和 斌，康 樂，瞿曉燕，楊尚，劉楚穎，閆 薔

(同濟大學(xué)a.附屬楊浦醫(yī)院臨床研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心，上海 200090；b.附屬第一婦嬰保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，上海 200120)

子宮腺肌癥在臨床上是一種較為多見的婦科良性疾患，其病理表現(xiàn)為子宮基底層內(nèi)膜細(xì)胞增生并侵入至子宮內(nèi)膜肌層間質(zhì)中，其臨床表現(xiàn)為盆腔疼痛、子宮出血過多、貧血和不孕癥等，然而子宮腺肌癥的病因迄今仍然難以很好地解釋[1]。目前較為公認(rèn)的學(xué)說[2]認(rèn)為，該疾病的病變是由于子宮內(nèi)膜黏膜下層的缺失從而導(dǎo)致子宮內(nèi)膜基底層的細(xì)胞侵襲和代償性增生而形成，基因因素、子宮內(nèi)膜基底層的損害如人工流產(chǎn)、分段刮宮術(shù)等均與子宮腺肌癥的發(fā)生緊密相關(guān)。

氧化應(yīng)激是指一種活性氧(ROS)與抗活性氧物之間形成的不平衡現(xiàn)象[3]。雖然正常細(xì)胞的生長需要一定量的ROS，但是過量的ROS產(chǎn)生可能損傷機體的天然抗氧化防御系統(tǒng)，形成一種不適于正常女性生理反應(yīng)的環(huán)境[4]。有研究[5]指出，不明原因不孕癥的發(fā)生與氧化應(yīng)激有關(guān)。而且，近年有文獻報道[6]指出：氧化應(yīng)激與多種婦科良性疾病有關(guān)，包括內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌病、輸卵管囊腫等。

沉默調(diào)節(jié)蛋白6(Sirt6)是去乙?；窼irtuin家族中最重要的成員之一，是一種NAD+依賴性組蛋白去乙?；负虯DP核糖轉(zhuǎn)移酶[7]。Sirt6在細(xì)胞衰老、新陳代謝、氧化應(yīng)激、炎癥及自噬等過程中起著重要作用[8]。有研究[9-11]發(fā)現(xiàn)，Sirt6在多種細(xì)胞模型中顯示良好的抗氧化應(yīng)激作用。例如，Sirt6可通過NRF2/ARE通路緩解氧化應(yīng)激從而保護肝細(xì)胞及視網(wǎng)膜細(xì)胞的氧化損傷，也可通過上調(diào)內(nèi)源性抗氧化劑來減輕心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷[9-10]。本研究旨在觀察子宮腺肌癥患者血清中Sirt6以及氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平并分析其相關(guān)性，為子宮腺肌癥發(fā)病機制的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2021年4—10月同濟大學(xué)附屬楊浦醫(yī)院收治的子宮腺肌癥患者20例作為腺肌癥組，另選擇同期體檢健康婦女20名作為正常組。腺肌癥組和正常組年齡分別為21～45(32.67±5.45)歲和21～48(30.83±5.63)歲，2組年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)子宮腺肌癥患者均經(jīng)病理檢查確診；2)體檢健康婦女及子宮腺肌癥患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)3個月內(nèi)服用過激素類藥物者；2)合并內(nèi)分泌、免疫性疾病者；3)合并惡性腫瘤或其他器質(zhì)性疾病者；4)具有感染和糖尿病史者；5)合并精神疾病、智力障礙或無法交流者；6)處于妊娠期或哺乳期者。本研究已獲得同濟大學(xué)附屬楊浦醫(yī)院倫理委員會審核并通過。

1.2 主要試劑和儀器

人沉默調(diào)節(jié)蛋白6(Sirt6)酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自ELK Biotechnology公司；丙二醛(MDA)檢測試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒均購自Beyotime生物科技有限公司；Spectramax M5酶標(biāo)儀購自美谷分子公司。

1.3 方法

1.3.1 血清Sirt6檢測

采集2組空腹外周血，室溫下靜置1 h后1000 g(1 g=2.528 r·min-1)離心15 min；取上清保存于-80 ℃?zhèn)溆?。血清Sirt6檢測按照人Sirt6酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒說明書進行，在波長450 nm處測定樣本的吸光度，根據(jù)吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線并分析Sirt6水平。

1.3.2 氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測

利用MDA檢測試劑盒、SOD活性檢測試劑盒分別檢測2組血清中MDA含量及SOD活性。

1.3.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組血清Sirt6水平比較

正常組血清Sirt6水平高于腺肌癥組[(7.03±4.59)ng·mL-1比(2.65±1.52)ng·mL-1，P<0.001]。見圖1。

2.2 2組血清氧化應(yīng)激水平比較

正常組血清中MDA含量明顯低于腺肌癥組[(2.75±2.11)μmol·L-1比(5.45±2.48)μmol·L-1，P<0.001]，而SOD活性高于腺肌癥組[(0.75±0.20)U比(0.52±0.24)U，P<0.01]。見圖2。

