吳惠香，楊 華，趙登奇，黃建穎，楊利軍

（浙江工商大學食品與生物工程學院，浙江省食品安全重點實驗室，浙江 杭州 310018）

在食品工業(yè)中，由于細菌會在食品、管道、空氣和其他食物接觸物的表面或內(nèi)部大量生長繁殖[1]，即使使用現(xiàn)代食品保存技術(shù)，微生物腐敗也會導致過多的食品劣變。由金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和大腸桿菌（Escherichia coli）引起的食品污染即使在發(fā)達國家也非常普遍。從農(nóng)場到餐桌這一連續(xù)過程中的任何一個環(huán)節(jié)都有可能導致細菌污染的發(fā)生，并最終引起食源性疾病[2]。迄今，食源性疾病已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)日益嚴重的公共衛(wèi)生問題[3]，并且可以造成全球范圍內(nèi)巨大的經(jīng)濟損失。為防止食品污染造成食源性疾病的暴發(fā)，定期對食品加工設備進行清洗和消毒是一項非常重要的步驟。然而，細菌耐藥性的出現(xiàn)導致傳統(tǒng)的抑菌劑和殺菌劑（如抗生素和一些納米材料）的抑菌、殺菌效果逐漸降低，迫切需要不斷研發(fā)新型抑菌和殺菌劑[4-7]。

柱芳烴（圖1）是一類具有相對較大空腔和對稱柱狀結(jié)構(gòu)的新型超分子化合物。根據(jù)柱芳烴形成單元數(shù)目的不同可分為柱[n]芳烴（n＝5,6,7,8,9,10…），因其富π-電子空腔和雙環(huán)上氧原子的冠醚狀排列而具有獨特的主客體性質(zhì)[8]。目前柱[5]芳烴已被較多用于構(gòu)建超分子聚合物、互鎖分子和生物分子雜化材料[9-10]?；谥紵N的應用研究已覆蓋吸附材料[11]、離子檢測[12]、氨基酸識別和蛋白質(zhì)吸附[13]、藥物可控釋放、癌癥治療[14]、催化[15]、光治療[16]、細胞膠水[17]等領域。

圖1 柱[5]芳烴的化學結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of pillar[5]arene

柱芳烴的生物活性近幾年才初步得到揭示[18-19]，其獨特結(jié)構(gòu)在不同領域的功能組裝體方面還具有很大的開發(fā)潛力。例如，季銨鹽和咪唑基團不同脂肪鏈的陽離子柱[5]芳烴[20-21]、帶有肽鏈的支柱[5]芳烴[22]和基于兩性離子柱[5]芳烴的帶正電納米聚集體[23]等陸續(xù)被報道具有較好的抑菌和抑制生物被膜活性。因此，本實驗在溴代柱[5]芳烴上引入季銨鹽基團，得到水溶性陰離子為溴離子的柱[5]芳烴鹽，并以S.aureusATCC 6538和E.coliDH5α菌株為供試菌，研究三甲胺柱[5]芳烴的抑菌性能；利用噻唑藍（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide，MTT）法測定其細胞毒性，旨在為開發(fā)新型有效無毒的抑菌劑提供更多的可能性和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株、材料與試劑

S.aureusATCC 6538 中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；E.coliDH5α 日本Takara公司。

HeLa細胞、MCF7細胞購于美國模式培養(yǎng)物集存庫。

胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、DMEM（Dulbecco’s modified Eagle’s medium）培養(yǎng)基、RPMI 1640培養(yǎng)基 上海麥克林生物化學有限公司；青霉素/鏈霉素、結(jié)晶紫及其他常用試劑 上海阿拉丁化學試劑有限公司；胰蛋白酶（酶活力≥2500 U/mg） 美國Gibco公司；MTT 美國Sigma公司。

1.2 儀器與設備

AVANCE III 500 NMR超導核磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR）儀 德國Bruker公司；H-7650型透射電子顯微鏡（transmission electron microscopy，TEM） 日本日立公司。

