毛志福，馬亞楠

（昌吉州農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，新疆 昌吉 831100）

0 引言

我國(guó)是畜牧業(yè)大國(guó)，養(yǎng)羊業(yè)在青海、新疆等牧區(qū)是一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)，但由于缺少規(guī)模化養(yǎng)殖，養(yǎng)殖密度高，衛(wèi)生環(huán)境差，各種疫病時(shí)常爆發(fā)，對(duì)養(yǎng)殖戶造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。羊快疫作為一種常見的羊類疫病，雖然已有了成熟的商品化疫苗，但該病在我國(guó)的主要羊養(yǎng)殖地區(qū)仍然廣泛流行。

1 羊快疫及腐敗梭菌

1.1 腐敗梭菌簡(jiǎn)介

腐敗梭菌屬于梭菌屬，是一種厭氧桿狀革蘭氏陽(yáng)性菌，可產(chǎn)生高致病的外毒素，可存在于多種自然環(huán)境中，如土壤、海洋、污水、腐爛和生銹的制品，以及動(dòng)物胃腸道及分泌物中。引起綿羊和牛在內(nèi)的多種反芻動(dòng)物的化膿性壞死性脂肪瘤及禽類的壞疽性皮炎和蜂窩組織炎。該菌可產(chǎn)生包括α毒素、β毒素、γ毒素、δ毒素、神經(jīng)氨酸酶、血凝素、幾丁質(zhì)酶、弱脂肪酶活性和唾液酸酶等多種有毒產(chǎn)物[1]。

1.2 羊快疫簡(jiǎn)介

羊快疫又稱羊腐敗梭菌病，是由腐敗梭菌引起的一種急性、惡性傳染病，該病發(fā)病急、病程短、死亡快，往往來不及發(fā)現(xiàn)便引起患畜死亡，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病在我國(guó)很多地區(qū)廣泛流行，但在青海、新疆等養(yǎng)羊較多的畜牧地區(qū)更為常見，且致死率很高可到50%。腐敗梭菌感染無種屬特異性，其可感染多種反芻動(dòng)物，但對(duì)綿羊的感染能力最強(qiáng)，其中尤其是6～18月齡的綿羊更為易感。腐敗梭菌是一種條件性致病菌，可以芽孢體的形成分布于水、土壤、潮濕的草地和被污染的飼料等低洼潮濕的地區(qū)，羊通過采食或者飲水?dāng)z入腐敗梭菌，進(jìn)而幫助其定居于健康動(dòng)物的消化道內(nèi)。當(dāng)動(dòng)物的腸道菌群失調(diào)、寄生蟲感染或炎性反應(yīng)導(dǎo)致中性粒細(xì)胞減少進(jìn)而導(dǎo)致腐敗梭菌感染[2]。

1.3 臨床癥狀

與其他多種細(xì)菌性疾病相似，羊快疫發(fā)病無特征性的臨床癥狀，發(fā)病初期病羊的食欲下降，采食減少或廢絕，呼吸困難，腹痛呻吟，進(jìn)而出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)障礙，臥地不起并很快死亡。病羊死亡后，由于細(xì)菌的大量增值，可見尸體迅速腐敗，腹部腫脹，部分患病羊可見到口腔或者鼻腔內(nèi)流出紅色的泡沫狀液體。

1.4 病理變化

對(duì)病死羊進(jìn)行剖檢可觀察到大網(wǎng)膜有彌漫性的出血，腹腔內(nèi)有大量的積液和血凝塊，肝臟腫大破裂，呈土黃色，并有點(diǎn)狀出血，心包積液呈膠凍狀，心肌變性壞死，左心室內(nèi)膜有大量的點(diǎn)狀出血，膽囊腫大。全身淋巴結(jié)腫大。消化道病變更為明顯，皺胃及十二指腸有塊狀出血，胃幽門區(qū)域及十二指腸幽門段有出血及壞死。

2 診斷

2.1 病原分離培養(yǎng)

羊快疫鑒定的傳統(tǒng)方法是對(duì)病原分離物進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定和進(jìn)行致病性實(shí)驗(yàn)，無菌采集病死羊的肝、脾等實(shí)質(zhì)臟器或腹腔積液，接種于葡萄糖瓊脂鮮血培養(yǎng)基，置于37 ℃厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)36 h，待長(zhǎng)出單個(gè)菌落，可觀察到菌落邊緣不整齊且可產(chǎn)生溶血環(huán)。將單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢可發(fā)現(xiàn)大量的單個(gè)分布或首位相連的革蘭氏陽(yáng)性桿菌。將分離好的純培養(yǎng)物進(jìn)行生化鑒定，生化結(jié)果為葡萄糖+、麥芽糖+、水楊苷+、乳糖+、甘露醇-、衛(wèi)矛醇-、蔗糖-，牛乳產(chǎn)酸凝固、過氧化氫-。為了快速鑒定，也可將病死羊的腸內(nèi)容物靜脈注射小鼠，同時(shí)設(shè)置高溫處理腸內(nèi)容物的小鼠對(duì)照，如實(shí)驗(yàn)組小鼠在20 min內(nèi)死亡，而對(duì)照組小鼠健康存活無異常，可初步判定為腐敗梭菌感染所導(dǎo)致的羊死亡[3]。

