劉 虹 張澤乾 董淑英 白艷玲

（1山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能食品研究院，山西太原 030031；2忻州市科技發(fā)展戰(zhàn)略研究所，山西忻州 034000）

近年來，筆者在山西省各地調(diào)查大型野生真菌資源多樣性，多次到中條山東段歷山區(qū)域進行考察[1?6]。歷山位于山西省南部垣曲縣、翼城縣、陽城縣和沁水縣交界處，面積2.48 萬hm2，屬中條山脈，海拔2 358 m，是國家級自然保護區(qū)，也是山西省溫帶向亞熱帶過渡的區(qū)域。該地區(qū)自然條件優(yōu)越，雨量充沛，植物多樣性豐富，分布有櫟類為主的落葉闊葉林以及油松林等暖溫性植被，有“山西神農(nóng)架”和“華北九寨溝”之稱。

2019 年8 月筆者在歷山中村林場櫟樹Quercusspp.林內(nèi)發(fā)現(xiàn)2種蘑菇，這2種蘑菇此前未見有在山西省發(fā)現(xiàn)的報道。顯微鏡觀察以及ITS 片段的比對分析證實這2 種蘑菇分別為櫟樹圓頭傘Descolea quercinaJ.Khan&Naseer 和白漏斗辛格杯傘Singero?cybe alboinfundibuliformis（Seok et al）Zhu L.Yang et al.。其中，櫟樹圓頭傘為中國新紀錄物種，白漏斗辛格杯傘為山西新記錄物種，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本采集

研究引證的櫟樹圓頭傘Descolea quercina和白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibuliformis野生子實體于2019 年8 月采自山西省中條山脈南部歷山國家級自然保護區(qū)，采集標本各2份，采集地生態(tài)環(huán)境為多種櫟樹Quercusspp.構(gòu)成的樹林地。每份標本均制備兩份材料，一份取新鮮的子實體經(jīng)50 ℃恒定溫度烘干（約12 h），放入自封袋中保存，用作憑證標本；另一份取黃豆粒大小新鮮子實體組織塊，用硅膠干燥保存，后續(xù)進行分子系統(tǒng)學(xué)研究。研究憑證標本（表1）分別保藏于首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院標本館（BJTC）和山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能食品研究院標本館（HSA）。

1.2 形態(tài)學(xué)鑒定方法

野外記錄物種宏觀特征，包括擔子果的形狀、大小、表面狀態(tài)，菌蓋大小、形狀、顏色，菌肉顏色、氣味，菌柄長度、顏色等特征。顯微結(jié)構(gòu)采用奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（Olympus BX51），在400~1 000 倍下進行顯微結(jié)構(gòu)觀察。先用鑷子夾取子實體干標本部分組織于載玻片上，用刀片徒手切取相應(yīng)組織薄片，滴加5%氫氧化鉀溶液使組織吸水復(fù)原，蓋上蓋玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察擔子果的孢子、擔子、囊狀體顯微結(jié)構(gòu)特征，記錄菌絲有無鎖狀聯(lián)合以及囊狀體、擔子、擔孢子大小等微觀特征；采用梅氏（Melzer’s reagent）試劑檢測擔孢子壁有無嗜藍和淀粉質(zhì)反應(yīng)。擔孢子大小測量按每份子實體測量50個擔孢子，統(tǒng)計測量數(shù)值。物種形態(tài)特征鑒定，櫟樹圓頭傘參考Khan 等（2017）[7]，白漏斗辛格杯傘參考Seok等（2009）[8]。

