周 全，謝慧嫻，梁曉玲，羅金紅，吳 華，吳 毅 ，余文華

（1.廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣州，510006；2.華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，武漢，430079）

暗褐彩蝠（Kerivoula furva）隸屬于翼手目（Chiroptera）蝙蝠科（Vespertilionidae）彩蝠亞科（Kerivoulinae），目前國(guó)內(nèi)分布于云南、廣西、江西、福建、廣東和臺(tái)灣，國(guó)外分布于越南、緬甸、柬埔寨、泰國(guó)和老撾等東南亞國(guó)家［1-2］。追蹤彩蝠屬蝙蝠在中國(guó)的分布?xì)v史發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期以來(lái)中國(guó)分布記錄僅有彩蝠（K.picta）和哈氏彩蝠（K.hardwickii）2 種［3-4］。Wu 等［5］發(fā)現(xiàn)了采集于海南和臺(tái)灣的泰坦尼亞彩蝠（K.titania）為中國(guó)分布新紀(jì)錄，李鋒等［6-7］相繼報(bào)道了該種在江西和廣東的新紀(jì)錄。隨后，Kuo等［8］將臺(tái)灣產(chǎn)彩蝠屬標(biāo)本命名為暗褐彩蝠，提出東南亞地區(qū)原有的哈氏彩蝠應(yīng)是一個(gè)復(fù)合群，并推測(cè)原中國(guó)分布的哈氏彩蝠應(yīng)是暗褐彩蝠。Yu等［9］采用系統(tǒng)發(fā)育學(xué)與形態(tài)學(xué)方法，分析了海南、江西、廣東三地的中國(guó)大陸彩蝠屬標(biāo)本，結(jié)果顯示上述標(biāo)本與臺(tái)灣的標(biāo)本聚為一支，形態(tài)特征亦與之相似，提示其實(shí)為暗褐彩蝠。那么，哈氏彩蝠和泰坦尼亞彩蝠到底在中國(guó)是否存在分布？中國(guó)幾種彩蝠的分類(lèi)與分布狀況如何？探討和核實(shí)上述問(wèn)題，十分必要。

本課題組近年來(lái)在中國(guó)中部和西南部區(qū)域開(kāi)展多次蝙蝠多樣性資源調(diào)查，其中于2017 年7 月在湖北省通山縣（6 只）和2021 年7 月在西藏林芝市墨脫縣（2 只）捕獲到一批彩蝠屬標(biāo)本，根據(jù)其外形、毛色和頭骨特征，并結(jié)合分子系統(tǒng)學(xué)證據(jù)，將該8 只彩蝠屬標(biāo)本鑒定為暗褐彩蝠，為該種在湖北和西藏分布的新紀(jì)錄。這一新發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步擴(kuò)大了暗褐彩蝠在中國(guó)的分布范圍，豐富了湖北和西藏翼手類(lèi)物種多樣性。同時(shí)，結(jié)合國(guó)內(nèi)外最新的研究結(jié)果，對(duì)中國(guó)現(xiàn)有彩蝠屬蝙蝠的分類(lèi)與分布進(jìn)行了探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 標(biāo)本采集

2017 年7 月27—29 日，于湖北省通山縣金家田金雞谷林道（29°22'18″ N，114°34'35″ E；海拔463 m）使用蝙蝠豎琴網(wǎng)采集6 只彩蝠屬標(biāo)本（5 ♀：GZHU 17141、17158、17161、17163、17165；1：17169）。2021 年7 月27—28 日，于西藏林芝市墨脫縣采集2只彩蝠屬標(biāo)本（1 性別不詳：GZHU 21205；1：21207），其中21205 號(hào)標(biāo)本（干尸）拾于該縣一地下停車(chē)場(chǎng)地面（29°18'50″ N，95°19'9″ E；海拔1 263 m），21207 號(hào)標(biāo)本為該縣白瑪崗東417 m 林道（29°19'8″ N，95°17'58″ E；海拔785 m）使用豎琴網(wǎng)捕獲。以上標(biāo)本現(xiàn)保存于廣州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院。同時(shí)，參考Wu 等［5］和李鋒等［6-7］使用的分子標(biāo)記方法，本研究使用部分館藏標(biāo)本（海南標(biāo)本編號(hào)IBHG 08279、08280；江西標(biāo)本編號(hào)GZHU 13239、13240、13241 以及廣東標(biāo)本編號(hào)GZHU 14131、14132）進(jìn)行后續(xù)分析（表1）。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本測(cè)量

