楊秋怡，易嘉寧，郭妙蘭，范培芝，喻潔，曾杰

（湖南師范大學(xué)附屬第一醫(yī)院/湖南省人民醫(yī)院 乳甲外科，湖南 長(zhǎng)沙 410005）

乳腺癌（breast cancer）已超過(guò)肺癌成為女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤[1]，是全球女性癌癥死亡的主要原因[2]。隨著早期篩查的進(jìn)步以及抗癌策略的不斷發(fā)展，乳腺癌的治療有了很大的改善。然而，乳腺癌的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移率仍然很高。由于腫瘤的異質(zhì)性和復(fù)雜性，現(xiàn)有的生物標(biāo)志物在預(yù)測(cè)乳腺癌預(yù)后方面受到限制[3]。因此，為了提高預(yù)后并指導(dǎo)個(gè)體化精準(zhǔn)治療，探索新的生物標(biāo)志物作為臨床研究領(lǐng)域的預(yù)后指標(biāo)成為迫切需要。

即使在氧氣存在的情況下，腫瘤細(xì)胞的增殖也以增加糖酵解代謝為特征，稱(chēng)為有氧糖酵解，即Warburg 效應(yīng)[4]。有氧糖酵解已被證實(shí)可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5-6]。丙酮酸脫氫酶復(fù)合物（pyruvate dehydrogenase complex，PDHC）是位于線(xiàn)粒體基質(zhì)的多酶復(fù)合物，發(fā)揮催化作用可以使丙酮酸氧化脫羧轉(zhuǎn)化成乙酰輔酶A，從而將糖酵解、三羧酸循環(huán)以及氧化磷酸化聯(lián)系起來(lái)[7-8]。PDHC 由丙酮酸脫氫酶（E1）、二氫硫辛酰胺轉(zhuǎn)乙酰酶（E2）和二氫硫辛酸脫氫酶（E3）組成，其中丙酮酸脫氫酶（E1）由α 和β 亞單位組成，α 亞單位即PDHA1，是PDHC 的活性調(diào)控位點(diǎn)[9]。最近，Tsvetkov 等[10]研究發(fā)現(xiàn)一種新的細(xì)胞死亡途徑，即銅離子載體誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，稱(chēng)為銅死亡（cuproptosis），并已證明銅直接與三羧酸循環(huán)中的脂?；煞纸Y(jié)合，導(dǎo)致蛋白質(zhì)毒性應(yīng)激，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。并且該研究為確定介導(dǎo)銅死亡的特定代謝途徑，進(jìn)行了全基因組CRISPR/Cas9 功能缺失篩選，獲得了10 個(gè)銅死亡相關(guān)基因：FDX1、LIAS、LIPT1、DLD、DLAT、PDHA1、PDHB、MTF1、GLS、CDKN2A，PDHA1 作為銅死亡的相關(guān)基因，參與銅死亡過(guò)程的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，PDHA1 的表達(dá)與多種腫瘤的預(yù)后相關(guān)，如胃癌[11]、子宮頸鱗狀細(xì)胞癌[12]、肝癌[13]、頭頸鱗狀細(xì)胞癌[14]、腎細(xì)胞癌[15]、卵巢癌[16]等。而乳腺癌中PDHA1 表達(dá)與預(yù)后關(guān)系卻少有研究。本研究旨在運(yùn)用生物信息學(xué)方法探討PDHA1 與乳腺癌預(yù)后關(guān)系并構(gòu)建預(yù)后相關(guān)的列線(xiàn)圖模型。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源

癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)（the cancer genome atlas，TCGA）（https//portal.gdc.cancer.gov）是目前最大的癌癥基因信息數(shù)據(jù)庫(kù),保存了包括基因表達(dá)數(shù)據(jù)、拷貝數(shù)變異等數(shù)據(jù)[17]。從TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中并下載乳腺癌患者的基因信息和臨床病理數(shù)據(jù)。利用R 語(yǔ)言整理其臨床資料，選擇TNM 分期、病理分期、人種、年齡、組織學(xué)類(lèi)型、ER、PR 和HER-2狀態(tài)、PAM50 亞型、絕經(jīng)狀態(tài)、放療情況、生存時(shí)間、生存狀態(tài)等信息完整的患者共1 065 例，將患者分為PDHA1 高表達(dá)者533 例，低表達(dá)者532 例，比較其臨床參數(shù)。

