白文明，蓮 花，渠 弼，那生桑

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院 呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)民族醫(yī)藥創(chuàng)新中心 呼和浩特 010110）

礦物藥是傳統(tǒng)蒙藥不可或缺的重要組成部分，有著悠久的臨床應(yīng)用歷史。現(xiàn)代蒙醫(yī)臨床上常用的蒙藥方劑中礦物藥出現(xiàn)的頻率較高，充分反映了礦物藥在蒙醫(yī)臨床的重要地位以及開展礦物藥相關(guān)研究的重要價值。綠松石（Turquoise），蒙藥名為沃優(yōu)（Oyuu），是代表性的礦物質(zhì)蒙藥之一，蒙醫(yī)臨床上主要用于治療肝熱及各種中毒病癥等。綠松石主要化學(xué)成分為含結(jié)晶水的銅鋁磷酸鹽[CuAl6(PO4)4(OH)8·4H2O]，呈藍(lán)綠色或黃綠色，礦石顏色主要取決于銅離子（藍(lán)綠色）和微量鐵離子（土黃色）的相對含量。綠松石在我國境內(nèi)有廣泛的分布，主產(chǎn)區(qū)有湖北、陜西、河南、安徽、新疆維吾爾自治區(qū)及青海等地[1-4]。綠松石用藥歷史悠久、臨床用藥經(jīng)驗豐富，傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥書籍《認(rèn)藥白晶鑒》[5]、《無誤蒙藥鑒》[6]、《金光注釋集》[7]等均有對綠松石的記載。不同地區(qū)用藥習(xí)慣、配伍藥材及對應(yīng)病癥均存在一定差異，所以流傳至今的臨床用含綠松石的處方種類較多，如《蒙醫(yī)藥方匯編》[8]中記載的與紅花、香青蘭、綠絨蒿等配伍制成的七味松石散可治療血協(xié)日性肝熱，肝包如等病癥；《方劑學(xué)》中記載的與丁香、檀香、葡萄干等配伍制成的八味松石散可治療肝熱，增勝熱，血熱，協(xié)日熱，毒熱等病癥。另有，相關(guān)研究人員通過現(xiàn)代藥理學(xué)實驗證明處方中配伍有綠松石的藏藥二十五味松石散和七十味松石丸分別具有廣譜抗菌和抗肝硬化的活性，并對其作用機理進(jìn)行了初步的探討[9-11]。此外，各級蒙醫(yī)醫(yī)院很多院內(nèi)制劑也配伍有綠松石，在對相應(yīng)病癥的治療方面發(fā)揮著顯著的療效。上述事實說明，綠松石在蒙醫(yī)藥病癥治療方面具有豐富的臨床經(jīng)驗，且需求量大。

在制劑和臨床用藥環(huán)節(jié)中，對礦物藥或含重金屬礦物藥進(jìn)行質(zhì)量控制及安全性評價是傳統(tǒng)醫(yī)藥發(fā)展過程中始終關(guān)注的重點研究課題。綠松石屬于天然礦石源藥材，是多種元素經(jīng)復(fù)雜且漫長的物理化學(xué)過程形成的無機化合物晶體。由于自然環(huán)境的差異，不同地區(qū)的礦石化學(xué)成分差異較大，其藥用價值也參差不齊，所以在藥材流通和制劑過程中對綠松石進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控是保障臨床用藥安全和療效的重要環(huán)節(jié)。蒙藥綠松石雖然應(yīng)用廣泛、臨床需求量大，但現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是基于性狀和顯微特點建立的評價體系，較為簡單、專屬性弱，且未收載含量測定項，既無完善的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也缺乏科學(xué)、系統(tǒng)的研究案例。上述原因致使綠松石藥材質(zhì)量控制環(huán)節(jié)上存在較大的問題，限制了綠松石相關(guān)產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。鑒于此，內(nèi)蒙古自治區(qū)政府以科技廳和藥檢所為牽頭單位，依托內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)的科研平臺設(shè)立了多個蒙藥材及炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究項目，綠松石即為其研究品種之一。

藥材流通和制劑過程中藥材和飲片質(zhì)量控制的檢定內(nèi)容主要包括性狀、鑒別、檢查、浸出物測定及含量測定等，本研究從外觀性狀、理化鑒別、水分檢查、水溶性浸出物測定及銅元素含量測定等方面入手，嘗試建立較為系統(tǒng)的準(zhǔn)確評價綠松石藥用價值的質(zhì)量評價體系。

