朱光正，張立功，楊中玉，李鵬飛，錢 軍(蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤外科，蚌埠 33000；蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院整形外科；通訊作者，E-mail:Qianjun5036@sina.com)

乳腺癌是當今全世界女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，中國新確診的乳腺癌病例占全球新診病例的12.2%，占全球所有乳腺癌死亡病例的9.6%[1]。截止2018年，乳腺癌已占全球各類型新發(fā)癌癥病例的11.6%，在女性癌癥死亡病例中占15%[2]，已成為威脅女性生命健康的頭號惡性腫瘤。因此聚焦乳腺癌新的診療及預測靶點具有重要意義。

CDC123(cell division cycle 123，C10orf7)，位于人的第10號染色體(10p14-p13)，是一種非典型ATP結(jié)合蛋白，是eIF2組裝所需的細胞周期調(diào)控因子[3]，為細胞周期進入S期所必需。CDC123可以促進eIF2g組裝到eIF2a來參與eIF2的生物發(fā)生，從而參與細胞周期的調(diào)控[4]。在相關(guān)文獻報道中CDC123被描述為乳腺癌的候選致癌基因[5]，并與其他疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如甲狀腺癌[6]、膠質(zhì)母細胞瘤[7]、二型糖尿病[8]等。然而，關(guān)于CDC123在乳腺癌中的作用機制研究卻鮮有報道。

Wnt/β-catenin通路是一種高度保守的信號通路，在控制胚胎和器官發(fā)育以及癌癥進展中起關(guān)鍵作用，其主要參與乳腺癌的增殖和轉(zhuǎn)移過程[9]。有研究表明，Wnt/β-catenin信號通路在多數(shù)乳腺癌中被激活，致癌的關(guān)鍵是β-catenin在細胞質(zhì)或核內(nèi)積累[10]。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelial-mesenchymal transition，EMT)與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥性有關(guān)[11]，研究認為癌癥的發(fā)展和轉(zhuǎn)移與E-cadherin表達下降和vimentin表達上調(diào)有關(guān)[12]。如Sun等[13]發(fā)現(xiàn)NuSAP1的高表達可以通過Wnt/β-catenin/EMT信號軸促進TNBC細胞的增殖和侵襲。綜上，乳腺癌多靶點診療的探索和發(fā)生發(fā)展機制仍是亟待解決的熱點問題。本研究通過探究CDC123在乳腺癌細胞和組織中的表達，聚焦于其在細胞層面對乳癌細胞生物學行為的影響，及其在乳癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制，從而為乳腺癌預防、診療及預后評估開拓新的分子靶點。

1 材料與方法

1.1 細胞與主要試劑

正常人乳腺細胞MCF-10A和乳腺癌細胞MCF-7、SKBR3、MDA-MB-231均采購于武漢普諾賽生命科技有限公司；DMEM培養(yǎng)基、DMEM/F12(1 ∶1)培養(yǎng)基、Opti-MEM、1%青霉素-鏈霉素均采購于美國Gibco公司；CCK-8細胞增殖-毒性檢測試劑盒、RIPA裂解液、PVDF膜、ECL化學發(fā)光底物試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、4%多聚甲醛組織固定液均購自北京蘭杰柯科技有限公司；si-RNA、NC均由上海吉瑪基因有限公司構(gòu)建；Lipofectamine2000和TRIzol Reagent購自美國Thermo Fisher Scientific科技公司；SYBR qPCR SuperMix Plus與Synthesis SuperMix試劑盒購自蘇州近岸蛋白科技股份有限公司；Western快速封閉液、Western一抗和二抗稀釋液、Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒均由上海碧云天生物技術(shù)有限公司提供；一抗(β-tubulin、β-catenin、c-myc、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)及二抗均購自美國Affinity Biosciences公司。

