譚海波，張小雨，任宇晴，楊祎琦，貝偉劍，蘭 天，郭 姣

（廣東藥科大學(xué)/廣東省代謝病中西醫(yī)結(jié)合研究中心 廣州 510006）

1 引言

根據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟最新數(shù)據(jù)顯示，全球成年糖尿病患者的數(shù)量達(dá)到了4.63億，而中國人患病率占比接近1/4，糖尿病早已成為中國乃至全世界最嚴(yán)重的公共健康問題之一[1]。糖尿病腎病(Diabetic Kidney Disease，DKD)是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，約40%糖尿病患者最終會發(fā)展成為DKD[2]，其是當(dāng)今許多國家終末期腎病和腎衰竭最常見的原因[1]。但目前臨床針對DKD為對癥治療，尚無特效療法。近期研究證實，鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白2抑制劑（SGLT2i）能夠有效降血糖，且對糖尿病患者的腎臟有較好的保護(hù)作用，但其泌尿生殖系統(tǒng)感染的副作用也不容忽視[3]；腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)抑制劑雖能降低尿蛋白，改善腎功能及DKD的預(yù)后，但不足之處是容易造成水和電解質(zhì)代謝紊亂[2]。而中醫(yī)藥以其毒副作用低且藥效良好的特點，在DKD的防治中發(fā)揮了重要作用。

DKD的中醫(yī)病名為消渴腎病，屬本虛標(biāo)實之證，本虛為肝脾腎虛，標(biāo)實為氣滯、血瘀、濁毒、濕熱、痰濁等。DKD在2019年《糖脂代謝?。òD濁）中西醫(yī)結(jié)合診療技術(shù)規(guī)范》中歸屬于糖脂代謝?、笃赱4]。復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊（Fufang Zhenzhu Tiaozhi Capsule，F(xiàn)TZ）是郭姣教授多年臨床驗方，主要由佛手、黃連、三七、大薊等8味中藥組成，具有補(bǔ)腎調(diào)肝健脾、化濁祛瘀之功效，在臨床上常用于治療糖尿病、高脂血癥等糖脂代謝性疾病。文獻(xiàn)研究顯示FTZ中的某些單體成分對DKD有良好的治療效果，如黃連的有效成分小檗堿[5]、三七的有效成分三七皂苷R1[6]等。而FTZ在治療DKD中的作用及機(jī)制尚未闡明。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是融合了系統(tǒng)生物學(xué)、生物信息學(xué)等多個學(xué)科，從系統(tǒng)層次和生物網(wǎng)絡(luò)的整體角度出發(fā)，揭示藥物的系統(tǒng)性藥理機(jī)制的新興學(xué)科[7]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的思維與中醫(yī)的整體觀有很大的相似性，并滿足了系統(tǒng)地干預(yù)復(fù)雜疾病的要求，以高通量、大網(wǎng)絡(luò)的方式揭示中醫(yī)藥治療復(fù)雜疾病的機(jī)制，這將為中醫(yī)藥由經(jīng)驗醫(yī)學(xué)過渡為循證醫(yī)學(xué)提供一種新的研究策略[8]。因此，本研究將應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析和動物實驗驗證的方法，從“藥物-靶點-通路-疾病”角度綜合探討FTZ防治DKD的作用及機(jī)制[9]。

2 研究思路與方法

首先采用中藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫和分析平臺（TCMSP）進(jìn)行FTZ的化學(xué)成分收集，按照口服生物利用度（Oral bioavailability，OB）≥30%和類藥性（Drug likeness，DL）≥0.18作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，再通過TCMSP收集化學(xué)成分對應(yīng)的靶點，利用Uniprot數(shù)據(jù)庫將蛋白靶點轉(zhuǎn)換成基因靶點。通過GeneCards和Comparative Toxicogenomics Database（CTD）數(shù)據(jù)庫進(jìn)行DKD疾病靶點收集。利用Venny 2.1工具對FTZ靶點和DKD靶點進(jìn)行交集，得到FTZ干預(yù)DKD靶點。采用STRING 11.0和DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫對交集靶點進(jìn)行蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（Protein-protein Interaction，PPI）分析、基因本體功能分析（Gene Ontology,GO）和基因組百科全書通路（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）分析。再通過建立DKD小鼠模型，驗證FTZ的藥效及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析得到的靶點和通路（如圖1）。

