靳瀟瀟，李衛(wèi)勝，楊雄，鄭聰，何文強(qiáng) （河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科二區(qū)，鄭州 450003）

腎結(jié)石是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)疾病之一，由于生活環(huán)境的變化及飲食結(jié)構(gòu)的改善，腎結(jié)石患病率呈上升趨勢(shì)[1]。我國(guó)最近一項(xiàng)調(diào)查研究顯示，腎結(jié)石患病率為5.8%（男性為6.5%，女性為5.1%），即每17人中就有1人患腎結(jié)石[2]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，炎癥、氧化和抗氧化失衡可能在腎結(jié)石的發(fā)展中起關(guān)鍵作用[3―5]。去乙酰化酶3（SIRT3）是存在于線粒體內(nèi)的一種依賴(lài)于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的去乙?；?，主要調(diào)節(jié)線粒體功能和相關(guān)代謝，可反映能量限制和應(yīng)激狀態(tài)；叉頭框蛋白O3a（FOXO3a）在線粒體內(nèi)主要受SITR3的調(diào)控，可保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激損傷[6]。

中醫(yī)范疇內(nèi)腎結(jié)石屬“石淋”“尿淋”“砂淋”等，主要是由于腎虛，膀胱氣化不足，濕熱蘊(yùn)結(jié)與下焦，氣滯血瘀而煉液成石[7]，其治療方式兼顧扶正祛邪、益氣補(bǔ)腎、清熱通淋[8]。石淋清顆粒主要由金錢(qián)草、海金沙、石韋、王不留行等組成，是河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院的自擬方，臨床上主要用于促進(jìn)泌尿系統(tǒng)結(jié)石患者排石，可緩解疼痛，縮短排石時(shí)間。為進(jìn)一步了解石淋清顆粒的作用機(jī)制，本研究建立草酸鈣腎結(jié)石大鼠模型，并以SIRT3/FOXO3a信號(hào)通路為靶點(diǎn)探討石淋清顆粒預(yù)防腎結(jié)石形成的作用機(jī)制，以期為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 主要儀器

1.2 主要藥品與試劑

石淋清顆粒由河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供；Von Kossa染色試劑盒（批號(hào)G1043）購(gòu)自武漢賽維爾生物科技有限公司；蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒（貨號(hào)G11120）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；活性氧（reactive oxygen species，ROS）試劑盒、丙二醛（malondi‐aldehyde，MDA）試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒（貨號(hào)分別為E004-1-1、A003-1、A001-1）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；骨橋蛋白（os‐teopontin，OPN）試劑盒（批號(hào)20211026R）購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司；SIRT3抑制劑（批號(hào)GC19013）購(gòu)自美國(guó)Glpbio公司；兔抗大鼠SIRT3多克隆抗體（批號(hào)2627S）購(gòu)自美國(guó)CST公司；兔抗大鼠FOXO3a多克隆抗體、兔抗大鼠SOD2多克隆抗體（批號(hào)分別為66428、24127）購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。本研究所用引物均由武漢賽維爾生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成，具體引物序列及擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度見(jiàn)表1。

表1 引物序列及擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為SPF級(jí)雄性SD大鼠，共60只，體質(zhì)量（200±20） g，由山東省濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（魯）20190003。大鼠飼養(yǎng)在河南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)室，環(huán)境溫度為（20±2） ℃，相對(duì)濕度為50%～60%。本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理審查批準(zhǔn)號(hào)為DWLL202105102。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將60只大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組和石淋清顆粒低、中、高劑量組（6.5、13、26 g/kg，低劑量為臨床等效劑量）及SIRT3抑制劑組（石淋清顆粒26 g/kg+SIRT3抑制劑25 mg/kg，SIRT3抑制劑的劑量根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置），每組10只。參考文獻(xiàn)[9]方法，除空白組大鼠外，其余各組大鼠將飲水更換為1%乙二醇溶液，并每天灌胃2%氯化銨溶液2 mL，連續(xù)4周，以復(fù)制草酸鈣腎結(jié)石大鼠模型。造模同時(shí)，給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，空白組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)4周。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，空白組和石淋清顆粒中劑量組大鼠無(wú)死亡，其余各組均死亡2只大鼠。

2.2 大鼠尿液和血清中相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)