1.2 生物信息學分析

使用腫瘤免疫數(shù)據(jù)庫Timer2.0(http://timer.comp-genomics.org/)對CDC123在不同癌癥組織和相應癌旁組織中的表達量進行對比分析；在Kaplan-Meier plotter在線數(shù)據(jù)庫(http://kmplot.com/analysis)中繪制乳腺癌CDC123高低表達組患者的生存曲線；運用Ualcan數(shù)據(jù)庫(http://ualcan.path.uab.edu/)TCGA數(shù)據(jù)集，分析CDC123在不同乳腺癌類型中的表達；在Coexpedia數(shù)據(jù)庫(https://www.coexpedia.org/)中查詢CDC123可能參與的GO-BP過程；在GEPIA數(shù)據(jù)庫(http://gepia.cancer-pku.cn/)TCGA數(shù)據(jù)集中分析CDC123和CTNNB1相關(guān)性。

1.3 組織來源

收集2022年4-8月期間在蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)的16例乳腺癌患者的乳腺癌組織及癌旁對照組織。所有患者術(shù)前均未接受過放、化療，且病理確診為乳腺癌?；颊邩吮镜氖占淹ㄟ^蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院倫理委員會的批準(倫科批字[2022]第157號)。

1.4 實時熒光定量PCR檢測CDC123在乳腺癌組織和癌旁組織的表達差異

取適量乳腺癌組織和相應癌旁組織，采用Trizol-氯仿-異丙醇三步法提取組織勻漿中的總RNA并逆轉(zhuǎn)錄cDNA模板，β-actin為內(nèi)參，擴增條件為：95 ℃，20 s；60 ℃，30 s；72 ℃，60 s；共循環(huán)30次。使用2-ΔΔCt法分析CDC123 mRNA的相對表達量。CDC123上游引物：5′-TGTCATTCTTCCACTTCCTC-3′，下游引物：5′-TTCTGCTTCATCATCACTGT-3′；β-actin上游引物：5′-GTGGACATCCGCAAAGAC-3′，下游引物：5′-AAAGGGTGTAACGCAACTA-3′。

1.5 Western blot檢測正常乳腺細胞和乳腺癌細胞CDC123的蛋白表達水平

分別收集MCF-10A、SKBr3、MDA-MB-231和MCF-7細胞株離心后的細胞沉淀，使用RIPA裂解液冰上裂解提取細胞總蛋白，使用BCA試劑盒測定蛋白濃度后，加入上樣緩沖液，沸水浴使蛋白變性。取等體積上樣進行凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜后，快速封閉液封閉15 min，隨后在CDC123一抗(1 ∶1 000稀釋)和β-Tubulin(1 ∶1 000稀釋)一抗中4 ℃孵育過夜。次日在二抗(1 ∶3 000稀釋)中孵育2 h后曝光顯色，Image J行灰度值分析，得出各組細胞中CDC123基因蛋白的相對表達量。

1.6 細胞培養(yǎng)及分組轉(zhuǎn)染

MCF-7、MDA-MB-231在含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng)，SKBr3在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，MCF-10A在MCF-10A特殊培養(yǎng)基中培養(yǎng)；培養(yǎng)環(huán)境為37 ℃和5%CO2飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱。選取MCF-7細胞進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染對象為處于對數(shù)生長期的細胞，要求轉(zhuǎn)染時細胞融合程度達到70%以上，實驗分為control組(只轉(zhuǎn)染Lipofectamine2000)、NC組(轉(zhuǎn)染Lipofectamine2000和NC序列)及si-CDC123組(轉(zhuǎn)染Lipofectamine2000和si-RNA1序列)，其中si-CDC123組分為3個轉(zhuǎn)染序列組(si-RNA1、si-RNA2、si-RNA3)行效率檢測，詳細轉(zhuǎn)染構(gòu)建的NC序列為F:5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，R:5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′；si-RNA1序列為F:5′-GCCAGACAGUGAUGAUGAATT-3′，R:5′-UUCAUCAUCACUGUCUGGCTT-3′；si-RNA2序列為F:5′-GCCGUUUAUUCAUUGUACUTT-3′，R:5′-AGUACAAUGAAUAAACGGCTT-3′；si-RNA3序列為F:5′-GUGGCUCAUUGACUUUAAUTT-3′，R:5′-AUUAAAGUCAAUGAGCCACTT-3′。轉(zhuǎn)染步驟嚴格按照轉(zhuǎn)染說明書進行，轉(zhuǎn)染完成后同1.6項步驟用Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后各處理組MCF-7細胞的CDC123蛋白水平。

