韓慶莉肖小陽謝永輝王 鐸李志剛 劉申艷李星慧陳雅瓊

（1.西南林業(yè)大學(xué)生物多樣性保護(hù)學(xué)院，云南昆明 650233；2.云南省煙草公司昆明市公司，云南昆明 650051）

農(nóng)藥的混配是減緩農(nóng)藥抗藥性、防治新型病害、延長農(nóng)藥壽命和提高藥效的一項重要措施，近幾十年來，農(nóng)藥混劑開發(fā)一直占據(jù)著我國農(nóng)藥生產(chǎn)的重要地位[1]。農(nóng)藥的混配不是簡單的將不同活性成分的單劑隨意混合在一起，混劑的作用效果也不是簡單的將兩單劑效果相加。不同單劑混配后的效果可分為增效、加成和拮抗3種，配劑增效具有實際應(yīng)用意義，因此需要科學(xué)的混配方法和評價體系[2]。目前已建立的農(nóng)藥混配評價方法有等效線法[3]、Colby 法[4]、Gowing法[5]、回歸分析法[6]、共毒系數(shù)法[7]、Abbott 法[8]及Wadley法[9]等，每種混配方法都有相應(yīng)評價指標(biāo)，這些方法曾被不同學(xué)者用于農(nóng)藥的混用效果評價[10-13]，其中Wadley方法是評價殺菌劑混劑相互作用通常采用的方法[9,14]。

吡唑醚菌酯是一種高活性的新型殺菌劑，可防治柑橘（Citrusreticulata）、香蕉（Musanana）、蘋果（Malus pumila）、煙草（Nicotianatabacum)及多植物灰霉病、霜霉病、白粉病、疫病、瘡痂病、黑星病等真菌病害[15]。氰烯菌酯是一類2-氰基丙烯酸酯類殺菌劑，可用于防治鐮刀菌引起的枯萎病、惡苗病、赤霉病等真菌病害[16]。實踐中已有不少將吡唑醚菌酯、氰烯菌酯與其他藥劑混用實例[17-19]，但未見將這2種殺菌劑混配的報道。植物病原真菌厚垣鐮刀菌（Fusariumchlamydosporum）、煙草疫霉菌和立枯枯絲核（Rhizoctonia solani） 是植物土傳病害的重要病原菌，除引起多種農(nóng)作業(yè)病害外[20]，還可引起不同經(jīng)濟(jì)林木、綠肥、園林樹木病害，如厚垣鐮刀菌引起國槐潰瘍病[21]、藍(lán)花楹（Jacarandamimosifolia）莖腐病等樹木病害[22]、阿爾及利亞地中海油松（Pinushalepensis）幼苗腐爛病[23]及番石榴的枯萎病等[24]；煙草疫霉菌（P.nicotianae)引起的煙草黑脛病是烤煙世界性土傳病害，每年給煙草生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[25]；立枯絲核也可引起具有重要價值的植物如大豆（Glycinemax）、紫花苜蓿（Medicago sativa）、甜菜（Betavulgaris）、小麥（Triticumaestivum）、水稻（Oryza sativa）、棉花（Gossypiumspp.）和煙草等引起根腐病，立枯絲核菌引起的根腐病于芒果（Mangiferaindica）和葡萄（Vitisvinifera）等果腐病[26-27]。本研究用Wadley法評價吡唑醚菌酯和氰烯菌酯混用對以上3種病原菌的抑菌效果，為實踐應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 培養(yǎng)基和供試藥劑

250 g/L吡唑醚菌酯乳油（EC）由巴斯夫植物保護(hù)江蘇有限公司生產(chǎn)。25%氰烯菌酯懸浮劑（SC）由江蘇省農(nóng)藥研究所股份有限公司生產(chǎn)。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 供試菌株

厚垣鐮刀菌、立枯絲核菌、煙草疫霉菌均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所惠贈。

1.3 單劑抑菌率

采用生長測速法測藥劑對病原菌的抑制效果[28]。每種藥劑設(shè)5個梯度濃度，每個濃度設(shè)3次重復(fù)，不加藥劑PDA培養(yǎng)基為對照，接種菌株培養(yǎng)72 h后十字交叉法測菌落直徑。

1.4 Wadley法評價混劑效果

首先分別構(gòu)建不同單劑以及混劑的劑量-反應(yīng)曲線，通過邏輯斯蒂值-對數(shù)或最恰當(dāng)?shù)母怕?對數(shù)將劑量—反應(yīng)曲線轉(zhuǎn)化為直線，計算出各配比下的理論EC(th)值[9]。

公式（2）中a、b為單劑在混劑中的組分，EC(A)50、EC(B)50為單劑實測的EC50值；EC50(th)為混劑的理論值，EC50(ob)為混劑的實測值；公式（3）的SR表示相互作用程度，當(dāng)SR在0.5～1.5之間時，為加成作用，當(dāng)SR≥1.5時，為增效作用；當(dāng)SR≤0.5時為拮抗作用[9]。