1.3 方法

1.3.1 三甲胺柱[5]芳烴的合成及表征

參考Joseph等[20-21]的方法并稍作修改，合成路線如圖2所示。將9.910 g對苯二酚二羥乙基醚和31.500 g三苯基膦加入以乙腈（250 mL）作為溶劑的反應瓶中，隨后在0 ℃下邊攪拌邊緩慢加入39.800 g四溴化碳。待固體完全溶解，在室溫下反應4 h。反應結(jié)束后，將反應液倒入冷水（500 mL）中有白色固體析出；通過抽濾得到固體，并用體積分數(shù)60%甲醇溶液（100 mL）沖洗固體。將粗產(chǎn)品用甲醇進行重結(jié)晶，析出固體后抽濾干燥得到產(chǎn)物1（產(chǎn)量10.360 g、產(chǎn)率64.3%）。

圖2 三甲胺柱[5]芳烴的合成路線Fig.2 Synthesis route of pillar[5]arene based on trimethylamine

將3.240 g化合物1（10 mmol）加入以1,2-二氯乙烷（130 mL）為溶劑的反應瓶中，完全溶解后加入0.570 g多聚甲醛（19 mmol）和2.4 mL三氟化硼乙醚（19 mmol），室溫反應10～30 min。反應結(jié)束后加入水淬滅，分液漏斗分液，取下層有機相用無水硫酸鈉進行干燥；通過真空蒸餾獲得粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物用二氯甲烷-石油醚（1∶2，V/V）進行柱色譜分離，得到白色固體為化合物2（產(chǎn)量1.04 g、產(chǎn)率30.4%），即溴代柱[5]芳烴。

將0.168 g化合物2加入以無水乙醇（100 mL）為溶劑的反應瓶中，再加入4 mL三甲胺（15 mmol），90 ℃下回流反應24 h。反應結(jié)束后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到白色固體為化合物3，即三甲胺柱[5]芳烴（產(chǎn)量0.250 g、產(chǎn)率78.1%）。

采用1H NMR對合成的各化合物進行表征，測定溫度為室溫，其中化合物1和2以氘代氯仿（CDCl3）為溶劑，化合物3以重水（D2O）為溶劑；同時采用高分辨質(zhì)譜（high-resolution mass spectra，HRMS）對化合物3進行表征，電噴霧電離離子源。

1.3.2 三甲胺柱[5]芳烴的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度測定

參考Sun Zhimin[24]和Liu Yuhong[25]等的方法并稍作修改，S.aureusATCC 6538培養(yǎng)于含40%（體積分數(shù)，下同）甘油、1%（質(zhì)量分數(shù)，下同）葡萄糖的胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基中；E.coliDH5α培養(yǎng)于含40%甘油、1%葡萄糖的LB（Luria-Bertani）培養(yǎng)基中，并保藏于－80 ℃冰箱中，使用前活化兩次，放置在振蕩培養(yǎng)箱中37 ℃、150 r/min培養(yǎng)12 h；對活化好的菌株按照平板計數(shù)法進行菌落計數(shù)，調(diào)整培養(yǎng)基中菌株濃度約為1h 106CFU/mL，置于4 ℃冰箱貯藏備用。

采用微量肉湯法測定最小抑菌濃度（minimal inhibit concentration，MIC），使用96 孔板通過梯度稀釋法配制不同質(zhì)量濃度的樣品溶液。吸取100 μL不同質(zhì)量濃度樣品溶液于96 孔板中，加入1h 106CFU/mL菌液使每孔菌株接種密度為5h 105CFU/mL，三甲胺柱[5]芳烴終質(zhì)量濃度依次為0.008～2.000 mg/mL。以等體積不含菌液的培養(yǎng)基無菌水溶液為空白對照，等體積含菌液的培養(yǎng)基和無菌水為陰性對照；金黃色葡萄球菌以甲氧西林為陽性對照，大腸桿菌以多黏菌素B為陽性對照。將96 孔板在37 ℃、100 r/min培養(yǎng)24 h后，用酶標儀于600 nm波長處測定光密度（optical density，OD）值。MIC為完全抑制微生物生長的最低濃度。