圖1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析和動物實驗驗證流程圖

3 材料與方法

3.1 實驗材料

3.1.1動物

4-6周齡的SPF級C57BL/6雄性 小 鼠，體重15-17 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2018-0002。飼養(yǎng)于廣東藥科大學(xué)實驗動物中心（濕度40-70%，溫度20-26℃），適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實驗。本實驗經(jīng)廣東藥科大學(xué)實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)（gdpulac2019180）。

3.1.2藥物

復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊(批號200501)，購買于廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院；氯沙坦(Losartan，默沙東，批號H20171245)。

3.1.3試劑

鏈 脲 佐 菌 素(Streptozotocin，STZ，sigma，CAS：18883-66-4)；肌酐測定試劑盒（南京建成，C011-2-1，批號：20210315）；尿蛋白測定試劑盒（南京建成，C035-2-1，批號：20200915）；磷脂酰肌醇3-激酶抗體(Phosphatidylinositide 3-kinases,PI3K)(CST,#4249)；磷酸化蛋白激酶B抗體(p-protein kinase B,p-AKT)(CST，#4046)；甘油醛-3-磷酸脫氫酶抗體(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)(CST，#5174)；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3抗體(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)(CST，#9139)；山羊抗兔IgG(CST，#7074)；馬抗鼠IgG(CST，#7076)；高脂飼料（廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，許可證號：粵飼證(2019)05073）；羧甲基纖維素鈉(Carboxymethylcellulose sodium，CMCNa)（國藥滬試，30036365）。

3.1.4儀器

酶 標(biāo) 儀(Mithras，LB940)；顯 微 鏡（Olympus，BX53）；電泳儀（Bio-Rad，153BR 110099）；電轉(zhuǎn)儀（Bio-Rad，552BR 221397）；化學(xué)發(fā)光成像儀（Bio-Rad，Chemidoc XRS+）。

3.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析方法

3.2.1復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方的化學(xué)成分收集和篩選

利用中藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫和分析平臺（TCMSP，http://tcmspw.com/tcmsp.php）[10]對FTZ的八味中藥（女貞子、丹參、白術(shù)、三七、佛手、大薊、黃連、杜仲）分別進(jìn)行化學(xué)成分的檢索，篩選標(biāo)準(zhǔn)為：口服生物利用度（OB）≥30%和類藥性（DL）≥0.18[11-12]。

3.2.2 FTZ和DKD靶點基因的收集

將篩選出的FTZ化學(xué)成分通過TCMSP數(shù)據(jù)庫獲得其相對應(yīng)的靶點蛋白，將靶點蛋白上傳至Uniprot數(shù)據(jù)庫（https://www.uniprot.org/）[13]轉(zhuǎn)化成與其對應(yīng)的基因靶點。利用GeneCards數(shù)據(jù)庫(https://www.genecards.org/)[14]和Comparative Toxicogenomics Database（CTD）數(shù) 據(jù) 庫(http://ctdbase.org/)[15]檢索關(guān)鍵詞“diabetic nephropathy”和“diabetic kidney disease”，得到DKD相關(guān)的靶點基因。

3.2.3 FTZ干預(yù)DKD靶點預(yù)測

利 用Venny2.1（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）分析工具對FTZ的作用靶點和DKD靶點進(jìn)行靶點交集，然后上傳至STRING11.0數(shù)據(jù)庫（https://string-db.org/）[16]獲取蛋白相互作用信息，最低相互作用評分設(shè)置為“highest confidence（0.900）”[17]，將信息上傳至Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析，構(gòu)建蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)（PPI），并篩選核心作用靶點。

