李占玲 吳春麗 曹永倉(cāng)

附子為毛茛科植物烏頭子根的加工品，是治療陽(yáng)虛里寒證的首選中藥。附子具有回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛之功效，藥理作用研究主要集中在心血管、免疫、抗腫瘤等方面，其抗氧化作用及機(jī)制是研究重點(diǎn)，而自由基清除能力和氧化應(yīng)激水平是評(píng)價(jià)抗氧化能力的關(guān)鍵指標(biāo)[1]。附子用量小為0.3 g，大則在100 g以上，一般用量10～15 g，隨著用量差異其煎煮法也各不同。短時(shí)間煎煮，附子中烏頭堿含量較多，治療痹證、痛證效果較好；長(zhǎng)時(shí)間煎煮，治療一些慢性病療效顯著。附子藥效與毒性并存，烏頭類(lèi)生物堿是其主要藥效成分，也是其毒性成分，通過(guò)加工炮制，將雙酯型生物堿轉(zhuǎn)換為單酯型生物堿是保障臨床安全應(yīng)用的重要途徑，因此附子炮制工藝的優(yōu)化改良是歷代醫(yī)家研究的重點(diǎn)[2-4]。不同附子炮制品的化學(xué)成分、藥理學(xué)和毒理學(xué)作用有差異，本文通過(guò)分析附子炮制有關(guān)的典籍和現(xiàn)代研究，比較各方法差異，為更好地應(yīng)用附子提供借鑒。

1 附子炮制研究概況

1.1 古代炮制方法

附子炮制方法首見(jiàn)于漢代《金匱玉函經(jīng)》：“皆破解，不口父咀，或炮或生……，刀刲取里白者”?！秱摗罚骸芭谌テ?，破八片”。從漢代至唐代以“炮”“燒”“煨”“炒”等方法為主。唐代醫(yī)家開(kāi)始根據(jù)不同病證使用不同輔料進(jìn)行附子加工，宋代醫(yī)家逐漸采用水洗、水浸、醋浸、黑豆煮、甘草制等。明代以后，附子加工基本沿用古法，以蒸煮等濕法為主，輔料也相對(duì)固定（如甘草、姜、童便、黑豆、鹽等）[5]。代珊等[6]運(yùn)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）比較古法炮制品與現(xiàn)代5種炮制品中生物堿含量的差異，結(jié)果顯示古法炮制有效成分保留較多，但去毒效果較差；黑順片、白附片毒性成分明顯減少，但有效成分流失較多；其中與古法差異較小的為炒附片，其原因可能是兩者炮制溫度接近，均約為170 ℃，而且炮制過(guò)程中均未有水蒸氣參與。

1.2 現(xiàn)代炮制工藝研究

《中華人民共和國(guó)藥典》詳細(xì)規(guī)定了附子炮制法：鹽附子和黑順片。現(xiàn)代技術(shù)結(jié)合傳統(tǒng)炮制工藝，又有許多新的方法出現(xiàn)，如微波炮制法、高壓炮制法、高溫炮制法、微生物發(fā)酵法等，迄今為止，有70多種傳統(tǒng)和現(xiàn)代工藝被用于附子炮制[7]。唐小龍等[8]應(yīng)用干熱滅菌和濕熱滅菌的技術(shù)方法炮制附子，具有雙酯型附子生物堿含量降低、水溶性有效成分流失減少、炮制工序簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。賀亞男等[9]探究微波炮制過(guò)程中生附片切片厚度、含水量、微波功率、炮制時(shí)間對(duì)工藝的影響，結(jié)果表明，附片厚度為3 mm、復(fù)水率60%～80%、炮制時(shí)間根據(jù)微波功率調(diào)整，能夠提升微波炮制附子質(zhì)量。

2 不同炮制方法對(duì)化學(xué)成分的影響

生物堿是附子的主要毒、效成分，單酯型生物堿是附子的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，而雙酯型生物堿如烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿等為附子的較強(qiáng)毒性成分。炮制減毒的主要機(jī)制可以歸納為：1）以烏頭堿為代表的雙酯型烏頭堿在加工炮制過(guò)程中水解成單酯型烏頭堿；2）烏頭堿類(lèi)結(jié)構(gòu)上8-位乙酰基被脂肪?；〈?，生成毒性較小的脂生物堿[10]。

2.1 加輔料

國(guó)偉等[11]按《中華人民共和國(guó)藥典》中的方法制備淡附片、甘草制飲片及黑豆制飲片，結(jié)果顯示，與鹽附子比較，分別加入甘草、黑豆炮制附子，雙酯型生物堿含量相比炮制前降低了97%，單酯型生物堿增加了26%；與甘草、黑豆共同炮制，其單酯型生物堿含量更高。葉強(qiáng)等[12]用染色法測(cè)定附子與生姜、干姜、炮姜配伍前后生物堿的變化，證實(shí)兩者配伍的減毒效果，可能機(jī)制是生姜、干姜、炮姜可提高附子生物堿的溶出度，促進(jìn)雙酯型附子生物堿轉(zhuǎn)化為單酯型附子生物堿。

