魏 杰，陳蓓蓓，陳迎麗，何 偉，謝 源，廖朝選▲

(1貴州省檢測(cè)技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴州 貴陽 550002；2貴州省分析測(cè)試研究院，貴州 貴陽 550014)

病蟲害是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要因素，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量大減，品質(zhì)降低，對(duì)生產(chǎn)收益影響巨大，為了降低病蟲害造成的損失，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)藥的應(yīng)用是必不可少的措施[1]。據(jù)研究報(bào)道，25%噻蟲嗪水分散粒劑對(duì)甜瓜蚜蟲1～7 d的防效高達(dá)96.49%～99.58%，可有效控制蚜蟲對(duì)甜瓜的危害，并且該農(nóng)藥對(duì)甜瓜生長沒有影響[2]。隨著農(nóng)藥的廣泛應(yīng)用，對(duì)環(huán)境生物的生存也造成很大影響，研究表明，22%氟啶蟲胺腈懸浮劑對(duì)蜜蜂的毒性為高毒，可導(dǎo)致其行動(dòng)遲緩、活力降低，嚴(yán)重影響蜜蜂正常生存[3]；氟啶蟲酰胺對(duì)家蠶的急性毒性LC50=10.21 mg a.i./L，具高毒性，可使家蠶食量降低、側(cè)躺、變軟甚至死亡[4]。噻蟲嗪與氟啶蟲酰胺可通過觸殺和胃毒產(chǎn)生作用，具有良好的內(nèi)吸性、滲透性，對(duì)刺吸式口器害蟲防效甚佳[5-6]。復(fù)配制劑在農(nóng)藥發(fā)展中具有重要意義，不同單劑聯(lián)合用藥可能會(huì)使藥效增加，對(duì)蟲害防控作用顯著，有研究表明氟啶蟲酰胺與啶蟲脒的復(fù)配制劑可顯著增加對(duì)花椒蚜蟲的防效和持效期[7]。目前，噻蟲嗪與氟啶蟲酰胺2種農(nóng)藥的單劑產(chǎn)品對(duì)瓢蟲、赤眼蜂、蜜蜂等環(huán)境生物的毒性研究與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)已有一定報(bào)道[5-6，8]，但對(duì)復(fù)配制劑的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)研究較少。研究60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的急性毒性與初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，可為氟啶蟲酰胺和噻蟲嗪復(fù)配制劑在田間安全規(guī)范使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器與試劑

電子天平：梅特勒-托利多(中國)有限公司，TLE204E/02，0.0001 g；人工氣候培養(yǎng)箱：上海比郎儀器制造有限公司，PRX-250B；指形玻璃管：內(nèi)表面積S=29.64 cm2。

吐溫-80，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑，購自陜西康禾立豐生物科技藥業(yè)有限公司，登記在黃瓜上防治蚜蟲，田間施藥量45～54 g a.i./hm2，每季作物最多噴霧施用3次，安全間隔期5 d。

1.2 試驗(yàn)生物

七星瓢蟲(Coccinellaseptempunctata)：采集于貴陽市沙文高新區(qū)農(nóng)田，置于實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖箱內(nèi)用豆蚜飼喂。待七星瓢蟲適應(yīng)環(huán)境并產(chǎn)卵一周后，收集卵片進(jìn)行孵化幼蟲并飼育，待幼蟲蛻皮為2齡后用于試驗(yàn)。

螟黃赤眼蜂(Trichogrammachilonis)：采用螟黃赤眼蜂蜂卡進(jìn)行孵化，使用48 h內(nèi)羽化的成蜂進(jìn)行試驗(yàn)，蜂卡購于北京中科白云綠色生物技術(shù)有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 瓢蟲毒性試驗(yàn)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)導(dǎo)則[9]，將60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑用去離子水稀釋為2.96 mg a.i./L、4.74 mg a.i./L、7.59 mg a.i./L、12.1 mg a.i./L、19.4 mg a.i./L、31.1 mg a.i./L的試驗(yàn)液，然后取0.30 mL置于玻璃管內(nèi)，于熱狗機(jī)上不間斷滾動(dòng)，使藥液在玻璃管內(nèi)壁形成均勻藥膜。以上每個(gè)濃度組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10支管。藥膜管制備完畢后，每管引入一只幼蟲進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)中每日飼喂足量新鮮蚜蟲以保證瓢蟲生長，環(huán)境條件控制為溫度25 ℃±2 ℃、相對(duì)濕度70%～85%，在光照強(qiáng)度大于1250 lx的培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)光暗比L∶D=16∶8進(jìn)行試驗(yàn)，至對(duì)照組瓢蟲全部羽化后結(jié)束。