各組大鼠在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1 d，禁食不禁水，采用代謝收集籠收集每只大鼠24 h尿量，以2 000 r/min離心10 min，取上清液，采用精密pH計(jì)測(cè)定尿液pH值，采用鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法檢測(cè)尿液中草酸（oxalic acid，Ox）含量，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)尿液中Ca2+含量。各組大鼠尿液收集后，腹腔注射戊巴比妥鈉行麻醉，于腹主動(dòng)脈采血，血樣以3 000 r/min離心15 min，取上層血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清中肌酐（creatinine，Cr）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）及Ca2+含量。

2.3 大鼠腎組織病理學(xué)形態(tài)觀察

采用HE染色法進(jìn)行觀察。大鼠采血完成后，采用空氣栓塞法處死大鼠，然后剖取腎臟組織，取部分組織制備石蠟切片（剩余組織于液氮中保存?zhèn)溆茫M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)）：取腎臟組織適量以4%多聚甲醛固定24 h后，經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片（厚度為4 μm）等過(guò)程制作病理切片；切片經(jīng)二甲苯脫蠟后，進(jìn)行HE染色，然后于顯微鏡下觀察腎組織病理學(xué)變化。

2.4 大鼠草酸鈣腎結(jié)晶情況觀察

采用Von Kossa染色法進(jìn)行觀察。將“2.3”項(xiàng)下剩余切片置于透明濕盒中，立即滴加Von Kossa染色液于組織切片上，以紫外燈連續(xù)照射5～20 min，蒸餾水清洗15 s×5次；以蘇木素染色3～5 min，梯度乙二醇脫水，再以伊紅染色5 min；脫水封片，于顯微鏡下觀察大鼠草酸鈣腎結(jié)晶情況。每只大鼠選取3張切片，每張切片選取3個(gè)視野觀察草酸鈣腎結(jié)晶數(shù)目（取平均值），然后進(jìn)行評(píng)分：0分為無(wú)結(jié)晶；1分為散在的結(jié)晶存在；2分為廣泛分布但不成堆或局部結(jié)晶存在；3分為成堆結(jié)晶但不連接；4分為結(jié)晶成堆且連接；5分為廣泛成堆結(jié)晶[10]。

2.5 大鼠腎組織超微結(jié)構(gòu)觀察

采用透射電子顯微鏡進(jìn)行觀察。取凍存的腎組織適量，于2.5%戊二醛浸泡4 h，以磷酸鹽緩沖液漂洗15 min×4次；再于1%鋨酸中浸泡1.5 h，以磷酸鹽緩沖液漂洗15 min×4次；經(jīng)梯度乙醇脫水、浸透、包埋、切片后，采用透射電子顯微鏡觀察大鼠腎小球足突細(xì)胞中的線粒體、基膜及腎小管上皮細(xì)胞線粒體。

2.6 大鼠腎組織中MDA、SOD、ROS、OPN水平的檢測(cè)

取適量?jī)龃娴哪I組織進(jìn)行勻漿，以3 000 r/min離心15 min，取上清液，按照MDA、SOD、ROS、OPN試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作，檢測(cè)大鼠腎組織中上述指標(biāo)水平。

中小企業(yè)的劃分標(biāo)準(zhǔn)是由國(guó)務(wù)院負(fù)責(zé)企業(yè)工作的部門(mén)根據(jù)企業(yè)職工人數(shù)、銷(xiāo)售額、資產(chǎn)總額等指標(biāo)，結(jié)合行業(yè)特點(diǎn)制定，對(duì)于不同的行業(yè)，劃分標(biāo)準(zhǔn)也有所不同。中小企業(yè)大多雇用人數(shù)與經(jīng)營(yíng)額都不大，多數(shù)上由業(yè)主直接管理。[1]其特點(diǎn)主要包括：經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品單一，風(fēng)險(xiǎn)較高；所有權(quán)與經(jīng)營(yíng)權(quán)很難分離；會(huì)計(jì)及內(nèi)部控制從業(yè)人員素質(zhì)較低。

2.7 大鼠腎組織中SIRT3、FOXO3a、SOD2 mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)

采用PCR法進(jìn)行檢測(cè)。取凍存的腎組織100 mg于勻漿管內(nèi)，加入RNA提取液1 mL充分研磨后，提取總RNA。取總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增條件為95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火 30 s，40個(gè)循環(huán)。以 GAPDH為內(nèi)參，采用2－ΔΔCt法計(jì)算目的基因mRNA的表達(dá)水平。

2.8 大鼠腎組織中SIRT3、FOXO3a、SOD2蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)