1 儀器與材料

1.1 實驗儀器

ZEEnit 700P原子吸收光譜儀（Analytik Jena AG）；KSW-5-12馬弗爐（天津市中環(huán)實驗電爐有限公司）；DHG-9013A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；Millipore synergy超純水系統(tǒng)(Merck Kgaa)。

1.2 材料及試劑

5個不同產(chǎn)地，共10批次綠松石分別購自西藏自治區(qū)（批號:20140216、批號:20150225、批號:20170310、批 號:20170426）、青 海（批 號:20120518、批 號:20150508、批號:20171013）及河北（批號:20161009、批號:20180528、批號:20160523）藥材市場。

1000μg/mL銅單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（中國計量科學(xué)研究院，GBW08615）；65%濃硝酸（優(yōu)級純，Merck，批號：1.00456.2508）；濃鹽酸（36%～38%）、硼砂、碳酸鉀、亞鐵氰化鉀等均為市售分析純試劑；水為超純水，電阻率為18.2 MΩ·cm；亞鐵氰化鉀試液：取亞鐵氰化鉀1 g，加水10 mL使溶解，注意本液臨用新制；

2 方法與結(jié)果

2.1 綠松石性狀

原藥材為不規(guī)則、周圍帶有黑石的塊狀物。表面藍(lán)綠色，體重，質(zhì)硬脆，難砸碎，斷面呈貝殼狀，蠟樣光澤。如圖1a；松石粉由松石研細(xì)制得。為灰綠色粉末。無臭，味淡。見圖1b。

圖1 綠松石原藥材及炮制品（a：原藥材；b：松石粉）

2.2 銅鹽鑒別

如前所述，綠松石的主要化學(xué)成分為銅鋁磷酸鹽，所以本研究選擇將銅離子作為理化鑒別的目標(biāo)物質(zhì)，基于沉淀顯色反應(yīng)建立相應(yīng)的理化鑒別方法。

供試品溶液的制備：稱取本品細(xì)粉5 g，置100 mL量瓶中，加15%鹽酸至刻度，搖勻，靜置24 h，定量濾紙過濾，即得。取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，生成紅棕色沉淀，即Cu2[Fe(CN)6]。按上述實驗方法對各批次綠松石樣品進(jìn)行鑒別分析，結(jié)果均呈陽性，可作為鑒別綠松石銅離子的分析方法。

2.3 水分含量的測定

水分照2020年版《中國藥典》四部通則0832-烘干法進(jìn)行測定[12]。

取本品4 g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5 mm，疏松供試品不超過10 mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100-105℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計算供試品中含水量（%）。見表1。

表1 各批次松石水分含量測定結(jié)果

式中：m：恒重的稱量瓶質(zhì)量，g；m1：干燥后的質(zhì)量，g；m2：干燥前的質(zhì)量，g。

結(jié)果顯示，各批樣品水分含量在0.41-3.94%之間，均在4%以下。安徽產(chǎn)兩批次藥材的水分含量明顯高于其他批次，究其原因可能與形成礦物晶體的自然環(huán)境有關(guān)[13]。故暫擬定綠松石水分含量不得超過5%。

2.4 浸出物的測定

照2020年版《中國藥典》四部通則2201水溶性浸出物測定法（冷浸法）進(jìn)行測定。[12]

取本品約4 g，精密稱定，置250～300 mL的碘量瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，前6 h內(nèi)時時振搖，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。見表2。

表2 各批次綠松石浸出物含量測定結(jié)果

式中：m:供試品質(zhì)量，g；m1:蒸發(fā)皿的質(zhì)量，g；m2:干燥后的蒸發(fā)皿的質(zhì)量，g。

結(jié)果表明各批綠松石樣品浸出物含量在0.21-0.81%之間，均在0.20%以上。考慮到各地藥材質(zhì)量差異，初步擬定綠松石浸出物含量不得低于0.10%。

2.5 含量測定

銅元素含量測定參照2020年版《中國藥典》四部通則0406-原子吸收分光光度法項下的要求進(jìn)行試驗研究[12]。銅含量測定方法學(xué)考察所用樣品批次為20140216，試驗數(shù)據(jù)按照2020年版《中國藥典》四部指導(dǎo)原則9101項下的要求進(jìn)行規(guī)范[12]。

