梁子騰 綜述，黃維金，王佑春 審校

1.中國食品藥品檢定研究院 國家衛(wèi)生健康委員會生物技術(shù)產(chǎn)品檢定方法與標準化重點實驗室 國家藥品監(jiān)督管理局生物制品質(zhì)量研究與評價重點實驗室，北京 102629；2.北京協(xié)和醫(yī)學院研究生院，北京 100730

近年來，流行病學調(diào)查顯示，由于人類感染單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）而導致的口唇皰疹、咽炎、生殖器皰疹等疾病的發(fā)病率仍處于高位。HSV 包括HSV-1 和HSV-2 兩種血清型［1］。目前每年約有1.4 億人感染HSV-1，5 億人感染HSV-2［2］，且病例數(shù)呈逐年上升趨勢。HSV-1 和HSV-2 均屬于皰疹病毒家族中的α 亞科，是具有包膜結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA病毒。HSV-1的基因組長度為125 000 ～240 000 bp，主要引起口、面部、咽部感染，嚴重者可表現(xiàn)為散發(fā)性腦炎等重大疾病。有文獻報道，HSV-1 減毒活疫苗VC2在生殖器皰疹豚鼠模型中提供了對HSV-2生殖器感染的保護，疫苗在2個HSV血清型間有一定的交叉保護作用［3］。HSV-2的基因組長度為154 000 bp，主要導致生殖器皰疹，每年報告的HSV-2感染新病例約為2 300萬［4］。有研究表明，HSV-2感染者艾滋病的發(fā)病率顯著增加［2］，且對于女性患者，與宮頸癌的發(fā)生也密切相關(guān)［5］。由于HSV獨特的感染特點和免疫逃逸機制，且目前全球范圍內(nèi)尚無HSV疫苗獲批上市，因此，研發(fā)HSV疫苗顯得尤為重要。本文對國內(nèi)外HSV疫苗的研究進展及其研制過程中可能存在的局限性作一綜述。

1 HSV感染及特點

HSV 的感染分為原發(fā)性感染、潛伏感染與復(fù)發(fā)，原發(fā)性感染即患者在感染HSV 后，該病毒在感染的組織及其周圍增殖，形成的病灶為原發(fā)性感染灶［5］。之后，病毒通過神經(jīng)細胞軸突向感覺神經(jīng)節(jié)傳遞形成潛伏性感染。有學者認為，HSV 潛伏感染時，其基因組的結(jié)構(gòu)和功能均完好無損，只是暫停了病毒基因的轉(zhuǎn)錄和表達相關(guān)的一系列調(diào)控［6］。HSV 增殖后，最終以核衣殼的形式存在于被根神經(jīng)節(jié)。當受到外界環(huán)境（紫外線照射或化學物質(zhì)刺激等）影響時，可引起HSV 的復(fù)發(fā)感染。目前已知的HSV 上有12種糖蛋白：gB、gC、gD、gE、gG、gI、gH、gJ、gK、gL、gM和gN［7］。研究者基于HSV 的生物學特點、潛伏感染的機制等開發(fā)改造HSV疫苗。

根據(jù)病毒的感染特點，HSV疫苗可分為預(yù)防性疫苗和治療性疫苗。預(yù)防性疫苗的接種對象是健康人群，防止病毒的入侵，主要針對HSV的原發(fā)性感染，在皮膚和黏膜表面建立病毒防御，阻止病毒向感覺神經(jīng)節(jié)的入侵，抑制病毒形成潛伏性感染。治療性疫苗的接種對象是已被病毒感染的人群，目的是緩解患者的臨床癥狀，達到治療或防止病情惡化的效果。

2 HSV疫苗

HSV疫苗按照其特點、形成和作用機理，可分為減毒活疫苗、核酸疫苗、滅活疫苗、亞單位疫苗、基因工程活病毒疫苗、合成肽疫苗和抗獨特型疫苗，見表1。有文獻表明，抗獨特型疫苗可在一定程度上抵抗HSV的入侵［8］，但也有實驗表明，抗獨特型疫苗并未起到明顯作用，反而增強了HSV的致病能力［9］，之后對該類疫苗鮮有報道。