2.2 PCR檢測(cè)

隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，新的研究技術(shù)也被應(yīng)用到羊快疫疫病的診斷中，有研究人員通過分析比對(duì)不同梭菌的基因組序列，建立了基于α毒素的特異性鑒定引物，成功建立了能鑒別診斷產(chǎn)氣莢膜梭菌或氣腫疽梭菌和腐敗梭菌的雙重PCR檢測(cè)方法。該方法較傳統(tǒng)方法靈敏度更高，特異性更強(qiáng)，所需時(shí)間更短且不需要進(jìn)行動(dòng)物致死性實(shí)驗(yàn)，成本也較低，適用于在基層獸醫(yī)站或養(yǎng)殖類企業(yè)廣泛的推廣。

2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

研究人員根據(jù)細(xì)菌的常用鑒定基因16SrRNA和16S-23SrRNA基因間隔區(qū)或鞭毛蛋白基因建立腐敗梭菌的檢測(cè)方法。但由于PCR擴(kuò)增后檢測(cè)期間可能對(duì)擴(kuò)增子造成污染，常規(guī)PCR具有產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果的潛在風(fēng)險(xiǎn)。后續(xù)研究人員又建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法進(jìn)而鑒別診斷腐敗梭菌和氣腫疽梭菌感染。該方法檢測(cè)時(shí)間更短，且假陽(yáng)性率低，但樣品處理和操作需要專業(yè)的設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室操作人員。更適用于實(shí)驗(yàn)室的流行病學(xué)調(diào)查檢測(cè)，對(duì)于基層獸醫(yī)站和畜牧類企業(yè)，由于缺少專業(yè)的設(shè)備和人員，該方法并不是十分可效。

3 羊快疫常用疫苗

3.1 滅活疫苗

目前常用的商品化羊快疫疫苗主要為多價(jià)的細(xì)菌滅活苗，通常是選擇地方流行菌株傳代培養(yǎng)后加入適當(dāng)?shù)臏缁顒┻M(jìn)行滅活，然后與其他滅活病原混合并加入適當(dāng)?shù)拿庖咦魟?，進(jìn)而免疫易感動(dòng)物。目前常用的商品化疫苗有聯(lián)合梭狀芽胞桿菌、羊梭菌病四防疫苗、羊厭氧梭菌疫苗、羊水腫梭菌和腐敗梭菌的黑疫快疫五聯(lián)混合苗，羊快疫、羊腸毒血癥、羊猝狙三聯(lián)疫苗，羊快疫、羊腸毒血癥、羊猝狙五聯(lián)疫苗或羊快疫、羔羊痢疾和羊腸毒血癥滅活四聯(lián)疫苗。

3.2 亞單位疫苗

腐敗梭菌是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，其在復(fù)制過程中會(huì)分泌許多有致病作用的毒素類物質(zhì)，其中α毒素不僅是其一種重要的外毒素，也是腐敗梭菌重要的免疫原蛋白。由研究人員通過純化腐敗梭菌培養(yǎng)物中的α毒素，使用福爾馬林將α毒素進(jìn)行滅活制備類毒素并與鋁磷酸鹽凝膠體佐劑混合制備一種α類毒素疫苗。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明該疫苗可很好地刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素并抵抗腐敗梭菌芽孢的攻擊，但研究還處于實(shí)驗(yàn)室階段，距離商品化應(yīng)用還有許多工作要做。

4 防控與治療

4.1 飼養(yǎng)管理與防控

為有效地預(yù)防羊快疫，除要對(duì)羊進(jìn)行定期免疫接種外，同時(shí)也需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和防控措施。在飼養(yǎng)中，避免將養(yǎng)殖場(chǎng)低選在低洼潮濕易寄生腐敗梭菌的區(qū)域，避免羊采食腐敗的飼草和飲水，同時(shí)做好保暖工作避免羊受寒應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體應(yīng)激抵抗力下降。在發(fā)現(xiàn)羊中有疑似病例暴發(fā)時(shí)應(yīng)將發(fā)病動(dòng)物緊急隔離，并對(duì)死亡的病羊進(jìn)行無害化處理和深埋，同時(shí)使用3%福爾馬林對(duì)飼養(yǎng)羊的圈舍和使用的工具進(jìn)行緊急消毒。

4.2 藥物治療

當(dāng)羊中出現(xiàn)疑似病例時(shí)，可采用藥物進(jìn)行緊急治療，如對(duì)同羊中的健康個(gè)體緊急免疫羊快疫疫苗，同時(shí)對(duì)羊投喂2%硫酸銅?？捎行Э刂蒲蚩煲咭咔榈倪M(jìn)一步擴(kuò)大。也可對(duì)發(fā)病羊肌肉注射羊快疫高免血清和抗生素頭孢噻呋鈉，同時(shí)對(duì)其他圈舍羊肌肉注射青霉素進(jìn)行預(yù)防。

5 結(jié)束語

羊快疫在我國(guó)牧區(qū)仍然廣泛流行，養(yǎng)殖戶要合理飼養(yǎng)，對(duì)羊進(jìn)行科學(xué)免疫，掌握羊快疫的病原及診斷，避免羊與腐敗梭菌污染物的接觸，對(duì)疑似患病羊及時(shí)隔離、診斷并治療，有效控制該疾病的爆發(fā)，降低經(jīng)濟(jì)損失。