李語婕，陳 顥

復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海 200032

胰腺癌是指起源于胰腺體外分泌部的導(dǎo)管上皮腺癌，胰腺導(dǎo)管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC）約占90%。胰腺癌發(fā)展迅速且后果嚴(yán)重，2020年報告了全球495 773例胰腺癌新發(fā)病例［1］?？偟?年生存率小于10%，大多數(shù)患者存在無法手術(shù)和無法治愈的腫瘤［2］。胰腺癌的早期癥狀隱匿導(dǎo)致確診時往往已經(jīng)到達(dá)晚期，不能進(jìn)行手術(shù)切除，再加上胰腺癌極具侵襲性且易發(fā)生轉(zhuǎn)移［3］，這是導(dǎo)致胰腺癌患者高死亡率的原因之一。胰腺癌發(fā)病率非常穩(wěn)定［4］，一項針對歐盟國家的研究［5］預(yù)測，2025年胰腺癌將超過乳腺癌，成為癌癥相關(guān)性死亡的第三大原因。另一項研究［6］預(yù)計到2030年，胰腺癌將可能成為癌癥相關(guān)性死亡的第二大原因，從如此嚴(yán)峻的統(tǒng)計數(shù)據(jù)來看，臨床上亟待尋找可用于胰腺癌精準(zhǔn)治療或提高生存率的新靶標(biāo)。滋養(yǎng)層細(xì)胞表面抗原2（trophoblast cell surface antigen 2，TROP2），又稱腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2（tumor-associated calcium signal transducer 2，TACSTD2），是一種Ⅰ型跨膜細(xì)胞表面糖蛋白，是TACSTD2基因編碼的蛋白產(chǎn)物。TROP2最初發(fā)現(xiàn)于人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞，是一種細(xì)胞內(nèi)鈣信號傳感器，在許多正常組織中均有表達(dá)，但在大多數(shù)人類腫瘤中高表達(dá)［7］。TROP2的表達(dá)依賴于多種轉(zhuǎn)錄因子，主要是肝細(xì)胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor 4α，HNF4α）［8］。這種跨膜糖蛋白在多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮作用，它向細(xì)胞發(fā)出自我更新、增殖和入侵的信號［9］。目前以TROP2為泛癌靶點(diǎn)的藥物在臨床試驗中取得了階段性成果［10］，本文概述TROP2在胰腺癌中的表達(dá)、可能參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及以TROP2為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物的研究進(jìn)展，為靶向TROP2在胰腺癌治療中的機(jī)制和提高患者預(yù)后方面提供參考。

1 TROP2在胰腺癌中的表達(dá)和意義

1.1 體外和體內(nèi)實驗中TROP2的表達(dá)和意義

TROP2通過細(xì)胞表面受體信號在腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲及轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮作用［11］。在體外實驗中抑制TROP2基因表達(dá)，可顯著降低胰腺癌細(xì)胞增殖率并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，體內(nèi)實驗［12］證明，TROP2基因的mRNA表達(dá)水平明顯高于癌旁組織。

在胰腺癌BALB/c裸小鼠皮下移植瘤模型中研究TROP2的表達(dá)，觀察到在3種不同的胰腺癌細(xì)胞株中，TROP2表達(dá)都處于高水平［13］。Cubas等［14］研究發(fā)現(xiàn)，TROP2可能介導(dǎo)胰腺癌肝轉(zhuǎn)移，將表達(dá)TROP2的胰腺癌細(xì)胞接種到免疫缺陷小鼠胰腺尾部，約1/3出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移的跡象。TROP2已被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，包括膽囊癌、胃癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、宮頸癌、甲狀腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤及口腔癌等［15-23］，但TROP2介導(dǎo)胰腺癌轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制還不清楚。