2.2 膽巴炮制與無(wú)膽炮制

為研究膽巴對(duì)附子藥效成分變化的影響，劉雨詩(shī)等[13]對(duì)不同炮制品中生物堿含量進(jìn)行了分析，與生附片相比，炮制品中有效成分含量均顯著提高，毒性成分均明顯降低，無(wú)膽炮制品如蒸附片、炒附片中總生物堿和單酯型生物堿含量均比熟附片（膽巴炮制片）高出3～5倍，雙酯型生物堿含量略高，說(shuō)明膽巴炮制過(guò)程增加了附子有效成分的流失，而無(wú)膽炮制工藝簡(jiǎn)便易行，增效效果較好，減毒效果稍差，具有推廣和應(yīng)用價(jià)值。夏飛等[14]的研究得出，浸泡附子用水量1 g∶0.4 ml，蒸制120 ℃，50 min，干燥溫度100 ℃，所得附片中單酯、雙酯型生物堿含量達(dá)0.308 5%、0.014 8%，體外二苯代苦味酰肼（DPPH）清除率87.832%，對(duì)羥基自由基清除率達(dá)29.253%。該無(wú)膽附子的炮制工藝，具有減少烏頭堿類(lèi)生物堿的毒性，提高抗氧化應(yīng)激作用，為安全、有效地應(yīng)用附子奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

2.3 建昌幫煨制法

侯春久等[15]分析建昌幫煨附子前后3種單酯型生物堿苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿的含量變化，結(jié)果表明建昌幫煨制法能顯著提高3種單酯型生物堿的含量，由0.009 1%升高到0.056 2%，提高了6倍多，存在顯著性差異，說(shuō)明建昌幫煨制法具有“減毒存效”作用。

2.4 微波炮制法

微波炮制具有獨(dú)特的熱力學(xué)形式，溫度高、加熱時(shí)間短，并且有滅菌作用。水分子在微波和電磁場(chǎng)作用下高頻振動(dòng)碰撞，產(chǎn)生大量熱能致使生附片中的雙酯型生物堿水解，達(dá)到減毒目的。與其他炮制品相比，微波炮制品的烏頭堿含量差異較小，但水溶物和石油醚可萃取物增多，表明微波加工能夠增加有效成分溶出，增加飲片的穩(wěn)定性，便于貯存和使用，顯著提高附子的安全性、有效性和藥用價(jià)值。

2.5 高溫高壓炮制法

高壓蒸煮方法操作簡(jiǎn)單可控，是現(xiàn)代研究的熱點(diǎn)，可有效降低毒性成分含量，同時(shí)減少有效成分流失。張麗萍[16]采用0.245 Mpa蒸汽壓力，蒸制附子1.5 h，以測(cè)定小鼠最大耐受給藥量，當(dāng)給予數(shù)百倍臨床成人用量時(shí)，未見(jiàn)相關(guān)毒性反應(yīng)，表明該炮制方法可靠，臨床安全性高。林華等[17]采用正交試驗(yàn)法對(duì)高溫炮制工藝進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果顯示，120 ℃，12 h，附子去毒效果最好，雙酯型生物堿含量（0.04～0.08 mg/g）明顯降低，單酯型生物堿含量（0.70～0.90 mg/g）略有升高，其中苯甲酰烏頭堿含量顯著增加，總生物堿含量略有降低。

3 炮制對(duì)附子藥理毒理作用的影響

3.1 炮制對(duì)附子藥理作用的影響

不同炮制方法對(duì)中藥物質(zhì)基礎(chǔ)產(chǎn)生不同的影響，藥理作用發(fā)生變化。因此，在附子的臨床應(yīng)用中，需根據(jù)附子炮制品藥理作用的不同進(jìn)行選擇。