從MIC測定實驗無明顯細菌生長的孔中吸取100 μL溶液涂布于含0.6%酵母浸粉的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，在恒溫恒濕培養(yǎng)箱中37 ℃靜置培養(yǎng)24 h后觀察平板菌落生長情況。三甲胺柱[5]芳烴最小殺菌濃度（minimal bactericidal concentration，MBC）為培養(yǎng)24 h后細菌平板無菌落生長所對應的最小濃度。

1.3.3 生物被膜形成實驗

參照文獻[20]的方法，按體積分數(shù)1%將測試菌株過夜培養(yǎng)物添加到含1%葡萄糖的新鮮LB培養(yǎng)基中，用生長培養(yǎng)基稀釋至5h 105CFU/mL。將100 μL菌液和100 μL不同終質(zhì)量濃度待測化合物溶液添加到96 孔板每孔中，37 ℃下不攪拌孵育24 h。孵育結(jié)束后用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌孔，去除浮游細菌。剩余的細菌在室溫下用質(zhì)量分數(shù)0.4%結(jié)晶紫溶液染色15 min后再次用PBS洗滌，將微孔板倒置并在紙巾上輕輕拍打以除去多余液體，風干，加入200 μL體積分數(shù)95%乙醇溶液，最后在600 nm波長處測定每孔OD值。以不加待測化合物為對照組，按式（1）計算生物被膜形成量。

1.3.4 透射電子顯微鏡觀察細胞膜損傷情況

參照文獻[26]的方法并稍作修改。將細菌過夜培養(yǎng)至108～109CFU/mL，反復離心（4 ℃、5000 r/min，5 min）收集細菌于管底，直到肉眼可見米粒大小沉淀，加1 mL質(zhì)量濃度為MIC的抑菌劑三甲胺柱[5]芳烴于離心管中，以不加抑菌劑為對照組，37 ℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)3 h，用體積分數(shù)2.5%戊二醛溶液固定，漂洗后用體積分數(shù)1%鋨酸溶液固定1 h，用體積分數(shù)30%～80%乙醇溶液依次脫水后，再用體積分數(shù)90%丙酮溶液和無水丙酮繼續(xù)脫水，用丙酮與包埋劑Spurr混合溶液（1∶2，V/V）處理樣品1 h，再使用此包埋劑與3 倍體積的丙酮混合，處理樣品3 h，最后用純包埋劑處理，室溫下過夜后，切片、染色，最后用TEM對切片進行觀察并保存圖片。

1.3.5 細胞毒性實驗

通過MTT測定法評估柱[5]芳烴的細胞毒性[27]。HeLa細胞培養(yǎng)在含10% FBS和1%青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，HeLa細胞和MCF7細胞在含10% FBS和1%青霉素/鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細胞生長為單層并融合時，加入1.5 mL胰蛋白酶溶液（0.5 g/100 mL，PBS配制）孵育5 min，離心（500hg、10 min），收集細胞，棄去上清液。加入3.00 mL血清補充培養(yǎng)基以中和殘留的胰蛋白酶，并將細胞以1.00h 104cells/mL重懸于血清補充培養(yǎng)基中，在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)15 h待細胞貼壁生長。棄原培養(yǎng)基，然后用不含或含不同質(zhì)量濃度柱[5]芳烴的新鮮血清補充培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4 h或12 h，然后每孔加入20 μL 0.50 mg/mL MTT溶液，37 ℃下培養(yǎng)4 h后，移除MTT溶液，并用PBS洗滌細胞3 次。添加100 μL二甲基亞砜溶解甲瓚晶體，并通過酶標儀于570 nm波長處測定OD值。以未處理細胞作為對照。細胞活力按式（2）計算。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每組實驗均進行3 次平行，結(jié)果用平均值±標準差表示。采用Excel 2016軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，Origin 8.0軟件作圖，采用單因素方差分析，通過Duncan’s test法進行差異顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 三甲胺柱[5]芳烴的表征結(jié)果

各化合物的結(jié)構(gòu)如圖3、4所示，以苯二酚二羥乙基醚為原料，通過簡單常規(guī)的有機反應合成溴代柱[5]芳烴（化合物2），隨后在無水、無氧、室溫條件下與三甲胺反應，得到三甲胺柱[5]芳烴（化合物3）。

圖3 化合物1（A）、2（B）和3（C）的1H NMR譜Fig.3 1H NMR spectra of compounds 1 (A),2 (B) and 3 (C)