3.2.4靶點的GO功能分析和KEGG通路富集分析

將獲得的FTZ-DKD交集靶點上傳至DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫（https://david.ncifcrf.gov/tools.jsp）進(jìn)行基因本體（GO）功能富集分析和基因組百科全書（KEGG）通路分析[18]。GO分析包括生物過程（Biological Process,BP）、分子功能（Molecular Function,MF）和細(xì)胞組成(Cellular Component,CC)分析。

3.3 動物實驗

3.3.1 DKD模型建立及分組給藥

DKD小鼠模型的建立參考Ding的造模方法[19]。具體如下：首先采用高脂飼料喂養(yǎng)4周，其次連續(xù)注射鏈脲佐菌素（STZ，40 mg/kg/天，5天），然后繼續(xù)進(jìn)行高脂飼料喂養(yǎng)；當(dāng)空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）≥11.1 mmol/L判定為糖尿病模型成功，尿常規(guī)測定出尿微量蛋白陽性，判定為DKD形成。小鼠分組：Control組（空白組，0.5% CMCNa）、Model組（模型組，0.5%CMCNa）、Losartan組（氯沙坦，30 mg/kg/天）和FTZ組（2 g/kg/天）;各組動物每天灌胃給藥1次，持續(xù)治療12周。

3.3.2生化指標(biāo)檢測

測定各組小鼠空腹血糖以及腎功能指標(biāo)（24 h尿蛋白、血肌酐），操作流程按試劑盒操作說明進(jìn)行。

3.3.3腎臟病理學(xué)檢測

腎臟組織切片蘇木精-伊紅染色(H&E)、馬松染色(Masson)和碘酸雪夫染色(PAS)步驟參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行[6]。H&E染色：石蠟切片進(jìn)行梯度脫蠟，將脫蠟后的切片放入蘇木素染液中染3 min，自來水沖洗，分色液分色，自來水沖洗，再梯度酒精脫水各5 min，伊紅染液染色5 min，最后再依次梯度復(fù)水透明，封片后顯微鏡鏡檢。Masson染色：石蠟切片進(jìn)行梯度脫蠟，放入重鉻酸鉀浸泡過夜，流水清洗，鐵蘇木素A液和B液等比例混合成鐵蘇木素染液，切片放入鐵蘇木素中染色3 min，流水沖洗，分色液分色，流水清洗，再放入麗春紅酸性品紅浸染10 min，流水清洗，磷鉬酸水溶液浸染3 min，直接入苯胺藍(lán)染液染6 min，用1%冰醋酸分化后，脫水透明，封片后顯微鏡鏡檢。PAS染色：石蠟切片脫蠟，放入高碘酸染液中染色15 min，流動水沖洗，避光環(huán)境下于雪弗染液中染色30 min，流水清洗5 min，切片放入蘇木素染液中染色5 min，分化液分化，流水清洗，脫水透明，封片后顯微鏡鏡檢。

3.3.4 Western blot檢測

取適量腎臟組織，加含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的組織裂解液，使用勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿，4℃離心(12000 r/min)15 min，轉(zhuǎn)移上清備用。將各組蛋白定量到相同的濃度，加入上樣緩沖液(loading buffer)，于100℃水中使蛋白變性。樣品通過80 V恒壓濃縮膠和120 V恒壓分離膠電泳后，再通過300 mA恒流電轉(zhuǎn)2 h轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用5%脫脂奶粉在室溫下封閉1.5 h，TBST清洗后，加入一抗4℃過夜孵育，TBST清洗，加入二抗，搖床室溫孵育1 h[20]，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)成像，采用Image Lab軟件進(jìn)行灰度分析。

3.3.5統(tǒng)計學(xué)分析

用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間采用單因素方差分析，以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié)果

4.1 FTZ作用靶點和DKD疾病靶點的篩選結(jié)果

采用TCMSP數(shù)據(jù)庫獲得FTZ的8味中藥活性化學(xué)成分共150個，逐一搜索其對應(yīng)的靶點蛋白，按照篩選標(biāo)準(zhǔn)獲得FTZ的作用靶點蛋白，經(jīng)過Uniprot數(shù)據(jù)庫轉(zhuǎn)換成靶點基因237個。檢索GeneCards和CTD數(shù)據(jù)庫獲得DKD相關(guān)疾病靶點803個。