1.7 CCK-8增殖實驗

消化轉(zhuǎn)染后的各組細胞并計數(shù)后，調(diào)整細胞密度為3 000個/孔，分別接種于5塊96孔板培養(yǎng)。將CCK-8溶液分別在培養(yǎng)當天(Day0)、1 d(Day1)、2 d(Day2)、3 d(Day3)、4 d(Day4)加入各孔中，加入試劑后37 ℃孵育2 h。在波長450 nm下酶標儀檢測control組、NC組和si-CDC123組MCF-7細胞吸光度(OD)值，繪制增殖曲線圖。

1.8 Transwell和劃痕實驗

1.8.1 細胞遷移實驗 分別取對數(shù)生長期的control組、NC組、si-CDC123組的MCF-7細胞，調(diào)整細胞密度為1×104/孔，用無血清培養(yǎng)基懸浮于上層小室，下室加入含10%胎牛血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，取出上層小室，4%多聚甲醛固定15 min后，結(jié)晶紫染色液染色15 min，洗去多余染料，200倍顯微鏡下觀察透膜細胞數(shù)。

1.8.2 細胞侵襲實驗 將Materigel膠與無血清培養(yǎng)基按1 ∶8的比例稀釋，每孔加入60 μl的Materigel膠均勻覆蓋Transwell上層小室底部，培養(yǎng)1 h使之呈半凝固狀態(tài)，余步驟同Transwell細胞遷移實驗。

1.8.3 細胞劃痕損傷實驗 分別取對數(shù)生長期的control組、NC組、si-CDC123組的MCF-7細胞，調(diào)整細胞密度為5×105/孔接種于6孔板，種板待細胞隔夜長滿后，經(jīng)孔底垂直劃痕，PBS清洗后，37 ℃、5% CO2飽和濕度下培養(yǎng)0，24 h后取樣、拍照。劃痕愈合率=(1-24 h距離/0 h距離)×100%。

1.9 Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡

取control組、NC組、si-CDC123組的MCF-7細胞懸液(消化細胞使用無EDTA胰酶)，1 000 r/min離心10 min后收集細胞，PBS清洗2次，再次離心收集后染色，按照碧云天Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒說明書依次添加試劑，避光孵育15 min后上機檢測，并使用Flowjo軟件分析結(jié)果。

1.10 Western blot檢測Wnt/β-catenin信號通路和EMT標識基因相關(guān)蛋白表達

按1.6項步驟分別檢測control組、NC組和si-CDC123組MCF-7細胞中β-catenin、c-myc、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表達水平。

1.11 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 生信結(jié)果顯示CDC123在乳腺癌中表達上調(diào)并導致不良預后

腫瘤免疫數(shù)據(jù)庫Timer2.0分析結(jié)果顯示CDC123在乳腺癌和其他多種癌癥中相對癌旁正常組織高表達(P<0.05，見圖1)。同時UALCAN在線分析工具表明CDC123在乳腺癌組織中的表達明顯高于正常乳腺組織，且無論在Luminal型、HER2陽型還是三陰型乳腺癌組織中表達均高于正常乳腺組織(P<0.001，見圖2A)。進一步地，根據(jù)Kaplan-Meier plotter乳腺癌數(shù)據(jù)庫分析顯示，高表達CDC123的乳腺癌患者，其總生存期(OS)、無復發(fā)生存期(RFS)和無遠處轉(zhuǎn)移生存期(DMFS)均較低表達患者顯著下降(P<0.05，見圖2B)。

與癌旁組織相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001圖1 Timer2.0數(shù)據(jù)庫分析CDC123在各類癌癥中的表達水平Figure 1 Expression level of CDC123 in various cancers in Timer2.0 database

B.Kaplan-Meier在線分析CDC123高表達與乳腺癌患者預后的關(guān)系圖2 生物信息學分析CDC123在乳腺癌中的表達及預后Figure 2 Expression of CDC123 in breast cancer and its relationship with prognosis by bioinformatics analysis