化合物1結(jié)構(gòu)的表征結(jié)果為：1H NMR（500 MHz，CDCl3）：δ6.86（s，4H）、4.24（t，J＝6.3 Hz，4H）、3.61（t，J＝6.3 Hz，4H）；化合物2結(jié)構(gòu)的表征結(jié)果為：1H NMR（500 MHz，CDCl3）：δ6.91（s，10H）、4.23（t，J＝5.6 Hz，20H）、3.84（s，10H）、3.63（t，J＝5.6 Hz，20H）；化合物3結(jié)構(gòu)的表征結(jié)果為：1H NMR（500 MHz，D2O）：δ6.92（s，10H）、4.42（s，20H）、3.90（s，10H）、3.77（s，20H）、3.19（s，90H）?；衔?的HRMS表征結(jié)果為：m/z1055.7550（[M－2Br]2＋），相對分子質(zhì)量2271.2350。

圖4 化合物3的HRMS圖Fig.4 HRMS spectra of compound 3

2.2 三甲胺柱[5]芳烴對S.aureus ATCC 6538和E.coli DH5α的MIC和MBC

添加不同質(zhì)量濃度三甲胺柱[5]芳烴、甲氧西林和多黏菌素B培養(yǎng)S.aureusATCC 6538和E.coliDH5α 24 h后，經(jīng)肉眼觀察到澄清孔的試劑濃度即為MIC（圖5、6），進一步通過測定OD值評估三甲胺柱[5]芳烴對S.aureusATCC 6538和E.coliDH5α的MIC（圖7），MBC測定平板涂布結(jié)果如圖8、9所示。由表1可知，三甲胺柱[5]芳烴對S.aureusATCC 6538的MIC和MBC分別為0.125 mg/mL和1.000 mg/mL，對E.coliDH5α的MIC和MBC分別為和0.250 mg/mL和＞1.000 mg/mL。結(jié)果表明三甲胺柱[5]芳烴對S.aureusATCC 6538抑菌效果優(yōu)于E.coliDH5α，三甲胺柱[5]芳烴對E.coliDH5α的MIC是S.aureusATCC 6538的2 倍。

圖5 不同質(zhì)量濃度三甲胺柱[5]芳烴培養(yǎng)S.aureus ATCC 6538（A）和E.coli DH5α（B）24 h后96 孔板結(jié)果圖像Fig.5 Pictures of S.aureus ATCC 6538 (A) and E.coli DH5α (B)cultured on 96-well plate in the presence of trimethylamine-based pillar[5]arene at different concentrations for 24 h

圖6 不同質(zhì)量濃度甲氧西林培養(yǎng)S.aureus ATCC 6538（A）和多黏菌素B培養(yǎng)E.coli DH5α（B）24 h后96 孔板圖像Fig.6 Pictures of S.aureus ATCC 6538 cultured in the presence of methicillin and E.coli DH5α cultured in in the presence of polymyxin B at different concentrations for 24 h on 96-well plate

圖7 濁度法分析三甲胺柱[5]芳烴對S.aureus ATCC 6538和E.coli DH5α的抑制作用Fig.7 Inhibitory effect of trimethylamine-based pillar[5]arene on the growth of S.aureus ATCC 6538 and E.coli DH5α evaluated by turbidity method

圖8 三甲胺柱[5]芳烴對S.aureus ATCC 6538（A）和E.coli DH5α（B）的抑制作用Fig.8 Antibacterial effect of trimethylamine-based pillar[5]arene against S.aureus ATCC 6538 (A) and E.coli DH5α (B)

圖9 甲氧西林對S.aureus ATCC 6538（A）和多黏菌素B對E.coli DH5α（B）的抑制作用Fig.9 Antibacterial effect of methicilin against S.aureus ATCC 6538 (A)and polymyxin B against E.coli DH5α (B)

表1 三甲胺柱[5]芳烴對S.aureus ATCC 6538和E.coli DH5α的MIC和MBCTable 1 MIC and MBC of trimethylamine-based pillar[5]arene against S.aureus ATCC 6538 and E.coli DH5α mg/mL