1.2 臨床試驗中TROP2的表達(dá)和意義

TROP2表達(dá)與腫瘤惡性程度及預(yù)后有關(guān)，仇金榮等［24］研究發(fā)現(xiàn)，人胰腺癌組織分化程度越低，TROP2陽性表達(dá)程度越高，與患者年齡和性別無關(guān)。Fong等［25］研究了TROP2表達(dá)在胰腺癌患者預(yù)后預(yù)測中的價值，在197個腫瘤樣本中有109個（55%）可檢測到TROP2高表達(dá)，生存曲線顯示，TROP2高表達(dá)與患者總生存率降低顯著相關(guān)，單因素分析顯示，TROP2高表達(dá)與組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。多因素分析證實，TROP2高表達(dá)是不良總生存期的獨(dú)立預(yù)后因子。此外，在接受治愈性手術(shù)的患者亞組中，TROP2高表達(dá)與縮短的無進(jìn)展生存期顯著相關(guān)。

2 TROP2參與多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

TROP2參與多種與腫瘤發(fā)展相關(guān)的分子通路，它有很多配體，包括胰島素樣生長因子-1（insulin-like growth factors-1，IGF-1）、緊密連接蛋白1（claudin-1）、緊密連接蛋白7（claudin-7）、細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）和蛋白激酶C（protein kinase C，PKC），主要通過調(diào)節(jié)鈣離子（Ca2+）信號通路、細(xì)胞周期蛋白表達(dá)及降低纖連蛋白黏附作用來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移［26］。

2.1 Ca2+信號通路

TROP2胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域有一個磷脂酰肌醇二磷酸（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate，PIP2）的同源結(jié)構(gòu)域，當(dāng)配體結(jié)合G蛋白偶聯(lián)受體，然后由Gq蛋白激活磷酯酶C（phospholipase C，PLC）將膜上的PIP2分解為二脂酰甘油（diacyl glycerol，DAG）和三磷酸肌醇（inositol 1,4,5-triphosphate，IP3）。IP3與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的特異性受體結(jié)合，促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放Ca2+到細(xì)胞質(zhì)中，而DAG在Ca2+的協(xié)同下激活PKC。TROP2蛋白的絲氨酸303位點(diǎn)（S303）被PKC磷酸化的過程被認(rèn)為是參與鈣信號調(diào)節(jié)的環(huán)節(jié)［27］，然而另一項研究［28］證明，絲氨酸322位點(diǎn)（S322）才是被PKC磷酸化的位點(diǎn)，這種絲氨酸位點(diǎn)的磷酸化通過使claudin-7減少定位到細(xì)胞邊緣，從而增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動能力。

2.2 絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

在小鼠模型和人胰腺及結(jié)直腸癌細(xì)胞中都觀察到TROP2過表達(dá)后細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2，ERK1/2）的激活，TROP2分子通過MAPK信號通路發(fā)揮作用，通過增加cyclin D1和cyclin E的水平，下調(diào)p27表達(dá)，從而增加ERK1/2的磷酸化水平，介導(dǎo)細(xì)胞周期的進(jìn)展。此外Ca2+信號通路也可激活MAPK信號通路，增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白1（activator protein-1，AP-1）的活性，下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)，抑制凋亡。AP-1又可促進(jìn)cyclin D/E和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（cyclindependent kinase，CDK）表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞周期。而DAG進(jìn)一步激活PKC，正反饋調(diào)節(jié)TROP2的磷酸化［29］。所以PKC和MAPK信號通路都可能參與TROP2誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長。此外，ERK信號通路通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）的表達(dá)來調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的侵襲［21］。

2.3 Notch1-HES1信號通路

Notch1蛋白是通路中的一種受體，介導(dǎo)兩個細(xì)胞相互靠近接觸后的活化效應(yīng)。周童等［12］利用RNA干擾技術(shù)抑制胰腺癌細(xì)胞中TROP2基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)caspase 3蛋白表達(dá)升高，Notch1、HES1蛋白表達(dá)降低，提示抑制TROP2可能通過Notch1信號通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

