鄧小嫚，康琳玲，鐘京琛，倪思銘，雷丹丹，彭?yè)碥?/p>

（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南京 210029）

腦卒中是我國(guó)目前發(fā)病率、致殘率、致死率、復(fù)發(fā)率均較高的疾病之一，也是我國(guó)目前傷殘調(diào)整壽命年的主要原因[1]。缺血性腦卒中的發(fā)病率占據(jù)腦卒中發(fā)病率第一位，約為87%[2]。腦卒中的發(fā)生目前認(rèn)為是由于各種原因?qū)е碌哪X組織缺血、缺氧進(jìn)而發(fā)生壞死或軟化，表現(xiàn)為腦組織損害及腦功能障礙。腦卒中患者常易罹患各種并發(fā)癥，如癲癇、腦水腫、腦出血、卒中后抑郁、卒中后焦慮、卒中后便秘、卒中后尿潴留、肺部感染、尿路感染等，不僅危害患者身心健康，還增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[3]。腦缺血再灌注損傷（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）被定義為由于缺血、缺氧但尚未發(fā)生器質(zhì)性壞死、仍具有可逆性的腦組織在恢復(fù)血液供應(yīng)后產(chǎn)生的病情惡化[4]。CIRI引起的梗死可能是不可逆性的，這種損傷比永久性血管閉塞危害更甚，因此，為了提高腦卒中患者的生存率、降低致殘率、改善神經(jīng)功能及生活質(zhì)量，探討腦缺血有效療法及其作用機(jī)制十分關(guān)鍵。

血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）是介于血液和腦組織之間對(duì)某些物質(zhì)的通過(guò)具有選擇性阻礙功能的動(dòng)態(tài)界面，主要是由毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞間的緊密連接、周細(xì)胞以及星形膠質(zhì)細(xì)胞末端足部構(gòu)成[5]。BBB的結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞，是引起血管源性腦水腫，造成卒中患者腦組織損傷的重要原因之一。紋狀體是大腦基底神經(jīng)節(jié)主要組成部分，前期研究采用IgG免疫組化法測(cè)定腦組織中的IgG來(lái)反映BBB的通透性，發(fā)現(xiàn)紋狀體是腦缺血再灌注期間BBB首先遭受破壞的區(qū)域[6]。水通道蛋白-4（Aquaporin-4，AQP4）是位于BBB兩側(cè)的一種雙向水轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，被認(rèn)為是調(diào)節(jié)腦組織水分子代謝最重要的水通道蛋白[7]，參與了腦水腫的發(fā)生發(fā)展。采用siRNA質(zhì)?？捎行С聊珹QP4在受損腦組織的表達(dá)，明顯減輕腦水腫[8]。毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞是由緊密連接蛋白連接，而閉鎖小帶蛋白-1（zonula Occludens，ZO-1）是參與緊密連接即血腦屏障的構(gòu)成的重要結(jié)構(gòu)之一，對(duì)穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞連接起著重要的樞紐作用。研究表明，ZO-1蛋白水平的變化與BBB的損傷程度具有高度相關(guān)性。腦缺血再灌注損傷發(fā)生后，相關(guān)蛋白表達(dá)的變化致使BBB的超微結(jié)構(gòu)及通透性發(fā)生改變，從而引起腦水腫，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷及凋亡。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)常采用針灸“水溝穴”和“百會(huì)穴”治療缺血性中風(fēng)，有著顯著療效及獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[9]。電針療法是在針灸的基礎(chǔ)上進(jìn)行低頻脈沖電刺激，近年來(lái)，電針被報(bào)道[10]可以通過(guò)改善腦卒中患者血腦屏障的通透性、改善微循環(huán)、治療缺血性中風(fēng)，但其作用機(jī)制仍尚不明確，可能與AQP4、ZO-1的表達(dá)存在聯(lián)系。因此，本研究制作了大鼠腦缺血再灌注損傷模型，探討電針后BBB通透性與AQP4、ZO-1表達(dá)的關(guān)系，以期為電針治療腦缺血再灌注損傷引起的血腦屏障損傷及腦水腫提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

健康的雄性SD大鼠（6-8周齡，210-230 g）由南京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法，本實(shí)驗(yàn)將SD大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組（NC）、MCAO模型組（M）、電針組（EA）、AQP4 siRNA組（siRNA）和空載質(zhì)粒組（EP）。根據(jù)再灌注6 h、12 h、24 h、48 h和72 h這5個(gè)時(shí)間點(diǎn)將大鼠分別處死，并分為5個(gè)亞組。所有大鼠均置于于室溫（22-25℃）中飼養(yǎng)，自由飲食。每種實(shí)驗(yàn)方法每個(gè)時(shí)間點(diǎn)選取大鼠6只。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 MCAO模型建立

