宋麗影，李雨艷，周婷婷，路放

吉林金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司，吉林長(zhǎng)春 130000

該公司PCR實(shí)驗(yàn)室于2009年成立并通過臨檢中心首次驗(yàn)收，2019年6月17日吉林金域正式被授予為吉林省內(nèi)首家也是唯一一家“基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室崗前培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)操作基地”。

該檢測(cè)方法可用于檢測(cè)艾滋病、乙型肝炎、人禽流感等病毒感染，檢測(cè)方法為通過病毒內(nèi)所含基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法，判斷出一些病毒含量不高感染者體內(nèi)是否含有特定病毒。2020年后，該公司在省內(nèi)開展多家PCR實(shí)驗(yàn)室，而作為省內(nèi)培訓(xùn)基地承接了來自多家單位的PCR進(jìn)修人員的帶教工作。PCR技術(shù)具備特異性高、靈敏度強(qiáng)、對(duì)樣品要求低等特點(diǎn)，但同時(shí)整個(gè)檢測(cè)操作步驟較為繁瑣，自動(dòng)化程度低，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中任何一個(gè)環(huán)節(jié)的疏忽都可能對(duì)結(jié)果造成嚴(yán)重影響[1-2]。故此帶教老師需根據(jù)進(jìn)修生進(jìn)修目的，定制培訓(xùn)計(jì)劃，幫助其明晰重點(diǎn)，做到有的放矢。兩年來，該科室一直從事臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室進(jìn)修生帶教工作，總結(jié)出幾點(diǎn)帶教體會(huì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 科室設(shè)備及項(xiàng)目介紹

該科室擁有一支專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，具有完整的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量安全管理體系及規(guī)范化的室內(nèi)質(zhì)控管理。科室所用主要檢測(cè)設(shè)備包括ABI7500熒光定量PCR儀、MA-6000熒光定量PCR儀、Luminex200流式熒光點(diǎn)陣儀、DML2000雜交信號(hào)擴(kuò)大儀、德同化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及LifeECO基因擴(kuò)增儀等。檢測(cè)項(xiàng)目近20項(xiàng)，包括HPV類宮頸癌篩查相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè)系列、肝炎類檢測(cè)系列、葉酸代謝能力基因檢測(cè)系列、性病感染系列、septin9腸癌基因檢測(cè)等。

2 根據(jù)進(jìn)修目的，制訂培訓(xùn)計(jì)劃，明確重點(diǎn)

進(jìn)修生學(xué)習(xí)時(shí)間為期1個(gè)月，由于時(shí)間較短所以必須有針對(duì)性地制訂培訓(xùn)計(jì)劃，便于進(jìn)修人員充分利用時(shí)間掌握要學(xué)習(xí)的知識(shí)。在制訂培訓(xùn)計(jì)劃前，應(yīng)了解學(xué)習(xí)需求，制訂更合理、更實(shí)用的教學(xué)內(nèi)容。由于其所在原單位的情況不同，進(jìn)修的目的也有所區(qū)別，有的進(jìn)修生所在醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室剛剛成立；有的醫(yī)院已開展幾項(xiàng)常規(guī)類項(xiàng)目，預(yù)計(jì)打算開展更多類型病毒感染檢驗(yàn)項(xiàng)目。因此在培訓(xùn)計(jì)劃中將學(xué)習(xí)內(nèi)容分為3個(gè)類別，即了解、掌握和熟練掌握。有側(cè)重點(diǎn)帶教更有助于進(jìn)修人員在有限的時(shí)間內(nèi)掌握自己要學(xué)習(xí)的知識(shí)。

