陳東亮，鐘楚，簡少芬，李林軒，韋坤華*，繆劍華*

1.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西藥用資源保護與遺傳改良重點實驗室/廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心，廣西 南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)農業(yè)科學院 經濟作物研究所，廣西 南寧 530007

八角蓮Dysosma versipellis（Hance）M.Cheng ex Ying別名山荷葉、金魁蓮、旱八角、荷葉蓮、江邊一碗水、獨角蓮等，為小檗科（Berberidaceae）鬼臼屬（Dysosma）多年生宿根草本藥用植物[1]。八角蓮始載于《神農本草經》，以“鬼臼”之名列為下品，“主殺蠱毒鬼注，精物，辟惡氣不祥，逐邪，解百毒”[2]。據(jù)《本草綱目》[3]、《證類本草》[4]、《植物名實圖考》[5]和《全國中草藥匯編》[1]等文獻記載，八角蓮以根莖入藥，能夠清熱解毒、祛瘀消腫、化痰散結，治療癰腫、跌打損傷、咽喉腫痛等[6]。現(xiàn)代藥理研究表明，其根狀莖中鬼臼毒素（podophyllotoxin）含量極高，具有較好的抗腫瘤、抗病毒及抗菌等生物活性[7]。近年來，八角蓮的開發(fā)利用備受關注。然而，據(jù)野外調查顯示，1960 年以前八角蓮在比較偏僻山區(qū)較為常見，1975 年后主要分布于自然保護區(qū)或以農家栽培形式生存。隨著人類對自然的不斷索取，八角蓮的適生環(huán)境正在縮小，資源急劇減少[8]。這說明人們對其植物資源的開發(fā)和利用缺乏科學的指導且保育意識淡薄。目前，八角蓮已被列為國家Ⅱ級保護瀕危植物[9]。因此，加強其保育研究對實現(xiàn)八角蓮資源的可持續(xù)利用具有重要意義。

1 資源現(xiàn)狀

八角蓮是我國特有的瀕危植物[10]。其大多為零星分布，種群數(shù)量小，主要分布于湖北、貴州、廣西、四川、江西、重慶、陜西、湖南、云南、安徽、廣東、浙江等地，陜西南部大巴山北坡為其分布的最北界[11]。王萬海等[12]通過查閱文獻、走訪市場等方式對湖北恩施地區(qū)的15 個樣地（N29°22′11.3″～30°50′10.2″，E110°18′50.0″～108°55′57.8″）的八角蓮野生資源進行了實地調查，并對樣地八角蓮的蘊藏量進行了估算，認為恩施產區(qū)的八角蓮蘊藏總量約為832.91 kg，年允收量僅為138.8 kg，且調查發(fā)現(xiàn)很多分布區(qū)的八角蓮已幾近滅絕。韋蓉靜等[13]對貴州省黔南州三都縣八角蓮群落進行生態(tài)學調查及生態(tài)位分析，認為該地區(qū)八角蓮生態(tài)位寬度較小且種間競爭激烈，自然條件下生長狀態(tài)與其他常見物種比較處于劣勢。管畢財[8]在2006 年對湖北神農架、重慶金佛山、四川峨眉山等10 個八角蓮群體進行調查，發(fā)現(xiàn)八角蓮適宜生境正在縮小，資源急劇減少，各群體之間呈明顯間斷的“島嶼狀”分布，且大群體越來越小，小群體逐漸消失，棲息地退縮到了人類日?；顒硬辉|及的森林，甚至自然保護區(qū)內的群體也被偷采，導致其棲息地不斷縮小。

2 瀕危成因

2.1 內部致瀕因子

2.1.1 自交不親和障礙 Bawa[14]認為，當大多數(shù)自花授粉植株不結實時，這個種就應被認為具有自交不親和的繁育系統(tǒng)。管畢財[8]對八角蓮進行了套袋實驗、自花傳粉實驗和同株異花實驗，發(fā)現(xiàn)同株同花和同株異花授粉均不結實或結實量極少，而異株異花結實率極高，表明八角蓮繁育系統(tǒng)存在較高程度的自交不親和障礙；通過對八角蓮繁殖系統(tǒng)的進一步研究，認為八角蓮屬于自交不親和的專性異花授粉植物，授粉主要依賴傳粉昆蟲，且通過觀察發(fā)現(xiàn)有效傳粉昆蟲長角甲蟲（long hornbeetle）的飛行距離不超過2 m，訪花頻率很低，造成八角蓮群體間缺乏有效的花粉傳播。這是其結實率低的主要原因，也是造成八角蓮瀕危的重要內部因子。

