張藝

(福建省閩東水產(chǎn)研究所，福建 寧德 352100)

擬穴青蟹又稱青蟹，在我國主要分布于福建、廣東、廣西、浙江等沿海地區(qū)。2020年，福建省青蟹養(yǎng)殖面積約為6萬畝，主要養(yǎng)殖模式以池塘養(yǎng)殖為主。近年來一蟹一盒的“蟹公寓”養(yǎng)殖模式有所發(fā)展，解決了池塘養(yǎng)殖條件下青蟹互相殘殺、抵抗自然災(zāi)害能力弱和占地面積大等問題，但目前僅限于育肥、育膏、軟殼蟹養(yǎng)殖等階段。國內(nèi)外學(xué)者關(guān)于鹽度變化對(duì)青蟹存活的影響、甲殼動(dòng)物的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制等進(jìn)行了廣泛研究，而鹽度對(duì)青蟹養(yǎng)殖效果、免疫機(jī)能影響的研究鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)研究了鹽度對(duì)擬穴青蟹養(yǎng)殖存活率、生長性能和免疫酶活性的影響，旨在為開展青蟹工廠化養(yǎng)殖技術(shù)提供技術(shù)參考。

一、材料與方法

1.青蟹來源

擬穴青蟹為寧德市蕉城區(qū)三都鎮(zhèn)灘涂野生青蟹，附肢完整、活力好、無病無傷、大小均勻，平均規(guī)格為每只殼長(9.52±0.78)厘米、體質(zhì)量(154±36.81)克，共150只。

2.試驗(yàn)設(shè)計(jì)及養(yǎng)殖管理

(1)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。試驗(yàn)在寧德市鼎誠水產(chǎn)有限公司三都鎮(zhèn)象溪村青蟹工廠化養(yǎng)殖車間進(jìn)行，采用“蟹公寓”進(jìn)行一蟹一盒隔離養(yǎng)殖。試驗(yàn)周期30天，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)置3個(gè)平行試驗(yàn)，每組10只擬穴青蟹。試驗(yàn)采用緩慢降鹽的方法，首先將海水鹽度直接降至20，再以日均2.5的幅度將鹽度降至15和10，然后繼續(xù)將鹽度緩慢降至5，最終將擬穴青蟹養(yǎng)殖在試驗(yàn)組鹽度分別為5(S5)、10(S10)、15(S15)、20(S20)和 對(duì) 照 組 鹽 度27(S27)的水環(huán)境中。

(2)日常管理。餌料每天分兩次投喂，以活體縊蟶為餌料，日投喂量按新鮮貝肉計(jì)，為青蟹重量的6%～8%，并根據(jù)青蟹具體攝食情況調(diào)整。每天做好清污工作，并撈除死蟹，做好養(yǎng)殖記錄。

3.生物學(xué)測(cè)定

(1)體重及甲殼長的測(cè)量。養(yǎng)殖30天后，將各組的青蟹一一取出，稱量前先用吸水紙吸干體表水分，用電子天平(精度0.1克)測(cè)定體重，并用直尺測(cè)量甲殼長(精度0.01毫米)。

(2)免疫指標(biāo)的測(cè)定。飼喂30天后制備血清，進(jìn)行酚氧化酶(PO)、過氧化物酶(POD)、溶菌酶(LZM)、酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)活力的檢測(cè)，均采用試劑盒(南京建成生物工程研究所研制)測(cè)定。

數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s多重比較分析，顯著性差異設(shè)定為P＜0.05，極顯著差異設(shè)定為P＜0.01。

二、結(jié)果

1.鹽度對(duì)擬穴青蟹存活率的影響

養(yǎng)殖30天，擬穴青蟹的存活率為(73.3±7.64)%～(93.3±2.89)%，對(duì)照組存活率最低，為(73.3±7.64)%；試驗(yàn)組S5存活率最高，為(93.3±2.89)%。低鹽度下養(yǎng)殖擬穴青蟹，對(duì)養(yǎng)殖存活率影響不顯著。

2.鹽度對(duì)擬穴青蟹生長性能的影響

經(jīng)30天低鹽度養(yǎng)殖，擬穴青蟹的體質(zhì)量特定生長率為(13.33±0.18)%～(17.66±0.16)%/天，甲殼長特定生長率為(5.98±0.26)%～(7.02±0.23)%/天。試驗(yàn)組S5的體質(zhì)量特定生長率和甲殼長特定生長率最高，分別為(17.66±0.16)%/天和(7.02±0.23)%/天；對(duì)照組的體質(zhì)量特定生長率和甲殼長特定生長率最低，分別為(13.33±0.18)%/天和(5.98±0.26)%/天。