1.3.2 赤眼蜂毒性試驗(yàn)

參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則 第17部分：天敵赤眼蜂急性毒性試驗(yàn)》進(jìn)行毒性測(cè)試[10]。將60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑用去離子水稀釋為0.296 mg a.i./L、0.504 mg a.i./L、0.857 mg a.i./L、1.46 mg a.i./L、2.48 mg a.i./L、4.21 mg a.i./L的試驗(yàn)液，然后取0.30 mL置于玻璃管內(nèi)，于熱狗機(jī)上不間斷滾動(dòng)，使藥液在玻璃管內(nèi)壁形成均勻藥膜。藥膜管制備完畢后，向每支管引入100±10只赤眼蜂，試驗(yàn)在溫度25 ℃±2 ℃、相對(duì)濕度70%～80%，無光照的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行，赤眼蜂爬管1 h后，在每支無藥管中劃入兩條糖線(10%蜂蜜水)作為赤眼蜂的食物并將試驗(yàn)管中存活赤眼蜂轉(zhuǎn)入其中，測(cè)試周期為24 h。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用Excel對(duì)毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用SPSS 19.0分析軟件中Probit模型計(jì)算半致死用量LR50和95%置信限，采用線性模型獲取回歸方程。

1.5 初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

評(píng)估參照NY/T 2882.7—2016《農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南 第7部分：非靶標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物》[11]的相關(guān)方法進(jìn)行。由產(chǎn)品標(biāo)簽信息可知，60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑登記于黃瓜的蚜蟲防治，田間用藥量45～54 g a.i./hm2，每季作物最多施藥3次，安全間隔期5 d。以此確定評(píng)估使用的田間推薦最大用藥量(AR)為54 g a.i./hm2，施藥次數(shù)3次，由于缺少施藥間隔，評(píng)估時(shí)采用安全間隔期5 d代替。黃瓜屬于藤蔓植物，后期高度大于50 cm，評(píng)估中基本漂移因子(PDF)選用導(dǎo)則附錄中“表B.3 3次用藥的基本漂移因子”的“高度>50 cm的蔬菜、觀賞植物等”數(shù)據(jù)。根據(jù)導(dǎo)則方法，選擇農(nóng)藥漂移因子(PDF)及植被分布因子(VDF)和農(nóng)田外物種分布不確定因子(UF)，并計(jì)算多次施藥因子(MAF)。結(jié)合試驗(yàn)毒性終點(diǎn)LR50按以下公式確定農(nóng)田內(nèi)、外的預(yù)測(cè)環(huán)境暴露濃度PECin、PECoff和危害商值HQin、HQoff，并通過HQ確定風(fēng)險(xiǎn)是否可接受。計(jì)算公式如下：

PERin=AR×MAF

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性效應(yīng)

在瓢蟲急性毒性試驗(yàn)中對(duì)照組瓢蟲正常死亡2只，死亡率為6.7%，低于20%符合標(biāo)準(zhǔn)要求。高濃度處理組對(duì)瓢蟲幼蟲期毒害作用大，試驗(yàn)蛹期前導(dǎo)致大量幼蟲死亡，中高濃度處理組對(duì)預(yù)蛹期的瓢蟲影響較大，可能是其作用機(jī)制阻礙瓢蟲進(jìn)入化蛹期，導(dǎo)致部分幼蟲一直停留在4齡后期無法化蛹最終死亡。在赤眼蜂毒性試驗(yàn)中對(duì)照組死亡率為1.0%，低于標(biāo)準(zhǔn)要求10%以下。試驗(yàn)赤眼蜂爬行1 h后每個(gè)處理組均出現(xiàn)抖動(dòng)掙扎的癥狀，當(dāng)處理組濃度升高，該癥狀數(shù)量也隨之增加，抖動(dòng)掙扎的赤眼蜂無法爬行至無藥管且狀態(tài)極差，該癥狀的赤眼蜂最終統(tǒng)計(jì)為死亡。