2.1.2 遺傳多樣性低 周新聞[15]利用等位酶技術和簡單序列重復區(qū)間擴增多態(tài)性（ISSR）分析技術研究了八角蓮5 個居群和六角蓮1 個居群遺傳變異情況，認為八角蓮居群的遺傳多樣性水平低于六角蓮。李忠超[16]研究認為，由于八角蓮生境片段化、異質化，地理空間隔離和繁育機制障礙，其種群間基因流小，種群內遺傳多樣性水平較低，種群間遺傳分化較大，小種群效應明顯。以上研究結果均表明，八角蓮的遺傳多樣性低、進化潛力和適應性較弱。

2.1.3 自然繁殖率低 八角蓮自然狀態(tài)下靠種子繁殖后代，但劉燕琴等[17]研究發(fā)現(xiàn)，其種子具有休眠的特點，休眠期從8月到次年的3月。種子休眠期越長，種子活力就越容易喪失[18]，致使自然繁殖率較低，這可能是野外很難觀察到八角蓮種子苗的主要原因。

2.2 外部致瀕因子

2.2.1 野生資源的過度采挖 由金文等[19]在湖北神農架地區(qū)走訪調查發(fā)現(xiàn)，2004 年有人從巴東沿渡河一次性挖走八角蓮根莖超過150 kg，神農架林區(qū)附近林叢中八角蓮已近枯竭。由于無節(jié)制、掠奪性采挖，八角蓮野生資源及其生境受到了嚴重破壞，原分布地區(qū)資源已臨近枯竭，全國的野生資源分布呈縮小的趨勢。

2.2.2 生長環(huán)境的破壞 2006年管畢財[8]對全國10個八角蓮主要分布區(qū)的生境調查顯示，除湖南天平山自然保護區(qū)、安徽天堂寨自然保護區(qū)及江西九江海行鄉(xiāng)3 個分布區(qū)的生境仍適宜八角蓮繁殖外，湖北神農架、重慶南川、四川峨眉山、陜西嵐皋南宮山、湖北九宮山和重慶縉云山的八角蓮生境均受到不同程度的破壞。近年來，由于違反自然規(guī)律的墾殖、旅游開發(fā)和生態(tài)環(huán)境惡化等原因，八角蓮喪失了適宜的生存環(huán)境，造成其野生資源日益減少，瀕臨枯竭[20]。

以上內因和外因的共同作用加劇了藥用植物八角蓮的瀕危程度。因此，研究八角蓮的就地保育、遷地保育和回歸保育對瀕危藥用植物八角蓮的可持續(xù)利用具有重要意義。

3 就地保育

就地保育主要通過封禁、輪采、人工授粉、人工補種及人工管理等方式對藥用植物實現(xiàn)有效保護。劉燕琴等[21]通過人工授粉和人工補種方法，對分布于重慶市南川區(qū)的廟壩石人山、松豐對窩山、槐坪山的野生八角蓮資源進行了人工撫育研究，分別統(tǒng)計人工授粉的結實率和人工補種的成活率，結果發(fā)現(xiàn)，經過人工授粉處理，廟壩石人山、松豐對窩山、槐坪山的八角蓮結實率分別由原來的8.1%、5.0%、2.5%提高到73.4%、91.6%、30.0%；人工補種八角蓮栽培苗、種子苗、組培定植苗、組培苗，成活率依次為96.7%、93.3%、50.0%、15.0%；定植1年，根部增質量依次為80.0%、86.2%、103%、120%。人工授粉有效提高了野生八角蓮的結實率，人工補種方式能夠有效增加八角蓮的種群數(shù)量及種群內個體數(shù)。