表1 HSV疫苗臨床試驗狀態(tài)Tab.1 Clinical trials of HSV vaccines

2.1 減毒活疫苗 減毒活疫苗刪除了病毒的致病基因，使其毒性減弱，接種后可刺激機體體液及細胞免疫應(yīng)答，部分還可引起黏膜免疫，由于其副作用小，安全性高［8］等特點，HSV 減毒活疫苗的研發(fā)被寄予厚望，但其安全性還與宿主的機體免疫力、毒株本身返祖而重新獲得致病力［10］密切相關(guān)。

最初，TK基因是研發(fā)減毒活疫苗的首選基因，在HSV-1F基因中敲除一段基因得到2 個基因重組體R7017和R7020，在動物試驗中也證明了該疫苗是安全有效的［10］。1999年，一種刪除核糖核酸酶PK基因的ICPΔ10基因缺陷活病毒疫苗被評價為是能夠預(yù)防HSV-2 感染的潛在疫苗［11］，使用ICPΔ10PK 疫苗免疫小鼠后，可觀察到小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了針對HSV的特異性抗體。在WACHSMAN 等［12］構(gòu)建的豚鼠模型中，注射ICPΔ10PK 疫苗的豚鼠，其潛伏感染神經(jīng)節(jié)比例、原發(fā)感染和復(fù)發(fā)感染比例以及生殖器皰疹感染與復(fù)發(fā)比例均顯著低于使用PBS 等劑量注射的對照組，表明ICPΔ10PK 疫苗在豚鼠體內(nèi)具有預(yù)防和治療作用。減毒活疫苗HSV529 目前正在進行Ⅱ臨床實驗。HSV-2 的UL5和UL29基因被敲除，獲得了HSV-2 的突變株dl5-29。YO 等［13］用已構(gòu)建的HSV-1血清陽性和陰性的豚鼠模型檢測dl5-29 與gD 疫苗對豚鼠的保護效力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)wild HSV 對豚鼠陰道刺激后，dl5-29 組豚鼠的神經(jīng)節(jié)HSV DNA 水平更低，且誘導的中和抗體滴度較高。DELAGRAVE等［14］比較了肌內(nèi)注射HSV529 與gD 疫苗在不同攻毒劑量下的保護作用，試驗結(jié)果與YO等的結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)，刪除UL22基因的非感染性單周期病毒，HSV 的gH 糖蛋白不能正常合成［15-16］，導致病毒不能感染正常的細胞，該疫苗安全性良好，但無法完全阻止HSV-2 的潛伏與復(fù)發(fā)。近幾年的一項研究中，STANFIELD 等［17］利用HSV gK 蛋白和2 個截短突變的UL20基因構(gòu)建了HSV VC2減毒活疫苗，該減毒疫苗株能在豚鼠體內(nèi)產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答，小鼠肌肉注射VC2可引發(fā)廣泛的黏膜免疫反應(yīng)。

2.2 核酸疫苗 核酸疫苗與傳統(tǒng)疫苗不同，其具有性能穩(wěn)定、安全性高、成本低、在細菌中可大量增殖和廣泛誘導免疫應(yīng)答等特點，是目前最新發(fā)展的疫苗之一［18］。核酸疫苗是將編碼某種病毒蛋白的質(zhì)粒接種于人體內(nèi)，之后在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄翻譯生成蛋白質(zhì)，刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。目前研究較多的是DNA 疫苗。由于糖蛋白D2（glycoprotein，gD2）和gB2 是誘導免疫反應(yīng)的主要抗原，HSV DNA 疫苗大多采用gD2 和gB2［18］。有資料顯示，聯(lián)合表達HSV gD、gB 的疫苗起到的保護效果優(yōu)于單一表達其中一種糖蛋白［19］。

