雷萌桐，李春花，蔡進(jìn)忠，索南多杰，李英明

(1.青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海 西寧 810016，青海省動(dòng)物疾病病原診斷與綠色防控技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810016； 2.祁連縣畜牧獸醫(yī)站，青海 祁連 810400；3.互助縣畜牧獸醫(yī)站，青海 互助 810500)

牦牛因依賴(lài)天然草場(chǎng)放牧飼養(yǎng)易受寄生蟲(chóng)的侵襲，特別是消化道線(xiàn)蟲(chóng)病，是牦牛飼養(yǎng)業(yè)中常見(jiàn)的重要疫病之一，該病在青藏高原的放牧家畜中流行廣泛，并多為混合感染，給防治帶來(lái)困難，其造成飼料報(bào)酬降低、畜產(chǎn)品質(zhì)量下降，甚至引起牲畜大量死亡，對(duì)草原飼養(yǎng)業(yè)造成了較大的危害，嚴(yán)重制約了草地畜牧業(yè)的發(fā)展。

伊維菌素(Ivermectin)是一種廣譜、高效、低毒的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗寄生蟲(chóng)藥，對(duì)體內(nèi)線(xiàn)蟲(chóng)和體外節(jié)肢動(dòng)物(昆蟲(chóng)、蜱和螨)等具有良好的驅(qū)殺效果[1]，自1976年美國(guó)Merck公司成立以來(lái)，由于驅(qū)蟲(chóng)、殺蟲(chóng)效果好，對(duì)人畜較安全，已開(kāi)發(fā)出多種可供獸醫(yī)臨床使用的劑型，廣泛用于多種動(dòng)物的線(xiàn)蟲(chóng)病和節(jié)肢動(dòng)物病等寄生蟲(chóng)病的防治[2,3]。隨著廣泛應(yīng)用，抗藥性問(wèn)題也顯露出來(lái)[4-7]。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)寄生蟲(chóng)抗藥性問(wèn)題關(guān)注較多。上世紀(jì)90年代初，世界獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)促進(jìn)協(xié)會(huì)(WAAVP)就制訂了評(píng)價(jià)反芻動(dòng)物、豬和馬屬動(dòng)物等驅(qū)蟲(chóng)藥的準(zhǔn)則，制訂了檢測(cè)抗藥性線(xiàn)蟲(chóng)的若干試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，使抗藥性線(xiàn)蟲(chóng)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)更容易獲得，其結(jié)果能被廣泛接受[8]。糞便蟲(chóng)卵減少試驗(yàn)(EHT)是世界獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)促進(jìn)協(xié)會(huì)(WAACP)所推薦的檢測(cè)方法之一，在許多國(guó)家應(yīng)用在消化道線(xiàn)蟲(chóng)的檢測(cè)中，為制定驅(qū)蟲(chóng)措施，選擇驅(qū)蟲(chóng)藥物提供了依據(jù)。為摸清青海祁連地區(qū)牦牛主要消化道線(xiàn)蟲(chóng)對(duì)伊維菌素的抗藥性現(xiàn)狀，我們選用伊維菌素片劑，按照世界獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)促進(jìn)協(xié)會(huì)(WAACP)制訂的方法和判定標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行了本項(xiàng)試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)地區(qū)概況

祁連縣隸屬于青海省海北藏族自治州，面積1.4萬(wàn)km2，境內(nèi)平均海拔3 169 m，縣城海拔2 787 m，年平均氣溫1℃，年降水量約在420 mm左右，屬典型的高原大陸性氣候。默勒鎮(zhèn)地處祁連縣東南部，是全縣最大的畜牧業(yè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)。有草場(chǎng)26.3萬(wàn)hm2，屬山地草甸類(lèi)草場(chǎng)，是天然的優(yōu)良牧場(chǎng)。有牲畜33.06萬(wàn)頭(只、匹)，牲畜總數(shù)占全縣牲畜數(shù)的28.1%。

1.2 試驗(yàn)藥物

伊維菌素片劑，西寧豐源農(nóng)牧科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20160112，每片含伊維菌素5 mg，100片/瓶，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所檢驗(yàn)室檢驗(yàn)合格。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