2.3 三甲胺柱[5]芳烴對生物被膜形成的抑制作用

如圖10A所示，隨三甲胺柱[5]芳烴質(zhì)量濃度的增加，S.aureusATCC 6538生物被膜形成量不斷降低。從結(jié)晶紫染色圖中也可以明顯看出，在0.125 mg/mL三甲胺柱[5]芳烴作用下，S.aureusATCC 6538生物被膜形成量為31.15%。如圖10B所示，隨三甲胺柱[5]芳烴質(zhì)量濃度的增加，E.coliDH5α生物被膜形成量也不斷減少，呈一定質(zhì)量濃度依賴性?？傮w而言，三甲胺柱[5]芳烴對S.aureusATCC 6538生物被膜形成的抑制作用優(yōu)于對E.coliDH5α。

圖10 三甲胺柱[5]芳烴對S.aureus ATCC 6538（A）和E.coli DH5α（B）生物被膜形成的影響及結(jié)晶紫染色圖Fig.10 Effect of trimethylamine-based pillar[5]arene on the formation of S.aureus ATCC 6538 (A) and E.coli DH5α (B) biofilm and results of crystal violet staining

2.4 三甲胺柱[5]芳烴對菌株細胞膜的損傷作用

如圖11所示，在不加三甲胺柱[5]芳烴的情況下，S.aureusATCC 6538具有完整的細胞結(jié)構(gòu)，細胞壁和細胞膜完整平滑，細胞質(zhì)厚實緊密，細胞質(zhì)中間可見一道隔膜；而當加入三甲胺柱[5]芳烴后，S.aureusATCC 6538細胞壁和細胞膜遭到損傷，失去細胞壁和細胞膜保護的細胞質(zhì)變得松散，內(nèi)容物開始向環(huán)境中泄漏，細胞壁和細胞膜有孔洞出現(xiàn)。未經(jīng)三甲胺柱[5]芳烴處理的E.coliDH5α呈短桿狀，細胞壁、細胞膜平滑完整，細胞質(zhì)內(nèi)物質(zhì)致密。E.coliDH5α細胞壁相對于S.aureus較薄，符合革蘭氏陰性菌的特點。此外，還可以看出E.coliDH5α細胞膜和細胞質(zhì)之間有細微間隙。而經(jīng)三甲胺柱[5]芳烴處理后E.coliDH5α細胞壁、細胞膜變得模糊不清，細胞膜通透性發(fā)生改變，細胞質(zhì)內(nèi)物質(zhì)發(fā)生絮狀凝結(jié)并變得疏松。同時E.coliDH5α形態(tài)也發(fā)生變化，出現(xiàn)皺縮并向內(nèi)彎曲凹陷。

圖11 三甲胺柱[5]芳烴處理處理前后S.aureus ATCC 6538（A）和E.coli DH5α（B）的TEM圖像Fig.11 TEM images of S.aureus ATCC 6538 (A) and E.coli DH5α (B)before and after treatment with trimethylamine-based pillar[5]arene

2.5 三甲胺柱[5]芳烴的細胞毒性

如圖12A所示，隨著三甲胺柱[5]芳烴質(zhì)量濃度的增加，相比于不加三甲胺柱[5]芳烴的對照組，HeLa細胞存活率下降，但細胞存活率仍保持較高水平，當質(zhì)量濃度達到2 mg/mL時，24 h后細胞存活率仍大于80%，這與Gao Lingyan等[23]研究報道結(jié)果類似。如圖12B所示，極低質(zhì)量濃度的三甲胺柱[5]芳烴略微促進了MCF7細胞的生長，這可能是實驗誤差所致，也可能是細胞對三甲胺柱[5]芳烴的刺激反應所致。在不同質(zhì)量濃度三甲胺柱[5]芳烴處理下，24 h培養(yǎng)后HeLa和MCF7細胞的存活率均比4 h培養(yǎng)后高，說明三甲胺柱[5]芳烴對這兩種細胞均無毒，細胞能夠正常存活。

圖12 不同質(zhì)量濃度三甲胺柱[5]芳烴處理對HeLa（A）和MCF7（B）細胞存活率的影響Fig.12 Cell viability of HeLa (A) and MCF7 (B) cells treated with different concentrations of trimethylamine-based pillar[5]arene after 4 and 24 h of incubation