4 遷地保育

植物遷地保育指把植物活體、器官和組織等轉移到自然生境之外來繁育生長的一種保育方式，是植物多樣性保護的重要補充手段[22]。對于以殘存種群或由于自然、人為因素造成生境條件已經發(fā)生改變的瀕危物種而言，遷地保育是必要且最為有效的措施。藥用植物園、藥用專類園、藥用植物種質圃等是目前開展藥用植物遷地保育的主要單位。將自然生境的藥用植物物種轉移到可控條件的地區(qū)保存，能方便研究藥用植物的遺傳、繁殖、生長發(fā)育規(guī)律，提取藥用植物有效成分，研究藥用植物藥效形成與維持規(guī)律。這些規(guī)律對藥用植物保育起基礎支持的作用。

4.1 引種馴化

4.1.1 人工栽培 近年來，八角蓮各種內部和外部致瀕因子的共同作用使其瀕臨滅絕。實踐證明，野生變家種是實現(xiàn)野生藥用植物資源有效保護和可持續(xù)利用的有效途徑。早在20 世紀80 年代，人們就開始了八角蓮野生轉家種的栽培研究[23]。經過30 余年的研究積累，對于八角蓮的引種栽培技術已經取得了初步成果。甘國菊等[24]在前人研究基礎上，總結了八角蓮的人工栽培技術，主要包括選地整地、育苗、定植、搭設蔭棚、中耕除草、肥水管理、病蟲害防治等內容，為廣大藥農提供了技術指導。劉少軒等[25]選用3 年生八角蓮苗，在半楓荷林不同郁閉度及空地種植，進行了栽培試驗，研究認為，適宜種植八角蓮的半楓荷林分最佳郁閉度為0.5～0.7，在這個郁閉度之間八角蓮的成活率、保存率及生長量都較好。陸煒強[26]研究了八角蓮規(guī)范化生產關鍵技術，依照我國中藥材產品標準規(guī)范，制定了適用于浙江省磐安縣八角蓮生產基地及其毗鄰地區(qū)的八角蓮規(guī)范化生產標準操作規(guī)程。為了進一步規(guī)范中藥八角蓮栽培技術，原國家林業(yè)局發(fā)布了《八角蓮栽培技術規(guī)程》（LY/T 2952—2018）[27]。該標準的實施有效規(guī)范了中藥材八角蓮的生產過程，在一定程度上保證了藥材質量。為了保護野生資源及滿足市場需求，四川省自然資源科學研究院秦小波等[28]通過對峨眉山特有八角蓮，特別是發(fā)現(xiàn)的新變種峨眉八角蓮進行了多年資源圃保育及繁殖，基本馴化了峨眉八角蓮，并將其應用于當?shù)厝斯ぴ耘嗍痉?。該團隊從2012 年起連續(xù)在峨眉山進行最小3.33 hm2的試種，與當?shù)仄髽I(yè)合作栽培八角蓮2.67 hm2，此后面積增加達百畝（1畝≈666.67 m2），畝產鮮質量達1000 kg。

4.1.2 引種材料 中藥材八角蓮的基原植物為八角蓮。此外，還有云南八角蓮D.aurantiocaulis（Hand.?Mazz.）Hu、小八角蓮D.difformis（Hemsl.et Wils.）T.H.Wang ex Ying、貴州八角蓮D.majorensis（Gagnepain）M.Hiroe、六角蓮D.pleiantha（Hance）Woodson、西藏八角蓮D.tsayuensisYing 等變種[10]，引種時要加以區(qū)分。內部轉錄間隔區(qū)2（ITS2）序列作為DNA 條形碼可準確鑒別八角蓮藥材的基原植物及其混偽品，為八角蓮物種鑒定及藥材真?zhèn)舞b別提供依據(jù)[29?30]。因其野外自然狀態(tài)下產種量極少，農家引種時多采挖根莖用來繁殖種苗。

