徐德昌，胡婕倫，鐘亞東，謝明勇

（南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中加食品科學(xué)技術(shù)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室（南昌） 南昌 330047）

刺梨（Rosa roxburghii Tratt）為薔薇科薔薇屬多年生落葉叢生灌木[1]，其花、果、葉、籽皆可入藥?，F(xiàn)代研究表明，刺梨含有多種營養(yǎng)成分，包括超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、維生素、多酚、多糖、氨基酸及微量元素等[2-4]。近年來，隨著對(duì)刺梨的深入研究，刺梨的藥用保健價(jià)值逐漸被相關(guān)研究所證實(shí)，目前研究發(fā)現(xiàn)刺梨具有降血糖[5]，抗衰老[6]，抗腫瘤[7]，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和抗應(yīng)激功能等作用[8-9]。

我國食用菌資源豐富，也是最早栽培和利用食用菌的國家之一，食用菌營養(yǎng)豐富，同時(shí)富含多種具有生理功能的活性成分，具有很高的藥用價(jià)值[10-11]。 長期食用食用菌具有促進(jìn)機(jī)體新陳代謝，增強(qiáng)機(jī)體免疫力等益處[12]。 猴頭菇（Hericium erinaceus）富含多糖、多肽等活性成分，具有增強(qiáng)免疫，降血糖，抗腫瘤等生理功能； 平菇（Pleurotus ostreatus）富含蛋白質(zhì)、多糖、維生素等營養(yǎng)成分，具有抗氧化，抗菌，增強(qiáng)免疫等功效；香菇（Lentinula edodes）味道鮮美，含有大量蛋白質(zhì)、多糖、礦物質(zhì)、萜類化合物等營養(yǎng)物質(zhì)，且能量、脂肪低，深受大眾喜愛，越來越多的研究表明，香菇具有顯著的抗氧化、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等功能。

益生菌發(fā)酵是改善食品品質(zhì)、 延長食品存儲(chǔ)期的常見手段之一。 采用益生菌發(fā)酵刺梨和食用菌，不僅解決了刺梨因含有單寧，果肉酸澀，食用性差的不足，還能改善食品的營養(yǎng)組成和風(fēng)味品質(zhì)[13]。 研究表明，植物發(fā)酵液具有調(diào)節(jié)腸胃，保護(hù)胃黏膜，抗氧化，提高免疫力等作用[14]。 然而，對(duì)于復(fù)配刺梨食用菌發(fā)酵液潛在的免疫調(diào)節(jié)活性基本無相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)造免疫抑制小鼠模型，探討不同劑量刺梨食用菌發(fā)酵液對(duì)免疫功能和抗氧化功能的影響，為開發(fā)利用刺梨及食用菌資源提供數(shù)據(jù)支持，為拓展刺梨及食用菌產(chǎn)品的商業(yè)用途提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

刺梨食用菌發(fā)酵液樣品，貴州黔之愛生物科技有限公司。

環(huán)磷酰胺、脂多糖（LPS）、刀豆蛋白（Con A），美國Sigma 公司；鹽酸左旋咪唑，仁和堂藥業(yè)有限公司；Cell Counting Kit-8（CCK-8），上海Dojindo Molecular Technologies 公司； 胎牛血清，以色列Bioind 公司；RPMI-1640 培養(yǎng)基、PBS 干粉，北京Solarbio 公司； 小鼠TNN-α、IL-4、IL-6、IL-10 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 （Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒，武漢博士德生物工程有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒、過氧化氫酶（CAT）測(cè)定試劑盒、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測(cè)定試劑盒，南京建成生物工程研究所； 其它試劑均為國產(chǎn)分析純級(jí)。

低溫高速冷凍離心機(jī)，德國Sigma 公司；多功能酶標(biāo)儀，美國Thermo Scientific 公司；生化培養(yǎng)箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器公司； 超凈工作臺(tái)，蘇州AIRTECH 公司；細(xì)胞流式儀，美國Beckman 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

48 只BALB/c 雌性小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，周齡6～8 周，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002）。

1.3 動(dòng)物分組及處理

飼養(yǎng)條件：房間溫度（22±1）℃，12 h/12 h 的燈光/黑夜循環(huán)。 自由飲食、 飲水飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周后，將小鼠隨機(jī)分為6 組，每組8 只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組及刺梨食用菌發(fā)酵液低、中、高組，具體分組情況和灌胃劑量見表1。 除正常對(duì)照組外，其余各組灌胃開始前3 d連續(xù)腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg/（kg·d），構(gòu)建免疫抑制小鼠模型，造模后連續(xù)灌胃30 d，分別在第15 天和第23 天再次腹腔注射環(huán)磷酰胺80 mg/kg，正常對(duì)照組注射等量生理鹽水。 末次給藥24 h后，取相應(yīng)器官備用。