2.2 乳腺癌組織與細胞中CDC123的表達水平

與癌旁組織相比，CDC123 mRNA的表達水平在乳腺癌組織中明顯增加，同時，Western blot結(jié)果顯示，與正常乳腺細胞MCF-10A相比，乳腺癌細胞SKBR3、MCF-7和MDA-MB-231的CDC123表達量顯著升高且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見圖3)。由于MCF-7細胞中CDC123表達升高最顯著，因此選擇MCF-7細胞進行轉(zhuǎn)染。結(jié)果顯示，si-RNA1對MCF-7細胞中CDC123基因的敲減效率最高，與control組和NC組相比，si-RNA1組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見圖4)。因此選擇轉(zhuǎn)染si-RNA1的MCF-7設為si-CDC123組進行后續(xù)實驗。

與癌旁組織比較，***P<0.001;與MCF-10A細胞比較，#P<0.05，##P<0.01圖3 CDC123在乳腺癌組織和細胞中的表達Figure 3 Expression of CDC123 in breast cancer tissues and cells

與control組比較，**P<0.01;與NC組比較，#P<0.05，##P<0.01圖4 轉(zhuǎn)染不同靶向的特異性si-RNA對乳腺癌MCF-7細胞CDC123干擾效果Figure 4 Effect of transfection of different targeted specific si-RNA on the interference of CDC123 in breast cancer MCF-7 cells

2.3 干擾CDC123表達抑制了乳腺癌細胞的增殖能力

CCK-8實驗結(jié)果顯示，與control組和NC組相比，si-CDC123組細胞增殖能力明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見圖5)，說明下調(diào)CDC123的表達抑制了MCF-7細胞的增殖活力。

與control組比較，*P<0.05;與NC組比較，#P<0.05圖5 干擾CDC123表達后對MCF7細胞增殖能力的影響Figure 5 Effect of interfering CDC123 expression on the proliferation of MCF7 cells

2.4 下調(diào)CDC123抑制了乳腺癌MCF-7細胞的侵襲、遷移能力

在細胞劃痕實驗中，si-CDC123組下調(diào)CDC123后MCF-7細胞24 h遷移距離較control組和NC組明顯降低(P<0.01，見圖6A)。Transwell遷移和侵襲實驗結(jié)果顯示，si-CDC123組MCF-7細胞的穿膜細胞數(shù)要顯著低于control組和NC組(P<0.01，圖6B、C)。以上結(jié)果表明，干擾CDC123表達后對乳腺癌細胞MCF7的侵襲、遷移能力有顯著抑制作用。

與control組比較，*P<0.05;與NC組比較，#P<0.05圖6 干擾CDC123抑制了乳腺癌細胞侵襲遷移能力Figure 6 Interference with CDC123 inhibits invasion and migration of breast cancer cells

2.5 敲低CDC123對乳腺癌細胞凋亡的影響

流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，與control組和NC組相比，si-CDC123組乳腺癌細胞早期和晚期凋亡率均增加(P<0.05，見圖7)，提示敲低CDC123可促進乳腺癌細胞凋亡。

與control組比較，*P<0.05;與NC組比較，#P<0.05圖7 干擾CDC123表達可促進乳腺癌細胞凋亡Figure 7 Interference of CDC123 expression promotes apoptosis of breast cancer cells

2.6 下調(diào)CDC123表達對Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白的影響

在Coexpedia數(shù)據(jù)庫中通過查詢CDC123基因參與的GO-BP過程發(fā)現(xiàn)其高表達可能與Wnt信號調(diào)控呈正相關(guān)。同時，在GEPIA數(shù)據(jù)庫的TCGA BRCA數(shù)據(jù)集中，分析提示CDC123和CTNNB1的基因表達存在相關(guān)性(見圖8A)?；诖耍覀儥z測了三組MCF-7細胞中Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白的變化。Western blot結(jié)果顯示，干擾CDC123表達后，MCF-7細胞中β-catenin、c-myc、cyclin-D1蛋白的表達量降低(P<0.05，見圖8B)。