3.鹽度對(duì)擬穴青蟹免疫酶活性的影響

養(yǎng)殖30天，擬穴青蟹的酚氧化酶活性在[(147.33±0.67)～(621.67±1.45)]單位/毫升。試驗(yàn)組S5的酚氧化酶活性最高，達(dá)(621.67±1.45)單位/毫升；對(duì)照組S27的酶活性最低，為(147.33±0.67)單位/毫升。所有組之間均為顯著性差異(P＜0.05)。

養(yǎng)殖30天，擬穴青蟹的過氧化物酶活性在[(18.78±0.50)～(42.19±0.04)]單位/毫升。試驗(yàn)組S5的過氧化物酶活性最高，達(dá)(42.19±0.04)單位/毫升；對(duì)照組S27的酶活性最低，為(18.78±0.50)單位/毫升。試驗(yàn)組S15和S10無顯著性差異，其他組間為顯著性差異(P＜0.05)。

養(yǎng)殖30天，擬穴青蟹的溶菌酶活性在[(65.65±1.22)～(136.79±1.17)]單位/毫升。試驗(yàn)組S10的溶菌酶活性最高，達(dá)(136.79±1.17)單位/毫升；對(duì)照組S27的酶活性最低，為(65.65±1.22)單位/毫升。所有組之間均為顯著性差異(P＜0.05)。

養(yǎng)殖30天，擬穴青蟹的酸性磷酸酶活性在[(0.58±0.06)～(3.26±0.09)]單位/毫升。試驗(yàn)組S5的酸性磷酸酶活性達(dá)到最高，達(dá)(3.26±0.09)單位/毫升；對(duì)照組S27的酶活性最低，為(0.58±0.06)單位/毫升。其中試驗(yàn)組S15和S20無顯著性差異，其他各組之間均為顯著性差異(P＜0.05)。

養(yǎng)殖30天，擬穴青蟹的堿性磷酸酶活性在[(0.49±0.08)～(10.49±0.17)]單位/毫升。試驗(yàn)組S5的堿性磷酸酶活性最高，為(10.49±0.17)單位/毫升；對(duì)照組S27的酶活性最低，為(0.49±0.08)單位/毫升。所有組之間均為顯著性差異(P＜0.05)。

三、討論

1.低鹽度對(duì)擬穴青蟹存活率的影響

本次試驗(yàn)結(jié)果表明，在低鹽度條件下，擬穴青蟹隨著鹽度的升高，存活率呈現(xiàn)出先降低、后升高的趨勢(shì)，試驗(yàn)組存活率均較高。試驗(yàn)結(jié)果與遠(yuǎn)洋梭子蟹存活率隨鹽度降低而提高，鹽度漸變對(duì)三疣梭子蟹幼蟹存活率的影響小于相對(duì)鹽度下的驟變組(王沖等，2010；路允良，2012)結(jié)果一致，分析其主要原因，隨著鹽度的降低，控制了海水中的致病菌、病蟲害的感染等，導(dǎo)致低鹽度條件下擬穴青蟹的存活率提升。

2.低鹽度對(duì)擬穴青蟹生長速度的影響

本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，在低鹽度條件下，擬穴青蟹隨著鹽度的降低，體質(zhì)量特定生長率和甲殼長特定生長率呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢(shì)，試驗(yàn)組體質(zhì)量特定生長率和甲殼長特定生長率均較高。試驗(yàn)結(jié)果與遠(yuǎn)洋梭子蟹幼蟹生長速率隨鹽度降低而提高，三疣梭子蟹的特定生長率隨鹽度的降低而提高(王沖等，2010；路允良，2012)結(jié)果一致。且有研究表明，自然條件下成熟的擬穴青蟹會(huì)在高鹽度海水中繁殖，而幼蟹則會(huì)隨著水流遷移，在低鹽度的河口等地區(qū)生長(喬振國等，2004；陳弘成等，1985)，說明在自然選擇的條件下，擬穴青蟹幼蟹會(huì)生活在對(duì)自身生長有優(yōu)勢(shì)的環(huán)境中，更加充分說明了低鹽度養(yǎng)殖擬穴青蟹的可行性。筆者認(rèn)為，產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因主要是隨著鹽度的降低，擬穴青蟹的新陳代謝加快、餌料轉(zhuǎn)化高等導(dǎo)致體質(zhì)量特定生長率和甲殼長特定生長率升高。這說明低鹽養(yǎng)殖擬穴青蟹的可實(shí)施性非常大，具有很好的理論依據(jù)。