根據(jù)哺乳動(dòng)物測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)［10-11］，使用數(shù)顯游標(biāo)卡尺（MNT-150，上海美耐特實(shí)業(yè)有限公司，精確到0.01 mm）對(duì)標(biāo)本外形和頭骨進(jìn)行測(cè)量，使用微型電子天平（JY-200，廣州艾瑞貿(mào)易有限公司，精確到0.01 g）進(jìn)行稱(chēng)量。測(cè)量指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)與Yu 等［9］一致，合計(jì)7 項(xiàng)外部形態(tài)測(cè)量指標(biāo)及13 項(xiàng)頭骨測(cè)量指標(biāo)。

2.2 DNA提取與擴(kuò)增

取約20 mg肝臟或肌肉樣品，使用通用型基因組提取試劑盒（AG21009，艾科瑞生物）提取總DNA。根據(jù)彩蝠亞科種類(lèi)在NCBI-nt數(shù)據(jù)庫(kù)基因物種覆蓋度，篩選線(xiàn)粒體細(xì)胞色素氧化酶亞基Ⅰ基因（COI）片段、線(xiàn)粒體細(xì)胞色素b基因（Cyt b）片段和核基因重組激活基因2（Rag2）片段為分子標(biāo)記。PCR引物、反應(yīng)體系和反應(yīng)程序參照Stadelmann等［12］和Yu等［9］設(shè)置。

2.3 系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析

使用Geneious 9.1.8 軟件［13］對(duì)測(cè)序文件人工拼接與校對(duì)，從NCBI-nt數(shù)據(jù)庫(kù)中下載中國(guó)現(xiàn)有分布的彩蝠屬蝙蝠的序列［5-9，14］（表1），同時(shí)下載哈氏彩蝠的序列［8］，采用MUSCLE［15］對(duì)序列矩陣排序比對(duì)，根據(jù)ModelFinder［16］確定3種分子標(biāo)記的最佳核苷酸替換模型分別為：TPM2+F+G4（COI）、TIM2+F+I+G4（Cyt b）和K3Pu+F+R2（Rag2）。IQ-TREE v2.0.3［17］構(gòu)建最大似然樹(shù)，自展1 000次估算節(jié)點(diǎn)支持度。基于不同分子標(biāo)記構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)均選用毛翼蝠（Harpiocephalus harpia）作為外群。

3 結(jié)果

3.1 暗褐彩蝠在西藏和湖北的新發(fā)現(xiàn)

3.1.1 外形及頭骨特征

體型較小，湖北雌性標(biāo)本（n=4）前臂長(zhǎng)（34.49±0.62）mm，雄性標(biāo)本（n=2）前臂長(zhǎng)分別為30.28、31.97 mm，西藏標(biāo)本前臂長(zhǎng)為33.86 mm（表2）。耳廓卵圓形，基部呈管狀，形似漏斗，耳屏細(xì)長(zhǎng)。體毛較長(zhǎng)、整體顯示為暗褐色，頭頂毛基為灰色，毛尖棕色；背毛毛基深褐色，毛尖淺灰色，腹毛基部暗褐色，毛尖黃灰色（圖1）。

圖1 暗褐彩蝠外形及頭骨特征Fig.1 External and skull characteristics of Kerivoula furva

頭骨較小，湖北雌性標(biāo)本顱全長(zhǎng)（14.79± 0.50）mm，雄性2 號(hào)標(biāo)本顱全長(zhǎng)分別為14.39、14.49 mm，西藏標(biāo)本顱全長(zhǎng)為14.14 mm（表2）。鼻吻部稍稍凹陷，腦顱部微微隆起、寬而低扁。上頜前2枚前臼齒略為退化，第一、第二上臼齒的前附尖、中附尖和后附尖正常，第三上臼齒后附尖缺失。下頜第一、第二下門(mén)齒為三尖型，第三下門(mén)齒較??；3枚下前臼齒著生于齒槽中，從前向后依次減小；第一下臼齒齒冠稍大于第二、第三下臼齒，也呈現(xiàn)依次減小趨勢(shì)（圖1）。齒式：2.1.3.3/3.1.3.3=38。上述標(biāo)本與早期采集的海南和臺(tái)灣標(biāo)本比較，其外形和頭骨特征基本一致。