與control組比較，*P<0.05;與NC組比較，#P<0.05圖8 下調(diào)CDC123表達對乳腺癌細胞Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白的影響Figure 8 Effects of down-regulating CDC123 expression on Wnt/β-catenin pathway-related proteins in breast cancer cells

2.7 下調(diào)CDC123表達對EMT相關(guān)蛋白的影響

Western blot結(jié)果顯示，與control組和NC組比較，si-CDC123組乳腺癌細胞中N-cadherin及Vimentin的表達下調(diào)，而E-cadherin表達增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見圖9)。表明CDC123可能通過激活Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控EMT促進乳腺癌細胞的增殖遷移能力。

與control組比較，*P<0.05;與NC組比較，#P<0.05圖9 Western blot法檢測下調(diào)CDC123對乳腺癌細胞EMT相關(guān)蛋白的影響Figure 9 Effect of down-regulation of CDC123 on EMT-related proteins in breast cancer cells by Western blot

3 討論

乳腺癌作為全身性疾病[14]，目前的主流治療手段還是以手術(shù)為主，配合化療、放療、內(nèi)分泌治療的個體化綜合治療方式。但目前，轉(zhuǎn)移性乳腺癌確定的相關(guān)生物標志物和已驗證的治療靶點只有ER、PR及HER2[15]。雖然內(nèi)分泌治療已經(jīng)大大降低了乳腺癌的復發(fā)和死亡率，但這種治療的原發(fā)性和獲得性耐藥仍然是一項重大難題[16]。針對復雜的乳腺癌發(fā)生發(fā)展機制，有限的內(nèi)分泌和靶向治療位點已無法滿足需要，探究乳腺癌新的致病基因，為乳腺癌提供新的治療靶標及預后監(jiān)測至關(guān)重要。

CDC123作為真核細胞周期調(diào)節(jié)因子之一，其生理功能主要是通過富集eIF2并結(jié)合eIF2γ從而調(diào)控細胞周期[17]，CDC123作為eIF2的“裝配伴侶”，下調(diào)CDC123后會使eIF2結(jié)合GTP和Met-tRNAiMet形成的eIF2三元復合物水平降低，這種eIF2活性復合物的降低會使細胞在應激誘導時更易死亡[18]。近年來諸多研究認為CDC123是乳腺癌[5]、肝癌[19]、甲狀腺癌[6]、絨癌[20]和膠質(zhì)母細胞瘤[7]的潛在致癌基因并與2型糖尿病[21]有關(guān)。但其在乳腺癌的作用機制還未見報道。本研究中我們通過對TCGA在線數(shù)據(jù)庫的分析發(fā)現(xiàn)CDC123在乳腺癌患者中表達上調(diào)，并與不良預后相關(guān)，同時對比我院乳癌患者的癌組織和癌旁組織中CDC123的表達量，也驗證了這一結(jié)果。為進一步探究CDC123對乳腺癌細胞生物學機制的影響，我們選取不同乳腺癌細胞系對CDC123的表達量進行篩選，最終以MCF-7細胞為研究對象，我們將CDC123-siRNA-1轉(zhuǎn)染其中后，發(fā)現(xiàn)干擾組較空白對照組和陰性對照組CDC123的相對表達量明顯降低，因此用于后續(xù)實驗。通過CCK-8實驗驗證干擾CDC123可以抑制乳腺癌細胞增殖能力；劃痕實驗和Transwell遷移、侵襲實驗結(jié)果顯示，干擾CDC123可以降低乳腺癌細胞的侵襲遷移能力；流式細胞儀檢測結(jié)果顯示下調(diào)CDC123后MCF-7細胞的凋亡率增加，同樣提示我們CDC123可促進乳腺癌細胞的惡性增殖。