表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及灌胃劑量Table 1 Grouping and administration dosage

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 小鼠臟器指數(shù)的測(cè)定 末次給藥24 h 后將小鼠脫頸致死，取臟器用生理鹽水漂洗后，用濾紙吸干水分，稱重，依照公式（1）計(jì)算臟器指數(shù)，包括脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.4.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 無菌操作取小鼠脾臟，用PBS（0.01 mol/L，pH 7.4）潤濕，研磨，過200 目細(xì)胞篩，用PBS 將細(xì)胞沖洗至平板，重復(fù)3次，無菌操作下，制備單細(xì)胞懸液。 調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106個(gè)/mL。 加入到96 孔培養(yǎng)板中，每孔加入100 μL 單細(xì)胞懸液。 分別加入等體積LPS 溶液（終質(zhì)量濃度10 μg/mL）或ConA 溶液（終質(zhì)量濃度5 μg/mL），另設(shè)空白對(duì)照組，加入等體積培養(yǎng)基，每組設(shè)6 個(gè)復(fù)孔，37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h 后，依據(jù)CCK-8 試劑盒說明書，配制CCK-8和培養(yǎng)基混合液，培養(yǎng)板每實(shí)驗(yàn)孔加入100 μL CCK-8 混合液，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30 min，于540 nm 波長處測(cè)定吸光度值，并依照公式（2）計(jì)算刺激指數(shù)。

1.4.3 小鼠脾淋巴細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn) 調(diào)整小鼠脾淋巴細(xì)胞濃度為5×106個(gè)/mL，取1.5 mL 單細(xì)胞懸液，加至EP 管，1 000 r/min 離心5 min，棄上清，1.0 mL PBS 清洗，1 000 r/min 離心5 min，棄上清，重復(fù)2 次，最后一次剩余大約20～50 μL PBS。 每管加入anti-CD3，anti-CD4 或者anti-CD8 抗體各0.625 μL，在4 ℃下避光孵育細(xì)胞懸液30 min。 加1.0 mL PBS 并吹均勻以終止反應(yīng)。 1 000 r/min 離心5 min，棄上清，用PBS 清洗2 次，每次1.0 mL，洗去過量抗體。清洗完后，加0.5 mL PBS 混勻。用流式細(xì)胞儀對(duì)CD3，CD4+和CD8+型細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并以各自占T 淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分比計(jì)量。

1.4.4 脾臟細(xì)胞因子測(cè)定 以預(yù)冷的PBS 緩沖液為勻漿液，取適量脾臟組織，在冰浴條件下制成10%組織勻漿液，4 ℃，3 000 r/min 離心10 min，收集組織上清液，按照ELISA 試劑盒操作說明，分別檢測(cè)TNF-α、IL-4、IL-6 和IL-10 的含量。

1.4.5 抗氧化能力測(cè)定 取適量肝臟和胸腺，用預(yù)冷的PBS 緩沖液制成10%組織勻漿，3 000 r/min 離心10 min，收集組織上清液，分別按照SOD、CAT、MDA、GSH-Px 試劑盒操作說明，測(cè)定各抗氧化水平。

1.4.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）”表示，采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行單因素ANOVA 分析和LSD 檢驗(yàn)。 利用Graph Pad 6.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作圖分析。P<0.05時(shí)有顯著性差異，P<0.01 時(shí)有極顯著差異。 采用SIMCA 13.0 軟件進(jìn)行主成分分析（Principle component analysis，PCA），從整體考察不同給藥對(duì)免疫抑制小鼠相關(guān)指標(biāo)的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 REFB 對(duì)免疫抑制小鼠體質(zhì)量的影響

由表2 可知，造模前，各組小鼠體質(zhì)量均在20.0±2.0 范圍內(nèi)，連續(xù)造模3 d 后，各組小鼠的體質(zhì)量均明顯下降，與正常組相比具有極顯著（P<0.01）差異，表明模型構(gòu)建成功，由圖1 和表2 可知，造模后，與正常組相比，各組體質(zhì)量恢復(fù)緩慢；與模型組相比，REFB 中、 高劑量組的體質(zhì)量要顯著（P<0.05）降低，這可能是由于灌胃REFB，增加了動(dòng)物的飽腹感，使得動(dòng)物進(jìn)食量減少，從而導(dǎo)致體質(zhì)量增加更為緩慢。