3 實(shí)施培訓(xùn)過程

雖然大部分進(jìn)修生均是具備一定工作能力和經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員，但基因擴(kuò)增技術(shù)能夠在短時(shí)間內(nèi)完成擴(kuò)增，加之PCR檢驗(yàn)程序復(fù)雜，可涉及標(biāo)本采集、編號(hào)、準(zhǔn)備試劑、提取、上機(jī)擴(kuò)增以及產(chǎn)物檢測(cè)等諸多環(huán)節(jié)，每一個(gè)步驟的嚴(yán)謹(jǐn)程度和準(zhǔn)確率均關(guān)乎檢驗(yàn)結(jié)果。也正因如此，使得大部分進(jìn)修者帶有習(xí)慣性和經(jīng)驗(yàn)性錯(cuò)誤的檢驗(yàn)方式被不斷放大，出現(xiàn)不易察覺的風(fēng)險(xiǎn)。故此進(jìn)修生在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室正式學(xué)習(xí)之前，第一件事為對(duì)其進(jìn)行崗前教育，重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)制度、單一流向制度、日常、生物安全等。第二為強(qiáng)化職業(yè)責(zé)任感的培養(yǎng)，灌輸責(zé)任意識(shí)、服務(wù)意識(shí)，使得進(jìn)修生可以時(shí)刻保持精益求精的專業(yè)態(tài)度。其次進(jìn)行專業(yè)知識(shí)學(xué)習(xí)，并在培訓(xùn)過程中要切實(shí)關(guān)注和掌握進(jìn)修生學(xué)習(xí)動(dòng)態(tài)，針對(duì)錯(cuò)誤問題及時(shí)糾正，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作流程進(jìn)行操作。

4 增強(qiáng)進(jìn)修生的安全防護(hù)意識(shí)

作為標(biāo)準(zhǔn)化的PCR實(shí)驗(yàn)室，根據(jù)實(shí)際情況將其劃分為以下幾大主要區(qū)域，如試劑待檢區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、檢測(cè)分析區(qū)等，而介于檢測(cè)標(biāo)本具有一定傳染性和檢測(cè)重要性，各區(qū)域之間主要采用傳遞柜完成物品傳遞，以此可避免因人為工作造成的誤差等。同時(shí)，該科室明確規(guī)定不可將任何標(biāo)本隨意帶出PCR實(shí)驗(yàn)室，在避免污染環(huán)境的同時(shí)也要保障區(qū)域人民安全。而因當(dāng)下科室所開展的所有檢測(cè)項(xiàng)目均具有一定傳染性，所以對(duì)所檢測(cè)的樣本，如血液、分泌物等均一律視為傳染性物質(zhì)，檢測(cè)人員必須按照統(tǒng)一規(guī)定制度采取相應(yīng)的防護(hù)措施，并明晰檢驗(yàn)樣本前中后的順序。①檢驗(yàn)前：個(gè)人防護(hù)佩戴齊整，PCR實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)帶無粉乳膠手套，因有粉手套會(huì)抑制PCR反應(yīng)，影響檢測(cè)結(jié)果[3-4]。檢測(cè)不同類型樣本處理區(qū)實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)采用三級(jí)防護(hù),熟練防護(hù)服的穿脫順序。②檢驗(yàn)中：將可能出現(xiàn)的職業(yè)風(fēng)險(xiǎn)告知如下，因?yàn)椴僮魇д`或者人為失誤等導(dǎo)致玻璃器皿的破損、液體飛濺等因素可致使檢測(cè)人員感染檢測(cè)病毒，如乙肝、丙肝病毒、艾滋病病毒、梅毒等。因?yàn)閷?shí)踐操作過程中，使用相關(guān)儀器將產(chǎn)生人類肉眼和嗅覺無法感染到的氣體，可能會(huì)增加呼吸道病毒感染概率。由于實(shí)驗(yàn)室電器設(shè)備眾多，使用不當(dāng)會(huì)發(fā)生觸電事故；由于接觸到患者的血液、分泌物等標(biāo)本和醫(yī)療廢物，可能會(huì)引起病原微生物的感染；PCR實(shí)驗(yàn)引起的感染性物質(zhì)局部擴(kuò)增，可能引起擴(kuò)散和感染。如果檢測(cè)人員意識(shí)到上述職業(yè)風(fēng)險(xiǎn)或者發(fā)生上述情況后應(yīng)立即停止當(dāng)下工作，對(duì)于身體存在實(shí)質(zhì)性傷口的人員應(yīng)該立即從近心端向遠(yuǎn)心端擠壓傷口，盡可能擠壓出損傷處受到污染的血液，并使用流動(dòng)水源反復(fù)沖洗[5-6]。沖洗完畢后涂抹消毒物品，必要時(shí)可包扎傷口；如果無實(shí)質(zhì)性傷口通過黏膜發(fā)生職業(yè)暴露時(shí)，可及時(shí)使用沖淋裝置；如通過眼睛進(jìn)行傳播，需立即使用洗眼器完成眼部沖洗；無論任何職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生時(shí)，必須保持冷靜，及時(shí)處置，并于傷后24 h內(nèi)完成上報(bào)，告知生物安全主管，采取后續(xù)監(jiān)測(cè)流程[7-8]。③檢驗(yàn)后：樣本嚴(yán)格按照SOP上面要求的溫度及時(shí)限進(jìn)行保存。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)各區(qū)的工作臺(tái)面用10%次氯酸鈉液消毒液進(jìn)行消毒清潔，然后用75%乙醇清潔，再用紫外線殺菌車照射1 h；地面用10%次氯酸鈉液消毒液進(jìn)行消毒清潔，打開固定紫外燈消毒2 h。以《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》為前提，所有醫(yī)療廢物必須遵守該規(guī)定條例規(guī)范處理，并必須區(qū)分生活垃圾和醫(yī)療垃圾，對(duì)于醫(yī)療垃圾可將其放置于黃色標(biāo)志垃圾袋、對(duì)于生活垃圾可將其放置于黑色標(biāo)志垃圾袋，并由專人完成不同垃圾的收集、處理等流程。