本試驗中，分別稱取吡唑醚菌酯（py）和氰烯菌酯（ph）配制為1.00 mg/L藥液，2種藥劑相按3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3的體積比混配，每個配比依次稀釋得到2.50、1.25、0.63、0.31、0.15 mg/L的5個濃度，1個配比1個濃度為1個處理，共20個處理，1個對照，每個處理重復(fù)3次，用公式（1）計算實際抑制率，并計算出混配后的實際EC50(ob)。

2 結(jié)果與分析

2.1 吡唑醚菌酯對3種病原菌的抑制作用

試驗濃度內(nèi)吡唑醚菌酯和氰烯菌酯對3種病原菌抑制率分別見表1和表2。吡唑醚菌酯對厚垣鐮刀菌的抑制活性顯著高于煙草疫霉菌和立枯絲核菌，抑制率為25%～70%，對煙草疫霉菌和立枯絲核菌的活性無顯著差異，最高試驗濃度1.00 mg/L時抑制率約50%，當(dāng)濃度為0.06 mg/L時已無抑制活性。

表1 吡唑醚菌酯對3種病原菌的抑制率Table 1 Inhibition rate of pyrazolyl methyl ester to 3 kinds of pathogenic bacteria %

表2 不同濃度氰烯菌酯對3種菌的抑制率Table 2 Inhibition rate of cymenate at different concentrations to 3 kinds of bacteria %

2.2 Wadley法評價下混劑的作用效果

2.2.1 對厚垣鐮刀菌的抑制

吡唑醚菌酯和氰烯菌酯混配對厚垣鐮刀菌的作用見表3所示。在5個試驗配比中，除了吡唑醚菌酯與氰烯菌酯為3∶1的處理為加成作用外，其余4個配比均為增效作用，增效程度隨著氰烯菌酯比值增大而增大。

表3 混劑對厚垣鐮刀菌的EC50及混配效果Table 3 EC50 and mixing effect of themixture on F.candidum

2.2.2 對煙草疫霉菌的抑制

吡唑醚菌酯和氰烯菌酯不同配比對煙草疫霉菌的抑制效果見表4。所有配比的抑制效果均強(qiáng)于單劑，當(dāng)混配比為3∶1時，增效系數(shù)1.47，表現(xiàn)為加成作用，其余各配比均表現(xiàn)為增效作用，增效效果與氰烯菌酯比例成正相關(guān)，配比為1∶3時增效結(jié)果最為顯著。

表4 混劑對煙草疫霉菌的EC50及混配效果Table4 EC50 of the mixture against P.nicotianae and itsmixing effect

2.2.3 立枯絲核菌的抑制

吡唑醚菌酯和氰烯菌酯不同配比對立枯絲核菌的生長均有抑制，且抑菌效果均強(qiáng)于單劑（表5）。當(dāng)混配比為1∶3時，增效系數(shù)為0.90，表現(xiàn)為加成作用，其余各配比均表現(xiàn)為增效作用，且當(dāng)配比為2∶1時EC50值最低，增效作用最顯著，該配比下對立枯絲核的抑制作用最佳。

表5 混劑對立枯絲核菌的EC50及混配效果Table 5 EC50 of the mixture against R. solani and itsmixing effect

3 結(jié)論與討論

厚垣鐮刀菌、煙草疫霉菌和立枯絲核菌引起的植物病害多為土傳病害，原菌主要分布在土壤中且在苗期或成株期都可以從傷口侵入根部，化學(xué)防治仍是目前主要防治手段，且對于化學(xué)試劑的使用方法具有較高的要求，藥劑量大容易造成環(huán)境的污染，量小則達(dá)不到防治的效果[29]。目前未有將吡唑醚菌酯與氰烯菌酯混配用于煙草、牧草、經(jīng)濟(jì)林、林木病害防治的報道。從試驗結(jié)果可知，吡唑醚菌酯與氰烯菌酯混配對鐮刀菌、煙草疫霉菌和絲核立枯病菌的作用效果都沒有拮抗作用，3種病菌中，只有1個配比表現(xiàn)為加成作用，其余都為增效作用。吡唑醚菌酯：氰烯菌酯3∶1對鐮刀菌和煙草疫霉菌均為加成作用，而對絲核菌表現(xiàn)增效作用。當(dāng)吡唑醚菌酯：氰烯菌酯2∶1、1∶1和1∶2時，對鐮刀菌、煙草疫霉菌、立枯絲核菌均為增效作用。因此，吡唑醚菌酯與氰烯菌酯在該范圍復(fù)配，均能取得良好的增效效果。研究結(jié)果可為煙草及林木病害防控提供理論依據(jù)。在實際應(yīng)用中，可根據(jù)2種藥劑的成本及防治對象，靈活地確定配比范圍為2∶1至1∶2。如針對鐮刀菌引起的病害發(fā)生嚴(yán)重，建議采用吡唑醚菌酯：氰烯菌酯=1∶2的配比，當(dāng)絲核菌引起的病害發(fā)生嚴(yán)重時，建議采用吡唑醚菌酯∶氰烯菌酯=2∶1的配比。