2.5.1供試品溶液的制備

取本品0.2 g，精密稱定，置于鉑坩堝中，加硼砂-碳酸鉀（1∶1）混合熔劑3.0 g，攪勻，注意擦下粘在攪拌棒上的熔劑，并入坩堝中，蓋好坩堝，置1100℃馬弗爐內(nèi)熔融10 min，取出冷卻至室溫，連同坩堝蓋放入微沸狀態(tài)的2%硝酸溶液100 mL中，保持微沸直至熔融物完全溶解。取出坩堝及坩堝蓋，用適量2%硝酸溶液洗滌，洗滌液并入供試品溶液中，冷卻至室溫，移置250 mL容量瓶中，加2%硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精確吸取上述供試品溶液1.00 mL，置100 mL容量瓶，加2%硝酸溶液至刻度，搖勻，即得。

2.5.2銅元素含量的測定方法

光源：銅元素空心陰極燈，狹縫寬度為1.2 nm；燈電流為3.0 mA，分析線為324.7 nm。

火焰原子化器：乙炔為燃?xì)?、空氣為助燃?xì)獾幕瘜W(xué)火焰（氬氣為保護氣），燃?xì)?空氣比例為0.075，燃?xì)饬髁繛?0 NL/h，燃燒頭高度為6 mm，火焰寬度為100 mm。

檢測器：光電倍增管。

分別吸取對照品溶液與供試品溶液適量，噴入原子吸收分光光度儀，在上述條件下測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中銅（Cu）的含量，帶入下式計算，即得銅元素含量。

式中：m：供試品質(zhì)量，g；m1：供試品溶液的測得量，μg/mL；0.025：轉(zhuǎn)換系數(shù)。

2.5.3方法學(xué)考察

（a）線性關(guān)系

精密移取1000μg/mL銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL，置100 mL容量瓶中，用2%硝酸溶液稀釋至刻度，得每1 mL含銅10μg的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.50、2.00、4.00、6.00、8.00 mL，分別置100 mL容量瓶中，用2%硝酸溶液稀釋至刻度，制得每1 mL分別含銅0.05、0.2、0.4、0.6、0.8μg的溶液。在測定條件下，將空白溶液與上述標(biāo)準(zhǔn)溶液依次噴入火焰，扣除空白，測得吸光度值，以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

結(jié)果顯示，0～0.8μg/ml濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

(b)精密度試驗

照供試品溶液制備方法制得供試品溶液（100%水平）和空白溶液各1份，在相同的測定條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，吸光度扣除空白，帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得濃度。

結(jié)果顯示，供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次測得濃度分別為0.2803、0.2816、0.2836、0.2829、0.2797、0.2827μg/mL，銅元素含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.50%，表明對銅元素含量儀器精密度良好。

(c)穩(wěn)定性試驗

本研究以穩(wěn)定性試驗作為方法耐用性的評價因素，為所建立的方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。

照供試品溶液制備方法制得供試品溶液（100%水平）和空白溶液1份，分別在制備后的0、1、2、4、6、8 h各進(jìn)樣1次進(jìn)行吸光度測量，吸光度扣除空白后，帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得濃度。

結(jié)果顯示，8 h內(nèi)同一供試品溶液不同時間段測得的銅元素濃度分別為0.3112、0.3171、0.3158、0.3167、0.3174、0.3146μg/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.67%。表明，供試品溶液在8 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

(d)重復(fù)性試驗

本研究選擇多次取樣測定結(jié)果的重復(fù)性作為含量測定方法的精密度評價標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行了試驗研究。照供試品溶液制備方法制得供試品溶液6份（100%濃度水平）和空白溶液1份，依次進(jìn)樣，吸光度扣除空白后，帶入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得濃度，并計算銅含量。結(jié)果見表3。

圖2 銅含量標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

表3 含量測定方法的重復(fù)性實驗數(shù)據(jù)

結(jié)果顯示，6份相同濃度水平供試品溶液中的銅元素含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9%。表明該方法的重現(xiàn)性良好。

(e)加樣回收試驗

本研究通過加樣回收試驗對方法測定結(jié)果與真實值的接近程度進(jìn)行了驗證，用以評價含量測定方法的準(zhǔn)確度。

稱樣量減半，平行取6份供試品，精密稱定質(zhì)量，將供試品中待測成分量與加入銅單質(zhì)量之比控制在約1∶0.5、1∶1、1∶1.5左右，加入銅單質(zhì)，按供試品溶液制備方法制得供試品溶液6份（各比例2份），分別測定其含量，并計算加樣回收率。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率實驗數(shù)據(jù)

結(jié)果顯示，銅元素的加樣回收率在93.98-97.44%范圍之內(nèi)，平均值為95.91%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.31%。表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