根據(jù)改良后的Longa線栓塞法[11]，制作急性腦缺血再灌注(MCAO)模型。采用10%水合氯醛（0.36 mL/100 g）腹腔注射將大鼠進(jìn)行麻醉，用高速顱骨鉆于大鼠后囟鉆取一合適小孔，將激光多普勒血流儀（LDF）插入小孔內(nèi)，探頭插至大鼠皮層表面，監(jiān)測(cè)腦血流5 min，記錄的腦血流為缺血前的基礎(chǔ)值。隨后將大鼠以仰臥位固定在操作臺(tái)上，在其頸正中做一長(zhǎng)度合適的切口，剝離血管及其周圍神經(jīng)，將分離出來(lái)的右翼腭突動(dòng)脈用微動(dòng)脈夾仔細(xì)夾閉，然后再分別夾閉大鼠的右頸外動(dòng)脈、頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈。于右頸外動(dòng)脈處用顯微外科剪剪一小口，將直徑0.18 mm 4-0號(hào)尼龍外科手術(shù)縫合線由此切口插入右頸內(nèi)動(dòng)脈，撤去微動(dòng)脈夾，插至顱內(nèi)，插入的深度約18-20 mm，此時(shí)有明顯的阻力感，即到達(dá)大腦中動(dòng)脈入口，撤去頸總動(dòng)脈和翼腭突動(dòng)脈上動(dòng)脈夾。此時(shí)，LDF監(jiān)測(cè)的腦血流量驟然下降至造模前15%以下[11]，大鼠腦缺血模型即構(gòu)建成功，1 h后，將尼龍線撤至頸外動(dòng)脈處時(shí)，為腦缺血再灌注的開始。

1.2.2電針干預(yù)

EA組于腦缺血5 min時(shí)進(jìn)行針刺，使用0.25×15 mm的華佗牌毫針，刺入大鼠的“水溝穴”（GV26）和“百會(huì)穴”（GV20），然后接G6805-Ⅱ型電針治療儀（上海醫(yī)用電子機(jī)械有限公司，上海）。參數(shù)設(shè)置為：疏密波：密波頻率為6.25 Hz，持續(xù)2.08 s；疏波頻率為3.85 Hz，持續(xù)1.28 s，電流強(qiáng)度為0.8-1.3 mA，時(shí)間30 min。

1.2.3右側(cè)腦室給藥

將siRNA組與EP組大鼠備皮后以仰臥位固定于操作臺(tái)上，在腦立體定向儀的指導(dǎo)下，于矢狀線旁約1 mm及冠狀線后約1.5 mm處穿刺右側(cè)腦室[12]，進(jìn)針的深度定為1.5 mm。腦缺血后5 min，采用高速顱骨鉆于大鼠右側(cè)腦室注射部位正上方鉆穿顱骨，然后插入微量注射器，分別向siRNA組和EP組大鼠右側(cè)腦室緩慢注入已經(jīng)配置好的AQP4 siRNA表達(dá)質(zhì)粒和不含AQP4 siRNA的空載質(zhì)粒，注射量為10μg（10μL）。操作結(jié)束后，于注射部位擦少許骨蠟，并且縫合外皮，即完成給藥。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分評(píng)定

參考改良的Zea Longa 8級(jí)神經(jīng)功能缺損評(píng)分法對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分[12]。見表1。

表1 神經(jīng)功能缺損評(píng)分

1.3.2 CV染色法

本實(shí)驗(yàn)將各組大鼠斷頭取腦后，提取其腦組織，每只大鼠每隔12張取1張腦片，共取18張。采用CV染色法進(jìn)行染色，主要通過(guò)脫水、復(fù)水、染色、分色及脫水、透明、封片等6個(gè)具體步驟完成。然后采用梯形公式，利用圖像分析和處理系統(tǒng)（Q5701W，Leica，German）及其軟件來(lái)測(cè)定每一張腦片缺血側(cè)及其對(duì)側(cè)的面積。公式如下所示：

V=1/2（S1+S2+S2+...Sn-1+Sn-1+Sn）×30×間隔張數(shù)