表2 REFB 給藥對(duì)免疫抑制小鼠體質(zhì)量的影響Table 2 Effect of REFB administration on body weight of immunosuppressed mice

圖1 小鼠體質(zhì)量變化情況Fig.1 Changes in body weight of immunosuppressed mice

2.2 REFB 對(duì)免疫抑制小鼠臟器指數(shù)的影響

脾臟和胸腺是動(dòng)物體內(nèi)主要免疫器官，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)能在一定程度上反映機(jī)體的免疫能力。 由表3 可知，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組相比，其脾臟指數(shù)和肝臟指數(shù)極顯著（P<0.01）下降，說明環(huán)磷酰胺能使小鼠免疫功能受到明顯抑制，免疫抑制模型構(gòu)建成功，與模型組相比，REFB 低、中、高劑量組都極顯著（P<0.01）提高小鼠脾臟指數(shù)和肝臟指數(shù)。 對(duì)于胸腺指數(shù)，REFB 各劑量組均有一定效果，然而無顯著性差異。 由此可見，給予REFB 對(duì)于改善免疫功能具有一定效果。

表3 REFB 給藥對(duì)免疫抑制小鼠臟器指數(shù)的影響（n=8）Table 3 Effect of REFB administration on liver，thymus，and spleen index of immunosuppressed mice （n=8）

2.3 REFB 對(duì)免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

由圖2 可知，與正常組相比，模型對(duì)照組小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力極顯著下降 （P<0.01）；與模型對(duì)照組相比，REFB 各劑量組均能極顯著（P<0.01） 提高ConA 誘導(dǎo)的T 淋巴細(xì)胞增殖； 對(duì)于LPS 誘導(dǎo)的B 淋巴細(xì)胞增殖能力，REFB 各劑量組較模型對(duì)照組也有所提高，而不具有顯著性。

圖2 REFB 給藥對(duì)免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響Fig.2 Effect of REFB administration on spleen lymphocyte proliferation in immunosuppressed mice

2.4 REFB 對(duì)免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞分化的影響

由圖3 可知，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組CD3+和CD4+細(xì)胞亞群占比極顯著（P<0.01）下降，CD8+T 細(xì)胞亞群占比顯著（P<0.05）下降，CD4+/CD8+的比值略有下降；與模型組相比，REFB 各劑量組CD3+、CD4+和CD8+T（低劑量除外）細(xì)胞亞群占比顯著（P<0.05）增加，其中REFB 中劑量組的效果最好，REFB 各劑量組CD4+/CD8+的比值較模型對(duì)照組也顯著（P<0.05）升高。

圖3 REFB 給藥對(duì)免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞分化的影響Fig.3 Effect of REFB administration on spleen lymphocyte differentiation in immunosuppressed mice

2.5 REFB 對(duì)免疫抑制小鼠脾臟細(xì)胞因子的影響

由圖4 可知，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組極顯著（P<0.01）降低了IL-4、IL-6 和TNF-α 的含量，極顯著（P<0.01）增加了IL-10 的含量。 與模型組相比，REFB 各劑量組均極顯著（P<0.01）降低了IL-10 的含量；REFB 高劑量組IL-4、IL-6 和TNFα 含量與模型對(duì)照組相比具有極顯著（P<0.01）差異，REFB 低和中劑量組具有緩解作用，然而沒有顯著差異。

圖4 REFB 給藥對(duì)免疫抑制小鼠脾細(xì)胞IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α 的影響Fig.4 Effect of REFB administration on spleen IL-4，IL-6，IL-10，and TNF-α in immunosuppressed mice

2.6 REFB 對(duì)免疫抑制小鼠肝臟及胸腺組織SOD、CAT、MDA、GSH-Px 含量的影響

由表4 可知，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組肝臟CAT、GSH-Px 和SOD 含量顯著（P<0.05）降低，MDA 含量極顯著（P<0.01）升高。與模型對(duì)照組相比，REFB 各劑量組CAT、GSH-Px 和SOD 含量均有所提高，MDA 含量極顯著（P<0.01）降低，其中REFB 中劑量組的緩解效果最好。

表4 REFB 給藥對(duì)免疫抑制小鼠肝臟及胸腺SOD、CAT、MDA、GSH-Px 含量的影響Table 4 Effect of REFB administration on liver and thymus SOD，CAT，MDA，and GSH-Px levels in immunosuppressed mice

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組胸腺各抗氧化指標(biāo)趨勢(shì)同肝臟抗氧化指標(biāo)，然而無顯著差異。與模型組相比，REFB 各劑量組CAT、GSH-Px 和SOD 含量顯著 （P<0.05） 提高，MDA 含量有所降低，綜上，REFB 給藥對(duì)于調(diào)節(jié)小鼠抗氧化功能具有一定效果。