3 討論

近年來，由于細菌病原體對常規(guī)抗菌藥物的耐藥性增加，迫切需要開發(fā)有效的新型抑菌劑和抑菌材料以控制這些細菌病原體引起的感染和腐敗。柱芳烴是除冠醚、環(huán)糊精、杯芳烴以及葫蘆脲以外的一類新型大環(huán)主體，因其獨特的柱狀結(jié)構(gòu)和在制備不同領域功能組裝體方面的潛力而備受關注。

本研究以二氯甲烷為溶劑，三氟化硼乙醚催化1,4-二溴乙氧基苯與多聚甲醛發(fā)生聚合反應，經(jīng)柱層析分離純化得到溴代柱[5]芳烴，最后三甲胺與溴代柱[5]芳烴經(jīng)親核取代反應得到陽離子水溶性柱[5]芳烴，其中陰離子為溴離子。通過NMR和HRMS對所合成物質(zhì)進行結(jié)構(gòu)表征，然后選取S.aureusATCC 6538和E.coliDH5α兩種常見細菌菌株進行抑菌性能研究。菌懸液濃度和OD值成正比，OD值越小則證明物質(zhì)的抑菌性能越強[24-25]。本實驗結(jié)果表明，三甲胺柱[5]芳烴處理后，在未達到MIC時，OD值較高，96 孔板中培養(yǎng)基渾濁，表明菌株生長未受到抑制并在培養(yǎng)基中大量繁殖；當達到MIC時，液體培養(yǎng)基開始澄清，表明細菌生長受到抑制，相應OD值則顯著降低。平板涂布實驗結(jié)果表明，在達到MIC時細菌生長僅被抑制，一旦給與細菌合適的生長條件，細菌仍會生長繁殖形成菌落。隨著三甲胺柱[5]芳烴質(zhì)量濃度增加，平板上的菌落數(shù)量也隨之下降，在達到MBC時，菌株停止生長?？偟貋碚f，三甲胺柱[5]芳烴對革蘭氏陽性菌的抑菌效果優(yōu)于革蘭氏陰性菌，這與Joseph等[20-21]研究結(jié)果一致。

此外，在對生物被膜形成影響的實驗中，隨著三甲胺柱[5]芳烴質(zhì)量濃度的增加，S.aureusATCC 6538和E.coliDH5α生物被膜形成量逐漸減少，呈質(zhì)量濃度依賴性，并且三甲胺柱[5]芳烴對革蘭氏陽性菌的抑制效果優(yōu)于革蘭氏陰性菌。

為了更直觀地了解抑菌劑對細菌細胞膜的影響，可采用TEM進行觀察，通過對比對照組與處理組細菌細胞膜形態(tài)差異，以及抑菌劑對細菌細胞膜的損傷情況，從而大致推斷抑菌劑的抑菌機制[28-29]。TEM觀察結(jié)果顯示，三甲胺柱[5]芳烴會影響S.aureusATCC 6538和E.coliDH5α的細胞膜通透性，導致膜穿孔、菌體裂解，使胞內(nèi)物質(zhì)大量流失而使菌體死亡。

食品防腐劑的過度添加會使細菌產(chǎn)生耐藥性，導致傳統(tǒng)抑菌劑的效果逐漸降低；而大多數(shù)化學合成防腐劑長期食用存在潛在致病風險，加之人們對食品安全問題的日漸重視，因此研發(fā)一種新型無毒、抗菌效果好的抑菌劑非常重要。本實驗采用MTT法分析三甲胺柱[5]芳烴的生物安全性，與傳統(tǒng)方法相比，MTT法是最簡便的測定細胞活力方法之一[30]。實驗結(jié)果表明MIC范圍內(nèi)三甲胺柱[5]芳烴對HeLa和MCF7細胞均無毒性，具有作為新型食品防腐劑或者抑菌藥物的潛力。

本實驗合成了水溶性三甲胺柱[5]芳烴，具有一定的抑菌效果，且毒性很低，可與其他抑菌劑復配使用，但其抑菌機制需進一步探討。