1.2 PDHA1在乳腺癌組織中的表達(dá)水平

腫瘤免疫評(píng)估資源（TIMER）數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cistrome.shinyapps.io/timer）是一個(gè)準(zhǔn)確且方便地分析腫瘤免疫的工具，包含32 種癌癥類(lèi)型，涵蓋10 897 個(gè)來(lái)自TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中的樣本[18]，本研究利用TIMER 數(shù)據(jù)庫(kù)差異表達(dá)模塊分析PDHA1 基因在多種癌癥中的表達(dá)情況。利用TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)乳腺癌中PDHA1 mRNA 的表達(dá)進(jìn)行分析。UALCAN 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://ualcan.path.uab.edu）是一個(gè)基于TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中相關(guān)癌癥數(shù)據(jù)進(jìn)行在線(xiàn)分析和挖掘的網(wǎng)站工具[19]。本研究利用該數(shù)據(jù)庫(kù)分析比較PDHA1 在人正常乳腺組織和乳腺癌組織中的蛋白表達(dá)。HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)（The Human Protein Atlas）（https://www.pro-teinatlas.org）是2003 年由瑞典科學(xué)家發(fā)起的項(xiàng)目，旨在利用不同的組學(xué)技術(shù)繪制細(xì)胞、組織和器官中所有的人類(lèi)蛋白質(zhì)圖譜。利用該數(shù)據(jù)庫(kù)分析PDHA1 免疫組織化學(xué)結(jié)果，進(jìn)一步驗(yàn)證PDHA1的表達(dá)水平。

1.3 構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（PPI），基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)

STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cn.string-db.org）是專(zhuān)門(mén)用于生物體范圍蛋白質(zhì)關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的幾個(gè)在線(xiàn)資源之一[20]。利用該數(shù)據(jù)庫(kù)中蛋白質(zhì)互作信息對(duì)PDHA1 構(gòu)建蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）。Gene MANIA數(shù)據(jù)庫(kù)可對(duì)基因數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和預(yù)測(cè),以分子網(wǎng)絡(luò)的形式顯示這些基因之間的關(guān)系（http://genemania.org）[21]。利用該數(shù)據(jù)庫(kù)繪制PDHA1 的基因-基因互作關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

1.4 生存分析

Kaplan-Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://kmplot.com/annalyss）包括基因表達(dá)數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)[22]。利用該數(shù)據(jù)庫(kù)在線(xiàn)分析上述數(shù)據(jù)中PDHA1 的表達(dá)對(duì)乳腺癌患者總生存期（overall survival，OS）、無(wú)復(fù)發(fā)生存期（relapse free survival，RFS）、進(jìn)展后生存期（post progression survival，PPS）、無(wú)轉(zhuǎn)移生存期（distant metastasis free survival，DMFS）的影響。并在TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)一步驗(yàn)證PDHA1 的表達(dá)對(duì)乳腺癌患者OS 的影響。運(yùn)用單因素和多因素Cox 回歸分析研究PDHA1 在乳腺癌中的預(yù)后價(jià)值。將TNM 分期、Stage 分期、人種、年齡、組織學(xué)類(lèi)型、ER、PR 和HER-2 狀態(tài)、PAM50 亞型、絕經(jīng)狀態(tài)、放療情況等進(jìn)行分層分析各亞組中PDHA1 的表達(dá)與乳腺癌患者OS 的關(guān)系。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 構(gòu)建基因集富集分析（GSEA）

通過(guò)GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://gepia.cancer-pku.cn）[23]篩選出PDHA1 的共表達(dá)基因，使用R 包“clusterProfiler”對(duì)其進(jìn)行GSEA，使用校正的P值和歸一化的富集分?jǐn)?shù)（NES）表征富集分析的結(jié)果。用“ggplot2”包使GSEA 富集分析可視化。

1.6 基因-化合物相互作用分析

GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（www.genecards.org）是一個(gè)全面的、權(quán)威的人類(lèi)基因注釋信息綱要，提供了所有已知和預(yù)測(cè)的人類(lèi)基因的簡(jiǎn)明基因組、蛋白質(zhì)組、轉(zhuǎn)錄組、疾病和功能數(shù)據(jù)[24]，本研究利用該數(shù)據(jù)庫(kù)尋找與PDHA1 基因有關(guān)的潛在相互作用的化合物。