2008年，一種候選HSV-2 gD2 DNA 疫苗在HSV-2 血清陰性的62 名健康成年人中進行了載體對照、雙盲、劑量遞增免疫原性和安全性試驗，且其中50%的受試者還是HSV-1 陰性，全部受試者被隨機分配到疫苗組和安慰劑組，比例為4∶1。實驗結(jié)果表明，疫苗安全性良好，未觀察到劑量依賴的毒性，但僅在3 000 μg 劑量組中一名受試者檢測到對gD2 的細胞免疫，提示該疫苗需高劑量接種可能才會發(fā)揮其更好的性能［19］。ZHOU 等［20］開發(fā)了一種編碼HSV-2 gD的gD2 DUL25 DNA 疫苗，該疫苗與傳統(tǒng)的gD2 疫苗相比，能誘導更強烈的免疫應(yīng)答。之后又在gD2 DUL25 DNA 疫苗上進行了改造，IL-28佐劑的加入使體液免疫和細胞免疫得到進一步加強。KIM 等［21］也將gD 作為核酸疫苗的主要靶點，為了促進細胞毒性T 淋巴細胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）反應(yīng)，又選擇了有CD8 T 細胞特異性表位的UL25 和gB 蛋白作為額外的靶點，結(jié)果表明，該疫苗誘導了病毒特異性T 細胞應(yīng)答，并較好地清除了HSV，起到了預(yù)防HSV原發(fā)性感染的作用。PACK 等［22］發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白70（heat shock protein 70，Hsp70）與病毒MHCⅠ級限制性表位（gB498-505）耦合疫苗可保護新生小鼠免受HSV-1 感染，可在生命早期抵抗HSV 的攻擊。DUTTON 等［23］通過對密碼子優(yōu)化修飾來增強免疫應(yīng)答，并在此基礎(chǔ)上增加泛素編碼序列將抗原靶向到蛋白酶體中進行處理，從而構(gòu)建了編碼HSV gD 的新型DNA 疫苗，在小鼠體內(nèi)注射后，細胞毒性T細胞應(yīng)答顯著增強，并降低了病毒潛伏感染的風險。還有多種新型DNA 疫苗，如gD2、gB2、CTL 表位質(zhì)粒DNA疫苗，可成功刺激機體產(chǎn)生廣泛的免疫應(yīng)答［23-27］。

2.3 滅活疫苗 第一代滅活疫苗是通過用福爾馬林處理被HSV 感染的兔腦等動物組織而制備的［28］。第二代滅活疫苗是將HSV接種于雞胚，用紫外線照射或化學處理等方法滅活雞胚中的病毒，進而制成疫苗。目前的滅活疫苗是通過細胞培養(yǎng)HSV，滅活后進行一系列純化等制備的。據(jù)文獻報道，Lupidon G和Lupidon H是全病毒滅活疫苗的兩個代表性疫苗，在意大利曾進行Ⅱ期臨床試驗，結(jié)果表明，具有一定的預(yù)防作用，但臨床資料并不能證明其安全性和有效性［29］。由于早期開發(fā)的HSV 滅活疫苗免疫原性低、功效差及存在潛在致癌性等缺陷，現(xiàn)已基本停止研究［30］。

2.4 亞單位疫苗 目前研究最多的HSV 疫苗為亞單位疫苗［31］，是通過提取或體外合成HSV 分泌的蛋白以及包膜表面的結(jié)構(gòu)蛋白制成的。已知的HSV上有12 種糖蛋白，研究者多使用gD 和gB 來研制亞單位疫苗，通過大腸埃希菌等原核表達系統(tǒng)或真核表達系統(tǒng)中的桿狀病毒載體系統(tǒng)來合成純化蛋白。KEVIN 等［32］用原核表達系統(tǒng)中的鼠傷寒沙門菌表達出HSV-1 糖蛋白D，動物實驗結(jié)果表明，該疫苗可對HSV 產(chǎn)生有效的保護作用。AWASTHI 等［33］研發(fā)的gD2／gC2／gE2 三價亞單位疫苗可提高ELASA 試驗中和抗體的滴度，對豚鼠具有預(yù)防作用，對恒河猴具有免疫原性［33-35］。亞單位疫苗中也常用佐劑聯(lián)合提高疫苗刺激機體免疫應(yīng)答的水平。COREY 等［36］對531 名感染HSV-2 但HSV-2 血清（-）的性伴侶和1 862名HSV-2高位感染人群進行2次雙盲、隨機、安慰劑對照的臨床試驗，試驗開始時、第1 個月和第6個月對受試者肌內(nèi)三角肌進行g(shù)D2-gB2-MF59疫苗3次注射，結(jié)果顯示，該亞單位疫苗在受試者中誘發(fā)了高滴度的HSV-2 中和抗體，但該疫苗的總有效率僅有9%。SITA 等［37］開發(fā)了Ⅱ型HSV 聯(lián)合佐劑MPL 和明礬的gD2亞單位疫苗，臨床試驗表明，僅對HSV（-）的女性提供了明顯的保護作用，但對HSV-1血清（+）的女性和男性無明顯的保護作用。ONNHEIM 等［38］近期研制了一款靶向gG2 的疫苗，可增強HSV-1、HSV-2的免疫應(yīng)答，誘導大量的CD4 T細胞。