3.低鹽度對(duì)擬穴青蟹血清免疫酶活性的影響

(1)對(duì)酚氧化酶活性的影響。酚氧化酶(PO)在青蟹體內(nèi)以酚氧化酶原形式存在，在甲殼動(dòng)物的免疫防御機(jī)制中有著獨(dú)樹一幟的作用，可以激活由絲氨酸蛋白酶和多種因子構(gòu)成的酚氧化酶原激活系統(tǒng)。酚氧化酶原系統(tǒng)具有防御、識(shí)別異物的兩個(gè)重要作用，有著類似于脊椎動(dòng)物的補(bǔ)體系統(tǒng)，在甲殼動(dòng)物的體內(nèi)非常重要。在微生物入侵機(jī)體時(shí)，其中的一些成分如肽聚糖、脂多糖等作為異己信號(hào)與結(jié)合蛋白結(jié)合，激活絲氨酸蛋白酶，然后將酚氧化酶激活為PO，PO生成的黑色素會(huì)抑制病原體胞外的蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性，從而達(dá)到殺死病原的重要作用(孟凡倫等，1999；李國榮等，2003)。PO活性在一定程度上反映了機(jī)體免疫能力的狀態(tài)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，鹽度脅迫對(duì)青蟹血清PO活性的影響差異極顯著(P＜0.01)。試驗(yàn)組S5的PO活性最高，說明養(yǎng)殖30天，青蟹血細(xì)胞中的酚氧化酶系統(tǒng)被更大限度地激活，以應(yīng)對(duì)鹽度脅迫引發(fā)的不利影響；此鹽度下，擬穴青蟹抗病力強(qiáng)、不易患病。

(2)對(duì)過氧化物酶活性的影響。過氧化物酶(POD)活性與生物免疫水平密切相關(guān)，可作為甲殼動(dòng)物非特異性免疫指標(biāo)(亓磊等，2013；潘魯青等，2002)。本次試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，鹽度脅迫對(duì)青蟹血清POD活性的影響差異顯著(P＜0.05)，隨著鹽度降低，POD活性逐漸升高，試驗(yàn)組S5血清中的POD活性最高，表明此鹽度下擬穴青蟹體內(nèi)因吞噬作用產(chǎn)生的自由基會(huì)被POD作用清除，青蟹生理活動(dòng)良好。

(3)對(duì)溶菌酶活性的影響。溶菌酶是生物體非特異性免疫系統(tǒng)的主要成分，在甲殼動(dòng)物的免疫中起重要作用，具有殺菌、抗感染、誘導(dǎo)調(diào)節(jié)其他免疫因子合成和分泌、增加免疫力、修復(fù)傷口等功能(劉樹青等，1999；丁美麗等，1997)。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，低鹽度養(yǎng)殖下，隨著鹽度的降低，溶菌酶活性先升高、后降低，試驗(yàn)組S10溶菌酶活性最高，說明青蟹的非特異性免疫較強(qiáng)，不易被異物侵入。

(4)對(duì)磷酸酶活性的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著鹽度降低，酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)活性升高，加快了磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，大大增強(qiáng)營養(yǎng)運(yùn)輸；同時(shí)形成水解酶體系，破壞和消除侵入體內(nèi)的異物，對(duì)維持蝦、蟹類的生存和生長有特別重要的意義(李國榮等，2003)。劉存歧(2001)分析金屬離子對(duì)中國對(duì)蝦幼體AKP的影響，認(rèn)為磷酸酶活性的高低可以作為判斷機(jī)體免疫能力的指標(biāo)。ACP主要參與磷酸酯的代謝，作為溶酶體的標(biāo)志酶，ACP與溶菌酶生理功能的正常發(fā)揮密切相關(guān)，在血細(xì)胞吞噬和包吞胞吐反應(yīng)中，常伴隨有酸性磷酸酶的釋放(張偉妮等，2011)。隨著鹽度的降低，機(jī)體會(huì)進(jìn)行滲透壓穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)，從而消耗大量ATP，而ACP和AKP可以通過催化水解磷酸酯類物質(zhì)生成ATP必需的無機(jī)磷酸，進(jìn)而使AKP和ACP活性增加，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫活性，在高鹽度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)酶的研究中也得到了相似的結(jié)論(李娜等，2018)。本試驗(yàn)中，隨著鹽度降低，酶活性逐漸增高，試驗(yàn)組S5的AKP和ACP活性達(dá)到最高。