表2 暗褐彩蝠的外形和頭骨測(cè)量數(shù)據(jù)對(duì)比Tab.2 Comparison of morphology and skull measurements of Kerivoula furva

3.1.2 系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析

將擴(kuò)增的線(xiàn)粒體基因COI（含GZHU 21205 標(biāo)本）、Cyt b和核基因Rag2片段序列基于最大似然法所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示，本研究所有標(biāo)本序列（包括原以泰坦尼亞彩蝠種名發(fā)表的海南、廣東和江西新紀(jì)錄標(biāo)本序列）均與采集于中國(guó)臺(tái)灣用于暗褐彩蝠新種發(fā)表的標(biāo)本序列聚為一支，自展值分別為82（COI）、100（Cyt b）和80（Rag2）（圖2）。同時(shí)，基于COI和Cyt b基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)也顯示，采于西藏墨脫的標(biāo)本與湖北標(biāo)本存在遺傳分化。COI基因結(jié)果提示GZHU 21207 標(biāo)本與緬甸標(biāo)本序列（KY086026）親緣關(guān)系較近（圖2A），Cyt b基因樹(shù)中提示與尼泊爾標(biāo)本（MH137391）較近（圖2B）。

圖2 基于COI、Cyt b 和Rag2 基因片段構(gòu)建的彩蝠屬最大似然樹(shù)Fig.2 Maximum likelihood phylogenetic trees of Kerivoula based on partial gene segments of COI、Cyt b and Rag2

3.1.3 暗褐彩蝠為西藏和湖北蝙蝠分布新發(fā)現(xiàn)

根據(jù)外形、毛色和頭骨特征比較，結(jié)合COI、Cyt b和Rag2基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育分析，證實(shí)上述8只彩蝠屬標(biāo)本應(yīng)為暗褐彩蝠，為該種在湖北和西藏分布的新紀(jì)錄。這一新發(fā)現(xiàn)，擴(kuò)大了該種在中國(guó)的分布范圍，豐富了湖北和西藏翼手類(lèi)物種多樣性。

3.2 彩蝠屬物種在中國(guó)的分類(lèi)與分布

3.2.1 中國(guó)彩蝠屬物種的分類(lèi)變動(dòng)

中國(guó)彩蝠亞科原記錄僅有彩蝠和哈氏彩蝠2種，前者在中國(guó)分布于貴州、福建、廣東、廣西和海南；后者分布于云南、四川、廣西和福建［3，18］。Bates等［10］將采集于柬埔寨的一種彩蝠類(lèi)標(biāo)本根據(jù)形態(tài)學(xué)特征發(fā)表新種，命名為泰坦尼亞彩蝠，隨后Wu 等［5］依據(jù)形態(tài)和分子證據(jù)，將采集于海南和臺(tái)灣的彩蝠類(lèi)標(biāo)本鑒定為泰坦尼亞彩蝠，并作為中國(guó)翼手目新紀(jì)錄予以報(bào)道，李鋒等［6-7］基于分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)及形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)該種在江西和廣東也有分布，使中國(guó)彩蝠亞科種類(lèi)從原記錄的2 種增加到3 種。然而Kuo等［8］依據(jù)臺(tái)灣和緬甸的彩蝠標(biāo)本命名了新種——暗褐彩蝠，并提出東南亞地區(qū)原有的哈氏彩蝠應(yīng)是一個(gè)復(fù)合群，存在幾個(gè)隱種，引出上述“泰坦尼亞彩蝠”海南等3 省分布新紀(jì)錄是否可信，以及已被認(rèn)可數(shù)十年中國(guó)分布的哈氏彩蝠是否有效的疑問(wèn)。Yu等［9］對(duì)中國(guó)大陸南部的彩蝠類(lèi)標(biāo)本進(jìn)行形態(tài)學(xué)、數(shù)值分類(lèi)學(xué)和親緣地理學(xué)研究，其結(jié)果顯示：海南、江西、廣東等地的彩蝠類(lèi)標(biāo)本均與臺(tái)灣發(fā)表的暗褐彩蝠聚為一支，形態(tài)特征亦相符，均應(yīng)屬于同一種彩 蝠——暗褐彩蝠，而在整理原有哈氏彩蝠在國(guó)內(nèi)分布報(bào)道［3-4，8-9，14，19-21］，并結(jié)合本研究分子系統(tǒng)學(xué)結(jié)果顯示（圖2），中國(guó)區(qū)域?qū)崯o(wú)真正的哈氏彩蝠K.hardwickiisensu stricto（sensu stricto 分類(lèi)學(xué)含義為真正的、正宗的），早期在我國(guó)不同獸類(lèi)名錄中廣泛使用的哈氏彩蝠K.hardwickii種名，均應(yīng)修正為暗褐彩蝠K.furva［22］。在中國(guó)沒(méi)有哈氏彩蝠K.hardwickiisensu stricto分布，該種真實(shí)分布區(qū)應(yīng)該僅在東南亞范圍［1］。