2.4 磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

TROP2通過AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)腫瘤生長，并決定細(xì)胞對AKT抑制劑的敏感性。AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路由上游磷酸化活化而啟動，又通過下游多種途徑對靶蛋白進(jìn)行磷酸化，發(fā)揮抗凋亡作用。由于AKT的激活需要重新募集到細(xì)胞膜上，研究［30］發(fā)現(xiàn)，AKT與TROP2緊密共定位在癌細(xì)胞的細(xì)胞膜上，且與TROP2共定位的AKT在T308和S473激活位點(diǎn)都被磷酸化，提示AKT的募集依賴于TROP2。

3 以TROP2為靶點(diǎn)的抗胰腺癌藥物

3.1 抗TROP2抗體

Ikeda等［31］制備了一種新的抗TROP2抗體，命名為Pr1E11，能與TROP2高親和力特異性結(jié)合，可識別多種上皮癌細(xì)胞系和原發(fā)性胰腺癌組織?；谝粋€富含半胱氨酸的結(jié)合表位，可能激發(fā)不同于其他抗TROP2抗體的生物活性，并可能成為多種上皮性腫瘤單抗體治療的潛在候選藥物。

3.2 抗體藥物偶聯(lián)物（antibody drug conjugate，ADC）

ADC由單克隆抗體、毒素分子和連接子組成。利用單克隆抗體靶向性定位癌細(xì)胞，ADC與靶癌細(xì)胞結(jié)合后被溶酶體溶解，釋放毒素分子殺死癌細(xì)胞。其中，連接子要滿足兩個條件：連接子在血液中無法被分解，而當(dāng)ADC進(jìn)入癌細(xì)胞之后，連接子要能正常分解，從而釋放毒素分子殺死癌細(xì)胞，并且保證每個單克隆抗體連接的毒素分子等量。

沙伊圖珠單抗（sacituzumab govitecan，SG）時抗TROP2免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）與SN-38組成的首個針對TROP2的ADC，是利用人源化抗體hRS7作為靶向載體與伊立替康活性代謝產(chǎn)物SN-38偶聯(lián)而成的。與大多數(shù)使用超毒藥物和穩(wěn)定接頭的ADC不同，SG使用一種中等毒性的藥物，在SN-38和接頭之間具有中等穩(wěn)定的碳酸鍵［13］。研究［32］發(fā)現(xiàn)，與伊立替康相比，SG為腫瘤提供的SN-38是伊立替康的20～136倍，血藥濃度是伊立替康的20～40倍，SG可以更好地輸送SN-38至腫瘤部位，提高血藥濃度。美國食品藥品管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）已宣布批準(zhǔn)SG用于一線和二線治療失敗的轉(zhuǎn)移性三陰性乳腺癌患者，是首款靶向TROP2蛋白的ADC類藥物［33］，最近又在非小細(xì)胞肺癌和尿路上皮癌中獲批［34］。Ⅲ期臨床研究［35］證明，與標(biāo)準(zhǔn)化療相比，SG對經(jīng)過化療無效或進(jìn)展的表達(dá)中高水平TROP2的轉(zhuǎn)移性三陰性乳腺癌患者有益，應(yīng)用SG患者的無進(jìn)展生存期和總生存期明顯長于單藥化療，但骨髓抑制和腹瀉更常見［36］。在胰腺癌中，有Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗［10］證實SG對高表達(dá)TROP2的胰腺腫瘤有抗癌活性，安全性試驗發(fā)現(xiàn)常見的不良反應(yīng)為惡心（62.6%）、腹瀉（56.2%）、疲勞（48.3%）、脫發(fā)（40.4%）和嗜中性粒細(xì)胞減少（57.8%）。

Strop等［37］利用位點(diǎn)特異性轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶和微管抑制劑連接子PF-06380101開發(fā)了一種可切割的TROP2介導(dǎo)的ADC（RN927C）。RN927C是一種位點(diǎn)特異性的TROP2 ADC，穩(wěn)定性增強(qiáng)，在臨床前實體腫瘤模型中非常有效。Okajima等［38］開發(fā)了新型抗TROP2 ADC datopatamab deruxtecan（Dato-DXd），在臨床前研究模型中，Dato-DXd對TROP2表達(dá)的腫瘤也顯示出抗腫瘤活性。