1.3 DNA序列測定和比對

將物種擔子果烘干，切取少量放于1.5 mL的EP管中，管中放置提前滅菌的直徑為3 mm 的小鎢珠，在球磨儀（Mixer Mill MM301，Retsch，Haan，德國）中將標本研磨成粉末狀（45 s，30 Hz，2~4 次），采用改良的CTAB 方法提取基因組DNA[9]。干標本總DNA提取后，擴增核糖體DNA 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal transcribed spacer，ITS）片 段 ，PCR 擴 增 引 物 為ITS1f/ITS4。ITS 的擴增條件：在 94 ℃下預(yù)變性3 min，隨后在 94 ℃變性 30 s，55 ℃退 45 s，72 ℃延伸1 min，35 個循環(huán)，最后 72 ℃延伸10 min。PCR 產(chǎn)物經(jīng)北京中科希林生工生物技術(shù)有限責任公司純化、測序和編輯，經(jīng)手工校對后獲得的序列提交到NCBI數(shù)據(jù)庫，采用BLAST工具在NCBI數(shù)據(jù)庫進行比對。

2 結(jié)果與分析

2.1 ITS-DNA比對結(jié)果

研究櫟樹圓頭傘樣本2 份、白漏斗辛格杯傘樣本2 份（表1），進行測序，提取DNA?ITS 分子片段。將分子片段用BLAST 工具在NCBI 數(shù)據(jù)庫上進行比對，結(jié)果見表2。

表1 研究樣本的信息

表2 研究樣本ITS片段在NCBI上的比對結(jié)果

研究樣本提取的ITS 片段在NCBI 數(shù)據(jù)庫用BLAST 工具比對表明：樣本LH743、樣本XYYM066與櫟樹圓頭傘Descolea quercina模式標本序列相似度高達99.0%，且形態(tài)特征與原始描述完全吻合，證實這兩份山西樣本為櫟樹圓頭傘，為中國新紀錄物種。

樣本XYYM036、LH718 與白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibuliformis發(fā)表新種的原始描述完全吻合，樣本序列和目標序列相似度高達99.9%，結(jié)果證實研究引證的采自山西歷山的這兩份樣本為白漏斗辛格杯傘，為山西新紀錄物種。

2.2 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

2.2.1 櫟樹圓頭傘

子實體中大型，氣味清淡。菌蓋直徑5~8 cm，初鐘形，后漸變?yōu)榘肭蛐位虮獍肭蛐?，中央有時稍凸起，橄欖綠褐色或黃褐色帶橄欖綠色調(diào)，表面具淺黃褐色纖毛狀鱗片；邊緣有明顯或不明顯放射狀條紋。菌肉厚2~4 mm，黃褐色。菌褶成熟時黃褐色，較密，直生。菌柄長4~7 cm，直徑0.8~1.5 cm，圓柱狀，中空，黃褐色，菌環(huán)以上表面光滑，菌環(huán)以下表面有纖維狀鱗片。菌環(huán)膜質(zhì)，上位，黃褐色，上表面有明顯的放射狀條紋，下表面近平滑。擔子（25~40）μm×（8.0~12.5）μm，棒狀，4 孢子，基部有鎖狀聯(lián)合。擔孢子（11~13）μm×（6.5~8.5）μm，檸檬形，兩邊具突出的小尖，銹褐色，表面具疣狀或短脊狀凸起。緣囊體棒狀，有時頂部具小尖，（40~50）μm×（10.0~12.5）μm。側(cè)囊體與緣囊體相似，有時頂部具小尖，部分小尖頂部膨大呈小球形，（40~50）μm ×（10~15）μm。菌髓菌絲近平行排列，具鎖狀聯(lián)合。菌蓋皮層菌絲近柵欄狀排列，細胞棒狀、近棒狀或梭形，（20~30）μm ×（10~15）μm，細胞壁明顯褐色，具鎖狀聯(lián)合。

研究引證標本在形態(tài)上高度吻合櫟樹圓頭傘Descolea quercina的特征[10]，ITS 比對與其模式標本NR154047 序列相似度達99%以上，支持形態(tài)鑒定結(jié)果。