4.1.3 生態(tài)適應性 適應性評價是衡量植物遷地保育成功與否的關鍵。藥用植物引種馴化不僅需要保證種源可靠，還需要注意生態(tài)環(huán)境在馴化過程中扮演的角色。溫度和光照是影響植物生長的重要生態(tài)因子。Karuppaiya 等[31]研究表明，低溫下調控八角蓮鬼臼毒素合成的基因表達量上調，促進了鬼臼毒素在根莖的積累。在低溫（4～6 ℃）條件下生長的八角蓮的生物量和葉綠素、類胡蘿卜素、鬼臼毒素含量均高于在25～30 ℃溫室大棚生長的八角蓮。Zhao 等[32]研究不同光照強度（10%、30%、50%、100%自然光）對八角蓮形態(tài)性狀、物質分配、光合作用及其活性成分積累的影響發(fā)現(xiàn)，隨著光照強度的增加，植株變矮，葉片變小，而在盛夏（7 月）日照充足（100%自然光）的情況下葉片受損嚴重；在過度光照導致葉片死亡后，8 月會長出新葉，而在其他3 種光照下生長的植株則表現(xiàn)出旺盛的綠葉；在30%自然光照射下，葉片為暗綠色；光照強度對八角蓮總生物量無顯著影響，且4 種光照強度梯度下的物質分配模式相似，生物量平均有85%分配給了地下器官（根莖），其余15%分配給了地上植物部分；30%自然光光照強度下，八角蓮表現(xiàn)出最佳的營養(yǎng)生長和光合作用能力，鬼臼毒素積累量較高。因此，八角蓮是一種能夠很好地適應光照變化的耐陰植物。在八角蓮的引種栽培和回歸保育實踐時，建議將光照強度設置為10%～50%自然光，尤其是30%自然光。

4.2 種苗繁育

八角蓮的種苗繁育方式通常有種子繁育、根莖繁育和組織培養(yǎng)繁育3種方式。

4.2.1 種子繁育 種子繁殖是八角蓮最原始的繁殖方式。其種子在自然條件下具有休眠期長的生理特性。劉燕琴等[17]認為，種皮和胚乳制約、種子生理后熟是引起八角蓮種子休眠的主要原因，用400 mg·L-1赤霉素（GA3）溶液浸種24 h 或6～7 ℃低溫層積均能在一定程度上解除休眠，促進萌發(fā)。其中，以6～7 ℃低溫層積150 d 效果較好，發(fā)芽率和發(fā)芽勢分別達到88.5%和30.4%。貯藏條件和方式也是影響種子活力的重要因素。研究表明，對種子進行砂藏可以提高種子的發(fā)芽率[33]。雖然，通過激素處理和低溫層積可以在一定程度上解除休眠、促進萌發(fā)，但據(jù)八角蓮有性繁殖的初步研究發(fā)現(xiàn)，自然情況下八角蓮坐果率低于8%，而成熟的八角蓮果實在5%以下，果實內僅含有效種子4～6 粒[33]。由于八角蓮存在自交不親和障礙，自然狀態(tài)下結實率低下，可用于育苗的種子量有限成為八角蓮種子育苗的瓶頸問題。對于異花授粉植物，人工授粉是提高其結實率的重要途徑。劉燕琴等[34]經過多年的研究，認為采用人工授粉方法可以提高八角蓮種子結實率。但人工授粉費時費工、效率低下，依然無法滿足規(guī)?；绲男枨蟆?/p>