在60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑的急性毒性暴露下，對(duì)七星瓢蟲在3 d前死亡率小于50%，半致死用量LR50>31.5 g a.i./hm2；當(dāng)試驗(yàn)4 d時(shí)最高濃度處理組死亡率超過50%，各處理組瓢蟲在整個(gè)周期發(fā)生不同程度死亡，對(duì)4 d、7 d、10 d及14 d試驗(yàn)點(diǎn)瓢蟲死亡數(shù)據(jù)進(jìn)行分析計(jì)算LR50和95%置信限等，結(jié)果見表1。供試農(nóng)藥對(duì)七星瓢蟲半致死用量4 d-LR50為36.0 g a.i./hm2，7 d-LR50為21.7 g a.i./hm2，10 d-LR50為16.4 g a.i./hm2，處理組全部羽化時(shí)(14 d)的LR50為9.03 g a.i./hm2。供試農(nóng)藥對(duì)螟黃赤眼蜂具有較高的毒害作用，毒性數(shù)據(jù)分析結(jié)果見表1，半致死用量24 h-LR50為0.815 g a.i./hm2。

表1 供試農(nóng)藥對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的毒性數(shù)據(jù)分析

2.2 初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

導(dǎo)則規(guī)定，當(dāng)農(nóng)藥對(duì)非靶標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物的危害商值HQ>5時(shí)，風(fēng)險(xiǎn)不可接受，當(dāng)HQ≤5，風(fēng)險(xiǎn)處于可接受水平。如表2所示，按產(chǎn)品規(guī)定條件在黃瓜上施藥，60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的農(nóng)田內(nèi)危害商值HQin分別為13.2、146，風(fēng)險(xiǎn)不可接受；對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂農(nóng)田外危害商值HQoff分別為0.912、10.1，對(duì)于七星瓢蟲的風(fēng)險(xiǎn)處于可接受水平，但對(duì)赤眼蜂的風(fēng)險(xiǎn)不可接受。

表2 供試農(nóng)藥對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果

3 結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)，60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑通過藥膜管法對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的急性接觸毒性LR50分別為9.03 g a.i./hm2、0.815 g a.i./hm2，該劑量低于農(nóng)藥的田間用藥量，表明產(chǎn)品在田間施用時(shí)，可能對(duì)田間的瓢蟲或赤眼蜂等產(chǎn)生接觸危害。噻蟲嗪是新煙堿類觸殺型殺蟲劑，其對(duì)環(huán)境生物具有觸殺毒性，有研究表明30%噻蟲嗪懸浮劑對(duì)七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的急性接觸毒性LR50分別為25.3 g a.i./hm2、1.39 g a.i./hm2[8]。而氟啶蟲酰胺對(duì)非靶標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物相對(duì)毒性較低，在75 g a.i./hm2的田間最大推薦用藥量下，10%氟啶蟲酰胺水分散粒劑對(duì)七星瓢蟲和玉米螟赤眼蜂的LR50均大于75 g a.i./hm2[5]。由此可知，復(fù)配制劑60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑的急性毒性較高，可能主要源自噻蟲嗪，但兩者復(fù)配的聯(lián)合作用及機(jī)制尚不清楚。

初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果顯示，60%氟啶·噻蟲嗪水分散粒劑對(duì)農(nóng)田內(nèi)的七星瓢蟲和螟黃赤眼蜂的危害商值HQin>5，風(fēng)險(xiǎn)不可接受。表明按產(chǎn)品推薦用藥量于田間施用時(shí)，對(duì)農(nóng)田內(nèi)的非靶標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物風(fēng)險(xiǎn)較大，在使用赤眼蜂、瓢蟲等開展生物防治或綜合防控的田間不能同時(shí)使用該農(nóng)藥。對(duì)七星瓢蟲的農(nóng)田外危害商值HQoff<5，風(fēng)險(xiǎn)可接受；但對(duì)螟黃赤眼蜂的HQoff>5，風(fēng)險(xiǎn)不可接受，表明了田間施用產(chǎn)品后，對(duì)農(nóng)田外的非靶標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物可能存在一定暴露風(fēng)險(xiǎn)，但可能因物種或接觸方式不同而風(fēng)險(xiǎn)不同。在生態(tài)脆弱區(qū)域，為保護(hù)生態(tài)多樣性，使用該產(chǎn)品時(shí)需嚴(yán)格注意施藥漂移。