2.2.2 白漏斗辛格杯傘

子實體小至中型，初期無味，成熟時有令人不悅的刺鼻味道。菌蓋直徑2~5 cm，薄，深漏斗狀，中央部分下陷至空心菌柄的基部，初期白色，成熟后變?yōu)闇\黃褐色或粉紅褐色；邊緣具有透明的放射狀條紋，幼時稍內(nèi)卷，成熟后多呈波浪狀。菌褶白色或乳白色，較窄，稀疏。菌柄長3~6 cm，粗4~8 mm，中空，細圓柱狀，表面光滑，白色或乳白色。擔子棒狀（20~30）μm×（4~6）μm，四小梗，基部具鎖狀聯(lián)合。擔孢子（6.0~7.5）μm×（4~5）μm，橢圓形，無色，光滑，非淀粉質(zhì)。菌蓋皮層菌絲近平行排列，菌絲薄壁，直徑2.5~5.0μm，具鎖狀聯(lián)合，間有膨大細胞（vesicles），達（20~50）μm×（5.0~12.5）μm，薄壁，無色。

引證標本形態(tài)特征吻合白漏斗辛格杯傘的原始描述[11]，ITS 比對結(jié)果顯示山西標本提取的ITS 片段和白漏斗辛格杯傘的可信序列JX514126、JX514132（QIN 等，2014）[7]同源性均超過99%，支持標本屬于白漏斗辛格杯傘。

圖1 櫟樹圓頭傘Descolea quercina生態(tài)照

圖2 白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibuliformis 生態(tài)照

3 結(jié)論與討論

櫟樹圓頭傘Descolea quercina在分類上隸屬于擔子菌門Basidiomycota，傘菌綱Agaricomycetes，傘菌目Agaricales 糞銹傘科Bolbitiaceae 環(huán)鱗傘屬Descolea。

櫟樹圓頭傘是近年在巴基斯坦北部被發(fā)現(xiàn)的一個新物種[10]，其主要識別特征為菌蓋橄欖綠褐色及菌環(huán)表面具明顯條紋的中大型子實體，此外生長在櫟樹林也是重要的參考特征之一。櫟樹圓頭傘在中國是首次記錄。圓頭傘屬Descolea成員主要分布在南半球，已知物種全部為菌根菌，寄主植物也多數(shù)屬南半球本土物種（Nothofagaceae）[8]，北半球物種相對較為罕見。此前中國已知該屬物種有兩個，分別為黃環(huán)圓頭傘Descolea flavoannulata（Lj.N.Vas‐siljeva）E.Horak 和珍貴圓頭傘Descolea pretiosaE.Horak，分布于東北和華中地區(qū)[9，12?13]。櫟樹圓頭傘食毒不詳。

白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibulifor?mis隸屬于蘑菇目Agaricales，目前科地位未定（In‐certae sedis），辛格杯傘屬（囊泡杯傘屬）Singerocybe。白漏斗辛格杯傘最早以Clitocybe alboinfundibulifor?misSeok，Yang S.Kim，K.M.Park，W.G.Kim，K.H.Yoo&I.C.Park 為名發(fā)現(xiàn)于韓國[11]，不久后分子數(shù)據(jù)分析支持重組為現(xiàn)名[7]。白漏斗辛格杯傘可能是一個亞洲物種，已知分布包括中國東北[14]、華北（本研究）及西南地區(qū)[15]，泰國北部也有發(fā)現(xiàn)[16]。山西省僅見于南部中條山脈東段歷山區(qū)域，處于東北偏西南溫帶森林大通道上。山西產(chǎn)的白漏斗辛格杯傘成熟時氣味濃烈，這種氣味在該種原始記錄及其他產(chǎn)區(qū)未有記載[11，13]，但在 NCBI 數(shù)據(jù)庫中 ITS 片段比對分析支持其為同一個物種，這種氣味差異可能是不同環(huán)境或者不同的發(fā)育階段等因素所致。有文獻記載該物種可食[17]。