2.5 基因工程活病毒疫苗 基因工程活病毒疫苗是利用基因工程方法，將HSV 外源基因插入已證明是安全的、能完整復(fù)制的病毒或細菌中，如痘苗病毒、腺病毒及相關(guān)病毒、水痘-帶狀皰疹病毒（varicella zoster virus，VZV）和鼠傷寒桿菌等。之后在上述病毒或細菌中即可表達出HSV 的相應(yīng)蛋白，免疫動物后刺激其產(chǎn)生相應(yīng)的免疫應(yīng)答。

MCDERMOTT 等［39］利用重組人腺病毒載體AdgB2 驗證基因工程活病毒疫苗的免疫效力，接種AdgB2 的小鼠體內(nèi)可產(chǎn)生針對HSV gB 高滴度的特異性抗體，且注射后無不良反應(yīng)。試驗表明，該人腺病毒載體不會在小鼠體內(nèi)復(fù)制，且單次免疫小鼠即可保護其免受HSV的攻擊。MESEDA等［40］用重組牛痘病毒MVA 載體研制了gD2 疫苗，在實驗過程中意外發(fā)現(xiàn)，如使用gD MVA 載體而不是gD 質(zhì)粒載體作為啟動免疫，獲得了更多樣化的抗體同型反應(yīng)，以及更多的抗體和強烈的細胞免疫反應(yīng)。MACMILLAN等［41］發(fā)現(xiàn)，重組霍亂弧菌幽靈（recombinantVibrio choleraeghost，rVCG）可成功增強人體和動物病原體的體液和細胞免疫應(yīng)答。該疫苗是由表達衣原體MOMP和HSV-2 gD的rVCG組成，在體內(nèi)，小鼠經(jīng)免疫后，在血清和陰道分泌物中均有l(wèi)gA和lgG2a抗體；在體外，小鼠經(jīng)聯(lián)合疫苗免疫后，血清和陰道分泌物中均產(chǎn)生對衣原體和HSV-2 抗原分泌的IgA 和IgG2a 抗體，生殖器官可免受高劑量衣原體和HSV-2的攻擊［41-42］。最新研究表明，將gD和UL25基因插入重組腺病毒5（adenovirus 5，Ad5）載體中制備的基因工程活病毒疫苗可誘導強烈的CD4 T、CD8 T細胞免疫［43-44］，在小鼠模型中可有效預(yù)防生殖器皰疹［45］。

基因工程活病毒疫苗因其高安全性、可構(gòu)建多價聯(lián)合疫苗以及可口服等特點備受關(guān)注，但由于有外源病毒的存在，可能會刺激機體產(chǎn)生多種抗體，抗體之間的相互作用對人體健康造成的影響目前尚不明確。另外，疫苗載體中HSV蛋白表達水平較低，誘導的抗體滴度較低，因此，后期應(yīng)更多地關(guān)注如何提高基因工程活病毒疫苗中的HSV外源基因水平。

2.6 合成肽疫苗 從亞單位疫苗到合成肽疫苗，研究者在不斷將發(fā)揮抗原作用、刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原單位縮短。2008年，一種以HSV-2 gB 中的HLA a *0201 限制性表位非共價鏈接，與截短的HSP70 佐劑結(jié)合的多肽疫苗AG-702 經(jīng)Ⅰ期臨床試驗證明安全性良好，但56 名受試者的T 細胞數(shù)據(jù)顯示，并未檢測到對HSV-2 CD8+表位增強的免疫應(yīng)答［19］。一種包含22個HSV-2蛋白與重組人Hsc70蛋白（命名為HerpV，原AG-707）非共價鍵鏈接而成的合成肽疫苗［46］已于2006年完成了Ⅰ期臨床試驗，2015年完成了Ⅱ期臨床試驗，其安全性高，且具有良好的免疫原性，受試者在注射疫苗前后，CD4 T和CD8 T 細胞應(yīng)答差異有統(tǒng)計學意義。HerpV 是第一個在HSV 血清陽性受試者中誘發(fā)廣泛CD4+和CD8+T 細胞免疫應(yīng)答的候選疫苗［47］。目前，多種生物信息學技術(shù)更多地應(yīng)用于HSV疫苗的開發(fā)中。采用DNAstar 序列比對、生物信息學軟件系統(tǒng)BioSun和Antheprot 蛋白序列分析相結(jié)合的方法，對HSV-2 gB2、gC2、gE2、gG2和gI2的20個候選表位進行預(yù)測，并在體外進行生物學功能測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其中17個候選表位在EIA 測試中可與抗血清產(chǎn)生應(yīng)答，有5個肽段與抗血清的反應(yīng)較強烈，分別為gB2466-473（EQDRKPRN）、gC2216-223（GRTDRPSA）、gE2483-491（DPPERPDSP）、gG2572-579（EPPDDDDS）和gI2286-295（CRRRYRRPRG），上述5種多肽與BSA載體蛋白結(jié)合均可刺激小鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答［48］。由此可見，合成肽疫苗是具有潛力的候選疫苗之一。但由于其分子量較小，免疫原性常不能達到設(shè)計者的預(yù)期，保護效力相對較弱，研發(fā)時需尋找適應(yīng)的載體相互結(jié)合。