5 培養(yǎng)質(zhì)量控制理念，確保結(jié)果準(zhǔn)確性

檢驗(yàn)工作質(zhì)量為先，其檢測(cè)出的最終結(jié)果直接關(guān)乎臨床診斷和后續(xù)采取的治療方式，關(guān)系到患者個(gè)人生命安全、家庭生活等，由此說明檢測(cè)質(zhì)量的重要性。而對(duì)于提升檢驗(yàn)質(zhì)量，只有不斷強(qiáng)化各個(gè)不同檢驗(yàn)流程的質(zhì)量控制，提高操作規(guī)范和人員意識(shí)，才能從根本上幫助臨床提供更加精準(zhǔn)的檢測(cè)數(shù)據(jù)，為臨床醫(yī)師后續(xù)采取的診療計(jì)劃打下良好依托[9-10]?！懊恳焕龢?biāo)本都是一顆期待的心”，我們的質(zhì)量方針是：公正、準(zhǔn)確、快速、創(chuàng)新，打造無縫鏈接的服務(wù)鏈，追求零缺陷的質(zhì)量目標(biāo)。質(zhì)量是生存的根本，質(zhì)量體系文件應(yīng)本著系統(tǒng)性、協(xié)調(diào)性、唯一性和適用性的原則。臨床檢驗(yàn)是應(yīng)用成熟的技術(shù)及方法對(duì)患者的臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，要求每一次檢測(cè)以及對(duì)每一份標(biāo)本的檢測(cè)都必須準(zhǔn)確、及時(shí)，這就要求實(shí)驗(yàn)室必須有嚴(yán)格的質(zhì)量保證程序[11-12]。在帶教過程中，要培養(yǎng)進(jìn)修生質(zhì)量控制的理念，掌握定性及定量項(xiàng)目質(zhì)控框架的建立，熟知質(zhì)控規(guī)則。以乙肝病毒（HBV）為例，每批檢測(cè)至少有待檢血清、HBV-PCR反應(yīng)液20管（20μl/管）、HBVDNA裂解液、陽性模板、溴化乙錠、PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、紫外線分析儀，質(zhì)控品隨機(jī)放在臨床標(biāo)本中，參與從提取到擴(kuò)增的全過程，讓進(jìn)修生理解室內(nèi)質(zhì)量控制是控制實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和精密度，檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度，提高本室常規(guī)工作中的批間、批內(nèi)標(biāo)本檢測(cè)的一致性[13-14]。真正做到“寫你所做、做你所寫、記錄你做和分析你做”，明確人員的職責(zé)、權(quán)限和行為規(guī)范，為實(shí)驗(yàn)室實(shí)現(xiàn)質(zhì)量目標(biāo)提供最有效、最切實(shí)可行的辦法。