4.2.2 根莖繁育 根莖繁殖是部分根莖類植物的繁殖方式，具有出苗率高、不容易發(fā)生徒長、生長勢和抗逆性較強、可較好保持品種種性等優(yōu)點。八角蓮根狀莖先端結節(jié)每年可形成1 個幼芽，第2～3節(jié)上有芽苞，當受外界創(chuàng)傷或人為切割時，可促使其節(jié)上芽苞萌發(fā)，長出新苗，而其后的結節(jié)則逐漸老化，再生能力很弱。因此，可利用八角蓮先端的1～3 節(jié)進行無性繁殖。我國華中地區(qū)一般在7 月下旬至8 月上旬（西南地區(qū)一般2—3 月[35]）采挖八角蓮根莖，切下其第1～3 個結節(jié)作繁殖材料，隨采隨栽。可在畦面上橫向開溝條播，行距20 cm，播幅10 cm，溝深3～4 cm，在溝內按每隔8～10 cm種上1 個芽苞，用火土灰蓋種，充分澆水后覆草保溫保濕[24]。但由于目前八角蓮資源量稀少，加之其根莖只有長在前端的2 個圓盤節(jié)具有分生能力，后面的圓盤節(jié)木質化嚴重，無再生能力，利用其根莖進行規(guī)?；缋щy很大。此外，八角蓮的藥用部分主要是根莖，為了不浪費其藥用部分，須要考慮利用其他非藥用部位來代替根莖進行育苗。韋蓉靜等[36]嘗試用根莖根代替根莖繁殖，但經對比，根莖根的成苗率僅為38%，比根莖育苗法成苗率低64%。劉燕琴等[37]開展了莖節(jié)育苗不同播種時間、不同生長年限莖節(jié)出苗特點的研究，對多年生莖節(jié)采用藥劑處理法，篩選合適的激素組合、濃度，促進了多年生莖節(jié)的出苗率；同時，對多年生莖節(jié)采用藥劑處理合并室內砂藏處理能較好地促進其萌芽，提高了莖節(jié)的出苗率。該研究組在對須根播種方法、材料規(guī)格、播種時間等研究的基礎上，對須根藥劑處理的激素組合進行了篩選，并采用合適的藥劑處理、室內河沙低溫層積等方法有效促進了須根苗的分化、出苗。徐銘澤等[38]采用正交法，對根狀莖結節(jié)進行浸泡之后，將根狀莖栽入培養(yǎng)土中，再用對應的激素水溶液代替自來水進行培養(yǎng)，結果發(fā)現(xiàn)，選取根狀莖第1 節(jié)結節(jié)，1.0 mg·L-16?芐氨基腺嘌呤（6?BA）+0.2 mg·L-1苯基噻二唑基脲（TDZ）激素水溶液中浸泡24 h，不定芽誘導效果最好，每個根狀莖誘導的不定芽數(shù)可達5～7 個，表明用激素水溶液對八角蓮根狀莖進行浸泡預處理和澆灌，能顯著提高八角蓮不定芽的產量。

4.2.3 組織培養(yǎng)繁育 Jiang 等[39]于2012 年成功建立了八角蓮的高效組織離體快繁技術體系。該方法以八角蓮的根莖上的嫩芽為外植體，接種在MS+1.0 mg·L-16?BA+0.5 mg·L-1GA3+0.5 mg·L-1玉米素（Zea）培養(yǎng)基上6 周后，可直接分化出多個不定芽而不經過愈傷組織階段；以葉片為外植體，接種在MS+0.5 mg·L-1萘乙酸（2,4?D）+0.2 mg·L-16?BA培養(yǎng)基上4 周內即可誘導出愈傷組織，愈傷組織在MS+1.0 mg·L-16?BA+0.2 mg·L-1TDZ 培養(yǎng)基上6周內可分化出不定芽；且從根莖的嫩芽和愈傷組織分化獲得的不定芽在1/2 MS+0.5 mg·L-1吲哚丁酸（IBA）+0.5 g·L-1活性炭（AC）培養(yǎng)基上培養(yǎng)4周，生根率可達100%；在蛭石?土壤（1∶1）的基質中煉苗后移植到田間，成活率達85%。八角蓮離體組織培養(yǎng)體系的建立為瀕危植物八角蓮開辟了新的繁育途徑。該方法外植體用量少、短時間內可繁殖大量種苗且對母體植株無損傷，彌補了種子繁殖和根莖繁殖的缺點，對瀕危植物八角蓮的遷地保護意義深遠。中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所廣西分所科研人員總結了八角蓮的組織培養(yǎng)繁殖方法，并制定了適用于廣西境內八角蓮種苗規(guī)范化生產的八角蓮組培苗生產技術規(guī)程[40]。利用此組織培養(yǎng)方法，組培苗種子誘導率為85.2%，組培苗生根率達85%以上，但有少量組培苗出現(xiàn)褐化，需進一步對其進行防褐化試驗研究。在對藥用植物的遷地保護過程中，活性成分的變化仍是備受關注的問題。比較八角蓮愈傷組織和組織培養(yǎng)品及野生品中鬼臼毒素含量，發(fā)現(xiàn)八角蓮的組織培養(yǎng)品與野生品所含化學成分類型基本相同，但有效成分鬼臼毒素含量遠低于野生品[41?43]。八角蓮為多年生藥用植物，主要以地下根莖入藥，但其根莖呈結節(jié)狀，每年長1 節(jié)，數(shù)年才能入藥用。育苗移植的八角蓮要8 年以上才能收獲，生產周期較長[22]。鑒于此，八角蓮組培苗移栽到野外生長數(shù)年后藥用成分含量是否能恢復到原野生品的水平還需要進一步深入全面的研究。