3.1.1 強(qiáng)心作用 氯仿致小鼠心室顫動(dòng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，生附子中烏頭堿類(lèi)含量高，一旦增大劑量即出現(xiàn)心律失常，房室傳導(dǎo)阻滯；而炮附子則具有顯著的強(qiáng)心作用，可改善心肌缺血缺氧，提高小鼠耐缺氧能力，抗炎鎮(zhèn)痛作用也有所增強(qiáng)[18]。雖然兩者都具有強(qiáng)心作用，但生附子具有起效快、作用強(qiáng)、維持時(shí)間短的缺點(diǎn)，且毒效劑量難以控制；而炮附子作用弱，強(qiáng)心作用持久，有一定的量-效、時(shí)-效關(guān)系，臨床應(yīng)用劑量可控[19]。李立紀(jì)等[20]從體外血小板聚集、小鼠耳郭微循環(huán)和垂體后葉激素致缺血再灌注模型3個(gè)方面比較不同附子制品對(duì)小鼠心血管系統(tǒng)的影響，結(jié)果表明，采用控溫、除雜、制顆粒等加工的附子制品能夠抑制體外血小板聚集，對(duì)心血管系統(tǒng)有保護(hù)作用。陳海媚等[21]研究附子對(duì)鹽酸普羅帕酮致急性心力衰竭大鼠模型的影響，結(jié)果表明，炮附子能夠減少心力衰竭有關(guān)神經(jīng)體液因子分泌，改善心力衰竭大鼠血流動(dòng)力學(xué)，起到強(qiáng)心作用。另外，附子對(duì)急性心力衰竭大鼠心功能有顯著改善作用，可升高血壓，加快心率，增強(qiáng)心肌收縮力，機(jī)制可能與激動(dòng)α、β腎上腺素能受體有關(guān)[22]。

3.1.2 抗炎、鎮(zhèn)痛作用 雙酯型二萜類(lèi)生物堿是附子抗炎、鎮(zhèn)痛的主要有效成分，對(duì)多種炎癥有抑制作用，能夠抑制醋酸所致疼痛，且抗炎鎮(zhèn)痛作用與附子煎煮時(shí)間、給藥劑量顯著關(guān)聯(lián)[23]。王麗[24]研究炒附片、黑順片、淡附片和蒸附片對(duì)炎癥模型的鎮(zhèn)痛效果，結(jié)果顯示，不同附子組在用藥6 h后足腫脹程度均明顯減輕，其中，炒附片組、黑順片組改善效果更顯著，不同附子組痛閾值相比對(duì)照組變化不明顯。因此，在附子的臨床應(yīng)用中，需根據(jù)炮制品的藥理作用不同而選擇，如在治療炎癥時(shí)，適宜選用炒附片、黑順片；對(duì)于炎癥疼痛，則適宜選用炒附片。

3.1.3 其他藥理作用 附子具有強(qiáng)心、抗心律失常、擴(kuò)張血管、抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、改善心肌缺血、調(diào)節(jié)免疫等多種作用，在糖尿病并發(fā)癥、腫瘤治療方面也有較好療效。Wang等[25]探究附子多糖對(duì)糖尿病大鼠周?chē)窠?jīng)病變的影響，結(jié)果顯示附子多糖可顯著降低細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，減少細(xì)胞凋亡，說(shuō)明附子多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷具有顯著保護(hù)作用。此外，附子可溫陽(yáng)散寒而流通津血，消散痰瘕，單味附子和含附子溫陽(yáng)方劑均可改善腫瘤患者臨床癥狀[26-27]，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，附子可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡，提高機(jī)體免疫力[28-29]，因此值得進(jìn)一步研究附子在惡性腫瘤臨床治療中的應(yīng)用。

3.2 炮制對(duì)附子毒理作用的影響

烏頭類(lèi)生物堿的心臟毒性和神經(jīng)毒性，主要是通過(guò)影響心肌、神經(jīng)和肌肉細(xì)胞膜的電壓敏感鈉通道釋放神經(jīng)遞質(zhì)，促進(jìn)心臟、肝臟細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化和凋亡。楊明等[30]將生附子、白附片、微波炮附子、香港炮附子分別給藥NIH系小白鼠，結(jié)果顯示，幾種附子炮制品的急性毒性大小順序?yàn)樯阶樱景赘狡鞠愀叟诟阶樱疚⒉ㄅ诟阶樱阶佣拘员任⒉ㄅ诟阶痈?.77倍。沈玉巧等[31]證實(shí)高壓蒸制品、高溫炮制品、微波炮制品、黑順片對(duì)小鼠心、肝、腎等臟器均有一定的損傷，高壓蒸制品對(duì)心臟損害最小，其他臟器損害差異不明顯，但其損傷程度較生附片明顯降低。

中藥炮制作為中藥領(lǐng)域中非常重要的組成部分，在中藥臨床運(yùn)用中發(fā)揮了重要作用。中藥經(jīng)過(guò)加工炮制可以減少或消除毒副作用，緩和藥性，增強(qiáng)藥效，改變藥物作用部位，便于服用和貯藏。藥材處理前后化學(xué)成分的變化，能夠顯著影響臨床效果和安全性，但不同處理方法對(duì)附子的影響程度不盡相同。因此，把握好附子“毒-效”辨證關(guān)系，加強(qiáng)對(duì)“減毒增效”的作用機(jī)制研究，分析中藥附子物質(zhì)基礎(chǔ)變化和藥理作用變化，能更好地研究附子臨床應(yīng)用價(jià)值。此外，也需要完善附子炮制工藝，建立附子炮制工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)體系，在確保用藥安全的前提下發(fā)揮最佳藥效，使附子在臨床應(yīng)用中擁有更廣闊的前景。