1.7 列線(xiàn)圖的構(gòu)建與校準(zhǔn)

運(yùn)用R 語(yǔ)言survival 和rms 軟件包（survival package R 3.6.3、rms package R 3.6.3）構(gòu)建乳腺癌預(yù)后因素預(yù)測(cè)列線(xiàn)圖模型，將基于單因素和多因素Cox 回歸分析中篩選出來(lái)的影響乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素及PDHA1 的表達(dá)納入列線(xiàn)圖中。并繪制校準(zhǔn)曲線(xiàn)以評(píng)估PDHA1 列線(xiàn)圖的預(yù)測(cè)和實(shí)際觀(guān)察之間的一致性。

2 結(jié) 果

2.1 PDHA1表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

采用χ2檢驗(yàn)分析PDHA1 表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系。PDHA1 基因低表達(dá)組和高表達(dá)組在T 分期（P<0.001）、病理分期（P=0.031）、人種（P<0.001）、組織學(xué)類(lèi)型（P<0.001）、PR 狀態(tài)（P<0.001）、ER 狀態(tài)（P<0.001）、PAM50 亞型（P<0.001）方面比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1 來(lái)自TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)的乳腺癌樣本中PDHA1表達(dá)與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)聯(lián)[n（%）]Table 1 Association between PDHA1 expression and clinicopathologic characteristics in breast cancer samples from the TCGA database [n (%)]

2.2 PDHA1在乳腺癌中的表達(dá)水平

TIMER 數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示PDHA1 在乳腺癌中低表達(dá)（P<0.001），另外，腎上腺皮質(zhì)癌（ACC）、食管癌（ESCA）、腎透明細(xì)胞癌（KIRC）、急性髓性白血病（LAML）等腫瘤中PDHA1 也明顯呈低表達(dá)（P<0.001）（圖1A）；TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示乳腺癌患者PDHA1 mRNA 的表達(dá)水平顯著低于正常乳腺組織（P<0.001）（圖1B）；利用UALCAN 數(shù)據(jù)庫(kù)分析PDHA1 蛋白在正常與乳腺癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果（圖1C）顯示PDHA1 蛋白在乳腺癌組織中低表達(dá)（P<0.001），HPA 數(shù)據(jù)庫(kù)顯示乳腺正常組織中PDHA1 染色為高水平，而在乳腺癌組織中PDHA1 染色為低水平，進(jìn)一步驗(yàn)證PDHA1 蛋白在乳腺癌組織中低表達(dá)這一結(jié)果（圖1D）。

圖1 PDHA1 的表達(dá)分析 A：PDHA1 在不同腫瘤中的表達(dá)；B：乳腺癌組織及正常組織中PDHA1 的表達(dá)情況；C：UALCAN數(shù)據(jù)庫(kù)中PDHA1蛋白在乳腺癌和正常組織中的表達(dá)情況；D：HPA數(shù)據(jù)庫(kù)中PDHA1蛋白在乳腺癌和正常組織中的表達(dá)情況Figure 1 Analysis of PDHA1 expression A: Expressions of PDHA1 in different tumors;B: Expressions of PDHA1 in breast cancer and normal tissue;C: Expressions of PDHA1 protein in breast cancer and normal tissues in UALCAN database;D: Expressions of PDHA1 protein in breast cancer and normal tissues in HPA database

2.3 構(gòu)建蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)

通過(guò)構(gòu)建PPI 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，與PDHA1 相關(guān)互作蛋白有15 個(gè)，包括：PDHB、DLD、PDHX、IDH2、DLAT、IDH3A、IDH3G、SUCLA2、PDP1、PDK4、PDK1、PDK3、IDH3B、DLST、OGDH（圖2）。

圖2 DHA1相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)分析Figure 2 Analysis of PDHA1 interaction protein network

2.4 構(gòu)建基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)

通過(guò)構(gòu)建基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)，與PDHA1 相關(guān)互作基因有20 個(gè)，即PDK1、PDK2、PDK3、DLAT、PDHX、PDHA2、PDHB、CS、HSD17B10、DLD、PDPR、PDP1、TRIM2、TRIM3、OGDH、ACO11462.1、DHTKD1、OGDHL、ABAT、OAT（圖3）。