采用Western blot法進(jìn)行檢測(cè)。取凍存的腎組織適量，加入預(yù)冷的裂解液于冰上進(jìn)行勻漿并離心，采用BCA法檢測(cè)蛋白濃度。蛋白變性后使用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，加入SIRT3、FOXO3a、SOD2、GAPDH 一抗（稀釋度分別為 1∶800、1∶800、1∶5 000、1∶800）封閉，4 ℃孵育過(guò)夜；洗膜，加入二抗（稀釋度為1∶5 000），室溫孵育30 min；采用ECL法曝光顯色，經(jīng)凝膠圖像分析儀拍照后，采用Image J軟件分析，以目的蛋白條帶與內(nèi)參蛋白（GAPDH）條帶灰度值比值表示目的蛋白的表達(dá)水平。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 石淋清顆粒對(duì)大鼠24 h尿量和尿液中相關(guān)指標(biāo)的影響

與空白組比較，模型組大鼠24 h尿量和尿液pH值均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），尿液中Ca2+、Ox含量均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠上述指標(biāo)均顯著逆轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01），而SIRT3抑制劑組大鼠上述指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠24 h尿量和尿液中相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果（±s）

表2 各組大鼠24 h尿量和尿液中相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果（±s）

a：與空白組比較，P＜0.05；b：與空白組比較，P＜0.01；c：與模型組比較，P＜0.05；d：與模型組比較，P＜0.01

組別空白組模型組石淋清顆粒低劑量組石淋清顆粒中劑量組石淋清顆粒高劑量組SIRT3抑制劑組n 10 8 8 1 0 8 8 24 h尿量/mL 29.70±7.12 18.25±5.62a 30.00±8.26c 31.40±9.58d 41.00±5.86d 23.25±6.43 pH值7.85±0.57 5.88±0.55b 6.60±0.69c 6.64±0.77c 6.70±0.69d 5.81±0.82 Ca2+/（mmol/L）0.33±0.07 0.70±0.12b 0.57±0.13c 0.55±0.13c 0.53±0.16c 0.65±0.12 Ox/mg 1.36±0.23 7.04±0.76b 5.31±0.69d 4.79±0.72d 4.61±0.95d 6.66±0.86

3.2 石淋清顆粒對(duì)大鼠血清中相關(guān)指標(biāo)的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清中Cr、BUN、Ca2+含量均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠血清中上述指標(biāo)含量均顯著逆轉(zhuǎn)（低劑量組Ca2+含量除外，P＜0.05或P＜0.01），而SIRT3抑制劑組上述指標(biāo)含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清中相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（±s）

表3 各組大鼠血清中相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果（±s）

a：與空白組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01

Ca2+/（mmol/L）2.22±0.06 2.34±0.07a 2.29±0.05 2.26±0.05c 2.28±0.04b 2.30±0.06組別空白組模型組石淋清顆粒低劑量組石淋清顆粒中劑量組石淋清顆粒高劑量組SIRT3抑制劑組n 10 8 8 1 0 8 8 Cr/（μmol/L）28.76±10.90 88.83±15.49a 63.67±13.71c 68.30±18.15c 60.63±20.64c 83.11±11.85 BUN/（mmol/L）17.96±8.41 65.25±18.45a 47.18±16.14b 48.39±19.42b 40.05±13.82c 60.82±13.50

3.3 石淋清顆粒對(duì)大鼠腎組織病理學(xué)形態(tài)的影響

與空白組比較，模型組大鼠腎小管管腔明顯擴(kuò)張，腎小球、腎小管排列紊亂，腎組織損傷嚴(yán)重。與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠以上病理變化得到改善，且中、高劑量組改善更明顯；而SIRT3抑制劑組大鼠腎臟損傷仍較為嚴(yán)重，腎小管、腎小球排列紊亂，且管腔擴(kuò)張明顯。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.4 石淋清顆粒對(duì)大鼠草酸鈣腎結(jié)晶的影響

空白組大鼠腎臟內(nèi)未見(jiàn)結(jié)晶。模型組大鼠腎臟內(nèi)可見(jiàn)大量彌漫性分布的結(jié)晶，且大多數(shù)在腎小管管腔內(nèi)融合成堆。與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠腎臟內(nèi)結(jié)晶相對(duì)減少，呈散狀分布，且高劑量組大鼠腎臟內(nèi)結(jié)晶最少，呈零星分布；SIRT3抑制劑組大鼠腎臟內(nèi)結(jié)晶部分彌漫分布但不成堆。結(jié)果見(jiàn)圖2、表4。