Wnt信號傳導通路在超過50%的乳腺癌患者中被異常激活[22]，異常激活的Wnt/β-catenin信號通路可以促進癌癥干細胞更新、增殖和分化，從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展和耐藥性中發(fā)揮關(guān)鍵作用[23]。在經(jīng)典Wnt信號通路中，轉(zhuǎn)錄因子β-catenin的異常積累會導致其與T細胞特異性因子(TCF)、淋巴增強子結(jié)合因子(LEF)和共激活因子(如Pygopus和Bcl-9)相互作用，以觸發(fā)Wnt靶基因(如c-myc、Cyclin D1和CDKN1A)，導致TCF/LEF靶基因上調(diào)，進而引發(fā)早期癌癥[10]。本研究中我們發(fā)現(xiàn)在GEPIA TCGA BRCA數(shù)據(jù)集中CDC123的表達與β-catenin呈正相關(guān)，而Western blot結(jié)果也證實了這一點，說明CDC123的異常表達可能伴隨β-catenin的異常積累，從而促進早期乳癌的發(fā)生。作為Wnt/β-catenin信號通路的下游位點，c-myc是控制各種生物過程(例如增殖、分化和凋亡)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其信號的異常激活會引發(fā)癌癥在體內(nèi)外的生長和侵襲，此外，細胞凋亡抑制和細胞周期進程增強也被證明是與c-myc過表達有關(guān)[24]。同樣的，Cyclin D1也在癌癥中起到關(guān)鍵作用，Cyclin D1參與促進G1期的細胞周期進程，在腫瘤發(fā)生過程中具有多種生物活性，包括促進增殖、增強DNA損傷修復和刺激遷移[25]。而我們在細胞層面干擾CDC123基因的表達后，MCF-7細胞中c-myc、Cyclin D1的表達量也顯著降低，這些結(jié)果都提示CDC123可能在乳腺癌細胞中對Wnt/β-catenin通路起到正向調(diào)控作用，從而促進乳腺癌細胞的惡性增殖并促進乳癌的發(fā)生與發(fā)展。

上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是指細胞失去其上皮特征而獲得間充質(zhì)特征的過程，EMT與多種腫瘤特性相關(guān)，包括腫瘤起始、惡性進展、腫瘤細胞干性、腫瘤細胞遷移和對治療的耐藥性等[11]。相關(guān)研究指出E-鈣黏蛋白是一種重要的跨膜糖蛋白，是細胞黏附連接的關(guān)鍵成分，其表達缺失會導致細胞間失去接觸抑制，從而引起細胞運動性增加和癌癥晚期進展[26]。而N-鈣黏蛋白是介導細胞黏附并促進細胞遷移和侵襲的跨膜蛋白，其異常表達與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)化、黏附、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等方面密切相關(guān)[27]。此外，Vimentin波形蛋白有維持細胞質(zhì)形狀和完整性以及穩(wěn)定細胞骨架的作用，通常在間充質(zhì)細胞中表達，在癌癥轉(zhuǎn)移過程中普遍上調(diào)，在細胞黏附、遷移和信號傳導中起重要作用[28]。Chen等[29]發(fā)現(xiàn)RCC2可通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路和誘導EMT來促進乳腺癌的進展；Wang等[30]發(fā)現(xiàn)敲低KIF3B可通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路和EMT來抑制乳腺癌細胞增殖、遷移和侵襲。故我們推測高表達的CDC123可能會通過抑制癌細胞的上皮黏附蛋白E-cadherin，并促進間充質(zhì)標志蛋白N-cadherin與Vimentin的表達，來提高乳腺癌細胞的侵襲遷移能力。為了驗證這一的猜想，我們用Western blot法檢測發(fā)現(xiàn)下調(diào)CDC123之后，乳腺癌MCF7細胞中E-cadherin的表達上升而N-cadherin和Vimentin的表達下降，提示在乳腺癌細胞中干擾CDC123表達可以抑制腫瘤細胞EMT進程從而影響其侵襲遷移能力。

綜上，CDC123作為乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的促癌因子之一，其高表達可通過影響Wnt/β-catenin通路和EMT促進乳腺癌細胞的增殖、侵襲、遷移并抑制凋亡，同時高表達CDC123會造成乳癌患者的不良預后。因此我們推測CDC123可作為乳腺癌新的治療靶點，及患者的預后監(jiān)測指標。然而，本研究仍有一定的局限性，MCF-7不能代表所有的乳腺癌細胞，細胞實驗也并不完全等價等效于臨床實驗，CDC123對乳腺癌致癌的直接機制及其他作用通路還需要進一步探究。