HBV感染是肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要危險(xiǎn)因素之一。聚集的規(guī)則間隔短回文重復(fù)序列(CRISPR)/CRISPR相關(guān)蛋白9(Cas9)已被用于精確編輯HBV基因組，并通過雙鏈斷裂(DSB)的非同源末端連接修復(fù)清除HBV。然而，CRISPR/Cas9介導(dǎo)的DSB引發(fā)宿主基因組的不穩(wěn)定性，編輯基因組的效率較低，限制了其應(yīng)用。CRISPR胞苷堿基編輯器(CBE)可以通過產(chǎn)生提前終止密碼子來沉默基因。吉林大學(xué)第一醫(yī)院和明尼蘇達(dá)大學(xué)開展的一項(xiàng)聯(lián)合研究開發(fā)了一種CRISPR堿基編輯器來精確編輯HBV基因組內(nèi)的單核苷酸，從而沉默HBV基因的表達(dá)。

HBsAg由HBV S基因編碼。研究者設(shè)計(jì)了一種單導(dǎo)向RNA(sgRNA)來編輯HBV S基因的第30個(gè)密碼子，可將其從CAG(谷氨酰胺)修改成終止密碼子TAG。研究者使用攜帶HBV基因組的人肝癌PLC/PRF/5細(xì)胞建立了表達(dá)CBE的穩(wěn)定細(xì)胞系(PLC/PRF/5-CBE)。然后用慢病毒將sgRNA導(dǎo)入PLC/PRF/5-CBE細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在表型上71%的PLC/PRF/5-CBE細(xì)胞在S基因內(nèi)形成了一個(gè)提前終止密碼子。HBs mRNA水平顯著降低。在PLC/PRF/5-CBE細(xì)胞中觀察到HBsAg分泌減少92%。經(jīng)gRNA_S治療后，細(xì)胞內(nèi)HBsAg也降低了84%。此外，在HBV基因組中預(yù)測的脫靶位點(diǎn)中未檢測到脫靶效應(yīng)。序列分析證實(shí)HBV基因型B、C、F、G和H的95%、93%、93%、9%和72%的S基因序列具有sgRNA的結(jié)合位點(diǎn)。

綜上所述，CRISPR介導(dǎo)的單堿基編輯是沉默HBV S基因的有效方法，具有清除HBV的治療潛力。

摘譯自ZHOU H, WANG X, STEER CJ, et al. Efficient silencing of hepatitis B virus S gene through CRISPR-mediated base editing[J]. Hepatol Commun, 2022. DOI: 10.1002/hep4.1933. [Online ahead of print]