6 提升操作技能，夯實(shí)理論知識(shí)

除了掌握理論知識(shí)，還應(yīng)加強(qiáng)進(jìn)修生的操作技能，更好地將理論與實(shí)踐相結(jié)合，學(xué)習(xí)過程中熟讀試劑說明書及項(xiàng)目SOP。能夠熟練掌握所學(xué)項(xiàng)目的方法學(xué)性能驗(yàn)證和實(shí)驗(yàn)操作，樣本的結(jié)果分析處理。精密度、正確度、線性、抗干擾能力等均為定量檢測(cè)方法和程序分析性能驗(yàn)證內(nèi)容，而測(cè)定下限、準(zhǔn)確度以及特異性等均為定性檢測(cè)項(xiàng)目中應(yīng)該驗(yàn)證的內(nèi)容[15-16]。熒光定量PCR儀和移液器均為臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室至關(guān)重要的設(shè)備，帶教老師需要就此儀器進(jìn)行詳細(xì)和全面的普及介紹，其中需包括PCR儀器使用方法、儀器保養(yǎng)、注意事項(xiàng)等[17]。同時(shí)移液器的正確使用十分關(guān)鍵，很容易在使用中出現(xiàn)各種細(xì)節(jié)問題，影響檢測(cè)結(jié)果，如移液器吸樣過快，導(dǎo)致氣溶膠產(chǎn)生，增加職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)，吸樣量不足，加樣器不穩(wěn)污染其他標(biāo)本等，使得檢測(cè)結(jié)果存在較大出入等。使用后未將移液器歸回最大量程等，這些都將直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。因此要求進(jìn)修生的所有操作必須在帶教老師的指導(dǎo)、監(jiān)督下完成，當(dāng)場(chǎng)糾正學(xué)生錯(cuò)誤或不當(dāng)?shù)牟僮鞑⒄f明原因，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。

7 制訂考核制度

進(jìn)修生需要在培訓(xùn)完成后根據(jù)檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)通過考核，具體包括檢測(cè)項(xiàng)目操作、設(shè)備維護(hù)、操作熟練度、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性測(cè)評(píng)以及實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度、臨床檢測(cè)意義等相關(guān)理論知識(shí)，所有進(jìn)修生需通過考核標(biāo)準(zhǔn)。

8 結(jié)語

我國(guó)人口密度較高，在國(guó)家的重點(diǎn)關(guān)注下，很多基層醫(yī)院均紛紛建立了分子生物實(shí)驗(yàn)室。分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，已應(yīng)用到臨床各個(gè)方面，作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)分子生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員，必須具有規(guī)范的操作技能、扎實(shí)的理論知識(shí)，才能更好地服務(wù)于臨床。針對(duì)不同目的進(jìn)修學(xué)員要因材施教，計(jì)劃合理、貼近實(shí)際的學(xué)習(xí)方案，使進(jìn)修生通過培訓(xùn)，熟練掌握和運(yùn)用臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)知識(shí)、流程規(guī)范、管理體系、質(zhì)量控制和性能驗(yàn)證等，為今后從事日常臨床分子檢驗(yàn)工作積累經(jīng)驗(yàn)。進(jìn)修生在按照培訓(xùn)計(jì)劃完成規(guī)定的培訓(xùn)任務(wù)后，應(yīng)分階段進(jìn)行考核，根據(jù)人員的接受程度隨時(shí)進(jìn)行調(diào)整，了解進(jìn)修生在培訓(xùn)過程中所存在的問題并及時(shí)解決，真正把培訓(xùn)工作落到實(shí)處。在帶教過程中，我們還需與時(shí)俱進(jìn)，努力提高自身知識(shí)水平，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)方法，加強(qiáng)交流，做到教學(xué)相長(zhǎng)，以此培養(yǎng)出更多技能全面、理論扎實(shí)、醫(yī)德高尚的優(yōu)質(zhì)檢驗(yàn)人才。