在祁連縣默勒鎮(zhèn)老日根村，從試驗(yàn)前7個(gè)月未投服任何驅(qū)蟲(chóng)藥的牦牛中，通過(guò)直腸采糞和常規(guī)糞便檢查(飽和鹽水漂浮法)，篩選出自然感染消化道線(xiàn)蟲(chóng)的2歲牦牛60頭供試。

1.4 分組

將60頭自然感染消化道線(xiàn)蟲(chóng)的供試牛隨機(jī)分為4組，每組15頭，1～3組為伊維菌素片劑試驗(yàn)組，4組為陽(yáng)性對(duì)照組。分組如下：

組1：伊維菌素片劑0.1 mg/kg體重劑量經(jīng)口投服給藥。

組2：伊維菌素片劑0.2 mg/kg體重劑量經(jīng)口投服給藥。

組3：伊維菌素片劑0.3 mg/kg體重劑量經(jīng)口投服給藥。

組4：陽(yáng)性對(duì)照組，不給藥。

1.5 方法

1.5.1第1-3組試驗(yàn)牛逐頭編號(hào)、稱(chēng)重、標(biāo)記、記錄，分別按0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg劑量口服給藥。第4組試驗(yàn)牛不給藥。

1.5.2糞便蟲(chóng)卵檢查投藥前1 d和投藥后7 d、14 d，從各組試驗(yàn)牛逐頭進(jìn)行直腸采糞，帶回實(shí)驗(yàn)室，每份糞便稱(chēng)取1 g，用飽和鹽水漂浮法檢查消化道線(xiàn)蟲(chóng)每克糞便蟲(chóng)卵數(shù)(EPG)。

1.5.3飽和鹽水制備：在1 000 mL沸水中加入380 g食鹽，待有結(jié)晶析出，此溶液的比重應(yīng)為1.180，冷卻后放置備用。

1.5.4操作：①用天平稱(chēng)取糞便1 g，置于小燒杯內(nèi)，加入適量清水浸泡；待糞便泡軟后，用鑷子搗碎攪勻；②用60目銅篩網(wǎng)過(guò)濾于試管中，靜置沉淀1 h；③吸去上清液，加入適量飽和鹽水搖勻，然后加入飽和鹽水至液面達(dá)管口水平，加蓋玻片與液面平接觸 (勿產(chǎn)生氣泡)。靜置30 min，取下蓋玻片，置于載玻片上進(jìn)行鏡檢并分類(lèi)計(jì)數(shù)。

1.6 效果判定

按下列公式計(jì)算蟲(chóng)卵減少率，并根據(jù)檢查結(jié)果，與陽(yáng)性對(duì)照組比較，分析是否存在抗藥性。

蟲(chóng)卵減少率=(給藥前EPG-給藥后EPG)/給藥前EPG×100%

2 結(jié)果

2.1 牦牛主要消化道線(xiàn)蟲(chóng)

依據(jù)糞檢結(jié)果，從試驗(yàn)牦牛檢出的消化道線(xiàn)蟲(chóng)主要有奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)(Ostertagia)、馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)(Marshallagia)、細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)(Nematodirus)。

2.2 奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)(Ostertagia)糞檢蟲(chóng)卵結(jié)果

奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)糞檢蟲(chóng)卵減少情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，給藥后第7 d和14 d檢查，伊維菌素片劑 0.1 mg/kg劑量組對(duì)試驗(yàn)牦牛自然感染奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)卵減少率分別為96.7%和98.1%；0.2 mg/kg劑量組蟲(chóng)卵減少率為100%和100%；0.3 mg/kg劑量組蟲(chóng)卵減少率分別為100%和100%；陽(yáng)性對(duì)照組檢查，糞便蟲(chóng)卵數(shù)無(wú)明顯變化。

表1 伊維菌素對(duì)奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)的蟲(chóng)卵減少率

2.3 馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)(Marshallagaa)糞檢蟲(chóng)卵結(jié)果

馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)糞檢蟲(chóng)卵減少情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，給藥后第7 d和14 d檢查，伊維菌素片劑0.1 mg/kg劑量組對(duì)試驗(yàn)牦牛自然感染馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)減少率分別為100%和100%；0.2 mg/kg劑量組蟲(chóng)卵減少率分別為100%和100%；0.3 mg/kg劑量組蟲(chóng)卵減少率分別為100%和100%；陽(yáng)性對(duì)照組檢查，糞便蟲(chóng)卵數(shù)無(wú)明顯變化。

表2 伊維菌素對(duì)馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)的蟲(chóng)卵減少率

2.4 細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)(Nematodirus)糞檢蟲(chóng)卵結(jié)果

細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)糞檢蟲(chóng)卵減少情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，給藥后7 d和14 d檢查，伊維菌素片劑 0.1 mg/kg劑量組對(duì)試驗(yàn)牦牛自然感染細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)卵減少率分別為100%和100%；0.2 mg/kg劑量組蟲(chóng)卵減少率分別為100%和100%；0.3 mg/kg劑量組蟲(chóng)卵減少率分別為100%和100%；陽(yáng)性對(duì)照組檢查，糞便蟲(chóng)卵數(shù)無(wú)明顯變化。

表3 伊維菌素對(duì)細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)的蟲(chóng)卵減少率

3 討論

3.1本次試驗(yàn)中伊維菌素片劑0.1 mg/kg劑量組時(shí)，對(duì)試驗(yàn)牦牛自然感染奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)卵減少率為96.7%和98.1%，對(duì)馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)和細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)卵減少率達(dá)到100%，對(duì)奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)不能一次性徹底驅(qū)蟲(chóng)。在使用0.2 mg/kg和0.3 mg/kg更高劑量組時(shí)，奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)、馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)、細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)卵減少率均達(dá)到了100%。按照世界獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)促進(jìn)協(xié)會(huì)(WAACP)制訂的判定標(biāo)準(zhǔn)，本次試驗(yàn)證明青海省祁連地區(qū)自然感染牦牛主要消化道線(xiàn)蟲(chóng)(奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)、馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)、細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng))對(duì)伊維菌素尚未產(chǎn)生抗藥性。

3.2目前，伊維菌素已在我國(guó)動(dòng)物養(yǎng)殖中應(yīng)用多年，有些地區(qū)在用藥后出現(xiàn)驅(qū)蟲(chóng)效果不佳現(xiàn)象，可能是該地區(qū)的蟲(chóng)體對(duì)伊維菌素產(chǎn)生了抗藥性。寄生蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性后，不但造成藥物減效或失效，延誤治療時(shí)機(jī)，同時(shí)也造成人力、財(cái)力及藥物的浪費(fèi)，給畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失[9]。因此，在畜禽的寄生蟲(chóng)病防治工作中，要通過(guò)輪換用藥、聯(lián)合用藥等科學(xué)用藥措施，結(jié)合常用驅(qū)蟲(chóng)藥物的藥效評(píng)價(jià)及其對(duì)寄生蟲(chóng)的抗藥性檢測(cè)，延緩、防止寄生蟲(chóng)抗藥性的產(chǎn)生，保證畜牧業(yè)生產(chǎn)健康發(fā)展。

3.3小結(jié) 采用糞便蟲(chóng)卵減少試驗(yàn)，就祁連地區(qū)牦牛主要消化道線(xiàn)蟲(chóng)對(duì)伊維菌素的抗藥性進(jìn)行了檢測(cè)，參照世界獸醫(yī)寄生蟲(chóng)學(xué)促進(jìn)協(xié)會(huì)(WAACP)制訂的判定標(biāo)準(zhǔn)，本次試驗(yàn)證明青海省祁連地區(qū)牦牛自然感染的主要消化道線(xiàn)蟲(chóng)(奧斯特線(xiàn)蟲(chóng)、馬歇爾線(xiàn)蟲(chóng)、細(xì)頸線(xiàn)蟲(chóng))對(duì)伊維菌素尚未產(chǎn)生抗藥性。