表4 各組大鼠腎臟結(jié)晶的評(píng)分結(jié)果（只）

圖2 各組大鼠草酸鈣腎結(jié)晶的顯微圖

3.5 石淋清顆粒對(duì)大鼠腎臟超微結(jié)構(gòu)的影響

與空白組比較，模型組大鼠腎小球基膜增厚，足突細(xì)胞中的線粒體水腫、破裂、嵴消失明顯，腎小管上皮細(xì)胞中的線粒體水腫、破裂、雙膜結(jié)構(gòu)損壞、嵴消失明顯、排列紊亂。與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠腎小球基膜、足突細(xì)胞中的線粒體損傷及腎小管上皮細(xì)胞中的線粒體損傷均減輕，且高劑量組大鼠腎小管上皮細(xì)胞中的線粒體表現(xiàn)出代償性增生；SIRT3抑制劑組大鼠上述腎臟超微結(jié)構(gòu)仍損傷嚴(yán)重。結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4。

圖3 各組大鼠腎小球的超微結(jié)構(gòu)顯微圖

圖4 各組大鼠腎小管的超微結(jié)構(gòu)顯微圖

3.6 石淋清顆粒對(duì)大鼠腎組織中MDA、SOD、ROS、OPN水平的影響

與空白組比較，模型組大鼠腎組織中ROS、MDA、OPN水平均顯著升高（P＜0.01），SOD水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠腎組織中上述指標(biāo)水平均顯著逆轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01），而SIRT3抑制劑組大鼠腎組織中上述指標(biāo)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠腎組織中MDA、SOD、ROS、OPN水平的檢測(cè)結(jié)果（±s）

表5 各組大鼠腎組織中MDA、SOD、ROS、OPN水平的檢測(cè)結(jié)果（±s）

a：與空白組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01

OPN/（ng/mL）22.48±4.59 30.60±3.49a 24.34±3.95c 24.05±3.89c 23.76±3.92c 28.38±3.63組別空白組模型組石淋清顆粒低劑量組石淋清顆粒中劑量組石淋清顆粒高劑量組SIRT3抑制劑組n 10 8 8 1 0 8 8 ROS 187.12±30.39 296.35±41.57a 252.36±21.97b 249.82±40.30c 234.56±41.09c 290.06±23.46 MDA/（nmol/mg）0.41±0.13 1.01±0.21a 0.82±0.18b 0.78±0.22b 0.76±0.18b 0.94±0.21 SOD/ （U/mg）49.60±7.63 24.58±4.47a 31.35±3.55b 32.01±3.21b 35.30±9.73c 24.11±4.56

3.7 石淋清顆粒對(duì)大鼠腎組織中SIRT3、FOXO3a、SOD2 mRNA和蛋白表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組大鼠腎組織中SIRT3、FOXO3a、SOD2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，石淋清顆粒各劑量組大鼠腎組織中上述指標(biāo)mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著逆轉(zhuǎn)（P＜0.05或P＜0.01）；SIRT3抑制劑組大鼠腎組織中上述指標(biāo)mRNA和蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖5、表6。

圖5 各組大鼠腎組織中SIRT3、FOXO3a、SOD2蛋白表達(dá)的電泳圖

表6 各組大鼠腎組織中 SIRT3、FOXO3a、SOD2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果（±s，n＝3）

表6 各組大鼠腎組織中 SIRT3、FOXO3a、SOD2 mRNA和蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)結(jié)果（±s，n＝3）

a：與空白組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.05；c：與模型組比較，P＜0.01

組別空白組模型組石淋清顆粒低劑量組石淋清顆粒中劑量組石淋清顆粒高劑量組SIRT3抑制劑組SIRT3 mRNA 1.00±0.00 0.57±0.04a 0.70±0.05b 0.76±0.07c 0.77±0.02c 0.50±0.03蛋白0.68±0.09 0.43±0.04a 0.54±0.05b 0.55±0.03b 0.60±0.07c 0.38±0.05 FOXO3a mRNA 1.00±0.00 0.51±0.03a 0.62±0.08b 0.70±0.06c 0.76±0.04c 0.53±0.03蛋白0.78±0.05 0.28±0.05a 0.46±0.07b 0.53±0.08c 0.54±0.09c 0.21±0.09 SOD2 mRNA 1.00±0.00 0.48±0.04a 0.78±0.10c 0.78±0.12c 0.81±0.06c 0.48±0.10蛋白0.74±0.05 0.30±0.04a 0.46±0.04b 0.51±0.05c 0.56±0.12c 0.30±0.07