*P<0.001。圖1 2組血清Sirt6水平比較

*P<0.01，**P<0.001。圖2 2組血清MDA含量、SOD活性比較

2.3 血清Sirt6與MDA、SOD相關(guān)性分析

相關(guān)性分析顯示，血清中Sirt6水平與MDA含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.56，P<0.05)，而Sirt6水平與SOD活性呈正相關(guān)(r=0.32，P<0.05)。見圖3。

MDA水平/(μmol·L-1)SOD水平/U

3 討論

子宮腺肌癥是一種子宮良性疾患，其往往伴有不孕癥和胚胎的不良植入，這是由于子宮環(huán)境改變、子宮收縮異常、炎癥增加和子宮內(nèi)膜功能異常等造成的[11]。在不孕癥婦女中約有25%患者存在著子宮腺肌癥，由于腺肌癥位置的原因，對于著床障礙患者，子宮腺肌癥極易造成其不孕。由于腺肌癥連接區(qū)肌層的異常收縮[12]，肥大肌纖維促進明顯的子宮蠕動和內(nèi)膜壓的增加，從而影響精子的運輸和植入[13]。也有學(xué)者[13-14]認(rèn)為，過度的慢性炎癥、血管改變、細(xì)胞因子分泌異常以及因ROS相關(guān)酶的過度表達導(dǎo)致自由基水平異常等均可導(dǎo)致腺肌癥，從而影響早期胚胎植入和發(fā)育。

本研究發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，子宮腺肌癥組患者血清MDA含量明顯升高、SOD活性下降，表明子宮腺肌癥時患者機體處于高氧化應(yīng)激狀態(tài)。氧化應(yīng)激是機體內(nèi)活性氧與抗氧化系統(tǒng)的失衡導(dǎo)致ROS過度產(chǎn)生，進而造成對機體的損害[15]。MDA和SOD是評價氧化應(yīng)激程度的重要指標(biāo)，MDA是硫代巴比妥酸的活性物質(zhì)，可間接反映細(xì)胞受活性氧攻擊造成的氧化損傷，而SOD是機體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)正常組血清中Sirt6水平高于子宮腺肌癥組，而且Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)Sirt6水平與SOD活性呈正相關(guān)，而與MDA含量呈負(fù)相關(guān)，這提示Sirt6可能參與子宮腺肌癥氧化損傷的調(diào)控機制。既往研究[7]顯示，Sirt6作為Sirtuins家族的一員在DNA修復(fù)、抗衰老、代謝等生理和病理進程中具有重要作用。而且最新研究[16]表明，Sirt1、Sirt3和Sirt5具有保護細(xì)胞免受活性氧ROS攻擊的影響，Sirt2、Sirt6和Sirt7具有調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激關(guān)鍵基因的作用，Sirt4可誘導(dǎo)活性氧ROS產(chǎn)生而具有抗氧化作用。另有研究[17-18]發(fā)現(xiàn)，Sirt6在血管病變、肝損害、糖尿病、視網(wǎng)膜疾病中具有抗氧化作用，這與本研究結(jié)果相類似。而且，已有研究[19-21]顯示，Sirt6過表達可通過AMPK-FOXO3α通路降低氧化應(yīng)激和上調(diào)內(nèi)源性抗氧化劑來保護心肌細(xì)胞免受缺血性再灌注的損傷[19]；Sirt6也可通過激活NRF2通路來保護人間充質(zhì)干細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷，Sirt6的缺失導(dǎo)致人間充質(zhì)干細(xì)胞的氧化還原代謝紊亂，從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷的增加[20]；在短時間的高糖暴露中，Sirt6下調(diào)使核因子κB的表達增加，而Sirt6的過表達則降低核因子κB的表達；天然抗氧化劑麥角硫因酸的抗氧化作用與麥角硫因酸增加Sirt1和Sirt6的表達及其負(fù)性調(diào)控核因子κB有關(guān)[21]。然而，Sirt6在子宮腺肌癥的抗氧化損傷中的作用機制是否與上述信號通路之間相關(guān)，需要后續(xù)實驗進行驗證。

綜上，子宮腺肌癥患者血清中Sirt6、超氧化物歧化酶活性水平降低，丙二醛含量升高，且Sirt6水平與丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性相關(guān)，提示Sirt6可能是子宮腺肌癥氧化損傷的調(diào)控機制之一，可能成為子宮腺肌癥治療的靶點。但是，本實驗入組樣本數(shù)相對較少，后期應(yīng)擴大樣本量或者進行多中心研究來驗證Sirt6在子宮腺肌癥氧化應(yīng)激損傷中的作用。