4.2 FTZ對DKD作用靶點及關(guān)鍵靶點篩選

將得到的FTZ作用靶點和DKD疾病靶點進(jìn)行交集篩選，發(fā)現(xiàn)FTZ與DKD的共有靶點94個（圖2）。94個交集靶點上傳至STRING 11.0數(shù)據(jù)庫獲取其蛋白相互作用信息，并剔除掉孤立的靶點（未發(fā)生蛋白相互作用的靶點），利用Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析得到FTZ對DKD作用相關(guān)靶點互作網(wǎng)絡(luò)（圖3）。圖中節(jié)點表示靶點，邊表示靶點之間的相互作用關(guān)系，網(wǎng)絡(luò)中有94個節(jié)點，372條邊。網(wǎng)絡(luò)圖中節(jié)點度值的大小用節(jié)點的大小來表示，節(jié)點越大表示度值越大。邊的粗細(xì)與靶點間的Combine score值呈正相關(guān)關(guān)系。網(wǎng)絡(luò)中度值排名前10的靶點如表-1，這10個靶點與其他作用靶點關(guān)聯(lián)相對密切，對FTZ-DKD的PPI網(wǎng)絡(luò)有關(guān)鍵的樞紐作用，表明了這些靶點在FTZ干預(yù)DKD中有核心地位。

圖2 FTZ和DKD靶點交集Venny圖

圖3 FTZ干預(yù)DKD蛋白互作關(guān)系圖

4.3 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析

表1 度值排名前10靶點

采用DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫對FTZ干預(yù)DKD靶點進(jìn)行KEGG通路富集分析，結(jié)果顯示，F(xiàn)TZ干預(yù)DKD可能是通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路，缺氧誘導(dǎo)因子-1(Hypoxia inducible factor,HIF-1)信號通路，腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor,TNF)信號通路，叉頭盒蛋白O(forkhead box O,FoxO)信號通路和Toll樣受體(Tolllike)信號通路等（圖4D）。GO分析結(jié)果顯示，F(xiàn)TZ干預(yù)DKD可能是通過調(diào)控細(xì)胞轉(zhuǎn)錄和凋亡、炎癥應(yīng)答、影響DNA轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄因子活性、蛋白質(zhì)結(jié)合等途徑（圖4A-C）。

圖4 FTZ干預(yù)DKD潛在生物過程和通路預(yù)測

4.4 FTZ對DKD小鼠腎臟功能的影響

STZ合并高脂飲食造模會造成小鼠血糖顯著升高，24 h尿蛋白和血肌酐是反應(yīng)腎功能損傷的指標(biāo)，DKD造模成功后的小鼠24 h尿蛋白和血肌酐也會顯著升高[21-22]。FBG結(jié)果顯示：與Control組相比，DKD組小鼠FBG顯 著 升高(P＜0.01)，而FTZ能 夠顯 著降低DKD小鼠的FBG（P＜0.05）。24 h尿蛋白結(jié)果顯示：與Control組相比，DKD組小鼠24 h尿蛋白顯著升高(P＜0.01)，而FTZ能夠顯著降低DKD小鼠的24 h尿蛋白（P＜0.01）。肌酐結(jié)果顯示：與Control組相比，DKD組小鼠肌酐顯著升高(P＜0.01)，而FTZ能夠顯著降低DKD小鼠的肌酐（P＜0.01）（表2）。FTZ與Losartan的降低尿蛋白和血肌酐的效果相當(dāng)。

表2 FTZ對DKD小鼠空腹血糖、24 h尿蛋白和血肌酐的影響(±s，n=6)

表2 FTZ對DKD小鼠空腹血糖、24 h尿蛋白和血肌酐的影響(±s，n=6)

注：與Control組（對照組）比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與Model組（模型組）比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