圖3 PDHA1基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)Figure3 PDHA1 gene-gene interaction network

2.5 PDHA1在乳腺癌中表達(dá)的預(yù)后價(jià)值

乳腺癌患者中PDHA1 的表達(dá)與OS、RFS、PPS、DMFS 預(yù)后結(jié)果的關(guān)系如圖4 所示：PDHA1基因高表達(dá)組的OS（HR=1.26，95%CI=1.02～1.54，P=0.029）、RFS（HR=1.18，95%CI=1.05～1.32，P=0.005 1）、PPS（HR=1.41，95%CI=1.07～1.86，P=0.015）、DMFS（HR=1.29，95%CI=1.1～1.52，P=0.002 3）均低于低表達(dá)組。在TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)一步得到驗(yàn)證PDHA1 基因高表達(dá)組的OS 低于低表達(dá)組（HR=1.47，95%CI=1.06～2.05，P=0.021）。單因素Cox 回歸分析結(jié)果提示TNM 分期、病理分期、年齡、分子分型、絕經(jīng)狀態(tài)、放射治療和PDHA1 表達(dá)均為影響患者預(yù)后的因素（P<0.05）。多因素Cox回歸分析顯示PDHA1 表達(dá)不是乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（表2）。另外，在年齡>60 歲、T2 期、N3 期、M0 期、病理Ⅱ期、絕經(jīng)后、左乳乳腺癌患者的OS 中，PDHA1 高表達(dá)組低于PDHA1 低表達(dá)組（圖5）（P<0.05）。

表2 PDHA1單因素和多因素Cox回歸分析Table 2 Univariate Cox regression analysis and multivariate Cox regression analysis of PDHA1

圖5 PDHA1表達(dá)與乳腺癌各亞組預(yù)后的關(guān)系Figure 5 Relationship between PDHA1 expression and prognosis of breast cancer subgroups

表2 PDHA1單因素和多因素Cox回歸分析（續(xù)）Table 2 Univariate Cox regression analysis and multivariate Cox regression analysis of PDHA1 (continued)

圖4 PDHA1表達(dá)與乳腺癌的預(yù)后的關(guān)系Figure 4 Relationship between PDHA1 expression and prognosis of breast cancer

2.6 共表達(dá)基因的基因集富集分析（GSEA）

通過(guò)GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相關(guān)性分析，篩選得到PDHA1 的共表達(dá)基因，為了進(jìn)一步探索PDHA1共表達(dá)基因相關(guān)的信號(hào)通路，對(duì)其進(jìn)行GSEA 富集分析，并繪制山巒圖（圖6A-B）。結(jié)果顯示與乳腺癌中PDHA1 共表達(dá)基因顯著相關(guān)的6 條通路包括：S 期、姐妹染色單體分離、細(xì)胞周期檢查點(diǎn)、細(xì)胞外基質(zhì)組織、核心基質(zhì)、三羧酸循環(huán)通路。

圖6 集富集分析 A：PDHA1共表達(dá)基因基因集富集分析；B：PDHA1共表達(dá)基因基因集富集分析山巒圖Figure 6 Enrichment analysis A: Gene set enrichment analysis of PDHA1 co-expressed gene;B: Mountains map for enrichment analysis of PDHA1 co-expressed gene set

2.7 化合物預(yù)測(cè)分析s

從GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)中得到與PDHA1 有關(guān)的化合物共10 種：輔酶A、CPI-613、硫辛酰胺、輔酶、α-酮異戊酸酯、2-氧代丁酸、丙酮酸、輔羧酶、二氧化碳、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（圖7）。其中已批準(zhǔn)的化合物是：丙酮酸、輔羧酶、二氧化碳、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸；尚在實(shí)驗(yàn)中的是：硫辛酰胺、輔酶、α-酮異戊酸酯、2-氧代丁酸；尚在研究中的是：輔酶A、CPI-613。

圖7 PDHA1相關(guān)化合物Figure 7 PDHA1 related compounds

2.8 構(gòu)建預(yù)后列線(xiàn)圖模型

建立一種臨床適用的預(yù)測(cè)乳腺癌患者預(yù)后的列線(xiàn)圖來(lái)預(yù)測(cè)1、3、5 年生存率（圖8A）。5 個(gè)預(yù)后參數(shù)：PDHA1 表達(dá)、年齡、放療、N 分期和M 分期被納入預(yù)測(cè)模型。校準(zhǔn)圖顯示列線(xiàn)圖預(yù)測(cè)和實(shí)際觀(guān)察之間有極好的一致性（圖8B）。

