劉翠云，王曉佳，施 森，馬金海

肥胖目前是世界范圍內主要的公共健康挑戰(zhàn)之一。肥胖會增加某些疾病和機體紊亂的風險，包括2型糖尿病、高血壓、慢性腎病和抑郁癥等[1]。報告顯示，全世界目前大約有13%的肥胖人群[2]。在2011—2014年，2至19歲的人群中有17%肥胖；在2011—2012年，有38%人具有超重或肥胖問題，且肥胖人群的比例在過去三十年來呈大幅增長[3]。肥胖人群數(shù)量的增加正在給公共衛(wèi)生和社會經(jīng)濟帶來沉重負擔。因此，控制肥胖是非常必要的[4]。哮喘是一種慢性炎癥性疾病，它是由多種因素引發(fā)的，如運動、過敏原或刺激物暴露、天氣變化或病毒性呼吸道感染[5]。有研究表明，肥胖會增加哮喘的嚴重程度，這證明了這兩種疾病之間的密切聯(lián)系[6-7]。Chemerin是一種最近發(fā)現(xiàn)的趨化蛋白，其作用依賴于功能性受體ChemR23表達[8]。有研究報道，在各種炎癥部位，包括急性銀屑病和狼瘡性皮膚病變以及嚴重狼瘡性腎炎患者的腎臟中，Chemerin表達水平升高，這與漿細胞樣樹突細胞的組織浸潤有關，表明Chemerin具有促炎作用[9-11]。最近的一項研究表明，Chemerin在急性病毒性肺炎和吸煙引起的肺部炎癥的氣道中表達上調[12]。但是Chemerin在肥胖性哮喘是否有發(fā)揮調控作用，報道比較少，本文旨在探討Chemerin與肥胖型哮喘的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2019年1月至2020年12月于本院就診并被確診為哮喘急性發(fā)作期患兒，診斷標準參考中華醫(yī)學會兒科學會呼吸學組制定的兒童支氣管哮喘診斷標準。

1.1.1 納入標準包括：①年齡小于14歲；②符合哮喘急性發(fā)作期診斷標準；③同意參與臨床試驗。

1.1.2 排除標準包括：①原發(fā)病2周內使用激素；②合并細菌感染、真菌感染、自身免疫性疾病；③長期使用免疫抑制劑的患者。根據(jù)納入標準共納入68例患兒，依據(jù)排除標準篩選后，共納入60例體重指數(shù)(BMI)>28 kg/m2的患兒作為觀察組。另納入60例年齡和性別相仿，體重指數(shù)(BMI)<28 kg/m2的哮喘患兒作為對照組。本研究經(jīng)本院倫理委員會審核，研究對象入選后由家屬代替簽署知情同意書。

1.2 檢測血清Chemerin、血清IL-4與INF-γ水平：采用ELISA試劑盒檢測2組患兒Chemerin水平。靜脈采取2組患兒血液，待凝固，3 000 r/min離心10 min，取上清，按照ELISA試劑盒說明書測血清Chemerin水平。

1.3 檢測血清EOS數(shù)量：采用自動化生化儀。檢測2組患兒血清EOS數(shù)量。

1.4 檢測血清SOD與MDA：靜脈采取2組患兒血液，待凝固，3 000 r/min離心10 min，取上清液，按照商品化試劑盒檢測說明書測血清SOD與MDA水平。

1.5 PCR技術檢測血清T-bet與GATA3 mRNA水平：采用PCR方法檢測T-bet 與GATA3 mRNA水平。具體步驟如下，根據(jù)Trizol試劑說明書提取細胞RNA，并根據(jù)cDNA逆轉錄試劑盒說明合成cDNA。RT-qPCR反應在StepOnePlus實時熒光定量PCR系統(tǒng)上通過兩步法進行。反應條件為95 ℃預變性1 min，95 ℃變性5 s，60 ℃退火和延伸60 s、30 s，共40個循環(huán)。引物序列如下：T-bet，forward，5′-GCCAGGGAACCGCTTATATG-3′，reverse，5′-GACGATCATCTGGGTCACATTGT-3′；GATA3，forward，5′-GAGGTGGACGTACTTTTTAACATCG-3′，reverse，5′-GGCATACCTGGCTCCCGT-3′；GAPDH，forward，5′-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3′，reverse，5′-TCCACC ACCCTGTTGCTGTA-3′。