缺血側(cè)腦半球的腫脹百分比=（V缺血側(cè)-V對(duì)側(cè)）/V對(duì)側(cè)×100%

1.3.3 Western blot

采用Western blot方法檢測(cè)各組大鼠右腦紋狀體中AQP4和ZO-1蛋白含量的表達(dá)情況[13]。分別于大鼠腦缺血再灌注6 h、12 h、24 h、48 h和72 h這5個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，并提取大鼠腦組織，參照上述文獻(xiàn)的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.4 RT-PCR

大鼠新鮮腦組織取材后，分離出右側(cè)紋狀體，按照TRIzol法提取大鼠總RNA，根據(jù)Promega公司提供的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書成功逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后以cDNA為模板進(jìn)行PCR。用2.5%（w/v）瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，灰度值用Syngene SYDR-1990系統(tǒng)（Amersham）測(cè)定，用目的條帶與β-actin的灰度值的比值作為靶基因的表達(dá)，A部分及B部分引物序列如下圖所示。見表2。

表2 引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若計(jì)量資料符合正態(tài)分布，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）進(jìn)行描述，若不符合則進(jìn)行秩和檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析或秩和檢驗(yàn)，若兩組間比較方差齊時(shí)采用LSD法，若方差不齊則采用Dunnett T3方法；并且采用Person相關(guān)分析。若P＜0.05，則認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 電針改善神經(jīng)功能

與NC組相比，M組與EP組大鼠神經(jīng)功能缺損程度較重（P＜0.05），與M組及EP組相比，EA組及siRNA組大鼠神經(jīng)功能缺損程度較輕（P＜0.05），而M組與EP組神經(jīng)功能缺損評(píng)分表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），EA組及siRNA組神經(jīng)功能缺損評(píng)分表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見表3。

表3 各組大鼠不同時(shí)程神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較（±s,n=30）

表3 各組大鼠不同時(shí)程神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較（±s,n=30）

注：與M組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.2 電針改善大鼠腦缺血再灌注損傷后腦水腫和腦梗死

各組大鼠采用CV染色后，可發(fā)現(xiàn)M組與EP組大鼠于腦缺血再灌注6 h時(shí)發(fā)生腫脹，且逐漸加重。與M組相比較，EA組及siRNA組大鼠腫脹率于再灌注24 h、48 h、72 h具有顯著性差異（P＜0.05）。見表4。且M組大鼠CV染色后，可見大鼠腦組織出現(xiàn)明顯的白色梗死灶（圖1），CV染色法用于測(cè)量腦梗死灶較傳統(tǒng)的TTC染色分布更直觀，測(cè)量數(shù)據(jù)更精準(zhǔn)。

圖1 M組大鼠缺血再灌注24 h CV染色

表4 各組大鼠腦水腫引起的腦半球腫脹率比較（%,±s,n=30）

表4 各組大鼠腦水腫引起的腦半球腫脹率比較（%,±s,n=30）

注：與M組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 電針有效下調(diào)AQP4蛋白和上調(diào)ZO-1蛋白的表達(dá)

與NC組 相 比，M組、EP組、EA組 及siRNA組AQP4蛋白均于12 h開始明顯表達(dá)，逐漸上升，且M組和EP組AQP4蛋白的表達(dá)明顯高于EA組及siRNA組（P＜0.05），其中M組和EP組AQP4蛋白的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），EA組及siRNA組AQP4蛋白的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

圖2 各組大鼠不同時(shí)程AQP4蛋白的表達(dá)情況

隨著腦缺血再灌注的進(jìn)展，M組、EP組、EA組及siRNA組ZO-1蛋白的表達(dá)均顯著下降，且M組、EP組ZO-1蛋 白 的 表 達(dá) 顯 著 低 于EA組 和siRNA組（P＜0.05）。其中M組和EP組ZO-1蛋白的表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），EA組及siRNA組ZO-1蛋白的表達(dá)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見圖3。

圖3 各組大鼠不同時(shí)程ZO-1蛋白的表達(dá)情況

2.4 電針有效下調(diào)AQP4 mRNA和上調(diào)ZO-1 mRNA的表達(dá)

M組、EP組、EA組及siRNA組大鼠AQP4 mRNA均于12 h開始顯著表達(dá)，逐漸上升，且M組和EP組AQP4mRNA的表達(dá)明顯高于EA組及siRNA組（P＜0.05），其中M組和EP組AQP4mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），EA組及siRNA組AQP4mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖4。