4.3 種質資源保存

目前，八角蓮種質資源保存主要有活體植株保存、種子保存及離體組織器官保存3 種方式?；铙w保存主要以種質圃栽培保存為主。四川省自然資源科學研究院熊鐵一等[44]收集了150余份野生八角蓮居群材料，建立了獨立的研究用八角蓮種質資源圃。在種子保存方面，劉燕琴等[33]研究發(fā)現(xiàn)，從9月開始進行4 ℃冰箱低溫貯藏，到次年2 月，八角蓮種子發(fā)芽率為0，說明八角蓮種子低溫貯藏技術還有待進一步研究。因未進行種子濕度管理，種子室內砂藏法出苗率低于50%。而室內砂藏保濕法的溫度、濕度能得到較好的控制，促進了種子后熟，有效保持了種子活力，種子發(fā)芽率較高，出苗率可達90%。隨著八角蓮植物組織培養(yǎng)技術的日漸成熟，也可通過離體組織培養(yǎng)技術保存種質資源。離體材料每隔一段時間（常規(guī)時間為1～2 個月）進行繼代培養(yǎng)以保存種質資源，但組織培養(yǎng)保存法存在遺傳材料變異的風險[45]。

5 回歸保育

回歸保育也稱再引入，是將人工繁殖體重新放回適合其生存的野生環(huán)境中去，重建較為完善的生態(tài)系統(tǒng)，提高生態(tài)系統(tǒng)生物多樣性及群落穩(wěn)定性，建立可自我維持的種群的保育方式[46]。八角蓮的回歸保育需根據(jù)其生長發(fā)育規(guī)律、野生原種適生環(huán)境及瀕危原因制定適宜的回歸保育方案。

5.1 回歸保育的類型

回歸保育主要有增強回歸、重建回歸和引種回歸3種類型[47]。增強回歸是在原有種群的基礎上，通過回歸增加物種數(shù)量；重建回歸即在生境中原有分布，但已經消失了，其目的是通過種群的釋放與管理，擴大物種的分布范圍；引種回歸是把物種回歸到合適的生境中，而不清楚該生境原來是否有回歸物種的分布[48]。由于八角蓮地理分布較廣，遍及我國16 個省、自治區(qū)和直轄市[49]，只是有些分布區(qū)原有種群數(shù)量減少或整個種群已消失。因此，可通過增強回歸在原有種群的基礎上增加八角蓮種群數(shù)量；通過重建回歸重新釋放一些八角蓮群體，回歸到原種群已消失的分布區(qū)，恢復原有八角蓮分布范圍?？紤]到資金和人力投入，對于主要分布區(qū)的八角蓮種質資源只需要限制亂采亂挖現(xiàn)象、保證現(xiàn)有資源正常更新和繁殖即可。

5.2 回歸適宜區(qū)域的選擇

長期的自然馴化使八角蓮形成了喜陰濕環(huán)境、忌強光和干旱的生長特性，其生長在山谷、山坡常綠闊葉林、落葉闊葉林或竹林下陰濕處，透射光強度10%～50%，以30%的透光率下生長為最優(yōu)[39]。由于八角蓮的自交不親和特性，在野外自然狀態(tài)下主要通過昆蟲傳粉受精進行后代繁殖。因此，在充分考慮八角蓮適生環(huán)境的前提下，應盡量選擇傳粉昆蟲活動頻繁的區(qū)域，或在該生境下通過放養(yǎng)傳粉昆蟲。為了便于八角蓮回歸保育的實施及后期的管理和監(jiān)控，最好選在國家或各地方自然保護區(qū)、國有林場等區(qū)域內。