1.6 流式細胞術檢測血Th1/Th2 水平：用CD4結合的APC-eFluor 780(RM4-5)、T-bet結合的eFluor 660(eBio4B10)、GATA-3結合的Per CP-eFluor 710(TWAJ)或對照特異的熒光標記抗體染色。用抗CD16/32封閉細胞以減少非特異性結合，并用抗CD4染色。隨后，細胞被固定、透化，并進一步用轉錄因子抗體染色。

2 結果

2.1 2組患兒基本情況比較：觀察組患兒男性24 例(40.0%)，女性36例(60.0%)；對照組男性22例(36.7%)，女性38例(63.3%)。2組年齡、性別、WBC、NEUT，RBC，HGB和PLT水平之間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 2組患兒基本情況比較

2.2 2組患兒檢測指標水平比較：與對照組比較，觀察組患兒血清中Chemerin水平顯著升高；觀察組患兒血清中INF-γ水平顯著降低(P<0.05)，IL-4水平顯著升高(P<0.05)；觀察組患兒血清中EOS數(shù)量顯著升高。與對照組患兒比較，觀察組患兒血清中SOD活性顯著降低，MDA顯著升高(P<0.05)；觀察組患兒血清中T-bet mRNA水平顯著降低(P<0.05)，GATA3 mRNA水平高于對照組(P<0.05)。與對照組比較，觀察組患兒血清中Th1細胞顯著降低(P<0.05)，Th2細胞水平顯著升高(P<0.05)，見表2與圖1(目錄后)。

表2 2組患兒檢測指標水平比較

3 討論

近年來，肥胖和哮喘的發(fā)病率呈同步上升趨勢。肥胖的存在增加了包括哮喘在內的幾種疾病的風險[13-14]。哮喘在肥胖人群中比在非肥胖人群中更常見[15-16]。研究表明，哮喘患者BMI比沒有患哮喘的人更高[17-19]。此外，一些肥胖的哮喘患者具有顯著的呼吸困難癥狀。同樣，大量研究也證明超重和哮喘之間存在密切關系[20-23]。Chemerin最初被認為是一種趨化蛋白，主要促進組織對樹突狀細胞和自然殺傷細胞的募集。Chemerin作為一種新型的脂肪因子，已證實參與人體內炎癥-氧化應激系統(tǒng)的調控。本文通過臨床研究，闡述Chemerin與肥胖哮喘的關系，結果顯示，肥胖兒童血清Chemerin升高的同時影響機體的Th1/Th2平衡。

Chemerin是由163個氨基酸組成的蛋白質，主要分布于白色脂肪組織和肺臟，少量表達于肝臟、心臟和棕色脂肪組織。研究發(fā)現(xiàn)，Chemerin可以通過調節(jié)一系列炎性因子水平，參與體內炎癥-氧化應激反應的調控[24]。有報道稱，Chemerin對Th17/Treg具有調節(jié)作用，其可以通過抑制Th17水平參與銀屑病發(fā)生發(fā)展的調控[25]，說明Chemerin對機體的免疫T細胞有調節(jié)作用。但是對于Chemerin與Th/Th2平衡之間的作用報道較少。本研究以肥胖哮喘患兒為研究對象，結果發(fā)現(xiàn)，繼續(xù)發(fā)作期肥胖哮喘患兒血清Chemerin顯著升高。Chemerin呈升高狀態(tài)的同時，患兒機體Th1/Th2失衡，表現(xiàn)為肥胖哮喘患兒血清中INF-γ顯著降低，IL-4水平顯著升高、血清中T-bet mRNA水平顯著降低，GATA3 mRNA水平顯著升高。以上結果顯示，Chemerin水平與Th1/Th2失衡之間有密切的關系。

氧化應激是哮喘急性發(fā)作中的重要病理機制之一。目前關于Chemerin與氧化應激水平之間的研究報道較少。本研究結果顯示，觀察組患兒血清中SOD活性顯著降低、MDA顯著升高，上述變化趨勢與Chemerin水平呈正相關。

綜上所述，本研究證明Chemerin在肥胖性哮喘中具有重要作用，其變化與患者機體Th1/Th2失衡有密切關系，可以作為配合Th1/Th2結果判斷患者哮喘病情嚴重程度的指標之一。而對于Chemerin調控肥胖性哮喘的潛在分子機制還有待進一步研究。