3 局限性與未來方向

目前為止，尚無HSV 疫苗成功上市［3］，提示研究者需制定合理的HSV 疫苗研制策略，所研制的HSV疫苗復(fù)制周期應(yīng)比病毒的復(fù)制周期長，具有能被宿主容易識別的靶點，刺激機體迅速產(chǎn)生免疫應(yīng)答，且具有無嗜神經(jīng)毒性等特點［49］。針對HSV 疫苗的開發(fā)，哈欽森癌癥研究中心另辟蹊徑，其關(guān)注點并不是復(fù)制病毒本身、DNA或病毒表面蛋白，而是用經(jīng)過改造的酶在關(guān)鍵位點的切割，以清除整合性或非復(fù)制性的附加型病毒的基因組為目標，結(jié)果目前尚無定論，但可作為一個全新的角度來嘗試HSV 疫苗的研制，這也提示HSV 疫苗目前未獲批上市的原因可能是研制策略需要調(diào)整，同是在HSV 疫苗研發(fā)過程中可能存在某些局限性。

3.1 尋找培養(yǎng)病毒的合適細胞系 資料表明，人胚肺細胞（MRC-5）和非洲綠猴腎細胞（Vero）多用于HSV的分離培養(yǎng)，其中HSV-1多在Vero細胞或人胚胎肺成纖維樣細胞（KMB17）中培養(yǎng)擴增，HSV-2多在Vero 細胞、地鼠腎細胞（BHK）和人喉表皮樣癌細胞（Hep-2）中進行培養(yǎng)［50］。據(jù)報道，通過空斑數(shù)和細胞病變出現(xiàn)的特征與時間對比黑松雞猴腎細胞（BGM）、宮頸癌細胞（Hela）、人二倍體細胞（HEL）、人非小細胞肺癌細胞（A549）對HSV-1 的敏感程度，進而得到HSV-1 分離培養(yǎng)較為理想的細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BGM細胞優(yōu)于其他類別的細胞［50］。但由于病毒或細胞表面蛋白結(jié)構(gòu)的影響，使用細胞培養(yǎng)病毒時，獲得的病毒量很少，應(yīng)進一步探討使用何種新型細胞系可提高病毒量。

3.2 疫苗試驗過程中合理選擇實驗動物人類感染HSV 后，不會對生命構(gòu)成威脅，但小鼠感染HSV 后，多會對其產(chǎn)生致命的攻擊［51］。因此，用小鼠模型進行HSV疫苗實驗存在很多局限性。研究發(fā)現(xiàn)，小鼠模型適于開發(fā)預(yù)防性疫苗，豚鼠模型適于開發(fā)治療性疫苗，但由于豚鼠不適合用基因敲除實驗來評估作用機制［52］，人們嘗試利用恒河猴等與人類親緣關(guān)系較近的實驗動物，盡量縮小動物實驗和臨床試驗的差距，缺點是使用恒河猴來進行模擬實驗成本太高［53］，提示急需建立一個更有效的動物實驗平臺，見表2。