2.5.4各批次樣品的銅元素含量及含量限度值

依法對各批次綠松石中銅元素含量進(jìn)行了測定。結(jié)果見表5。

表5 各批次松石銅含量測定實驗數(shù)據(jù)

結(jié)果綠松石含堿式磷酸鋁銅以銅（Cu）計，含量為3.03-4.63%，均值為3.72%。將10批次綠松石藥材銅元素含量均值上下浮動30%，即2.60%-4.84%作為銅元素含量標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

本研究收集的不同產(chǎn)地、不同批次綠松石樣品間外觀、性狀無顯著差異。概括總結(jié)了各批次樣品的外觀、顏色及氣味等特點的基礎(chǔ)上，對藥材性狀進(jìn)行了規(guī)范化描述。對藥材進(jìn)行鑒別分析是保證其質(zhì)量穩(wěn)定性和臨床用藥安全必不可少的環(huán)節(jié)，但僅憑借外觀性狀進(jìn)行鑒別的方法專屬性弱且對鑒別人員的專業(yè)知識和經(jīng)驗儲備程度的要求較高，出現(xiàn)誤判漏判的概率較高。所以為了保障和提高臨床用藥的安全程度，本研究基于綠松石主要化學(xué)成分銅元素的銅鹽沉淀顯色反應(yīng)特點，制定了綠松石理化鑒別方法。

蒙藥綠松石為天然礦物質(zhì)藥物，不同自然環(huán)境下形成的礦物質(zhì)的水分含量和入藥時可溶性成分含量均可能存在較大的差異，所以本研究依法對各批次綠松石樣品的水分和浸出物含量進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示，各批次綠松石樣品的水分、浸出物含量范圍和平均值分別為0.41-3.94%、0.21-0.81%、1.34%、0.53%。綠松石的晶體結(jié)構(gòu)中包含銅元素，而銅屬于重金屬元素，所以對綠松石進(jìn)行重金屬限量檢查無實際意義，所以本研究未進(jìn)行重金屬限量檢查研究。

有學(xué)者通過藥理學(xué)研究證明銅離子具有抑制細(xì)菌的活性[14]，并且是人體不可或缺的微量金屬元素之一。因此本研究選擇綠松石晶體結(jié)構(gòu)中的銅元素作為目標(biāo)成分，以其含量作為指標(biāo)項，制定相應(yīng)的含量測定標(biāo)準(zhǔn)?；诂F(xiàn)有的文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，雖然與綠松石銅元素含量測定相關(guān)的文獻(xiàn)報道屬于空白，但是相似礦物金屬元素或銅元素含量測定相關(guān)的研究報道較為多見，可作為建立綠松石銅元素含量測定方法的參照。現(xiàn)有的礦物質(zhì)銅元素含量分析方法有電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法[15]、原子吸收分光光度法[16]及X射線熒光光譜法[17]等。上述光譜分析法中，原子吸收分光光度法作為金屬元素含量測定方法已廣泛應(yīng)用于包括醫(yī)藥、環(huán)境在內(nèi)的各個研究領(lǐng)域且獲得了較豐富的研究成果。現(xiàn)有的文獻(xiàn)報道表明，基于原子吸收分光光度法的礦物質(zhì)金屬元素含量測定法具有較好的前期研究積累，且原子吸收分光光度法已經(jīng)作為標(biāo)準(zhǔn)方法收載于國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 14353.1-2010，用于定量測定銅礦石中銅元素的含量[18]。本研究以原子吸收分光光度法作為含量測定方法，照2020版《中國藥典》四部指導(dǎo)原則9101進(jìn)行方法學(xué)驗證，結(jié)果顯示線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及加樣回收率等均符合相關(guān)要求，表明所建立的銅元素含量測定方法有效。依上述方法對各批次綠松石樣品進(jìn)行了含量測定，得堿式磷酸鋁銅以銅（Cu）計含量范圍為3.03-4.63%，平均含量為3.72%。在實際制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)以上述實驗數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，結(jié)合生產(chǎn)實際情況制定出符合市場需求的含量測定限度值。

基于現(xiàn)代分析技術(shù)的蒙藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是提高蒙藥相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量控制現(xiàn)代化程度的技術(shù)基礎(chǔ)。本研究建立的綠松石質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)快速簡便，且準(zhǔn)確度高，可作為藥材流通或制劑過程中質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)方法。該標(biāo)準(zhǔn)的建立不僅對完善蒙藥綠松石的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系具有重要的理論指導(dǎo)意義，也可以為其他礦物類藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。