室檢測提供參考依據(jù)，同時探討蟯蟲卵保存時長與蟯蟲“易治難防”、反復感染的關(guān)系，為蟯蟲感染高發(fā)人群的衛(wèi)生保健工作提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采取分層整群抽樣法對2021 年4 月廣東省韶關(guān)市共5 個幼兒園的兒童開展蟯蟲感染調(diào)查。在家長、老師知情同意的情況下，對調(diào)查的兒童采用透明膠紙肛拭法采集蟯蟲卵并進行鏡檢，檢測出的陽性標本即為本次蟯蟲卵形態(tài)觀察的來源。

1.2 方法

1.2.1 鏡檢規(guī)則 選取玻片上中下三個片區(qū)為鏡檢觀察區(qū)，每天對鏡檢區(qū)域進行一次觀察，記錄蟯蟲卵的形態(tài)。

1.2.2 樣本保存環(huán)境與方法 需鏡檢的樣本一部分密封保存于4 ℃的恒溫冰箱中，另一部分密封避光保存于平均氣溫為32℃的夏季環(huán)境和平均氣溫為18℃的秋季環(huán)境中。

1.2.3 蟲卵形態(tài)改變的判斷[18]（1）新鮮蟯蟲卵：卵殼大小正常，輪廓清晰，內(nèi)含一條胚蚴，胚蚴結(jié)構(gòu)清晰，邊緣光滑，常見緩慢蠕動。（2）胚蚴形態(tài)改變：胚蚴結(jié)構(gòu)模糊，蠕動消失，邊緣不光滑，有裂縫出現(xiàn)。（3）卵殼內(nèi)有空泡：內(nèi)容物皺縮未充盈滿卵殼，水分流失，出現(xiàn)不同形狀、大小的空隙。

1.2.4 密封蟯蟲卵玻片方法 將玻片放置在密封性良好的鐵盒中，用保鮮袋密封鐵盒。

1.3 觀察指標

觀察不同季節(jié)（夏季、秋季）室溫下蟯蟲卵的形態(tài)變化及4 ℃冷藏保存下蟯蟲卵的形態(tài)變化。

2 結(jié)果

2.1 不同季節(jié)室溫下蟯蟲卵的形態(tài)變化

在最高37℃、最低28℃、平均氣溫32℃以及空氣濕度為91% 的夏季環(huán)境中，避光保存2 d 后蟯蟲卵卵殼內(nèi)的胚蚴等內(nèi)容物消失，卵殼增厚，體積變小，但邊緣仍光滑整齊，此時的空殼與氣泡相似，已無蟯蟲卵輪廓，不能判斷為陽性。詳見表1。在最高24℃、最低12℃、平均氣溫為18℃以及空氣濕度為71% 的環(huán)境下，避光保存2 d 蟯蟲卵形態(tài)改變率為50.0%，但仍能判斷為陽性。避光保存5 d，卵殼內(nèi)胚蚴等內(nèi)容物消失，卵殼增厚，體積變小，邊緣光滑整齊，此時的空殼與氣泡相似，已無蟯蟲卵輪廓，不能判斷為陽性。為提高檢測結(jié)果的準確率，建議類似此環(huán)境條件下2 d 內(nèi)完成檢測。詳見表2。

表1 夏季室溫（28 ～37 ℃）下蟯蟲卵的形態(tài)變化

表2 秋季室溫（12 ～24 ℃）下蟯蟲卵的形態(tài)變化

2.2 4℃冷藏保存下蟯蟲卵的形態(tài)變化

蟯蟲卵在4 ℃冷藏環(huán)境中保存40 d，胚蚴大部分形態(tài)無明顯改變，卵殼光滑，邊緣整齊。56 d 后胚蚴的形態(tài)變化明顯，邊緣毛糙，偶見蟲體裂解成塊狀，內(nèi)容物喪失嚴重，蟲卵體積皺縮變黑，但蟯蟲卵輪廓仍清晰可見，可判斷為可疑陽性。135 d 后蟯蟲卵形態(tài)同室溫保存2 d 后相似，不能判斷為陽性。詳見表3。