Mao等［39］將一種新的抗TROP2 Fab抗體與阿霉素（doxorubicin，DOX）偶聯(lián)，形成ADC TROP2 Fab-DOX，TROP2 Fab-DOX呈劑量依賴性地抑制胰腺癌細(xì)胞增殖和遷移，在體內(nèi)抑制胰腺癌移植瘤的生長，并且其對胰腺癌細(xì)胞的抑制率高于相同濃度的DOX。

3.3 靶向免疫雙抗療法

靶向抗CD3/TROP2雙特異性抗體有效誘導(dǎo)T細(xì)胞介導(dǎo)的對表達(dá)TROP2的胰腺癌的殺傷，此外干擾素α還能增強(qiáng)這種殺傷作用［40］。在包括胰腺癌的多種實體腫瘤中，靶向TROP2的嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimeric antigen receptor T-cell，CAR-T）可以抑制腫瘤生長，尤其是基于CD27的靶向TROP2的CAR-T表現(xiàn)出較高的抗腫瘤活性，TROP2可能為CAR-T細(xì)胞免疫治療提供一個潛在靶點(diǎn)［41］。

3.4 光免疫療法（photoimmunotherapy，PIT）

人源化抗TROP2單克隆抗體結(jié)合光敏劑IR700（TROP2-IR700）偶聯(lián)物在與目標(biāo)分子結(jié)合時被近紅外輻射激活，IR700吸收700 nm波長的近紅外線并引起化學(xué)變化，體外實驗［42］證實，TROP2-IR700吸收光能并產(chǎn)生熱量，從而損害癌細(xì)胞。靜脈注射TROP2-IR700后能定位于小鼠異種移植瘤并能顯著抑制腫瘤生長。

4 小結(jié)

TROP2已被證明在許多腫瘤中過表達(dá)，但在其他非癌細(xì)胞類型中也顯示出不同水平的表達(dá)［26］。這一發(fā)現(xiàn)表明，針對TROP2治療藥物的開發(fā)可能需要針對惡性腫瘤組織的靶向策略，以便將靶向藥物對表達(dá)高水平TROP2的基本正常組織的潛在毒性降至最低。許多傳統(tǒng)信號傳導(dǎo)通路中的分子已被證明與TROP2的作用相關(guān)，但具體通路及作用機(jī)制仍不明確，TROP2在胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中參與的環(huán)節(jié)還需要進(jìn)一步探索。大多數(shù)研究針對從靶標(biāo)測量如TROP2推斷藥物反應(yīng)，而測量目標(biāo)激活分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的方法相對較少。如果將AKT活性作為腫瘤治療的靶點(diǎn)，將有利于把預(yù)測藥物反應(yīng)的途徑從靶點(diǎn)檢測轉(zhuǎn)變?yōu)楸O(jiān)測靶點(diǎn)激活分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)［30］，這對藥物作用于靶蛋白從而改變表型的通路和機(jī)制研究提供了新思路。Sharkey等［32］通過體外細(xì)胞毒性和體內(nèi)實驗證明，抗TROP2結(jié)合物在治療胃癌方面優(yōu)于milatuzumab-SN-38（一種與SN-38結(jié)合的抗CD74抗體），然而在胰腺癌動物模型中milatuzumab-SN-38卻更有效。尚缺乏相關(guān)試驗說明靶向TROP2與其他療法相比在無進(jìn)展生存期與生存率方面有何優(yōu)勢。目前，評估SG單獨(dú)或聯(lián)合治療效果的臨床試驗正在各個癌種中進(jìn)行，臨床試驗［10］結(jié)果表明，以TROP2為靶點(diǎn)的藥物在實體癌患者中產(chǎn)生的不良反應(yīng)可控，但納入的胰腺癌患者數(shù)量仍然較少?？傊琓ROP2作為胰腺癌發(fā)生、發(fā)展多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的靶點(diǎn)之一，在尋求新的治療方案中展現(xiàn)出潛在的價值。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。