圖4 各組大鼠不同時(shí)程AQP4 mRNA相對(duì)含量的變化

隨著腦缺血再灌注的進(jìn)展，M組、EP組、EA組及siRNA組ZO-1mRNA的表達(dá)均顯著下降，且M組、EP組ZO-1mRNA的表達(dá)顯著低于EA組和siRNA組（P＜0.05）。其中M組和EP組ZO-1mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），EA組及siRNA組ZO-1mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖5。

圖5 各組大鼠不同時(shí)程ZO-1 mRNA相對(duì)含量的變化

2.5 大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分與腦水腫腫脹率、AQP4及ZO-1表達(dá)的相關(guān)分析

采用Pearson相關(guān)分析比較在缺血再灌注24 h時(shí)M組、EP組、EA組及siRNA組各組大鼠神經(jīng)神經(jīng)功能缺損評(píng)分與腦水腫腫脹率、AQP4及ZO-1表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果表明，大鼠神經(jīng)神經(jīng)功能缺損評(píng)分與腦水腫腫脹率呈現(xiàn)正相關(guān)（r=0.673，P＜0.05），與AQP4的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)（r=0.618，P＜0.05），與ZO-1的表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.635，P＜0.05）；AQP4與ZO-1的表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)（r=-0.716，P＜0.01）。

3 討論

血腦屏障是人體外周循環(huán)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）之間重要的物理及生化屏障，主要維持CNS內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定性[14-15]。BBB是主要由內(nèi)皮細(xì)胞和緊密連接構(gòu)成的具有選擇性阻礙作用的保護(hù)性屏障，可以有效阻止有害物質(zhì)進(jìn)入腦組織。腦缺血再灌注過(guò)程中血腦屏障的結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞，導(dǎo)致細(xì)胞旁通透性發(fā)生改變，引發(fā)腦水腫，其發(fā)生的分子水平機(jī)制尚不清楚，但可能與氧化應(yīng)激、酸中毒、鈣離子超載、免疫功能損傷、線粒體功能障礙、細(xì)胞毒性以及炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)[16-17]。AQP4是位于BBB兩側(cè)介導(dǎo)水分子運(yùn)動(dòng)的水通道蛋白[7,18]，可通過(guò)影響B(tài)BB的完整性促進(jìn)腦水腫的產(chǎn)生與消退[19]。BBB的完整性還與內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接的磷酸化水平有關(guān)，緊密連接是以Claudin蛋白為主由多種緊密連接蛋白構(gòu)成的具有選擇性滲透的結(jié)構(gòu)[20]，而ZO-1是緊密連接復(fù)合體中的一種十分重要的跨膜蛋白，通過(guò)肌動(dòng)蛋白細(xì)絲，穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞連接，起著重要的樞紐作用。研究表明，ZO-1蛋白含量的變化與BBB損傷密切相關(guān)[21]。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腦缺血再灌注12 h時(shí)，在缺血側(cè)紋狀體最先染色。紋狀體區(qū)的BBB較易受到破壞，故我們采用大鼠右腦紋狀體來(lái)研究急性腦缺血再灌注后AQP4、ZO-1的表達(dá)情況。Taniguchi等[22]研究發(fā)現(xiàn)，AQP4 mRNA含量在MCAO第1天有微弱的上調(diào)，第3天達(dá)到高峰，持續(xù)7天左右減少，與水腫形成及消退的變化呈平行關(guān)系。前期通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，大鼠腦缺血后腦水腫規(guī)律與臨床上腦水腫規(guī)律基本一致，缺血再灌注6 h開始發(fā)生腦水腫，于再灌注72 h最嚴(yán)重，與臨床上腦缺血急性期的癥狀表現(xiàn)相吻合，故本實(shí)驗(yàn)選擇再灌注6 h、12 h、24 h、48 h和72 h這5個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步的觀察研究[6]。