圖8 列線(xiàn)圖預(yù)測(cè)模型 A：乳腺癌預(yù)后模型列線(xiàn)圖的構(gòu)建；B：乳腺癌預(yù)后列線(xiàn)圖模型校準(zhǔn)圖Figure 8 Nomogram prediction model A: Construction of nomograms for prognosis model of breast cancer;B: Calibration curves of breast cancer prognostic nomogram model

3 討 論

PDHA1 作為丙酮酸脫氫酶復(fù)合物的關(guān)鍵調(diào)控位點(diǎn)，發(fā)揮著連接糖酵解和三羧酸循環(huán)的重要作用，對(duì)癌癥代謝轉(zhuǎn)變具有重要意義。最新研究[10]發(fā)現(xiàn)了一種細(xì)胞體內(nèi)依賴(lài)銅離子并且受到調(diào)控的新的死亡方式，即銅死亡，PDHA1 是銅死亡的相關(guān)基因，參與銅死亡過(guò)程的調(diào)控。

Sun 等[13]研究發(fā)現(xiàn)：肝癌中PDHA1 表達(dá)低于正常肝臟組織，其表達(dá)與肝癌的腫瘤大小、腫瘤分化和腫瘤分期相關(guān)；Song 等[11]研究發(fā)現(xiàn)胃癌中PDHA1 的表達(dá)低于正常胃黏膜組織，其表達(dá)與胃癌的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期和神經(jīng)浸潤(rùn)顯著相關(guān)；吳雅珣等研究[12]發(fā)現(xiàn)：子宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中PDHA1 表達(dá)顯著高于癌旁鱗狀上皮組織，其表達(dá)與患者年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO 分期有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)：與癌旁乳腺組織相比，PDHA1 在乳腺癌組織中表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)與T 分期（P<0.001）、病理分期（P=0.031）、人種（P<0.001）、組織學(xué)類(lèi)型（P<0.001）、PR 狀態(tài)（P<0.001）、ER 狀態(tài)（P<0.001）、PAM50亞型（P<0.001）相關(guān)。Sun 等[13]報(bào)道肝癌中PDHA1表達(dá)水平降低與患者OS 低有關(guān)；Song 等[11]報(bào)道胃癌中PDHA1 的低表達(dá)與患者較差的總體生存率顯著相關(guān)。然而吳雅珣等[12]研究報(bào)道子宮頸鱗狀細(xì)胞癌PDHA1 高表達(dá)患者的OS 較低表達(dá)患者的長(zhǎng)；Chen 等[14]發(fā)現(xiàn)頭頸鱗狀細(xì)胞癌中較高的PDHA1 表達(dá)似乎與患者5 年內(nèi)較差的OS 相關(guān)，而在長(zhǎng)期（>6 年）環(huán)境中，PDHA1 表達(dá)較高的頭頸鱗狀細(xì)胞癌患者卻表現(xiàn)出穩(wěn)定的生存趨勢(shì)；Jiang 等[25]研究發(fā)現(xiàn)：與正常組織相比，乳腺癌中PDHA1 的表達(dá)下調(diào)，而PDHA1 水平升高的乳腺癌患者OS、RFS均較差，這與本研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)：乳腺癌中PDHA1 低表達(dá)組患者的OS（P=0.029）、RFS（P=0.005 1）、PPS（P=0.015）、DMFS（P=0.002 3）均較PDHA1 高表達(dá)組患者的長(zhǎng)。另外進(jìn)一步分層分析中：年齡>60 歲、T2 期、N3 期、M0 期、病理Ⅱ期、絕經(jīng)后患者的OS PDHA1 高表達(dá)組低于PDHA1低表達(dá)組（P<0.05）。值得關(guān)注的是，PDHA1 在乳腺癌組織中的表達(dá)低于正常乳腺組織，但PDHA1低表達(dá)乳腺癌患者卻有較好的預(yù)后，提示PDHA1可能在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中不僅發(fā)揮單一的抑癌或促癌作用。