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4.5 FTZ對DKD小鼠腎臟病理損傷的影響

DKD小鼠的腎臟會發(fā)生一系列病理改變：糖原堆積，腎小球逐漸腫大，炎性細(xì)胞浸潤，系膜基質(zhì)增生，膠原纖維堆積，可以分別采用H＆E、PAS和Masson染色來反應(yīng)[23]。H＆E染色結(jié)果顯示：Control組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)正常；Model組小鼠腎小球腫大，腎臟炎性細(xì)胞浸潤；FTZ組改善了腎小球腫大及腎臟炎性細(xì)胞浸潤的病理表現(xiàn)（圖5）。PAS染色結(jié)果顯示：與Control組相比，Model組小鼠腎小球內(nèi)發(fā)生糖原的積累和系膜細(xì)胞增生，而FTZ組相較于Model組有所緩解（圖6）。Masson染色結(jié)果顯示：Control組小鼠腎臟組織無病理性膠原纖維沉積，與Control組相比，Model組小鼠腎臟組織有大量藍(lán)染的膠原纖維堆積，而FTZ組膠原纖維的堆積現(xiàn)象有所改善（圖7）。

圖5 FTZ對DKD小鼠腎臟組織病理學(xué)的影響（H&E染色）（400×）

圖6 FTZ對DKD小鼠腎臟組織系膜增生及糖原堆積的影響（PAS染色）（400×）

圖7 FTZ對DKD小鼠腎臟組織膠原沉積的影響（MASSON染色）（400×）

4.6 FTZ改善DKD的機(jī)制與PI3K/AKT和STAT3相關(guān)

對網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析得到的靶點和通路進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，最終選擇STAT3和PI3K/AKT核心通路進(jìn)行實驗驗證。文獻(xiàn)報道PI3K/AKT和STAT3是多種自身免疫性病理損傷的關(guān)鍵通路和因子，PI3K/AKT和STAT3的激活介導(dǎo)了DKD腎臟的損傷，因此，下調(diào)PI3K/AKT和STAT3的表達(dá)能改善DKD的腎臟損傷[24-25]。Western Blot(WB)及統(tǒng)計結(jié)果顯示：Model組相較于Control組的腎臟組織PI3K和p-AKT及STAT3蛋白表達(dá)顯著上升(P＜0.05)，而FTZ組顯著下降（P＜0.05），說明FTZ改善DKD的機(jī)制與抑制PI3K/AKT和STAT3信號通路相關(guān)（圖8）。

5 討論

DKD是糖尿病患者最常見的并發(fā)癥之一，也是糖尿病并發(fā)癥中最主要的死亡風(fēng)險因素。因此，尋找有效治療DKD的藥物對臨床防治DKD具有重大意義。本研究顯示FTZ在改善DKD小鼠的腎功能以及腎臟病理損傷有一定的療效。文獻(xiàn)報道FTZ在治療糖脂代謝性疾病方面具有較好的效果，并部分闡明了其作用機(jī)制。胡旭光等[26]研究發(fā)現(xiàn)FTZ可以降低代謝綜合征大鼠的血清甘油三酯、總膽固醇和空腹血糖，重新激活胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中胰島素相關(guān)的胰島素受體底物-1通路。黎土娣等[27]發(fā)現(xiàn)FTZ能有效降低血脂并改善兔動脈血管成形術(shù)后再狹窄，其機(jī)制與激活脂聯(lián)素(Adiponectin,APN)信號通路相關(guān)；另外，陳羽等[28]發(fā)現(xiàn)FTZ緩解高脂高膽固醇飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝小鼠的肝臟脂肪變性、炎癥和纖維化改變，可能是通過抑制核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎癥小體形成和激活實現(xiàn)的。由此可知FTZ在治療糖脂代謝性疾病方面具有較好的療效。本研究也顯示FTZ可有效改善DKD小鼠的腎功能及腎臟病理損傷，但作用機(jī)制不明。