5.3 種苗繁育及要求

藥用植物在回歸保育時要盡量保留其野生原種的生物學特性及其藥效遺傳特性。雖然，通過種子繁殖、根莖繁殖和組織培養(yǎng)繁殖3 種繁殖方式都可以獲得八角蓮實生苗，但由于回歸野外除種苗用量大外還要求能較好地保持其遺傳特性。八角蓮本身產生種子數(shù)量有限，且種子存在休眠期，繁殖多代后會發(fā)生種性退化和種質變異現(xiàn)象，不能完全保證其野生原種的生物學特性及其藥效特性。根莖繁殖對母體植株有一定損傷性，且不能滿足生產大量種苗的要求。因此，建議通過離體組織培養(yǎng)的方式來獲得八角蓮回歸種苗。種源須為野生原種，苗木須健壯無病蟲害，以保證種苗具備一定的野外條件生長能力，同時也可避免對回歸生境的危害。組培苗的繼代次數(shù)不能太多，若在人工條件下已經繁殖多代則有可能導致其繁殖和自衛(wèi)能力降低，從而難以適應野外惡劣的環(huán)境而無法生存。回歸所用組培苗按《八角蓮組培苗生產技術規(guī)程》（DB45/T 1031—2014）[40]的要求生產。組培苗煉苗15 d 后，移栽于泥炭土?珍珠巖（1∶1）混合的苗缽中，在遮陰棚下生長30 d后即可移栽回歸至野外[26]。

5.4 移栽回歸

移栽時間在春、夏、秋季均可，以春季為最佳。具體可按參考文獻[26]和《八角蓮栽培技術規(guī)程》（LY/T 2952—2018）[27]進行。

5.5 后期管護與監(jiān)測

定植后如無降雨，可進行人工澆水。要保持土壤濕潤透氣。同時，注意排水，以防根系外露和爛根現(xiàn)象的出現(xiàn)。此外，也要意適時培土。為了滿足其生長發(fā)育的需要，在定植后，還要適時摘蕾、追肥[27]。待植株健壯生長后每隔半年或1年須去實地查看，及時清除纏繞在植株上的枝蔓及其他威脅八角蓮生長的不利因素。

6 討論

一系列內因（自交不親和現(xiàn)象、遺傳多樣性低、自然狀態(tài)下結實率低）和外因（野生資源的過度采挖、生長環(huán)境的破壞）的共同作用加劇了藥用植物八角蓮的瀕危程度。為實現(xiàn)對其資源的可持續(xù)利用，對藥用植物八角蓮的保育學研究與實踐勢在必行。

藥用植物的保育不同于一般植物的保育，不僅要保護其野生原種免于瀕?；驕缃^，還要注意保持其藥效不喪失。保護物種需要研究種群的生活條件和干擾對其生存能力的影響，保護藥效需要研究藥效成分動態(tài)積累及各種環(huán)境和遺傳因子對成分積累的影響[50]。通過就地保育可實現(xiàn)對八角蓮原始種群及生境的有效保護，從而為遷地保育的原始材料來源提供保障，為回歸保育的生境選擇提供實體參考。通過遷地保育能方便研究八角蓮的遺傳、繁殖、生長發(fā)育規(guī)律，提取其有效成分，研究其藥效的形成與維持規(guī)律。這些規(guī)律對八角蓮的藥效保護起基礎支持作用。藥用植物需要在特定環(huán)境下才能合成或積累藥用活性成分，有些藥用植物離開原生境其藥效也會下降或消失。所以，還需通過回歸保育將人工繁殖體重新放回適合其生存的野生環(huán)境中去，增加八角蓮野生種群的數(shù)量，擴大野生資源分布范圍，重建較為完善的生態(tài)系統(tǒng)，提高生態(tài)系統(tǒng)生物多樣性及群落穩(wěn)定性，使其“源于自然，歸于自然”。此外，為保護八角蓮現(xiàn)有種群和將來回歸種群的生長和正常繁殖，地方政府和國家相關部門應加大對其分布區(qū)的監(jiān)管力度，鞏固八角蓮保育成果，最終實現(xiàn)對八角蓮資源的可持續(xù)利用。最后，還需關注八角蓮保育效果，如所制訂保育策略實施一段時間后，對其分布區(qū)域、蘊藏量、年允采量、市場供應量等是否增加，是否能保持其原有的遺傳特征、化學特征和藥效特征等進行評價和反饋。