為分析PDHA1 在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能及分子調(diào)控機(jī)制，本研究利用Gene MANIA 數(shù)據(jù)庫(kù)繪制PDHA1 基因-基因互作網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果顯示與PDHA1 相關(guān)互作基因有20 個(gè)，其中DLD，DLAT，PDHB 是參與銅死亡過(guò)程的基因；另外GSEA 結(jié)果顯示PDHA1 共表達(dá)基因顯著相關(guān)的通路共6 條，包括與銅死亡密切相關(guān)的三羧酸循環(huán)通路。Tsvetkov 等[10]研究證明銅死亡主要取決于細(xì)胞內(nèi)銅的積累。一項(xiàng)Meta 分析[26]顯示：與良性乳腺疾病和健康對(duì)照組相比，乳腺癌患者的血清銅水平顯著升高。由此，PDHA1 可能通過(guò)調(diào)節(jié)銅死亡在乳腺癌中發(fā)揮關(guān)鍵作用。而曹靜等[27]研究發(fā)現(xiàn)PDHA1 表達(dá)及活性下降可導(dǎo)致Warburg 效應(yīng)增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞加速分裂，從而導(dǎo)致腫瘤的侵襲性增加。Liu 等[28]研究顯示乙肝病毒X 蛋白結(jié)合蛋白（HBXIP）調(diào)節(jié)糖代謝重編程并下調(diào)乳腺癌中的細(xì)胞色素c 氧化酶2（SCO2）和PDHA1，SCO2和PDHA1 的下調(diào)導(dǎo)致乳酸產(chǎn)生和細(xì)胞內(nèi)葡萄糖的增加，以及活性氧（ROS）的減少，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，筆者推測(cè)PDHA1 可能通過(guò)調(diào)控Warburg 效應(yīng)與銅死亡過(guò)程促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)而影響患者預(yù)后，這需后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究。

列線(xiàn)圖對(duì)腫瘤預(yù)后的評(píng)估具有重大價(jià)值。宋張駿等[29]研究利用SEER 數(shù)據(jù)庫(kù)中的臨床病理資料構(gòu)建的列線(xiàn)圖預(yù)后模型可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)初診乳腺癌肝轉(zhuǎn)移患者預(yù)后狀態(tài)。Sha 等[30]研究將年齡、腫瘤分期和銅死亡相關(guān)基因評(píng)分（CRG-score）作為參數(shù)所構(gòu)建的列線(xiàn)圖用于預(yù)測(cè)三陰性乳腺癌患者的總生存率具有較高的準(zhǔn)確性。本研究首次將PDHA1 的表達(dá)、年齡、放療、N 分期和M 分期納入預(yù)測(cè)模型構(gòu)建乳腺癌患者的預(yù)后預(yù)測(cè)列線(xiàn)圖，校準(zhǔn)圖結(jié)果顯示列線(xiàn)圖預(yù)測(cè)和實(shí)際觀(guān)察之間有極好的一致性。本研究構(gòu)建的列線(xiàn)圖可為臨床醫(yī)生對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的評(píng)估以及為乳腺癌患者制定個(gè)體化治療方案提供依據(jù)。基于PDHA1 對(duì)乳腺癌患者預(yù)后具有良好的預(yù)測(cè)作用，本研究利用GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)尋找與PDHA1 有關(guān)的潛在相互作用的化合物，得到輔酶A、CPI-613、硫辛酰胺、輔酶等10 種可能使PDHA1 的表達(dá)發(fā)生逆轉(zhuǎn),有望成為治療乳腺癌的化合物。

但本研究存在一定的局限：僅在數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)乳腺癌PDHA1 的表達(dá)及預(yù)后進(jìn)行了研究，缺乏進(jìn)一步的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證；對(duì)于PDHA1 如何調(diào)控銅死亡及Warburg 效應(yīng)進(jìn)而影響乳腺癌發(fā)生發(fā)展缺乏了解，后期我們將設(shè)計(jì)具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究。

綜上所述，PDHA1 基因高表達(dá)組患者的OS、RFS、PPS、DMFS 較PDHA1 低表達(dá)組患者的短，PDHA1 表達(dá)水平是影響乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)因素。本研究所構(gòu)建的列線(xiàn)圖可為臨床醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷乳腺癌患者的預(yù)后，有望為乳腺癌患者制定個(gè)體化治療方案提供依據(jù)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。