3.2.2 中國(guó)彩蝠屬物種分布的新發(fā)現(xiàn)

本研究報(bào)道暗褐彩蝠在湖北和西藏二省區(qū)新發(fā)現(xiàn)后，目前該種在中國(guó)分布省區(qū)為重慶、云南、西藏、湖北、湖南、江西、福建、廣東、廣西、海南和臺(tái)灣。最近，Yu 等［14］依據(jù)云南省西雙版納翼手目多樣性專(zhuān)項(xiàng)調(diào)查捕獲彩蝠屬標(biāo)本，通過(guò)分類(lèi)厘定確認(rèn)其中克欽彩蝠K.kachinensis為中國(guó)蝙蝠分布新紀(jì)錄，同時(shí)亦發(fā)現(xiàn)真正的泰坦尼亞彩蝠K.titaniasensu stricto在云南西雙版納分布紀(jì)錄，重新確認(rèn)泰坦尼亞彩蝠在我國(guó)的分布。自此，我國(guó)彩蝠屬應(yīng)包括4 種，分別為彩蝠、暗褐彩蝠、克欽彩蝠和泰坦尼亞彩蝠。前2 種在我國(guó)東南部廣泛分布，后2 種目前僅在云南西雙版納地區(qū)發(fā)現(xiàn)。值得注意的是，我國(guó)相鄰的越南記錄彩蝠屬種類(lèi)達(dá)8 種［1，23-24］，根據(jù)緬甸、越南等東南亞鄰國(guó)彩蝠類(lèi)群物種多樣性分布情況，我國(guó)西南地區(qū)該類(lèi)群動(dòng)物物種資源狀況仍可能被低估，有進(jìn)一步開(kāi)展專(zhuān)項(xiàng)調(diào)查的必要。

3.2.3 中國(guó)彩蝠屬的分類(lèi)特征及檢索表

中國(guó)的4 個(gè)彩蝠屬物種，彩蝠的翼膜和毛色為鮮艷靚麗的橘紅色，容易鑒定識(shí)別。其余3 種體色略顯灰暗，顏色較為近似，但克欽彩蝠體型明顯較大，前臂長(zhǎng)常大于40.00 mm。而暗褐彩蝠與泰坦尼亞彩蝠的外形差異主要體現(xiàn)在：前者的脛骨較短（小于18.00 mm）且背毛呈暗褐色，為我國(guó)4種彩蝠物種中體色最深的種類(lèi)；后者則脛骨較長(zhǎng)（常大于18.00 mm）且背毛顏色稍淺，毛中淺灰色，毛基黑色［10，14］。具體鑒別特征和方法，參見(jiàn)以下檢索表。

中國(guó)彩蝠屬分種檢索表A key to the genus Kerivoula of China