因此，本研究首先采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)初步分析了FTZ干預(yù)DKD的潛在作用靶點及機(jī)制，其中PPI結(jié)果 顯 示 其 核 心 靶 點 為STAT3、AKT1、JUN、IL-6、MAPK1、VEGFA、RELA、MAPK14、TP53、EGFR等。文獻(xiàn)研究表明腎小球系膜細(xì)胞中STAT3通路的激活可刺激細(xì)胞過度增殖，并增強(qiáng)膠原和纖維連接蛋白的生成，促進(jìn)DKD腎小球硬化[29]。此外，在STZ誘導(dǎo)的條件下，正常小鼠與STAT3基因敲除的小鼠相比，會發(fā)生更嚴(yán)重的蛋白尿、腎小球細(xì)胞增生和纖維化活動[30]。Zheng等[31]發(fā)現(xiàn)抑制STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠腎臟中STAT3的表達(dá)能夠緩解腎臟損傷和纖維化病變。因此，STAT3對DKD的發(fā)展起著重要作用，抑制STAT3可能是治療DKD的有效策略。本研究通過動物實驗驗證發(fā)現(xiàn)STAT3在DKD小鼠腎臟的表達(dá)顯著上調(diào)，而FTZ可顯著抑制其表達(dá)。由于PPI網(wǎng)絡(luò)顯示的靶點較多，F(xiàn)TZ成分的明確和靶點驗證將會在后續(xù)實驗繼續(xù)探究。GO分析結(jié)果得到的生物過程為調(diào)控細(xì)胞轉(zhuǎn)錄和凋亡、炎癥應(yīng)答、影響DNA轉(zhuǎn)錄等。KEGG分析顯示得到的通路為PI3K/AKT信號通路、HIF-1信號通路、TNF信號通路、FoxO信號通路、Toll樣受體信號通路等。有研究證實在DKD動物模型中，PI3K/AKT通路顯著上調(diào)[32]，且可通過激活腎臟自噬和炎癥介導(dǎo)腎小球和腎小管細(xì)胞損傷[33]，而抑制PI3K/AKT通路能夠改善腎功能和腎臟纖維化病變[34]。另有文獻(xiàn)表明在DKD中TNF通路的激活會導(dǎo)致下游大量炎癥因子的釋放和凋亡相關(guān)蛋白caspase-3的激活[35]，HIF-1信號通路激活會加重DKD的腎小球硬化和蛋白尿的排泄[36]。Toll樣受體通路的激活使巨噬細(xì)胞等一系列炎癥細(xì)胞在腎臟浸潤，均加重了DKD的進(jìn)展[37]。本研究結(jié)果進(jìn)一步驗證了FTZ能夠有效抑制PI3K/AKT信號通路改善DKD。

綜上所述，F(xiàn)TZ干預(yù)DKD的機(jī)制可能是通過抑制PI3K/AKT通路及STAT3通路，減少DKD小鼠尿蛋白的排泄，減輕腎臟膠原、糖原的堆積。這為FTZ治療DKD提供了實驗基礎(chǔ)。但是，本研究仍然存在一些不足，如檢索藥物化學(xué)成分和篩選靶點過程中使用的數(shù)據(jù)庫較單一，雖然TCMSP數(shù)據(jù)庫整合了藥物化學(xué)、藥代動力學(xué)、網(wǎng)絡(luò)靶點預(yù)測等信息，并提供成分作用靶點等關(guān)鍵信息，且是目前中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)領(lǐng)域運用較廣泛的數(shù)據(jù)庫，但不同數(shù)據(jù)庫之間信息存在差異，使用單一數(shù)據(jù)庫對數(shù)據(jù)收集的豐富度和完整性有一定影響[38-39]；方劑中的君臣佐使搭配是中醫(yī)辯證論治的特色，而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析將所有藥物的成分和靶點都同等考究，未考慮藥物的劑量、配比和入血代謝等對藥物吸收的影響，因此需要通過進(jìn)一步實驗對藥物的入血活性成分及靶點進(jìn)行探究。另外，動物體內(nèi)實驗僅對STAT3和PI3K/AKT通路進(jìn)行了驗證，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析得到的其他靶點和通路需要進(jìn)一步實驗的驗證。

6 結(jié)論

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析及動物實驗初步探討了FTZ治療DKD的作用及機(jī)制。發(fā)現(xiàn)了FTZ可有效改善DKD小鼠腎臟功能，緩解腎臟病理損傷，其機(jī)制可能與抑制STAT3及PI3K/AKT通路有關(guān)。