表2 HSV疫苗動物模型Tab.2 Animal models used for HSV vaccines

其次，構(gòu)建模型時，實驗動物的性別也是應(yīng)考慮的重要因素。臨床資料表明，HSV-2 在男性中的發(fā)病率明顯低于女性，可能與其生殖結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。男性和女性生殖器部位的免疫細胞和微生物群不同，女性陰道處免疫細胞較多、多為厭氧微生物；而男性免疫細胞少，多為需氧微生物。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)，研制HSV 疫苗時多用雌性動物［2］，但應(yīng)用于雄性動物中，疫苗的保護效力低于雌性動物［2］，因此，應(yīng)充分考慮實驗動物的性別差異對HSV 疫苗的限制，進而開發(fā)兼容性更高的HSV疫苗。

3.3 合理使用佐劑大量文獻表明，疫苗聯(lián)合佐劑的應(yīng)用誘導了更有力的T細胞免疫和抗體水平。在疫苗研制過程中，CPG、MPL、MF59、QS21、HSP70和明礬等已被用作HSV疫苗的佐劑。如HSP70能夠通過MHCⅠ類途徑交叉提呈外源性病毒抗原，與HSV gB498-505表位耦合成重組HSV gB 疫苗，可在生命早期抵抗HSV的攻擊［22］，HSV聯(lián)合佐劑MPL和明礬的gD2亞單位疫苗可對HSV（-）的女性提供明顯的保護作用［54］。HSP70聯(lián)合HSV gB蛋白可將HSV抗原肽呈遞至CD8+和CD4+T淋巴細胞，還可激活抗原提呈細胞，并促進機體免疫應(yīng)答［55］。有文獻表明，以細胞因子、趨化因子、免疫刺激調(diào)節(jié)分子和共刺激分子作為HSV-2 疫苗佐劑的DNA 疫苗可誘導機體產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答。SIN 等［56］將編碼IL-12 P40 與編碼IL-12 的P35質(zhì)粒與HSV-2 PgD 質(zhì)粒共同免疫小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠體內(nèi)免疫球蛋白lgA、lgG 水平明顯增高。之后用免疫刺激調(diào)節(jié)分子CD154 作為佐劑共同免疫小鼠，仍可觀察到小鼠T細胞免疫應(yīng)答增強，且面對HSV-2致死劑量攻擊時，小鼠死亡率顯著降低［56］。SHLAPOBERSKY 等［26］將pDNA 與Vaxfectin（一種基于陽離子脂質(zhì)的佐劑）開發(fā)了gD2 疫苗，用HSV-2 致死劑量攻擊小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠神經(jīng)毒性明顯減弱，提示VaxfectingD2 pDNA具有作為未來多價HSV-2疫苗聯(lián)合佐劑的潛力。大多數(shù)佐劑可刺激先天免疫細胞或樹突狀細胞，從而誘導有效且持久的免疫應(yīng)答。由此可見，佐劑的合理應(yīng)用可大大提高免疫應(yīng)答的效率，因此，實驗過程中佐劑的選擇至關(guān)重要，但聯(lián)合新型佐劑的HSV疫苗對人體產(chǎn)生的副作用應(yīng)額外關(guān)注。

3.4 關(guān)注疫苗不同注射方式對其保護作用的影響資料表明，疫苗的接種途徑均是具有高度經(jīng)驗性的，通過反復(fù)對比不同方式接種疫苗的保護作用，從而選擇一種對機體保護作用最高的疫苗接種方式作為標準［4］。但最近一項研究表明，HSV-2候選基因缺陷活病毒疫苗ACAM529［16］，不同注射方式可在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生不同的相對免疫原性和保護效力。通過皮內(nèi)、皮下和肌內(nèi)途徑注射ACAM529，結(jié)果表明肌內(nèi)注射途徑對小鼠的保護作用最強。胡凱等［57］設(shè)計了一款以PEI-Fe3O4 為載體的DNA 疫苗pRSC-gD-IL-21，在小鼠HSK動物模型中，通過眼表黏膜注射方式刺激小鼠產(chǎn)生了明顯的細胞免疫、體液免疫和特異性黏膜免疫應(yīng)答。由此可見，疫苗不同的注射方式在疫苗的作用發(fā)揮方面起重要作用，對注射方式的考量為進一步的臨床試驗研究奠定了基礎(chǔ)。

隨著HSV生物學特點，病毒感染、潛伏和復(fù)發(fā)機制等的深入研究，相信未來HSV 疫苗的研制將在上述研究的基礎(chǔ)上尋找到新的突破點。