表3 4 ℃冷藏保存下蟯蟲卵的形態(tài)變化

3 討論

新鮮蟯蟲卵的低溫保存有利于保持其活性和形態(tài)，能延長有效檢測時間。本研究發(fā)現(xiàn)，蟯蟲卵密封在4 ℃的環(huán)境中保存40 d 后，大致形態(tài)仍清晰可辨。本研究表明了蟯蟲卵有較長的有效檢測時間。本研究的開展對于貧困地區(qū)或國家的蟯蟲檢測、蟯蟲感染的大范圍普查或集中檢測，以及標本集中困難和短時間內(nèi)的大量檢測有參考和指導意義。目前，國內(nèi)外對于蟯蟲易治難防和反復感染的原因討論較少，對于蟯蟲卵檢出率和防治措施的研究較多。人體對蟯蟲普遍無抵抗力，研究顯示感染蟯蟲后的驅(qū)蟲工作并不能一步到位，藥物治療6 個月后復查蟯蟲感染率回升至75.39%[1]。這可能與蟯蟲卵的傳播途徑多樣及體外存活力較強有關(guān)。據(jù)記錄，感染期蟯蟲卵在寒冷潮濕的環(huán)境中可保存6 ～8 周[14]，而在本研究中蟯蟲卵可在4 ℃的冰箱中密封保存40 d，在平均氣溫為18 ℃、空氣濕度為71% 的室內(nèi)環(huán)境中可密封保存2 d。在兒童寄生蟲感染率均在30% 以上的幼兒園進行物品（如玩具、床席、桌子）采樣及檢測，可發(fā)現(xiàn)蟯蟲卵的攜帶率為17.41%[19]。這表明，在適宜的條件下，蟯蟲卵可長時間存活于環(huán)境中，造成幼托機構(gòu)或家庭聚集性感染。蟯蟲卵可長時間存活或許與其蟲卵結(jié)構(gòu)有關(guān)。豬蛔蟲和蟯蟲同屬線蟲，豬蛔蟲同蟯蟲一樣殼質(zhì)較厚且透明，為雙層結(jié)構(gòu)，殼外包繞一層蛋白膜[20]。豬蛔蟲卵可在2% 的甲醛液、4 ℃的冰箱中存放5 年，5年后仍能孵出對動物具有感染力的幼蟲，其對外界環(huán)境的抵抗力相當強[21]。而血吸蟲卵即使卵殼薄，也可在4 ℃下1.2% 鹽水溶液冷藏儲存40 d 內(nèi)保持大部分形態(tài)無明顯改變，毛蚴孵出率均在70% 以上[22]。

不同溫度和濕度影響蟯蟲卵在外界環(huán)境中的存活時間，這與蟯蟲卵的地理分布有一定的關(guān)系。在2016—2018 年全國三十個省蟯蟲病的監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)，本病的好發(fā)氣候以亞熱帶季風氣候為主，氣候夏熱冬溫的江西南部和西南部地區(qū)的蟯蟲感染率為4.79% ～8.52%[4]；以亞熱帶季風性濕潤氣候為主的布宜諾斯艾利斯蟯蟲的感染率達34.7%[23]；以溫帶海洋性氣候為主的挪威蟯蟲的感染率達18%[24]。這些地區(qū)氣候的共同點是溫暖濕潤，最冷月平均氣溫也在0℃以上，全年降雨，濕度較高。有研究發(fā)現(xiàn)，在柏林地區(qū)，十月、十一月和十二月的蟯蟲感染率較高[25]。柏林在十月、十一月、十二月的溫度為0 ～14 ℃，濕度也在80% 以上，這與本研究中4 ℃的試驗條件較為接近。這些條件有利于蟯蟲卵在外界環(huán)境中保持活性。蟯蟲的反復感染不僅與當?shù)貧夂蛴嘘P(guān)，還與兒童的衛(wèi)生習慣和學校生活環(huán)境有密切的關(guān)系[26]。由于蟯蟲卵存在于肛門中，因此糞便中也可能攜帶蟯蟲卵。國外研究表明，家庭中兒童糞便處理方法與兒童生長發(fā)育之間有著密切的聯(lián)系，使用改進的兒童糞便處理方式（將兒童糞便沖入化糞池）可使五歲以下兒童發(fā)育遲緩的流行率降低10%，使嚴重發(fā)育遲緩的患病率降低13%[27]。調(diào)查顯示，我國揚州市改廁后的2009年比改廁前的2005 年寄生蟲病的發(fā)病率下降58.1%，其中蟯蟲病的發(fā)病率下降92.3%[28]。由此可見，無害化衛(wèi)生廁所的普及在蟯蟲病的預防中起到了重要的作用。而在偏遠地區(qū)，如我國云南省農(nóng)村義務學校，無害化衛(wèi)生廁所的普及率僅為63.58%[29]，這或許是該地區(qū)蟯蟲病高發(fā)的原因之一。蟯蟲易治難防、易反復感染，且在新型冠狀病毒疫情常態(tài)化的背景下，幼兒園更應提升衛(wèi)生保健工作的質(zhì)量，如提升保育員的衛(wèi)生素養(yǎng)，保證衛(wèi)生消毒工作的質(zhì)量[30]。當前，國內(nèi)外多用物理、生物方法及化學、植物性藥物對寄生蟲卵進行殺滅[31]。查鑒良等[32]研究發(fā)現(xiàn)，用過氧乙酸和1%次氯酸鈉處理，能大大降低蟯蟲卵的存活率。因此，推薦幼托機構(gòu)使用符合原國家衛(wèi)生部《次氯酸鈉類消毒劑衛(wèi)生質(zhì)量技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的次氯酸鈉類消毒劑對物體表面進行消毒，同時消毒后應用生活飲用水將殘留消毒劑擦凈。對于床席、被子等織物，建議進行陽光暴曬，時間不少于6 h[33]。

綜上所述，新鮮的蟯蟲卵標本密封置于4 ℃環(huán)境中，1 個月內(nèi)進行檢測仍能保持較好的觀察效果，臨床上可據(jù)此合理安排檢測時間。結(jié)合相關(guān)文獻，提示濕度高的季節(jié)可對室內(nèi)空氣進行降濕處理，從而減少蟯蟲反復感染的發(fā)生。