4 討論

腎結(jié)石是一種慢性代謝性、高復(fù)發(fā)性疾病，其發(fā)生和發(fā)展與多種疾病（如高血壓、糖尿病、代謝綜合征等）有關(guān)。腎結(jié)石的非手術(shù)治療方式是通過(guò)增加尿量和改善尿液pH值進(jìn)行預(yù)防治療的，如增加液體攝入量、低鈣飲食、口服檸檬酸鉀等[11―12]。

目前，草酸鈣腎結(jié)石模型大多采用1%乙二醇溶液+2%氯化銨溶液進(jìn)行誘導(dǎo)：體內(nèi)乙二醇代謝后形成草酸，草酸與鈣鹽結(jié)合形成草酸鈣，而氯化銨溶液可降低尿液pH值，從而促進(jìn)草酸鈣結(jié)晶的形成[13]。本研究結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠24 h尿量、尿液pH值均降低，尿液中Ca2+、Ox含量及血清中Cr、BUN、Ca2+含量均升高，且腎組織病理?yè)p傷較為嚴(yán)重，可見(jiàn)大量彌漫性分布的結(jié)晶。經(jīng)石淋清顆粒干預(yù)后，大鼠24 h尿量、尿液pH值均升高，尿液中Ca2+、Ox含量及血清中Cr、BUN、Ca2+含量均降低，且大鼠腎組織損傷得到改善，黑色結(jié)晶相對(duì)減少、呈散狀分布。這表明石淋清顆?？梢种拼笫竽I臟結(jié)晶的形成。

ROS的產(chǎn)生不僅損傷腎臟功能，還會(huì)促進(jìn)結(jié)晶在腎臟的沉積，其主要來(lái)源于線粒體[14]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，腎結(jié)石患者體內(nèi)抗氧化酶（如SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶）水平降低，且經(jīng)手術(shù)處理后，患者體內(nèi)MDA水平降低[4，14]。研究表明，OPN在腎結(jié)石患者體內(nèi)存在高表達(dá)，從而在腎結(jié)石的形成過(guò)程中具有重要的作用[15]。經(jīng)石淋清顆粒干預(yù)后，大鼠腎組織中ROS、MDA、OPN水平均降低，SOD水平升高，腎小球基膜、足突細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞中的線粒體損傷均減輕。這表明石淋清顆?？赏ㄟ^(guò)抗氧化作用改善大鼠腎小球足突細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞的線粒體損傷。

相關(guān)研究表明，抑制SIRT3在細(xì)胞中的表達(dá)，可促進(jìn)ROS的產(chǎn)生，從而增強(qiáng)氧化應(yīng)激，進(jìn)一步損傷細(xì)胞[16]。FOXO3a是參與細(xì)胞抗氧化的重要成員之一，其可從多種細(xì)胞刺激（生長(zhǎng)因子、代謝應(yīng)激、氧化應(yīng)激）中接收信號(hào)[17―18]，從而發(fā)揮抗氧化作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，SIRT3的去乙?；烧{(diào)節(jié)FOXO3a的活性，二者共同在線粒體中發(fā)揮促進(jìn)氧化應(yīng)激相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的作用，進(jìn)而增加SOD2的生成，從而改善細(xì)胞和組織的氧化損傷[19]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)石淋清顆粒干預(yù)后，大鼠腎組織中SIRT3、FOXO3a、SOD2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均升高，而經(jīng)SIRT3抑制劑+石淋清顆粒干預(yù)后，上述指標(biāo)表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且腎組織損傷較為嚴(yán)重，黑色結(jié)晶彌漫分布，腎小球和腎小管上皮細(xì)胞線粒體損傷嚴(yán)重。這表明石淋清顆?？赏ㄟ^(guò)激活SIRT3/FOXO3a信號(hào)通路活性，發(fā)揮抗氧化作用，進(jìn)而抑制腎結(jié)石的形成。

綜上所述，石淋清顆?？捎行б种拼笫蟛菟徕}腎結(jié)石的形成，改善腎損傷，其作用機(jī)制可能與提高抗氧化作用和激活SIRT3/FOXO3a信號(hào)通路有關(guān)。