2.7 基于PCA 的梨食用菌發(fā)酵液免疫及抗氧化活性分析

為進(jìn)一步發(fā)掘刺梨食用菌發(fā)酵液的免疫及抗氧化活性，運(yùn)用多元數(shù)據(jù)分析，采用6 種給藥組的22 種免疫和抗氧化指標(biāo)，進(jìn)行主成分（PCA）方法分析生成中軸散點(diǎn)圖，以可視化不同組之間的指標(biāo)差異，PCA 得分圖（圖5a）顯示不同給藥組的樣品分布，荷載圖（圖5b）顯示各指標(biāo)的分布，該模型的第一主成分（PC1）和第二主成分（PC2）的貢獻(xiàn)度之和為53.4%，能夠較好地反映各給藥組與各指標(biāo)之間的聯(lián)系。 在PCA 得分圖中，48 個(gè)樣本分為6 組，分別為正常對(duì)照組（綠色）、模型對(duì)照組（藍(lán)色）、陽性對(duì)照組（紅色）、REFB 低劑量組（黃色）、REFB 中劑量組（淺藍(lán)色）和REFB 高劑量組（紫色）。 從圖5a 可知，模型對(duì)照組（藍(lán)色）偏離其它給藥組，位于右上角，由圖5b 可知，該組IL-10以及MDA 含量較高，其它指標(biāo)均要低于其它給藥組。 而REFB 給藥組位于中間偏左位置，相比模型組更接近正常組。 由荷載圖可知該組的主要貢獻(xiàn)者是免疫器官指數(shù)，抗氧化指標(biāo)以及T 淋巴細(xì)胞增殖分化指標(biāo)，此結(jié)果表明REFB 主要通過T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，以及提高機(jī)體抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力?；趫D5a，對(duì)于REFB 低、中、高各劑量組，分別從縱向和橫向進(jìn)行比較，結(jié)果表明，REFB 高劑量組要更接近陽性對(duì)照組和空白對(duì)照組，表明REFB 高劑量組對(duì)于免疫抑制小鼠的免疫及抗氧化能力的調(diào)節(jié)作用整體要優(yōu)于低、中劑量組。

圖5 不同給藥對(duì)免疫抑制小鼠相關(guān)指標(biāo)PCA 分析得分圖（a）和荷載圖（b）Fig.5 PCA analysis （PC1 versus PC2） score plot （a） and load plot （b） of different administrations on immunosuppressed mice related indicators

3 討論

果蔬經(jīng)益生菌發(fā)酵后，不僅能夠延長產(chǎn)品的貨架期，還能形成獨(dú)特的風(fēng)味，提高產(chǎn)品的營養(yǎng)價(jià)值以及增強(qiáng)產(chǎn)品的功能性。越來越多的研究顯示，益生菌發(fā)酵能夠提高食品的免疫調(diào)節(jié)活性，如益生菌發(fā)酵蘆筍[15]、靈芝[16]、蟲草[17]、紅參[18]、菠蘿汁[19]、歐李汁[20]等均能明顯改善免疫抑制小鼠的免疫功能，增強(qiáng)免疫刺激活性。本實(shí)驗(yàn)通過多次腹腔注射環(huán)磷酰胺構(gòu)建免疫抑制小鼠模型，探討復(fù)配刺梨食用菌發(fā)酵液潛在的免疫調(diào)節(jié)活性。

免疫系統(tǒng)是機(jī)體免疫應(yīng)答和免疫功能的重要系統(tǒng)，由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子構(gòu)成[21]，脾臟作為T、B 淋巴細(xì)胞聚集和參與免疫應(yīng)答的器官，其可通過T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫和B 細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫的功能[22]。 注射環(huán)磷酰胺是目前建立免疫抑制小鼠模型最為常見的手段，其對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)有較為全面的抑制。本研究發(fā)現(xiàn)，注射環(huán)磷酰胺后，小鼠體質(zhì)量、免疫器官指數(shù)、T/B 細(xì)胞增殖分化均要明顯低于正常組，說明免疫抑制小鼠模型構(gòu)建成功。 灌胃刺梨食用菌發(fā)酵液（REFB）能夠明顯改善環(huán)磷酰胺引起的臟器萎縮，上調(diào)器官指數(shù)，尤其是脾臟等免疫器官；促進(jìn)T/B 淋巴細(xì)胞的增殖分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能； 通過調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子分泌水平來發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能，緩解環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的免疫低下。 根據(jù)PCA 分析可知，REFB 主要影響T 淋巴細(xì)胞的增殖分化，即通過T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫作用。 這可能與REFB 中所含的食用菌多糖有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)平菇多糖、猴頭菇多糖、香菇多糖均能刺激免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖分化，上調(diào)免疫器官指數(shù)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[23-24]。 而食用菌多糖經(jīng)過復(fù)配后往往會(huì)表現(xiàn)出良好的生物活性，如給免疫抑制小鼠口服香菇多糖、茯苓多糖、銀耳多糖或者三者混合物，均能夠顯著增加免疫抑制小鼠的臟器指數(shù)，降低IL-10 水平，改善免疫抑制小鼠的免疫能力[25]。