針灸治療腦卒中的療效顯著，“水溝穴”和“百會(huì)穴”均是奇經(jīng)八脈的督脈上的穴位，督脈入屬于腦，總督一身之陽(yáng)氣，為陽(yáng)脈之海。因此，針刺“水溝穴”及“百會(huì)穴”具有補(bǔ)腦益髓，醒神開竅之功效。電針療法是傳統(tǒng)針灸療法與低頻脈沖電刺激相結(jié)合的一種新型療法，可以標(biāo)準(zhǔn)化和客觀測(cè)量。當(dāng)需要強(qiáng)刺激時(shí)，如治療腦卒中引起的癱瘓時(shí)，電針可能比傳統(tǒng)針灸療效更佳。研究顯示，電針不僅可以改善血液流變學(xué)和腦循環(huán)[9]，還可以降低血腦屏障通透性和腦水腫[23]，還能促進(jìn)腦血管生成和神經(jīng)生成[24]。Zhang等[25]發(fā)現(xiàn)電針“百會(huì)穴”（GV20）和人中穴（GV26）可以提高腦缺血再灌注大鼠血腦屏障通透性，且與針刺時(shí)間有關(guān)。田健材等[26]通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)電針“水溝穴”可通過(guò)降低AQP4的表達(dá)減輕腦水腫，保護(hù)缺血性腦卒中大鼠腦組織的神經(jīng)血管單元。前期的研究證明，腦缺血再灌注損傷與AQP4的表達(dá)上升關(guān)系密切，電針可有效地抑制AQP4蛋白和mRNA的表達(dá)，從而改善血腦屏障損傷，保護(hù)腦組織[27-28]。還通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)電針人中、“百會(huì)穴”可通過(guò)有效抑制ZO-1蛋白的減少改善血腦屏障損傷，緩解腦水腫[29]。Jung等[30]也發(fā)現(xiàn)電針預(yù)處理缺血性腦卒中小鼠可顯著減少AQP4的表達(dá)，增加緊密連接蛋白ZO-1和claudin-5的表達(dá)，從而降低腦梗死幾率，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制作腦缺血再灌注模型，發(fā)現(xiàn)除NC組外，其余四組大鼠均于腦缺血再灌注6 h時(shí)發(fā)生腫脹，且逐漸加重，AQP4均于缺血再灌注12 h開始顯著表達(dá)，并逐漸上升，ZO-1均于缺血再灌注12 h開始顯著下降。電針可上調(diào)AQP4的表達(dá)，下調(diào)ZO-1的表達(dá)，且隨著時(shí)間的進(jìn)展，AQP4的表達(dá)逐漸上升，ZO-1的表達(dá)逐漸下降，與siRNA抑制劑作用相似。通過(guò)相關(guān)分析還發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)神經(jīng)功能缺損評(píng)分與AQP4的表達(dá)呈正相關(guān)，與ZO-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與以往研究相比，我們認(rèn)為腦缺血再灌注損傷過(guò)程中AQP4與ZO-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，電針通過(guò)有效抑制AQP4的上升及ZO-1的下降，改善血腦屏障損傷，減緩腦水腫，保護(hù)腦組織。我們推測(cè)，采用AQP4的抑制劑或ZO-1興奮劑或通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制對(duì)腦卒中患者進(jìn)行早期干預(yù)治療，則可能通過(guò)減少BBB中水分子轉(zhuǎn)運(yùn)，從而達(dá)到緩解腦水腫的目的，采用電針療法可能成為治療腦缺血再灌注損傷的一條新思路。本研究的創(chuàng)新性在于采用了改良的大鼠腦缺血再灌注模型制作方法，缺血效果確切可靠，穩(wěn)定性好，手術(shù)時(shí)間短，遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的方法。而且，我們采用了CV染色法用于顯示MCAO造模后腦梗死灶的分布及腦水腫情況，較以往的TTC染色法分布更直觀，不但節(jié)省了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量，保護(hù)了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利，而且降低了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的測(cè)試誤差，提高了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。但是本研究仍存在局限性，由于組數(shù)有限，側(cè)腦室注射損傷未被排除。

綜上所述，我們推測(cè)，大鼠神經(jīng)神經(jīng)功能缺損評(píng)分與腦水腫腫脹率呈正相關(guān)，與AQP4的表達(dá)呈正相關(guān)，與ZO-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，腦缺血再灌注損傷過(guò)程中AQP4與ZO-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。調(diào)控AQP4、ZO-1的表達(dá)可能是電針“水溝穴”、“百會(huì)穴”治療腦缺血再灌注引起腦水腫及血腦屏障損傷的關(guān)鍵機(jī)制，有效地抑制AQP4的上升和ZO-1的下降可能成為腦卒中治療的新靶點(diǎn)。電針治療腦缺血再灌注損傷療效已被證實(shí)，未來(lái)可進(jìn)一步探討電針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞-星形細(xì)胞-周細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)的作用機(jī)制[31]，還應(yīng)該關(guān)注電針刺激頻率和刺激強(qiáng)度對(duì)AQP4、ZO-1蛋白和mRNA表達(dá)能力的影響，為電針治療腦缺血再灌注損傷尋找最合適的針刺時(shí)機(jī)和刺激量。