抗氧化系統(tǒng)是機(jī)體正常新陳代謝所必不可少的，通常情況下，活性氧（Reactive oxygen species，ROS） 的產(chǎn)生與抗氧化防御系統(tǒng)之間處于一種平衡狀態(tài)[26]，免疫系統(tǒng)對(duì)于這種氧化-抗氧化的內(nèi)穩(wěn)態(tài)特別敏感，特別是吞噬細(xì)胞的生物活性[27]，如果沒有足夠的抗氧化劑，吞噬細(xì)胞產(chǎn)生的ROS 會(huì)對(duì)細(xì)胞本身造成破壞，此時(shí)補(bǔ)充抗氧化劑，可以幫助氧化-抗氧化內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡的恢復(fù)，有利于提高免疫力[28]。 環(huán)磷酰胺會(huì)導(dǎo)致機(jī)體抗氧化系統(tǒng)失衡，抗氧化能力下降。 而植物提取物能在一定程度上提高機(jī)體的抗氧化活性，如天然蟲草多糖[29]、黑靈芝多糖[30]、鐵皮石斛多糖[31]。本研究發(fā)現(xiàn)，注射環(huán)磷酰胺后，模型對(duì)照組的肝臟和胸腺SOD、CAT 和GSHPx 水平顯著低于正常對(duì)照組，MDA 含量顯著高于正常對(duì)照組，表明環(huán)磷酰胺可明顯抑制機(jī)體的氧化應(yīng)激功能。灌胃REFD 各劑量組后，小鼠肝臟和胸腺組織中SOD、CAT、GSH-Px 顯著提高，MDA含量顯著下降。 表明REFD 可以通過調(diào)節(jié)免疫抑制小鼠的抗氧化酶活性，改善由環(huán)磷酰胺引起的氧化應(yīng)激。 REFB 表現(xiàn)出良好的抗氧化應(yīng)激功能，可能與刺梨和食用菌相關(guān)成分有關(guān)，刺梨果實(shí)中富含的活性成分SOD、 黃酮和多糖等均有良好的抗氧化性能[9，32]，而香菇、猴頭菇、平菇提取物已被諸多研究報(bào)道出具有良好的抗氧化應(yīng)激活性，特別是其中的多糖成分可以作為天然的抗氧化劑，保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷[33-35]。而益生菌發(fā)酵會(huì)增強(qiáng)食品的相關(guān)活性，如基于益生菌發(fā)酵的藍(lán)莓提取物會(huì)表現(xiàn)出更好的抗菌和抗氧化活性[36]，其機(jī)制可能是發(fā)酵改變了食品原本的營養(yǎng)組成，產(chǎn)生更多具有抗氧化活性的物質(zhì)。 如蘋果汁經(jīng)過乳酸菌發(fā)酵后，具有強(qiáng)氧化性的槲皮素等含量顯著增加，提高了蘋果汁的抗氧化活性[37]。 桑葚果汁經(jīng)過乳酸菌發(fā)酵后，產(chǎn)生了更多的酚酸、黃酮醇等物質(zhì)，增加了發(fā)酵果汁對(duì)自由基的清除能力[38]。 因此，益生菌發(fā)酵可能也是使刺梨食用菌發(fā)酵液（REFB）表現(xiàn)出良好抗氧化應(yīng)激活性的重要原因之一，然而發(fā)酵對(duì)該產(chǎn)品的功能活性影響仍需進(jìn)一步研究以驗(yàn)證。

綜上所述，刺梨食用菌發(fā)酵液（REFB）不僅能夠增加免疫器官指數(shù)，還能夠促進(jìn)T、B 淋巴細(xì)胞的增殖與分化，調(diào)節(jié)脾臟細(xì)胞因子的平衡，從而發(fā)揮對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)還能顯著改善注射環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為刺梨、 食用菌及其發(fā)酵制品開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。